COPEG PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIÓN DE FILTROS MILLIPORE PARA FILTRACIÓN DE MEDIOS-USO DE FILTRO DE MEMBRANA 1.0 OBJETIVO: Describir los procedimientos necesarios para el Uso de Filtro de Membrana. 2.0 ALCANCE: El alcance de este procedimiento incluye dar a conocer los requerimientos necesarios para el uso de Filtro de Membrana que debe tomar en cuenta el Personal del Laboratorio. 3.0 PROCEDIMIENTO: Paso Descripción Responsable 3.1 Encender el gabinete de bioseguridad por lo menos 30 minutos antes de iniciar el filtrado y desinféctelo por dentro y por fuera con solución de alcohol yodado. Personal de la Sección de Cultivo Celular 3.2 Lavarse las manos y brazos con abundante agua y jabón, secarlas y desinfectarlas con alcohol al 70%. 3.3 Desinfectar con alcohol yodado los frascos, tapas y todo el material que se van a utilizar en el filtrado y envasado de la solución. Ubíquelos dentro de la cámara. Personal de la Sección de Cultivo Celular Personal de la Sección de Cultivo Celular 3.4 Ese material debe ser esterilizado antes de introducirlo en la cámara 15 minutos, a 121° C y a 15 lbs. de presión. 3.5 Ajuste con la llave o herramientas los tornillos del filtro, asegurándose que queden bien apretados para evitar que una vez se inicie el proceso de filtración, la solución se derrame por las hendiduras del filtro. Coloque el extremo de la manguera que esta forrada en la olla de filtrado y ajústela con hilo. 3.6 Ubique el soporte en el centro de la cámara. Retire papel del soporte de metal y coloque la campana en manguera de la parte inferior del filtro, ajustándola con pinza, sin tocar por ningún motivo los bordes de campana. el la la la Personal de la Sección de Cultivo Celular 3.7 Coloque el extremo de la manguera de la parte superior del filtro, que está forrado, en la salida del envase que contiene los 5 litros de medio por filtrar y ajústela con hilo pabilo. Personal de la Sección de Cultivo Celular Código: PO-LAD -13 Revisión: 01 Personal de la Sección de Cultivo Celular Personal de la Sección de Cultivo Celular Aprobado por: Directores de Operaciones de Campo Página 1 de 3 Documento vigente de INTERNET Propiedad de COPEG, cualquier versión impresa es una copia no controlada COPEG PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIÓN DE FILTROS MILLIPORE PARA FILTRACIÓN DE MEDIOS-USO DE FILTRO DE MEMBRANA Paso Descripción Responsable 3.8 Conectar la manguera de la bomba de vacío a la entrada de la olla de filtrado. Esta bomba inyecta aire creando así una presión positiva que impulsa el medio a través de la manguera superior, atraviesa la membrana del filtro y sale por la manguera inferior que en su extremo tiene conectada la campana de vidrio. Personal de la Sección de Cultivo Celular 3.9 El filtro no debe caerse durante el procedimiento de uso. Si esto sucede se deberá preparar nuevamente. 3.10 Añadir en la olla la solución a filtrar la cual debe haber sido filtrada previamente de 3 a 4 veces en filtro whatman No.1. 3.11 Cerrar la tapa de la olla y encender la bomba de vacío. 3.12 A medida que va saliendo el medio filtrado, ya estéril, se va depositando en frascos de 500 ó 1000 ml 3.13 La filtración debe tratarse con suma esterilidad y asepsia por lo que se debe trabajar con sumo cuidado evitando tocar bordes y sacar las manos de la cámara. 3.14 Después del último filtrado, tomar unas gotas del medio que esta en la campana para realizar la prueba de esterilidad del medio de cultivo producido. Colocar de 2 a 3 gotas de medio en caldo sabouraud y tioglicolato. ( 2 viales de cada uno) Apagar todos los aparatos, recoger todo el equipo y material utilizado y desinfectar el gabinete de seguridad. 3.15 3.16 3.17 Código: Desarmar el filtro Millipore, revisar su membrana la cual debe estar intacta como prueba que los 5 litros de medio fueron bien filtrados. Si la membrana está rota, quiere decir que la filtración no se efectuó adecuadamente y por lo tanto, el Filtro Millipore debe preparase, esterilizarse e iniciar el proceso nuevamente. Una vez se haya terminado el proceso de filtrado, tanto el filtro millipore como el envase de 5 litros, deben ser lavados sólo con agua destilada y puestos a secar antes de volver a ser utilizados. PO-LAD -13 Revisión: 01 Personal de la Sección de Cultivo Celular Personal de la Sección de Cultivo Celular Personal de la Sección de Cultivo Celular Personal de la Sección de Cultivo Celular Personal de la Sección de Cultivo Celular Personal de la Sección de Cultivo Celular Personal de la Sección de Cultivo Celular Personal de la Sección de Cultivo Celular Personal de la Sección de Cultivo Celular Aprobado por: Directores de Operaciones de Campo Página 2 de 3 Documento vigente de INTERNET Propiedad de COPEG, cualquier versión impresa es una copia no controlada COPEG PROCEDIMIENTO PARA LA PREPARACIÓN DE FILTROS MILLIPORE PARA FILTRACIÓN DE MEDIOS-USO DE FILTRO DE MEMBRANA 4.0 DOCUMENTOS DE REFERENCIA 5.0 HISTORIAL DE MODIFICACIONES FECHA MODIFICACIONES 11/06/07 Se cambió de alcohol yodado a solución de alcohol yodado en el paso 3.1 y 3.3. En el paso 3.2 debe cambió de alcohol yodado a alcohol al 70%. Se especificó el paso 3.3 En el paso 3.4, se cambió el tiempo de esterilización a 15 minutos. En el paso 3.5 se cambió la palabra pinza por llave y se mejoró la redacción. Se modificaron los pasos 3.6 al 3.9 y se incluyeron los pasos del 3.9 al 3.17. Código: PO-LAD -13 Revisión: 01 Aprobado por: Directores de Operaciones de Campo Página 3 de 3 Documento vigente de INTERNET Propiedad de COPEG, cualquier versión impresa es una copia no controlada