MUESTREO DE VECTORES Y OTROS ORGANISMOS NOCIVOS La identificación y análisis de la situación, mediante el reconocimiento de las instalaciones y un examen del entorno. Se utilizan cuestionarios de chequeo de instalación y se evalúa el grado de infestación mediante trampas. Si no se observan artrópodos se identificará su presencia mediante rastros: -Excrementos de cucarachas, moscas, chinches, entre otros. -Huellas, como sangre por picadura o por aplastamiento de estos en sábanas. -Ruidos, producidos al excavar, llamar a congéneres, etc. EQUIPO DE INSPECCIÓN Linterna halógena con filtro rojo o con luz UV que permiten evidenciar las manchas de orina de roedores. Espátula para introducir en las rendijas o grietas RESTOS DE HECES Máquina de fotos o de vídeo Aerosol con insecticida (piretrinas) repelente, hacer salir a los insectos y poder ver el grado de infestación. Conservantes. según tipo de muestra., etanol 70%, formol 4% Frascos, tubos y bolsas de muestras. Para guardar ejemplares Pinzas, Bloc de notas cuestionarios de inspección. y Prevenir y protegidos frente a posibles riesgos laborales, No introducir material o equipo que no fuera absolutamente necesario, podría resultar infestado y causa posteriormente de contaminación. 1. Mono desechable (color blanco, para contrastar con los organismos). Evitará depositar equipos sobre mobiliario de riesgo 2. Calzas sellar con cinta adhesiva. Precaución de abrir las ventanas, el aire acondicionado propaga insectos. 3. Protección respiratoria: filtro frente a partículas mínimo FFP2, o FFP3. 4. Guantes desechables, de nitrilo. 5. Calzado especial, casco en zonas de riesgo, etc. VERTEBRADOS Etiqueta, Para identificar muestras MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD PERSONAL Equipo protección individual (EPI): Solo evidenciables si hay una acumulación, en los espacios donde hay humedad, en el caso de los parásitos. Se pueden identificar a través de sus heces: • Termitas: tamaño de una semilla de amapola, de color similar a la madera. • Cucarachas: cucaracha alemana: granos de pimienta negra (<I mm) blandos y manchan. Cucaracha americana: oscuro o negro (5 mm), forma de cápsula. Cucaracha oriental, algo más pequeñas que las de la cucaracha americana son más blandas y producen manchas. • Chinches: con aspecto de pequeñas manchas oscuras de tinta en las sábanas, colchones, etc. Cimex lectularius manchas negras de heces y los huevos blancos. • Moscas: son pequeños puntos negros pegados en las superficies. Destornilladores, alicates, etc. Lupa (IO aumentos) o microscopio de campo. Formación y cualificación profesional. Seguir PNT específico. ARTRÓPODOS Espejo articulado. Para observar zonas de difícil acceso. Trampas de captura y monitorización localiza focos de infestación y evaluar el tamaño de la población de la plaga. Insectos (trampas de feromonas). Roedores (las capturas no se harán en la inspección). Elemento principal en la investigación, son característicos de las especies. y sentarse El EPI debe ser retirado siempre antes de salir de la habitación, sobre suelo no enmoquetado, introducidos en una bolsa plástica y dispuestos para su destrucción. Al finalizar, revisarse a sí mismo y al equipo, ropa y material no desechable se someterán al tratamiento de descontaminación. • Roedores: Las heces de los vertebrados, roedores y murciélagos, son de mayor tamaño. Los excrementos frescos presentan brillo a la luz, son blandos y de color oscuro, casi negro (indicativos de plaga reciente); si están secos serán más claros y se desharán fácilmente. Los roedores producen heces en notable cantidad. • Murciélago: Rugosas y aparecen en grandes cantidades en el suelo bajo los lugares en los que se refugian y dormitan, para diferenciarlas hay que observarlas con la lupa, se puede distinguir restos de la cutícula de los insectos • Salamanquesa : Reptil insectívoro, se comprobará que está constituida de cutículas de insectos y restos de cal en un extremo puntiagudo, defeca por la cloaca. MANCHAS DE ORINA Se suele detectar un olor especial. Las manchas de orina en los dobles techos son apreciables con luz ultravioleta Otras manchas son las producidas por los roces de los cuerpos sucios en paredes. CADÁVERES Signo de gran infestación o tratamiento adecuado. DAÑOS (MORDEDURAS) Daños que producen las roeduras y sonidos. Las galerías excavadas orientar hacia un tipo de roedor. Los orificios en los muebles indican carcomas. Personas que han sufrido picaduras, localización, cantidad, dolorosas, si es blanco, permite suposicioner la plaga PELOS Y OTROS RESTOS ORG Eliminados por los organismos vivos al renovar sus tejidos: Las plumas sueltas o acumuladas identifica diferentes aves. Los pelos en productos almacenados y los restos de pelaje identificar a los roedores y felinos. Los restos de las ootecas, huevos de chinche o las liendres. Las exuvias (exoesqueleto) tras la muda identifica la especie o sexo. HUELLAS Y PISADAS Ratas y ratones muestran cuatro dedos en las patas delanteras y cinco en las traseras. La cola también deja huella. Medición Directa mide una porción de la población en su hábitat. La unidad de muestreo puede ser una determinada área del suelo. Es importante recorrer el espacio de manera uniforme, resultado final será representativo de lo que sucede en la población. Artrópodos: se registra el número de individuos en la unidad de muestreo, los resultados se expresan: número de artrópodos por metro cuadrado, lineal, por trampa etc Roedores: mediante métodos cuantitativos con sistemas de captura y posterior recuento. Medición Indirecta mide una parte imprecisa de la plaga; es una estimación relativa o semicuantitativa. Insectos: usando trampas con atrayentes (colores, feromonas, luz, cebos de alimento, etc.), redes entomológicas, trampas de caída. El resultado se expresa número de insectos por trampa por día o por semana. Roedores: recuento de huellas y medida del consumo alimento, la diferencia de peso entre lo consumido y la cantidad inicial, varios días. Los puntos se distribuyen de forma uniforme, misma cantidad y tipo de alimento. Trampas, método de estudios de población y de comportamiento, ayuda planificar el control, conocer el insecto diana, el grado de intensidad y el momento óptimo de los tratamientos químicos, mantener seguimiento y efectividad. ARTRÓPODOS • Voladores: cazados al vuelo o durante períodos de descanso sobre la vegetación, se utiliza la clásica manga entomológica o cazamariposas. • Terrestre: se colectan con pala y se separan con cernidor, los materiales y ejemplares grandes son retenidos, las partículas y organismos pequeños pasan por la criba y se pueden colectar mejor. Para artrópodos que permanecen ocultos en la vegetación, el barrido o batido de las plantas, los organismos caen en redes, sábanas o paraguas invertidos. Después de la captura se introducen en tubos, mediante la ayuda de pinzas o un aspirador bucal o "pooter ". Destaca las bandejas de color o trampas de Moericke, se colocan a I m del suelo y se llenan de agua con detergente que reduce la tensión superficial, cuando los insectos son atraídos caen al agua. ROEDORES Para capturar e identificar la especie se usan jaulas ratoneras con cebo alimentario sin plaguicida, en lugares de paso y puntos de alimentación. No recomendable trampa adhesiva TRANSPORTE, PREPARACIÓN Y CONSERVACIÓN DE LAS MUESTRAS TRAMPA Diferentes tipo de atrayente y mecanismo de retención • Acuáticos: por ejemplo larvas de mosquito, se usa una manga de malla cerrada, con bastidor fuerte para compensar la resistencia del medio. El zooplancton se recogen con redes de arrastre o de plancton. • Color: trampas de color como señuelo, pueden ser de agua o cromáticas adhesivas. El amarillo con pulgones, pequeños dípteros, coleópteros, etc. El azul para los trips. CAPTURA TRAMPAS DE MUESTREO: TIPOS Y USOS CAPTURA • Adhesivas: trampas de pegamento muy simples, de cartón u otro material. Los insectos son atraídos mediante feromona o alimento cebo. Técnica de evaluación de las infestaciones en control de cucarachas y roedores en la industria alimentaria. Las feromonas son sustancias segregadas por los insectos que provocan respuesta en individuos de la misma especie, se suelen utilizar con lepidópteros, moscas, cucarachas, etc. La utilidad en las trampas la marcará el tipo de feromona (de atracción sexual lepidópteros o agregación- cucarachas). • Luz: El hábitat edáfico es húmedo y oscuro, para capturarlos se utiliza el embudo de Berlese, que hace huir a los organismos de la luz y el calor. Dispositivo de extracción de microartrópodos edáficos, se basa en el fototropismo negativo y el higrotropismo positivo. Consta de un embudo en cuyo extremo se coloca el recipiente recolector y en su boca un cedazo sobre el cual se colocan pequeñas porciones de una muestra de suelo; encima se dispone una fuente intensa de luz y calor que provoca reacciones de huida hacia el fondo del embudo Las trampas de luz para capturar insectos voladores nocturnos o crepusculares aprovechan el fototropismo. - Lámpara de luz ultravioleta o blanca sobre un recipiente de agua, los insectos atraídos por la luz caen. - Trampas con tubos de luz ultravioleta en un soporte y detrás o debajo se dispone una trampa adhesiva. - Trampa CDC (Communicable Diseases Center) un cilindro transparente que contiene un ventilador que aspira los insectos por la parte superior, sobre el que se coloca una bombilla incandescente o UV. En la parte inferior se va una bolsa entomológica con armazón, también se puede acoplar un recipiente para muestras líquidas. En la bolsa caen los insectos atraídos por la luz y succionados por la corriente de aire. Se utiliza emisor de dióxido de carbono (C02) para mayor atracción. Una vez capturados se introducen en frascos de vidrio para su transporte. Para que no se estropeen, se guardan de forma aislada en tubos de boca ancha. Se pueden transportar vivos, en el lab se matarán por asfixia, introduciendo al bote una tira de papel impregnada de acetato de etilo o tetracloruro de carbono, se conservarán en seco. Los insectos con alas delicadas (moscas, avispas, mariposas, etc.) es conveniente sacrificarlos de inmediato (cámara letal: tarro con serrín recubierto por escayola perforada o virutas con gotas de acetato de etilo o de éter. Tras la muerte se pasarán a tubos o bolsas de transporte. Las mariposas, se guardan en triángulos de papel. Para la conservación en medio líquido de crustáceos, miriápodos e insectos de tegumento blando, se guardarán en frascos con alcohol de 70º y gotas de glicerina, para reducir la deshidratación. Para artrópodos no es recomendable el formol al 4% como conservante (para gusanos y cadáveres de vertebrados, sí). Las larvas y los huevos se sacrificarán con agua hirviendo, para fijar sus tejidos, y se preservarán en alcohol de 70º. Los insectos con exoesqueleto duro y garrapatas se preservan en alcohol de 70º que evita el endurecimiento de las membranas. ANESTÉSICOS Acetato de etilo: sal etílica del ácido acético, de evaporacion rápida. Se vierten unas gotas en un recipiente cerrado que contenga una sustancia porosa como viruta. Tetracloruro de carbono: líquido incoloro, inflamable e insoluble en agua, a partir del cual se obtiene el cloroformo. Su fórmula es CCk Los tubos, frascos y bolsas se sellarán y etiquetarán; se numerará la muestra con un código y se pondrá el nombre del técnico que la ha recogido. El transporte será rápido, seguro y viable para los ejemplares, idóneo en una nevera portátil y se mantendrán en frigorífico a entre 4 y 7ºC. Los artrópodos adultos se montan en seco, utilizando alfileres y cajas entomológicas y preservando el material del ataque de insectos necrófagos. Se montan con alfileres entomológicos, de grosor variable (nº O, 1 y 2). Los ejemplares se pinchan por la cara dorsal y sobre el tórax. Alfiler entomológico: alfileres específicamente usos entomológicos, bañados en laca negra y de longitud constante (38 mm). Grosor estandarizado (000, +finos - 7, +gruesos). Para que las mariposas queden con las alas extendidas, se utilizan extendedores. Con insectos pequeños, alfileres muy finos, cortos y sin cabeza (minucias) o pegarlos sobre un pequeño cartón. Una vez montados, se etiquetan: localidad, fecha y el nombre del recolector, la familia, género y especie del ejemplar, y nombre de la persona efectuó que determinación. Los ejemplares en seco se pinchan en cajas entomológicas con algún conservante para evitar la entrada de insectos que puedan destruirla (pastilla antipolilla o una ampolla Sauvinet). CONTROL DE AIRE 4. Muestreo de microorganismos La detección de microorganismos (bacterias y hongos) se realiza mediante diferentes técnica. El muestreo microbiológico se realiza previo y en los tratamientos de desinfección para comprobar su eficacia; ya sea una desinfección de superficies, ambiental o de control de legionela. Es importante elegir los puntos de muestreo adecuados, teniendo en cuenta la zona o utensilio de riesgo, la desinfección, la naturaleza y estado de materiales. CONTROL DE SUPERFICIES Importante en la industria alimentaria, para comprobar el estado de las materias primas o incluso de los trabajadores. Puede tener su origen en los instrumentos de trabajo, las ropas, el mobiliario o por una higiene deficiente. Se puede comprobar la eficacia de los métodos de desinfección, los microorganismos que se investigan son: la flora microbiana total, coliformes totales, hongos y microorganismos de riesgo para el producto (esporas). Procedimiento: 1) Torna de muestra: Realizarla unas horas después de la desinfección, diferentes métodos: Presión de agar con placas Rodac: Se colocan los medios de cultivo sobre la superficie por muestrear Método de lavado y recuperación: sembrando posteriormente. Método de cepillado o frotis: recogida del material con torundas estériles de algodón, para luego sembrarlos. Cuando exista la posibilidad de generación de bioaerosoles, donde se encontrarán tanto microorganismos cultivables (vivos) como sus partículas. Los métodos más utilizados: Gravitación o impactación natural: la tendencia a caer por acción de la fuerza gravitatoria de las partículas en suspensión cuando el fluido en el que se encuentran está en calma. Los microorganismos son recogidos sobre una placa (Petri o Rodac) que se situarán alejadas de corrientes fuertes de aire (de otro modo las partículas no caerían). Impactación: fuerzan el paso del aire con una bomba de aspiración a través de pequeños orificios haciendo impactar a los agentes biológicos sobre el medio de cultivo. Los microorganismos van impactando según su momento de inercia y la recogida puede hacerse sobre una única superficie de agar en una placa de Petri o Rodac, o dividiendolos por tamaño en superficies sucesivas (en cascada). Filtración: el aire es filtrado por un medio en el que las partículas se depositan, con ayuda de una bomba de aspiración que trabajará con un flujo función del tipo de filtro (el flujo puede variar entre 1-500 l/min). El filtro más utilizado es la membrana de policarbonato, permite fácil obtención de partículas mediante líquidos adecuados. 2) Interpretación de resultados: Se toma la siguiente referencia. Ausencia de coliformes. Para microorganismos aerobios se establecen varios niveles de riesgo, especificados en la tabla. Se establecen niveles de riesgo según los requerimientos de asepsia del local, cuando se necesita un ambiente casi estéril, no debe superarse 10 ufc/ 100 cm2. Si tras el análisis aparecen resultados anómalos, se determina la causa para asegurarse de que la toma de muestra ha sido correcta y verificar que se han seguido los protocolos de muestreo. CONTROL DE AGUAS El muestreo de fluidos (humidificadores, torres de refrigeración). Ejemplo: Legionella, que crece en sistemas de refrigeración y tuberías. El método más sencillo consiste en recoger directamente una muestra de fluido en un recipiente estéril para su posterior siembra, debe ser representativa y hay que preservarla de contaminación accidental. Unas requieren recipiente de vidrio o de plástico, dado que pueden alterar características, transparente o color topacio. Los volúmenes de los recipientes oscilan de 100 a 2.000 mL (más usados de 500 y 1.000 mL). La abertura de 35 mm de diámetro. Para captaciones a profundidad se utilizará un toma-muestras especial: equipo manual con un dispositivo de apertura y cierre. Cuando se necesitan muchas muestras se empleará un equipo automático, con uno o varios depósitos de almacenamiento. En caso de grifos, dejar fluir el agua durante un tiempo. Procedimiento: Grifos: Retirar accesorios, limpiar el grifo con alcohol etílico. Dejar corre el agua 2 minutos. Flamear la boca del grifo con algodón con alcohol. Dejar correr el agua 2 mnts. Llenar el frasco sin tocar grifo. Pozo o depósito: se utilizará bomba de aspiración del pozo o depósito. Si no existe sistema de bombeo, se introduce el envase sostenido por una cuerda mediante lastre, tras agitar la superficie. Piscina, lago o río: se sumerge el frasco 30 cm mirando hacia arriba y contra la corriente, evitando orilla y fangos. Manantial o boca de riego: se toma directamente de la fuente y en la boca de riego se hace igual que con un grifo. Identificación y transporte de la muestra Una vez tomada la muestra, esta deberá etiquetarse cerrarse herméticamente. Para identificar las muestras son necesarias etiquetas y hojas de muestreo. Se debe hacer constar en la etiqueta: Número de identificación de la muestra, lugar, fecha y hora del muestreo, identidad de la persona que realiza la toma de muestras, Nº de recipientes. Una muestra hay que conservarla y transportarla en las mejores condiciones para evitar alteraciones. Para ello se mantienen en la oscuridad evitando la acción de la luz y en muchos casos se añaden conservantes. Casi siempre deberá mantenerse a 4ºC y enviarla al laboratorio con la mayor celeridad. 5. Técnicas de cuantificación y estimación de la densidad de la plaga Tras la inspección y muestreo, los datos obtenidos nos permitirán identificar la plaga, evaluar el tamaño de su población, el estado fenológico en que se encuentra la especie, valorar la incidencia de los daños, hacer una prospectiva de la evolución de la infestación, etc. La evaluación del grado de infestación se puede hacer mediante métodos cualitativos, se ponderan los signos encontrados durante la inspección, o mediante métodos cuantitativos, que permitirán evaluar el tamaño de la población de organismos nocivos. El conocimiento del tamaño de la plaga nos permite planificar si es o no necesaria la intervención y seleccionar el método de control. Los métodos de evaluación pueden ser: Cualitativos: basados en consideraciones subjetivas que ponderan la densidad de la plaga. Cuantitativos: se obtiene un valor numérico de la población mediante un cálculo sencillo. Aproximativos: se evalúa la densidad de la población a partir de datos indirectos. OBSERVACIÓN DE INDIVIDUOS VIVOS Y SUS RASTROS IN SITU La valoración de la densidad mediante observación directa es un método cualitativo. Se buscarán a los organismos en los focos y puntos críticos, donde pudieran nidificar o reproducirse. También se pueden poner trampas de captura cada noche. Para observar los insectos en el interior, un buen método es pulverizar un piretroide que provoque su fuga y salida de los escondrijos. Se consideran los siguientes grados de densidad: • Infestación baja: en roedores si aparecen esporádicamente excrementos, manchas o ruidos. Cucarachas O a 5 por trampa. • Infestación media: en roedores, signos de presencia nocturna habituales, observación frecuente de excrementos, manchas, etc. Cucarachas de I a 20 ejemplares por trampa. • Infestación alta: en roedores, la observación de individuos vivos de noche e incluso de día, presencia de excrementos frescos, chillidos diurnos, etc. Cucarachas de 15 a 25-50 individuos. La observación de roedores es difícil, solo se observarán individuos vivos si la población es muy grande. Se puede hacer un censo de organismos grandes (colonias de gatos). CAPTURA-MARCAJE-RECAPTURA Es la técnica más utilizada para estimar las poblaciones de animales, se emplea en la evaluación de grado de infestación por roedores. Este método implica una serie de supuestos: La probabilidad de captura es la misma para todos los individuos de la población. Los individuos marcados se redistribuyen en la población de forma homogénea con los individuos no capturados ni marcados. Se mantiene la proporción entre individuos marcados y no marcados entre el primer y segundo muestreo. Las marcas no se eliminan ni pierden. La población es cerrada, no aumenta la población por emigración o la integración de individuos de otras colonias. Se usan jaulas trampa con cebo, se marcan los capturados (A), se liberan y al cabo de dos o tres días se hace una nueva captura (B) de los individuos de esta segunda captura una parte están marcados (C). La población total se obtiene: A/N = C/B de donde N = A · B/C Respecto a las heces de vertebrados como indicio de infestación, ¿cuál de los siguientes criterios permite diferenciar heces de murciélago frente a las de roedor? 1.Las heces de murciélago presentan extremos puntiagudos debido a la cloaca. 2.Las heces de roedor presentan fragmentos visibles de quitina de insectos. 3.Las heces de murciélago se deshacen fácilmente al presionarlas, mostrando restos de cutícula 4.Las heces de ratón muestran habitualmente acúmulos de cal en los extremos. En el muestreo entomológico, ¿qué característica justifica el uso del embudo de Berlese para la extracción de micro artrópodos edáficos? 1.El fototropismo positivo y el higrotropismo negativo de los organismos edáficos. 2.El fototropismo negativo y el higrotropismo positivo que los impulsa a desplazarse hacia el fondo 3.La necesidad de separar manualmente el sustrato mediante cribas y calor. 4.La incapacidad de los micro artrópodoss para sobrevivir en presencia de humedad. En el equipo de inspección de plagas que debería estar compuesto: 1.Linterna halógena con filtro rojo, espátula, trampas de captura, destornilladores, detergentes y disolventes. 2.Linterna halógena con filtro rojo, espátula, trampas de captura y monitoreo 3.Linterna halógena con filtro rojo, cuaderno de notas, aerosol con insecticida, espátula, destornilladores y máquinas de fotos. 4.Linterna halógena con filtro rojo, trampas de captura y monitoreo, destornilladores y bolígrafo. De las siguientes imágenes, señale cual es cada trampa: (está muy bien) 1.Potter. 2.Trampa adhesiva. 3.Trampa de ratones. 4.Trampa de luz tipo CDC. ¿Cuál es el propósito principal de utilizar una linterna halógena con filtro rojo durante la inspección de plagas? 1.Evidenciar las manchas de orina de roedores por fluorescencia. 2.Ahuyentar a los insectos para que salgan de sus refugios. 3.No ahuyentar a los insectos al observar grietas y oquedades 4. Actuar como repelente para eliminar ejemplares vivos. ¿Qué método se utiliza principalmente para capturar artrópodos que pasan la mayor parte del tiempo volando o son cazados al vuelo? 1.Embudo de Berlese. 2. Trampa de luz tipo CDC. 3.Manga entomológica o cazamariposas 4.Trampa de Moericke (bandeja de color). CONSUMO DE CEBOS Se utilizan cebos de cereal u otro alimento, preferentemente en bloques para identificar la mordedura de la especie, y se evalúa la diferencia de peso entre lo consumido y la cantidad inicial, durante varios días. Este método es el mejor baremo para evaluar la densidad de la población. Los puntos de control se distribuirán de forma uniforme en el área. En dichos puntos se colocará la misma cantidad de cebo, con el mismo tipo de alimento atrayente. Los cebos deben permitir desechar los datos de consumo de otras especies diferentes a la de la infestación. La cantidad consumida dividido por el factor de alimentación de la especie es estimativo del tamaño de la población. MÉTODO DE RASTROS DE ROEDORES Se utilizan polvos de paso o tablillas con polvo en los que se marcarán las huellas, la abundancia de las mismas indica el tamaño de la población de acuerdo al número de huellas. ¿Qué ventaja tiene añadir glicerina al alcohol en la conservación de ejemplares blandos? 1.Evita la proliferación microbiana. 2.Reduce la deshidratación del tejido 3.Aumenta el poder disolvente del alcohol. 4.Endurece las membranas para su montaje. ¿Cómo son las heces de las termitas? 1.Como granos de pimienta negra. 2.Puntos negros adheridos a superficies. 3.Como una semilla de amapola 4.Puntos oscuros en sábanas. Un EPI completo, incluye: 1.Mono desechable (de color blanco), calzas selladas con cinta adhesiva, guantes preferiblemente de látex, protección respiratoria, calzado especial, y casco en zonas de riesgo. 2.Mono desechable (de color blanco), calzas selladas con cinta adhesiva, guantes preferiblemente de nitrilo, protección respiratoria, calzado especial, y casco en zonas de riesgo 3.Mono desechable (de color oscuro), calzas selladas con cinta adhesiva, guantes preferiblemente de nitrilo, protección respiratoria, calzado especial, y casco en zonas de riesgo. 4.Todas son falsas.
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