Carrera de Nutrición y Dietética
Bioquímica General (NYD1102)
Lineamientos de Laboratorios de Bioquímica General
1.
HORARIO Respetar estrictamente el horario asignado a cada laboratorio.
2.
PRESENTACIÓN Uso obligatorio de delantal blanco en todos los laboratorios. En caso de
poseer pelo largo, se le solicita al alumno tener el pelo tomado, ya que esto puede ocasionar un
accidente dentro del laboratorio.
3.
PROTECCIÓN Uso estricto de las barreras de seguridad primarias (delantal blanco, y si
corresponde guantes, mascarillas y otros).
4.
VESTIMENTA Ropa y calzado cómodo, seguro y protegido para trabajo del laboratorio.
5.
COMPORTAMIENTO Acorde al trabajo en laboratorios considerados de primer orden de
riesgo y seguridad.
6.
DISCIPLINA Respeto al personal profesional, docente, administrativo y auxiliar de los
laboratorios.
7.
RESPONSABILIDAD En el manejo y uso de los instrumentos, materiales, artículos,
dependencias y mobiliario ofrecidos en los laboratorios.
8.
NO COMER EN LOS LABORATORIOS.
9.
NO BEBER EN LOS LABORATORIOS.
10.
NO FUMAR EN LOS LABORATORIOS.
Será OBLIGACIÓN DE CADA ALUMNO estar al tanto de la fecha que le corresponde asistir al
laboratorio. No se aceptarán alumnos después del comienzo de la actividad, siendo este motivo de
ausencia injustificada.
Los alumnos deberán tener una conducta apropiada durante todo el desarrollo del trabajo práctico
y acatar las normas e instrucciones que le entreguen los profesores a cargo del grupo. Los profesores
se reservan el derecho de SOLICITAR LA SALIDA del laboratorio a cualquier alumno que no respete
estas normas.
Cada alumno debe disponer de su guía de trabajo práctico que posee las instrucciones de cada
laboratorio a realizar. Tanto esta guía como los antecedentes teóricos y metodológicos que
sustentan el trabajo práctico deberán ser ESTUDIADOS por el alumno previo a la realización del
trabajo.
Al finalizar este laboratorio deberá confeccionar un informe en parejas. El informe debe tener un
máximo de 3 páginas, en donde deben incluir la tabla con las medidas de absorbancia obtenidas y
el cálculo de la concentración de glucosa obtenido (registrar todos los cálculos realizados para la
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obtención de ese valor). El informe debe ser escrito a mano, por lo que se exigirá orden y buena
ortografía. Este informe deberá ser entregado por “tarea” de ucampus, y debe contener los
siguientes apartados:
1.
INTRODUCCIÓN: Indicar el objetivo y fundamentos teóricos del trabajo que realizó. Máximo
1/2 página.
3.
RESULTADOS: Debe incluir las observaciones realizadas, así como las tablas o los datos
experimentales obtenidos, incluir el desarrollo de los cálculos realizados. En este punto debe incluir
el valor de la concentración de glucosa en sangre. Máximo 2 páginas.
4.
DISCUSIÓN: Debe analizar los resultados obtenidos, incluyendo si fuera necesario las
limitaciones de las técnicas y procedimientos utilizados. Máximo 1 página.
5.
CONCLUSIONES: Indicar las conclusiones más relevantes derivadas del trabajo realizado.
Máximo 1/2 página.
6.
BIBLIOGRAFÍA: Señalar el material bibliográfico utilizado título, autor, edición, editorial y
páginas (como se indica más adelante, en la bibliografía sugerida). Máximo 1 página (esta no será
considerada dentro del total de páginas del informe).
Todos los informes deben ser confeccionados según el formato y número de hojas indicado. En el
caso de no cumplir con estas normas, de un atraso en su entrega o se visualice copia, el informe
será calificado con NOTA 1.0.
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Laboratorio 1: Determinación de la Glicemia
I.
Introducción
La determinación de la glicemia en ayuno (concentración de glucosa plasmática) se realiza en una
muestra de suero o de plasma, obtenida a partir de una muestra de sangre venosa en condiciones
de ayuno (10 horas). La medición de la glicemia posee un gran valor clínico, ya que permite o
contribuye a diagnosticar enfermedades como la diabetes Mellitus, la diabetes gestacional y el
síndrome metabólico. La determinación debe realizarse antes de una hora de adquirida la muestra,
debido a que las células sanguíneas como los leucocitos comienzan a consumir la glucosa lo que trae
como consecuencia la obtención de valores falsamente disminuidos.
El método de elección para realizar la determinación de la glicemia es el método de la glucosa
oxidasa. Paralelamente a la determinación de la muestra de interés, se deben determinar algunas
muestras que nos permitan validar nuestro resultado, este paso es una parte crucial del proceso de
aseguramiento de la calidad en un laboratorio.
Los valores de referencia de glucosa plasmática normal en ayuno fluctúan entre los 70 y 100 mg/dL.
Fundamento del método:
La secuencia de reacciones que ocurrirá en el tubo de ensayo es la siguiente:
II.
Objetivo
Medir la concentración de glucosa plasmática en muestras de suero.
III.
Materiales
Muestra: Muestra de sangre en tubo de toma de muestra sin anticoagulante o con fluoruro de sodio
y el oxalato de potasio como aditivos.
Preparación de la muestra: Hielo molido, centrífuga clínica, tubos eppendorf de 1,5 ml, pipetas
Pasteur plásticas, lápiz marcador.
Determinación: Baño regulado a 37°C, Kit de glucosa oxidasa (Wiener), tubos de ensayo, gradillas,
suero control y estándar, espectrofotómetro.
EPP (Equipo de protección personal): Guantes, antiparras, pechera plástica.
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IV.
Actividad Experimental:
Determinación de la glicemia
1. Realice el siguiente protocolo
Para realizar el siguiente protocolo debe extraer el suero o plasma (capa superior de color amarillo)
de la muestra de sangre ya centrifugada.
TUBO
1
2
3
4
Agua
10 µl
---
---
---
Estándar
---
10 µl
---
---
Control
---
---
10 µl
---
Muestra
---
---
---
10 µl
Reactivo
1000 µl
1000 µl
1000 µl
1000 µl
Volumen total
1010 µl
1010 µl
1010 µl
1010 µl
Incube los tubos en un baño termorregulado a 37°C por 5 min.
2. Registre la absorbancia (realizar al menos dos mediciones de ella por tubo).
tubo
1
2
3
4
Absorbancia
medida 1
Absorbancia
medida 2
Promedio de la
absorbancia
3. Cálculo de los resultados
Divida la concentración de su estándar por la absorbancia de esta, el resultado corresponde al factor
de su técnica. Luego multiplique el promedio de las absorbancias de su muestra por este factor, el
cuál corresponde al resultado de la glicemia. Recuerde incluir la unidad de concentración.
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Concentración de glucosa:
0
