Universisdad Autónoma de Nuevo León
Facultad de Ciencias Biológicas
Actividad: Enzimas de restricción
Nombre:
Gpo:
Matrícula:
Instrucciones: Digiera la secuencia pUC19 en Nebcutter y conteste lo siguiente.
I.
A partir de la información que le otorga el programa complete la siguiente tabla.
Secuencia de
Tipo de corte que
nucleótidos que
Posición en la
Enzima
realiza
reconoce (sito de
que corta
(Sticky/Blunt)
corte)
EcoRI
SacI
KpnI
SmaI
BamHI
XbaI
AccI
SbfI
PstI
SphI
HindIII
PvuII
AhdI
PvuI
II.
Indique las enzimas que forman parte del Multi-Cloning Site si este se ubica del par
de bases 346 a 447.
III.
El MCS es la sección del plásmido donde se inserta el gen de interés
a. Si tomamos el plásmido pUC19 y lo digerimos con la enzima de restricción
PvuII se van a generar dos fragmentos de DNA con tamaños de:
i. Fragmento 1:
pb
ii. Fragmento 2:
pb
b. Si tomamos un plásmido pUC19 al cual se le insertó un gen que tiene un
tamaño de 1200 pb y se digiere utilizando PvuII, se van a generar dos
fragmentos con tamaño de:
i. Fragmento 1:
pb
ii. Fragmento 2:
pb
c. Supongamos que hace una electroforesis en gel con los fragmentos del
plásmido y el vector; indique dónde estarían los fragmentos en la siguiente
representación:
Marcador
Puc19
Puc19 + gen
4000
3000
2000
1000
500
IV.
La siguiente imagen es un gel de electroforesis utilizado en una investigación
criminal. Contiene muestras de DNA obtenidas de la víctima del crimen, la escena
del crimen y dos sospechosos. Analice los patrones de corte generados al digerir el
DNA con enzimas de restricción e indique cuál de los dos sospechosos estuvo
presente en la escena del crimen. Recuerde que su labor es solo indicar si la persona
estuvo presente en la escena del crimen, la culpabilidad la determina el oficial a
cargo de la investigación con el cúmulo de evidencia que tiene disponible.
V.
Realice la digestión de la secuencia contenida en el documento “yxeK.txt” y
supongamos que deseamos extraer el gen yxeK de esta región del genoma de B.
subtilis. Tomando en cuenta que el gen codifica a una proteína de 441 AA y que
tenemos un plásmido que presenta en su multi-cloning site los sitios de corte de:
ApoI, AseI, MseI y BfaI ¿Sería posible extraer el gen del genoma para insertarlo al
plásmido? Explique porque si o porque no y muestre una captura de pantalla de la
digestión de NEBCUTTER que le ayudó a fundamentar su respuesta.
