ELECTROFORESIS EN GEL
DE AGAROSA Y
POLIACRILAMIDA
Christopher Emmanuel Juárez Zúñiga 3°B
¿Qué es la electroforesis?
Es una técnica de laboratorio que
se utiliza para separar ácidos
nucleicos o proteínas según su
tamaño y carga eléctrica.
Electroforesis en gel de agarosa
Agarosa: Es un polisacárido derivado de algas y se usa para separar fragmentos de
ADN y ARN.
Paso 1. Preparación del gel
La agarosa se disuelve en un tampón (TAE o TBE) calentando la mezcla. La
concentración de agarosa dependerá del tamaño del ADN que se va a
separar.
• 0.7% a 1% ADN tamaño mediano o grande
• 2% ADN tamaño pequeño
El buffer es el medio por el cual se va a disolver la agarosa y migran las
moléculas de ADN, generalmente se prepara al 1X.
• Mantener el pH estable
• Permite la conductividad eléctrica
• EDTA
Después de disolver la agarosa se le vierte un colorante que permitirá
observar las bandas de ADN (bromuro de etidio).
La solución se vierte en un molde en donde se le agregara un tipo de
“Peine” que formara unos pocitos, donde se colocara la muestra. Dejan
enfriar de 20 a 30 min.
Las muestras de ADN se mezclan con un buffer de carga (que contiene
glicerol y colorantes) para que se puedan cargar en el gel. Los colorantes
permiten ver cómo se mueve la muestra durante la electroforesis.
Posteriormente con una micropipeta colocar la muestra en los pocitos del
gel.
Cargar un marcador de peso molecular
Paso 3 electroforesis.
El gel se coloca en una cámara de electroforesis y se le agrega buffer trisacetato o tris-borato, después se conecta a una fuente de poder.
Los fragmentos más pequeños se mueven más rápido, mientras que los
más grandes se mueven más lento. Produciendo la separación de las
diferentes bandas según su tamaño.
Bajo una lámpara UV, las bandas de ADN se visualizarán como franjas
fluorescentes
Electroforesis en gel de poliacrilamida
Se usa principalmente para proteínas y ADN de tamaño pequeño
Paso 1 preparación del gel
Se mezcla acrilamida y bisacrilamida, la concentración de acrilamida
dependerá del tamaño de las proteínas que se desean separar (4% y 20%).
Se agrega un iniciador, como el persulfato de amonio (APS), para comenzar
la polimerización, y se agrega TEMED para acelerar el proceso.
Paso 2 carga de la muestra
Las muestras de proteínas se tratan con un buffer de carga que contiene
agentes desnaturalizantes como SDS que permite que las proteínas se
desnaturalicen y se carguen negativamente.
Se agrega la muestra a los pocitos del gel
Similar a la agarosa, el campo eléctrico provoca que las proteínas que están
cargadas negativamente debido al SDS, se desplacen hacia el ánodo (+).
• Las proteínas más grandes se mueven lentamente.
• Las proteínas pequeñas mas rápidamente.
Las proteínas separadas pueden ser teñidas con un colorante como el
Coomassie Brilliant Blue o el nitrato de plata, que permitirá ver las bandas
de proteínas bajo luz visible.
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