METODOLOGIA CARBOHIDRATOS POR EL METODO DE MÉTODO DE LANE Y EYNON PARA
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE AZÚCARES REDUCTORES Y TOTALES.
REACTIVOS
Solución de Fehling A (34,639 g de CuSO4,5H2O en 500 ml de agua)
Solución de Fehling B (173 g de tartrato de sodio y potasio, y NaOH en 500 ml de
agua) agregar 10g de NaOH por cada 100 ml de solución preparada
Azul de metileno (1%)
Solución patrón de glucosa al 1%
Solución diluida de glucosa (50 mg/ml), preparada a partir de la solución patrón de
glucosa (1%)
Solución de acetato básico de plomo o Sub acetato de plomo al 30%
Oxalato de sodio o potasio en polvo
Solución de HCl 1:1
Solución de NaOH 6 N.
PROCEDIMIENTO
Estandarización de la solución de Fehling:
1. Colocar la solución diluida de glucosa en una bureta.
2. Colocar en un matraz de 250 ml 5 ml de solución de Fehling A y 5 ml de solución de Fehling B.
3. Añadir 2 o 3 gotas de solución de azul de metileno.
4. Diluir con aproximadamente 20 ml de agua destilada.
5. Llevar a ebullición la solución de Fehling y agregar lentamente la solución de glucosa sin dejar de
calentar, hasta que desaparezca la coloración azul.
6. En el momento en que desaparece el color del indicador, en los bordes del fondo deL matraz se
puede observar cierto tono rojizo.
Nota: durante todo el tiempo en que se añade la solución de glucosa, la solución de Fehling debe
mantenerse en ebullición.
Preparación de la solución clarificada de azúcares:
1. Pesar una cantidad de muestra tal que, en la solución final clarificada, la concentración de
azúcares reductores sea de2 a 5 mg/ml (para gastar entre 10 y 25ml de dicha solución por cada 10
ml de solución de Fehling). 10 gramos de muestra diluir con 50 ml de agua destilada y añadir unos
pocos mililitros de solución de acetato de plomo (30%)(5 ml aprox.) hasta lograr la precipitación
completa (en el caso de jugos, pulpas y mermeladas de frutas es suficiente añadir 1 o 2 gotas de la
solución de acetato de plomo al 30%) dejar sedimentar.
2. Mezclar bien y filtrar.
3. Agregar al filtrado oxalato en polvo en pequeñas porciones (una cantidad muy pequeña tomada
con la punta de una espátula para evitar la profusión de oxalato) hasta eliminar el exceso de
acetato de plomo.
4. Mezclar y filtrar descartando los primeros mililitros.
5. El filtrado debe quedar perfectamente transparente.
Determinación de azúcares reductores (originalmente presentes):
1. Tomar una alícuota de 25 ml, colocarla en un matraz aforado de 100 ml, aforar con agua,
mezclar bien y colocar la solución en una bureta.
2. Colocar en un matraz de 250 ml 5 ml de solución de Fehling A y 5 ml de solución de Fehling B.
3. Añadir 2 o 3 gotas de solución de azul de metileno.
4. Diluir con aproximadamente 20 ml de agua destilada.
5. Llevar a ebullición la solución de Fehling y proceder igual a como se hizo durante la
estandarización de la solución de Fehling.
Determinación de azúcares totales:
1. En un vaso de precipitados de 100 ml, colocar una alícuota de 25 ml de solución
clarificada.
2. Agregar 5 ml de solución de HCl (1:1) y calentar a 70 °C durante 5 minutos.
3. Enfriar a temperatura ambiente y con ayuda de un potenciómetro llevar a pH 8,2 utilizando una
solución 6N de NaOH (en caso de no disponer de un potenciómetro, añadir 2 o 3 gotas de
fenolftaleína y titular lentamente con la solución de hidróxido de sodio hasta el cambio de viraje
del indicador, luego añadir lentamente, gota a gota HCl (1:1) hasta la desaparición del color
rosado).
4. Una vez alcanzado el pH indicado, pasar la solución cuantitativamente a un matraz aforado de
100 ml, aforar con agua, mezclar bien y colocar la solución en una bureta.
5. Colocar en un matraz de 250 ml 5 ml de solución de Fehling A y 5 ml de solución de Fehling B.
6. Añadir 2 o 3 gotas de solución de azul de metileno.
7. Diluir con aproximadamente 20 ml de agua destilada.
8. Llevar a ebullición la solución de Fehling y proceder igual a como se hizo durante la
estandarización de la solución de Fehling.
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