TECNICAS SEROLOGICAS
Técnica de aglutinación en placa (Huddleson) (PAT)
INTRODUCCION
Antígenos febriles, es un término aceptado generalmente como referencia a suspensiones bacteriana,
representativas de un numero de especies de microorganismos patogénicos para el hombre, y que van
acompañadas de un cuadro febril persistente. Incluidos dentro de estos microorganismos, encontramos
los géneros. Salmonella, Brucella, Francisella, Leptospira y Rickettsia. Grumbaum y Widal, fueron los
primeros en introducir técnicas inmunológicas para la determinación cuantitativa de aglutininas, en
pacientes con fiebre tifoidea.
USO
Para la determinación de aglutininas anti-Brucella, por aglutinación rápida en placa.
FUNDAMENTO DEL METODO
Cuando un organismo invade el huésped, éste responde a ese estimulo antigénico, con la producción de
anticuerpos. Estos anti cuerpos (aglutininas), presentes en el suero del enfermo, reaccionan con la
suspensión antigénica de Brucella abortus, produciendo una aglutinación macroscópica.
PROCEDIMIENTO
Todo el material de vidrio deberá estar perfectamente limpio y libre de detergentes. Llevar a temperatura
ambiente los reactivos y los sueros a ensayar, agitar adecuadamente la suspensión antigénica antes de
usar. Sobre una placa de vidrio
colocar:
Mezclar con varilla de vidrio o
madera, empezando por la
dilución mayor. Balancear con
movimientos circulares entre 1 a 3 minutos, observar sobre fuente luminosa con fondo oscuro, la
presencia o no de aglutinación. En caso de que hubiere aglutinación en todas las diluciones, efectuar una
dilución 1/10 con solución fisiológica y efectuar nuevamente la técnica. El resultado deberá multiplicarse
por 10.
EXPRESIÓN DE LOS RESULTADOS
Negativo: Ausencia de aglutinación. Positivo: Suero reactivo (Indicar dilución). Interpretación: en caso de
obtener títulos significativos (1/40,1/80), es importante el control del paciente a través de una curva de
aglutinación, que se efectúa sobre los resultados obtenidos con determinaciones seriadas. En sueros de
enfermos, (fase aguda) pueden encontrarse títulos de 1/320 o mayores. Para el titulo se considera la
última dilución que da aglutinación.
CONTROL DE CALIDAD
Se podrá realizar el control de calidad reemplazando la muestra por una gota del correspondiente control
positivo y negativo y siguiendo los pasos indicados en el procedimiento y observando la presencia o
ausencia de aglutinación, respectivamente, (sólo en equipos con controles).
LIMITACIONES Y CUIDADOS
Pueden presentarse fenómenos de zona, es decir aglutinación en diluciones mayores mientras las
primeras son negativas; es por ello que se aconseja realizar las reacciones en todos los títulos. Se han
encontrado reacciones cruzadas, en personas con cólera, como así también aglutinación no especifica en
pacientes con in fluenza. Retrasos en las lecturas puede inducir falsos resultados positivos. Cuando
sean utilizados los controles, positivo y negativo, estos deberán procesarse en forma idéntica que los
sueros problemas, es decir realizando las diluciones.
(Antigenos Febriles de Bruselosis)
50 µL suero
1 gts Antigeno
Mezclar
Observar Aglutinación
Se informa 1/20; 1/40: 1/40;1/80;1/160 según agente
Monotest (Paul-Bunnell)
QUE ES
El test de Paul-Bunnell, también llamado test de la mononucleosis o test de aglutinación para la
mononucleosis, es una prueba rápida de diagnóstico para diagnosticar la mononucleosis infecciosa
causada por el virus de Epstein-Barr.
En la infección por el virus de Epstein-Barr se desarrollan anticuerpos de la clase IgM específicos que
tienen la propiedad de aglutinar hematíes de carnero o de caballo. Si una persona está infectada por el
virus de Epstein-Barr y padece la enfermedad llamada mononucleosis infecciosa, el suero del paciente se
mezcla con hematíes de carnero o de caballo en una placa y se produce una aglutinación dependiendo
de diluciones seriadas del suero.
APLICACIÓN CLINICA
El test Paul-Bunnell se utiliza para evaluar la presencia de la mononucleosis infecciosa (enfermedad
producida por el virus de Epstein-Barr).
Cuando un paciente tiene un título alto el diagnóstico es certero excepto en falsos positivos que pueden
ser debidos a la presencia de un linfoma, LES (Lupus Eritematoso Sistémico), una leucemia y alguna forma
de hepatitis crónica.
Los niveles aumentados de anticuerpos aglutinantes pueden indicar:
Infección activa por el virus de Epstein-Barr y la presencia de mononucleosis infecciosa.
Infección crónica por el virus de Epstein-Barr.
Síndrome de astenia crónica.
Linfoma de Burkitt.
Hepatitis crónica.
Puede haber un falso positivo de esta prueba en personas con sífilis, rubeola y toxoplasmosis.
La prueba puede permanecer positiva hasta un año después del inicio de la enfermedad.
50 µL suero inactivo
50 µL de Reactivo
HIV
Inactivar suero 15 ‘ a 56 ºC
Observar
Mezclar
Aglutinación
Hepatis B
(+)
(-)
Hepatis C
20 µL suero
50 µL suero
50 µL suero
1 gota
de Buffer
ASO latex
(-)
25 µL reactivo
25 µL suero
25 µL fisiológico
25 µL reactivo
1/300
1/600
1/1200
1/1500
Dilución
1/900
(+)
SIGNIFICACION CLINICA
El anticuerpo antiestreptolisina O se encuentra presente en casi todas las personas en títulos bajos,
debido a que las infecciones estreptocócicas son comunes. Sin embargo un título alto o creciente de
antiestreptolisina O, indica una infección reciente producida por un estreptococo beta he molítico de
grupo A, como amigdalitis, escarlatina, sepsis puerperal, erisipela.
FUNDAMENTOS DEL METODO
Los anticuerpos antiestreptolisina O se detectan en suero por su reacción con la estreptolisina O
adsorbida sobre soporte inerte de látex. Los anticuerpos antiestreptolisina reaccionan con la
estreptolisina produciendo una aglutinación visible macroscópicamente.
Artritest directo LAR
25 µL fisiológico
25 µL reactivo
25 µL suero
1/8
Diluciones sucesivas a partir de la muestra pura
1/2
1/4
1/16
1/32
1/8
1/2
1/4
1/16
1/32
SIGNIFICACION CLINICA
La artritis reumatoidea es un síndrome crónico de etiología desconocida, caracterizado por una
inflamación inespecífica y generalmente simétrica de las articulaciones, que a veces evoluciona hacia la
destrucción de las estructuras articulares y periarticulares. En la articulación enferma se observa un
engrosamiento de la membrana sinovial con formación de pliegues y proliferación de linfocitos. Estas
células, que forman folículos linfoides, son las responsables de la síntesis de factores reumatoideos (FR)
y otras inmunoglobulinas. Los FR son generalmente de tipo IgM anti-IgG, es decir que reaccionan con las
fracciones Fc de las IgG. También se han encontrado FR de tipo IgG, aunque en mucho menor proporción
de casos. Los FR de tipo IgM están presentes en el 85-90% de los adultos con artritis reumatoidea aunque
no es específico de la enfermedad puesto que también se han encontrado en individuos sanos (en un 3 a
5% de los casos). Por tal motivo, cuando se sospecha la existencia de una enfer medad distinta de la
artritis reumatoidea, frente a una reacción de aglutinación positiva es aconsejable realizar la precipitación
de las globulinas con sulfato de amonio. De tal forma, se asegura la precipitación completa de los FR y se
mantiene en solución cualquier aglutinina responsable de una falsa reacción positiva, como así también
algún posible inhibidor.
FUNDA MENTOS DEL METODO
El factor reumatoideo de tipo IgM se detecta en presencia de gamma-inmunoglobulina o fracción II de
Cohn (que en este caso es el antígeno) adsorbida sobre un soporte inerte de látex-poliestireno. Este
antígeno se une a los FR (anti-IgG) produciendo una aglutinación de las partículas de látex poliestireno,
visible macroscópicamente.
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