SOP OCP en leche materna

PROCEDIMIENTO
PARA LA EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE
ANÁLISIS DE PESTICIDAS
ORGANOCLORADOS
(OCP) EN MUESTRAS DE
LECHE MATERNA
Hoja 1 de 6
Rev.1
PROCEDIMIENTO PARA LA EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN
DE PESTICIDAS ORGANOCLORADOS (OCP) EN MUESTRAS
DE LECHE MATERNA
1.
2.
3.
4.
Introducción
Objetivo
Alcance
Realización
4.1. Extracción
4.2. Purificación
4.3. Paso a vial
4.3. Adición del patrón interno o de jeringa
5. Anexos
5.1. Acondicionamiento del Florisil
5.2 Preparación de las columnas del Florisil
5. Histórico de modificaciones
Enero 2011
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Fdo.: M.G. Martrat
LABORATORIO DE DIOXINAS
IDÆA-CSIC
Fecha: 27/01/2011
Fdo.- E. Abad
LABORATORIO DE DIOXINAS
IDÆA-CSIC
Fecha: 4/02/2011
Fdo.- H. Fiedler
UNEP Chemicals Branch
Fecha: 8/02/2011
PROCEDIMIENTO
PARA LA EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE
ANÁLISIS DE PESTICIDAS
ORGANOCLORADOS
(OCP) EN MUESTRAS DE
LECHE MATERNA
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1. INTRODUCCIÓN
Este procedimiento ha sido elaborado en el Laboratorio de Dioxinas del Departamento de
Química Ambiental del Instituto de Diagnóstico Ambiental y Estudios del Agua (IDÆA) del
Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) de Barcelona (España), en el Marco de
Colaboración con el Programa de las Naciones Unidas para el Medio Ambiente (PNUMA) para
dar apoyo a la Implantación del Plan de Vigilancia Mundial de Contaminantes Orgánicos
Persistentes (COP)1 bajo el Convenio de Estocolmo. El programa incluye a los países
participantes en Latinoamérica y el Caribe en los proyectos de capacitación de los laboratorios
financiados por el Fondo para el Medio Ambiente Mundial (FMAM)2, así como del Enfoque
Estratégico para la Gestión de Productos Químicos a Nivel Internacional (SAICM)3.
Las personas participantes en la elaboración de este documento:
Dr. Esteban Abad Holgado
Dra. Heidelore Fiedler
Prof. Josep Rivera Aranda
Dra. Manuela Ábalos Navarro
Sra. Laura Morales Pérez
Sr. Jordi Sauló Dalmau
Sra. Mª Generosa Martrat Castellví
Sr. Jordi Parera Costa
Sr. Miquel Àngel Adrados León
Sr. Karell Martínez Guijarro
Sr. Joan Rivera Austrui
2. OBJETIVO
El objetivo del Plan de Vigilancia Mundial (PVM) es apoyar la evaluación de la eficacia del
Convenio de Estocolmo en relación a las concentraciones ambientales de fondo mediante medios
que tienen un gran potencial de comparabilidad. La Conferencia de las Partes ha decidido que sea
la vigilancia del aire y la exposición en leche materna o sangre humana, los medios prioritarios
para la primera evaluación.
El objetivo del presente procedimiento es describir la sistemática seguida para la extracción,
y purificación del análisis de pesticidas organoclorados (OCP) en muestras de leche materna
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En inglés: Global Monitoring Plan for Persistent Organic Pollutants (GMP)
En inglés: Global Environment Facility (GEF)
En inglés: Strategic Approach to International Chemicals Management (SAICM)
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PARA LA EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE
ANÁLISIS DE PESTICIDAS
ORGANOCLORADOS
(OCP) EN MUESTRAS DE
LECHE MATERNA
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3. ALCANCE
Este procedimiento describe la sistemática seguida para la extracción y purificación del
análisis de OCP en muestras de leche materna.
4. REALIZACIÓN
4.1. EXTRACCIÓN
4.1.1. Pesar, a temperatura ambiente, 20 g de muestra en una probeta 100 mL, con una
precisión de 0,1 g. A continuación diluir la muestra con agua ultra pura hasta un
volumen de 100 mL usando la probeta con la que se ha pesado la muestra. Colocar
la muestra diluida de la probeta de 100 mL en un embudo de decantación de 1 L.
4.1.2. Añadir 1 g de oxalato sódico, medidos con una precisión de 0,1 g, tapar el
embudo, girarlo, abrir la llave para permitir la salida de gases y agitar manualmente
durante 20 segundos. Cerrar la llave de nuevo y girar el embudo.
4.1.3. Añadir 100 mL de MeOH, medidos con probeta, tapar el embudo, girarlo, abrir la
llave para permitir la salida de gases y agitar manualmente durante 10 segundos.
Cerrar la llave de nuevo y girar el embudo.
4.1.4. Fortificación (Sólo para método de la dilución isotópica):
4.1.4.1.Por pesada:
4.1.4.1.1. Sacar el vial con el patrón marcado de la nevera y esperar a que
alcance la temperatura ambiente.
4.1.4.1.2. Tomar un vial de 1 mL. Tararlo en una balanza analítica, y con la
ayuda de una micropipeta o jeringa de vidrio medir el volumen de patrón
necesario para realizar la fortificación. Pesar el vial con el patrón
adicionado en una balanza analítica.
4.1.4.1.3. Medir aproximadamente 10 mL de éter dietílico. Con una pipeta
Pasteur, trasvasar el patrón contenido en el vial sobre la muestra. Con una
pipeta Pasteur, trasvasar parte de los 10 mL de disolvente al vial que
contenía el patrón. Con una pipeta Pasteur, vaciar el vial sobre la muestra.
Repetir los pasos anteriores hasta que no quede disolvente.
4.1.4.2.Por volumen:
4.1.4.2.1. Con la ayuda de una micropipeta o una jeringa de vidrio medir el
volumen de patrón necesario para realizar la fortificación. Añadir el
patrón a la muestra.
4.1.5. Medir 100 mL más de éter dietílico con probeta, añadirlos al embudo de
decantación. Tapar el embudo, girarlo, abrir la llave para permitir la salida de gases
y agitar manualmente durante 30 segundos. Cerrar la llave de nuevo y girar el
embudo.
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LECHE MATERNA
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4.1.6. Añadir 100 mL de éter de petróleo, medidos con probeta, tapar el embudo, girarlo,
abrir la llave para permitir la salida de gases y agitar manualmente durante 1 minuto.
Cerrar la llave de nuevo y girar el embudo. Dejar separar las fases acuosa y orgánica
por gravedad. Recoger la fase acuosa (fase inferior) en una probeta de 250 ml.
4.1.7. Recoger la fase orgánica en un matraz de 1 L. Concentrar el extracto contenido en
el matraz, hasta aproximadamente la mitad de su volumen.
4.1.8. Colocar de nuevo la fase acuosa en el embudo de decantación.
4.1.9. Repetir los apartados 4.1.5, 4.1.6, 4.1.7 y 4.1.8. Recoger la fase orgánica en el
mismo matraz de la primera extracción.
4.1.10. Concentrar el extracto contenido en el matraz, hasta aproximadamente 5-10 mL.
Trasvasar el extracto a un balón de 250 mL previamente etiquetado con la referencia
de la muestra, intentando no coger restos de oxalato durante el proceso de trasvase.
4.1.11. Añadir 2-3 veces aproximadamente 2 mL de éter de petróleo al matraz original
para limpiarlo, intentar no coger restos de oxalato. Añadir el disolvente de lavado al
balón de 250 mL.
4.1.12. Concentrar el extracto contenido en el matraz, hasta aproximadamente 1-2 mL o
hasta observar la presencia de un residuo graso.
4.1.13. Adicionar 100 mL de hexano medidos con probeta, y concentrar los extractos
hasta un volumen final de 1-2 mL.
4.2. PURIFICACIÓN
4.2.1. Una vez preparada la columna de Florisil según el punto 5.1, colocar bajo la
columna un matraz esférico de 250 mL previamente identificado con la referencia
de la muestra y fracción primera. Asegurarse que la llave de la columna esté
cerrada.
4.2.2. Medir 200 mL de éter de petróleo: dietil éter al 6% con la ayuda de una probeta,
disolver el residuo de muestra contenido en el matraz. En el menor volumen
posible de éter de petróleo: dietil éter al 6% de la probeta y con la ayuda de una
pipeta Pasteur transvasar la muestra a la cabecera de la columna. Lavar el matraz
que contiene la muestra con unos mililitros de éter de petróleo: dietil éter al 6% o
(de los de la probeta de 200 mL) y transvasarlos a la cabecera de la columna.
Lavar el matraz seis veces como mínimo. El volumen final será de 200 mL.
4.2.3. Abrir la llave para que comience la elución de la columna.
4.2.4. En el momento en que el hexano llega a la cabecera de la columna de sulfato de
sodio se cierra la llave.
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PURIFICACIÓN DE
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4.2.5. Se retirará el matraz de 250 mL y se colocará otro de 250mL etiquetado con el
nombre de la muestra y fracción segunda adicionar 200 mL de una disolución éter
de petróleo: dietil éter al 15% a la columna de Florisil. Abrir la llave para que
comience la elución. En el momento en que el hexano llega a la cabecera de la
columna de sulfato de sodio se cierra la llave.
4.2.6. Se retirará el matraz de 250 mL y se colocará otro de 250mL etiquetado con el
nombre de la muestra y fracción tercera. Adicionar 200 mL de una disolución éter
de petróleo: dietil éter al 50% a la columna de Florisil. Abrir la llave para que
comience la elución. La columna de Florisil se considera finalizada cuando todo el
disolvente haya eluido a través de la columna.
4.2.7. Concentrar los extractos, procurando que la temperatura del baño no supere los
30ºC
4.3. PASO A VIAL
4.3.1. Con una pipeta Pasteur, trasvasar el extracto contenido en el matraz procedente de
la columna de Florisil en un vial de 2 mL. Concentrar el extracto del vial bajo una
corriente de nitrógeno. Cuando el volumen contenido en el vial es de unos 20 µL
se realizan los lavados del matraz que contenía la muestra. Con una pipeta
Pasteur, trasvasar 2 mL de hexano al matraz que contenía la muestra. Con una
pipeta Pasteur, trasvasar el contenido del matraz al vial. Repetir los pasos
anteriores 4 veces más. Finalmente, dejar el vial bajo la corriente de nitrógeno
hasta que llega a sequedad.
4.4. ADICIÓN DEL PATRÓN INTERNO O DE JERINGA
4.4.1. Por pesada:
4.4.1.1.1. Sacar el vial con el patrón marcado de la nevera y esperar a que
alcance la temperatura ambiente.
4.4.1.1.2. Coger el vial que contiene la muestra. Tararlo en una balanza analítica,
y con la ayuda de una micropipeta medir el volumen de patrón interno
o de jeringa necesario y adicionarlo al vial de muestra. Pesar el vial
con el patrón adicionado en una balanza analítica.
4.4.2. Por volumen:
4.4.2.1.1. Con la ayuda de una micropipeta o una jeringa de vidrio medir el
volumen de patrón interno o de jeringa necesario y adicionarlo al vial
de muestra.
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5. ANEXOS
5.1. ACONDICIONAMIENTO DEL FLORISIL
5.1.1 Pesar la cantidad de Florisil correspondiente al número de muestras a las que se
les va a realizar la purificación en una cápsula de porcelana.
5.1.1. Colocar la cápsula en el horno mufla.
5.1.2. En el indicador del horno mufla marcar la temperatura de activación del Florisil
(675ºC)
5.1.3. Ponerla en marcha y dejar el Florisil en activación como mínimo 16h
5.1.4. Una vez transcurridas el tiempo mínimo de activación, parar la mufla y dejar
enfriar.
5.1.5. El Florisil se ha de utilizar dentro del día siguiente a su activación o se ha de
volver a activar.
5.2. PREPARACIÓN DE LA COLUMNA DE FLORISIL
5.2.1. Coger una columna de vidrio de 1.5 cm. de diámetro y 60 cm. de longitud y
colocar una base de lana de vidrio.
5.2.2. Pesar y añadir dentro de la columna 20 g de Florisil, activado tal y como se
describe en el apartado 5.1 del presente procedimiento.
5.2.3. Pesar y añadir dentro de la columna 2 g de sulfato sódico
5.2.4. Después de cada adición golpear ligeramente la columna para evitar la formación
de caminos preferenciales.
5.2.5. Acoplar el matraz de adición.
5.2.6. Eluir la columna con 50 mL de hexano.
5.2.7. Antes de que se seque cerrar la llave
6. HISTÓRICO DE MODIFICACIONES.
FECHA DE MODIFICACIÓN
REFERENCIA DE LAS MODIFICACIONES REALIZADAS
REVISIÓN Nª
24/07/2012
Primera Edición
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