Anexo de la R.C.U. N°126-2022-UNASAM ANEXO 1 INFORME DE ORIGINALIDAD El que suscribe (asesor) del trabajo de investigacion titulado: “EVALUACIÓN DE PROTOTIPOS DE HUMEDALES CONSTRUIDOS ANAEROBIOS CON DIFERENTE COMPOSICIÓN DE SUSTRATO ORGÁNICO (COMPOST, ESTIÉRCOL DE VACA Y OVEJA) PARA EL TRATAMIENTO DE DRENAJES ÁCIDOS DE ROCA DEL CANAL CHONTA – RECUAY, ÁNCASH, 2022”. Presentado por : AGUIRRE FALCÓN, KIARA MARY Con DNI N° : 70685205 Para optar al Título Profesional de: Ingeniero Ambiental Informo que el documento del trabajo anteriormente indicado ha sido sometido a revision, mediante la plataforma de evaluacion de similitud, conforme al Artículo 11° del presente reglamente y de la evaluación de originalidad se tiene un porcentaje de: 11% de similitud. Evaluacion y acciones del reporte de similitud de los trabajos de los estudiantes / tesis de pre grado (Art. 11, inc. 1). Porcentaje Marque con Evaluación y acciones Trabajos de Tesis de una X estudiantes pregrado Esta dentro del rango aceptable de X Del 1 al 30% Del 1 al 25% similitud y podrá pasar al siguiente paso según sea el caso. Se debe devolver al estudiante o Del 31 al Del 26 al egresado para las correcciones con las 50% 50% sugerencias que amerita y que se presente nuevamente el trabajo. El docente o asesor que es el responsable de la revisión del documento emite un Mayores a Mayores a informe y el autor recibe una observación 51% 51% en un primer momento y si persistiese el trabajo es invalidado. Por tanto, en mi consideración de Asesor responsable, firmo el presente informe en señal de conformidad y adjunto la primera hoja del reporte del software antiplagio. Huaraz, 20 de noviembre de 2024. ___________________ FIRMA Dr. Maximiliano Loarte Rubina DNI N°: 32295136 Se adjunta: 1. Reporte Generado por la plataforma de evaluacion de similitud Reporte de similitud NOMBRE DEL TRABAJO AUTOR Evaluación de prototipos de humedales c Kiara Mary Aguirre Falcón onstruidos anaerobios con diferente com posición de sustrato o RECUENTO DE PALABRAS RECUENTO DE CARACTERES 34208 Words 174356 Characters RECUENTO DE PÁGINAS TAMAÑO DEL ARCHIVO 140 Pages 5.6MB FECHA DE ENTREGA FECHA DEL INFORME Nov 20, 2024 9:13 AM GMT-5 Nov 20, 2024 9:15 AM GMT-5 11% de similitud general El total combinado de todas las coincidencias, incluidas las fuentes superpuestas, para cada base de datos. 10% Base de datos de Internet 4% Base de datos de publicaciones Base de datos de Crossref Base de datos de contenido publicado de Crossref 7% Base de datos de trabajos entregados Excluir del Reporte de Similitud Material bibliográfico Material citado Material citado Coincidencia baja (menos de 8 palabras) Resumen i UNIVERSIDAD NACIONAL SANTIAGO ANTÚNEZ DE MAYOLO FACULTAD DE CIENCIAS DEL AMBIENTE ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL EVALUACIÓN DE PROTOTIPOS DE HUMEDALES CONSTRUIDOS ANAEROBIOS CON DIFERENTE COMPOSICIÓN DE SUSTRATO ORGÁNICO (COMPOST, ESTIÉRCOL DE VACA Y OVEJA) PARA EL TRATAMIENTO DE DRENAJES ÁCIDOS DE ROCA DEL CANAL CHONTA – RECUAY, ÁNCASH, 2022 TESIS PARA OPTAR EL TITULO PROFESIONAL DE INGENIERO AMBIENTAL Tesista: Br. KIARA MARY AGUIRRE FALCÓN Asesor: Dr. MAXIMILIANO LOARTE RUBINA Asesor externo: Mg.Sc. VLADIMIR ALFONSO LEÓN MENACHO MSc. EDSON DESCIOMAR PALACIOS ROBLES Huaraz-Perú 2024 i DEDICATORIA A Dios, A mis padres Fortunata Falcón y Juan Aguirre, a mis hermanos Daniel, Isabel, María y Diego por el apoyo que me han brindado. Este logro va dedicado a ustedes con todo cariño. A mis familiares, amigos, compañeros y todos los que contribuyeron en esta investigación. ii iii AGRADECIMIENTOS A la UNASAM por el apoyo de financiamiento otorgado mediante el “Concurso de subvenciones económicas a favor de graduados y estudiantes de pregrado para el desarrollo de actividades académicas y de investigación UNASAM-2023”. Así como también, al Instituto Andino de Montaña por la oportunidad de ser partícipe en el proyecto “Agua limpia y segura” y haberme brindado las facilidades para el desarrollo de la tesis. A la Comunidad Campesina Cordillera Blanca, en especial al Comité de Investigación Agropecuaria Local (CIAL) “Alli yacu, alli pastu”, por compartir y enseñarnos sus saberes que contribuyeron en la investigación. Un agradecimiento especial a mi asesor Dr. Maximiliano Loarte Rubina; a mis asesores externos de tesis, al Mg. Sc. Vladimir León, por la asesoría en todo el proceso de planificación, ejecución y redacción de la tesis; en especial por su orientación académica y predisposición brindado en este camino. Y al M. Sc. Edson Palacios, por sus consejos, motivación, apoyo y valiosos conocimientos para la redacción de la tesis. A la Dr. Rosario Pastor, quien me brindó consejos y compartió su vasta experiencia para disfrutar el desarrollo de esta investigación; sus enseñanzas guiaron mi trabajo e inspiraron su continuidad. Al Grupo de Investigación Ciencia y Tecnología del Agua (CyTA) por promover y fomentar la investigación, dando soporte científico, logístico y humano, para llevar a cabo esta investigación. Finalmente, a mis jurados de tesis, por darse el tiempo en la revisión científica de la tesis. Y deseo expresar mi gratitud a aquellos amigos y compañeros por su apoyo y colaboración en las actividades de campo, que fue fundamental para la marcha del proyecto. iii iv RESUMEN En las últimas décadas los glaciares se han visto afectados por el cambio climático, acelerando el proceso de retroceso glaciar por la pérdida de superficie y masa, dejando a la intemperie rocas sulfurosas (pirita) que, al entrar en contacto con el oxígeno y el agua del ambiente se oxidan y meteorizan, generando los drenajes ácidos de roca que impactan negativamente la calidad de los recursos hídricos, afectando los medios de vida y seguridad alimentaria de las comunidades altoandinas, como es el caso de la Comunidad Campesina Cordillera Blanca, Recuay; por lo que es indispensable abordar esta problemática, es así que, la presente investigación tiene como objetivo evaluar los prototipos de humedales construidos anaerobios con diferente composición de sustrato orgánico para el tratamiento de drenaje ácido de roca del canal Chonta, ubicado en el centro poblado de Canrey Chico. Para ello, se implementó un sistema integrado por dos etapas, iniciando con la línea de captación hacia el tanque de distribución de caudales y como 2da etapa los prototipos de humedales construidos. Estos humedales fueron diseñaron en base a la carga de acidez aplicada, obteniendo una carga hidráulica de 102.58 L/m2.d y un TRH de 5.85 d; además, considerando el área superficial de 1.14 m2 los prototipos operaron a un caudal de flujo continuo de 111.8 L/d en el 1er prototipo, 118.4 L/d en el 2do prototipo y 109.8 L/d en el 3er prototipo. Cada uno de ellos estuvieron compuestos por grava, espejo de agua y Juncus arcticus Willd., con la única diferencia del sustrato orgánico (compost, tierra negra, estiércol de vaca y oveja). Los datos obtenidos del afluente y efluentes durante el periodo de monitoreo de 6 meses fueron analizados y procesados mediante el software SPSS. Los resultados obtenidos indican que el estiércol de oveja (0.61) presenta mayor fracción biodegradable, seguida del estiércol de vaca (0.57), donde estos sustratos orgánicos se degradarán más fácil y rápido para ser fuente de energía de los microorganismos. Por otro lado, la comparación fisicoquímica entre el afluente (PH0) y efluente (PH01) del prototipo control no presentó diferencias significativas. El prototipo 3 presentó mejores resultados en términos de pH (6.37), ORP (57.91 mV) y T (13.08 °C) en comparación con los demás; mientras que, el prototipo 1 mostró mejores resultados en CE (186.88 µS/cm) y TDS (99.61 mg/L). Asimismo, el efluente del prototipo 3 presentó menores concentraciones de Fe (1.21 mg/L), Al (0.055 mg/L), Co (0.0003 mg/L) y B (0.014 mg/L), en comparación con los demás. En contraste, el efluente del prototipo 1 obtuvo mejores resultados para sulfato (86.96 mg/L), Mn (0.96 mg/L) y As (0.0040 mg/L). En los iv v casos de Zn y Cd no hubo variaciones entre los efluentes, similar para Pb y Hg que se encontraban por debajo del límite de cuantificación. Además, el prototipo 3 presentó la mejor eficiencia de remoción para Co y Al (99.13%, 97.82% resp.), el prototipo 2 para Zn y Cu (97.54%, 95.86% resp.) y el prototipo 1 para Fe, Cd y sulfato (90.01%, 85.49% y 28.64% resp.); entre estos podemos determinar que en 6 de los parámetros se superando el 70% de eficiencia. Además, los PHCA presentaron una eficiencia negativa de remoción para Mg, B, Mn y As. Inferimos, que hay diferencia estadística significativa entre el prototipo control y los prototipos que contienen sustrato orgánico; sin embargo, al analizar los prototipos con sustrato orgánico no se encontraron diferencia significativa. Palabras clave: drenaje ácido de roca, humedal construido anaerobio, sustrato orgánico, tratamiento. v vi ABSTRACT In recent decades glaciers have been affected by climate change, accelerating the process of glacial retreat by the loss of surface and mass, leaving sulfide rocks (pyrite) that, when in contact with oxygen and environmental water, oxidize and weather, generating acid rock drainage that negatively impact the quality of water resources, affecting the livelihood and food security of the high Andean communities, as is the case of the Cordillera Blanca Rural Community, Recuay; Therefore, it is essential to address this problem, so this research aims to evaluate the prototypes of anaerobic constructed wetlands with different composition of organic substrate for the treatment of acid rock drainage of the Chonta canal, located in the village of Canrey Chico. For this purpose, a two-stage integrated system was implemented, starting with the catchment line to the flow distribution tank and as a second stage the constructed wetland prototype. These wetlands were designed based on the acidity load applied, obtaining a hydraulic load of 102.58 L/m2.d and a HRT of 5.85 d; in addition, considering the surface area of 1.14 m2 , the prototypes operated at a continuous flow rate of 111.8 L/d in the 1 st prototype, 118.4 L/d in the 2nd prototype and 109.8 L/d in the 3rd prototype. Each of them was composed of gravel, water mirror and Juncus arcticus Willd. with the only difference being the organic substrate (compost, black soil, cow and sheep manure). The data obtained from the influent and effluent during the 6-month monitoring period were analyzed and processed using SPSS software. The results obtained indicate that sheep manure (0.61) has a higher biodegradable fraction, followed by cow manure (0.57), where these organic substrates will degrade more easily and quickly to be a source of energy for the microorganisms. On the other hand, the physicochemical comparison between the influent (PH0) and effluent (PH01) of the control prototype did not show significant differences. Prototype 3 presented better results in terms of pH (6.37), ORP (57.91 mV) and T (13.08 °C) compared to the others; whereas, prototype 1 showed better results in EC (186.88 µS/cm) and TDS (99.61 mg/L). Likewise, the effluent of prototype 3 presented lower concentrations of Fe (1.21 mg/L), Al (0.055 mg/L), Co (0.0003 mg/L) and B (0.014 mg/L), compared to the others. In contrast, the effluent of prototype 1 obtained better results for sulfate (86.96 mg/L), Mn (0.96 mg/L) and As (0.0040 mg/L). In the cases of Zn and Cd there were no variations between the effluents, similar for Pb and Hg which were below the limit of quantification. vi vii In addition, prototype 3 presented the best removal efficiency for Co and Al (99.13%, 97.82% resp.), prototype 2 for Zn and Cu (97.54%, 95.86% resp.) and prototype 1 for Fe, Cd and sulfate (90.01%, 85.49% and 28.64% resp.); among these we can determine that in 6 of the parameters the efficiency exceeded 70%. In addition, the PHCA presented a negative removal efficiency for Mg, B, Mn and As. We infer that there is a statistically significant difference between the control prototype and the prototypes containing organic substrate; however, when analyzing the prototypes with organic substrate, no significant difference was found. Keywords: acid rock drainage, anaerobic constructed wetland, organic substrate, treatment. vii viii ÍNDICE CONTENIDO Pág. DEDICATORIA ........................................................................................................ ii AGRADECIMIENTOS ............................................................................................ iii RESUMEN ............................................................................................................. iv ABSTRACT ............................................................................................................ vi LISTA DE TABLAS................................................................................................. xi LISTA DE FIGURAS ............................................................................................. xii LISTA DE ACRÓNIMOS ...................................................................................... xiv CAPÍTULO I ........................................................................................................... 1 INTRODUCCIÓN ................................................................................................... 1 1.1. Formulación del problema ......................................................................... 4 1.2. Objetivos ................................................................................................... 4 1.2.1. Objetivo General ................................................................................. 4 1.2.2. Objetivo Específicos ........................................................................... 4 1.3. Hipótesis ................................................................................................... 5 1.4. Variables ................................................................................................... 5 1.4.1. Variable independiente ....................................................................... 5 1.4.2. Variable dependiente .......................................................................... 5 1.4.3. Operacionalización de variables ......................................................... 5 CAPÍTULO II .......................................................................................................... 8 MARCO TEÓRICO ................................................................................................. 8 2.1. Antecedentes ............................................................................................ 8 2.1.1. Antecedentes Internacionales ............................................................ 8 2.1.2. Antecedentes Nacionales ................................................................. 13 2.1.3. Antecedentes regionales .................................................................. 16 viii ix 2.1.4. Antecedentes Locales ...................................................................... 17 2.2. Bases teóricas ......................................................................................... 19 2.2.1. Generación de Drenajes Ácidos de Roca ......................................... 19 2.2.2. Tratamiento de Drenajes Ácidos de Roca ........................................ 20 2.2.3. Humedales construidos para el tratamiento de DAR ........................ 22 2.2.4. Composición típica de los humedales anaerobios ............................ 25 2.2.5. Mecanismos de remoción de metales pesados en humedales anaerobios .................................................................................................... 26 2.2.6. Función del sustrato orgánico en los humedales anaerobios ........... 29 2.2.7. Características químicas del sustrato orgánico ................................ 31 2.3. Definición de términos básicos ................................................................ 34 CAPÍTULO III ....................................................................................................... 36 MARCO METODOLÓGICO ................................................................................. 36 3.1. Tipo de investigación............................................................................... 36 3.2. Diseño de la investigación ....................................................................... 37 3.3. Localización ............................................................................................ 36 3.4. Descripción de la zona de estudio .......................................................... 36 3.5. Métodos y técnicas de investigación ....................................................... 37 3.5.1. Caracterización química del sustrato orgánico ................................. 37 3.5.2. Diseño e implementación de los prototipos de humedales ............... 39 3.5.3. Análisis de la eficiencia de la remoción de metales y sulfatos, y comparación de parámetros fisicoquímicos en los PHCA ............................. 46 3.6. Condiciones climáticas ............................................................................ 48 3.7. Participación comunitaria ........................................................................ 49 3.8. Población y muestra ................................................................................ 49 3.8.1. Población .......................................................................................... 49 3.8.2. Muestra ............................................................................................. 49 ix x 3.9. Instrumentos validados de recolección de datos ..................................... 49 3.10. Procesamiento y análisis estadístico de datos..................................... 50 CAPÍTULO IV ....................................................................................................... 53 RESULTADOS ..................................................................................................... 53 4.1. Determinación de la fracción biodegradable del sustrato orgánico... 53 4.2. Diseño e implementación de los prototipos de humedales ............... 55 4.3. Análisis y comparación de la eficiencia en la remoción de metales totales, sulfato y parámetros fisicoquímicos en los PHCA ............................ 60 4.4. Análisis estadístico de datos ............................................................ 87 CAPÍTULO V ........................................................................................................ 90 DISCUSIÓN DE RESULTADOS .......................................................................... 90 5.1. Fracción biodegradable del sustrato orgánico .................................. 90 5.2. Diseño e implementación de los prototipos de humedales ............... 92 5.3. Análisis de la eficiencia de la remoción de metales y sulfatos, y comparación de parámetros fisicoquímicos en los PHCA ............................. 93 CAPÍTULO VI ....................................................................................................... 99 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ....................................................... 99 6.1. Conclusiones .................................................................................... 99 6.2. Recomendaciones .......................................................................... 100 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................... 102 ANEXOS ............................................................................................................ 116 x xi LISTA DE TABLAS Contenido Pág. Tabla 1. Operacionalización de variables .............................................................. 6 Tabla 2. Materiales orgánicos utilizados para el tratamiento de drenaje ácido de mina ..................................................................................................................... 11 Tabla 3. Caracterización del drenaje ácido de roca en Canrey Chico ................. 19 Tabla 4. Componentes químicos de algunos sustratos orgánicos ....................... 32 Tabla 5. Caracterización química de algunos sustratos orgánicos ...................... 33 Tabla 6. Caracterización inicial del DAR del canal Chonta .................................. 40 Tabla 7. Composición del sustrato orgánico en cada prototipo de humedal ........ 42 Tabla 8. Volumen total de los componentes utilizados en los prototipos de humedales ............................................................................................................ 44 Tabla 9. Estaciones de monitoreo en los PHCA .................................................. 46 Tabla 10. Condiciones climáticas durante la operación del PHCA ...................... 48 Tabla 11. Instrumentos de recolección de datos.................................................. 50 Tabla 12. Caracterización química del sustrato orgánico utilizado en los PHCA . 53 Tabla 13. Concentración de metales totales en el sustrato orgánico ................... 54 Tabla 14. Variación de caudal de operación de los PHCA .................................. 55 Tabla 15. Características del afluente contaminado con drenaje ácido de roca .. 61 Tabla 16. Características del efluente del prototipo control ................................. 62 Tabla 17. Medidas descriptivas del pH en los efluentes del PHCA con diferente composición de sustrato orgánico ........................................................................ 64 Tabla 18. Medidas descriptivas del ORP (mV) en los efluentes del PHCA con diferente composición de sustrato orgánico ......................................................... 66 Tabla 19. Medidas descriptivas de la CE (µS/cm) en los efluentes del PHCA con diferente composición de sustrato orgánico ......................................................... 69 Tabla 20. Medidas descriptivas del TDS (mg/L) en los efluentes del PHCA con diferente composición de sustrato orgánico ......................................................... 69 Tabla 21. Medidas descriptivas de la temperatura (°C) en los efluentes del PHCA con diferente composición de sustrato orgánico .................................................. 70 Tabla 22. Resultados del análisis estadístico de los efluentes en los PHCA ....... 88 xi xii LISTA DE FIGURAS Contenido Pág. Figura 1. Esquema de clasificación de algunos de los tratamientos pasivos de aguas contaminadas más utilizados..................................................................... 21 Figura 2. Diagrama de flujo para seleccionar el sistema o la combinación de sistemas para el tratamiento pasivo de drenajes ácidos ...................................... 22 Figura 3. Esquema de un humedal construido anaerobio ................................... 24 Figura 4. Esquema de investigación de los prototipos de humedal construido anaerobio ............................................................................................................. 35 Figura 5. Ubicación de los prototipos de humedales construidos anaerobios ..... 36 Figura 6. Esquema de actividades desarrolladas para la caracterización del sustrato orgánico .................................................................................................. 39 Figura 7. Caracterización del agua del canal Chonta contaminado por DAR ...... 40 Figura 8. Sistema de prototipos de humedal construido anaerobio ..................... 41 Figura 9. Esquema de las actividades desarrolladas para la implementación de los PHCA ................................................................................................................... 45 Figura 10. Adaptación de los PHCA .................................................................... 45 Figura 11. Monitoreo de la calidad del agua en PHCA ........................................ 47 Figura 12. Esquema del diseño estadístico de la investigación........................... 52 Figura 13. Cobertura de macrófito en el prototipo 3 ............................................ 58 Figura 14. Diseño de los prototipos de humedal construido anaerobio: a) Control, b) Prototipo 1, c) Prototipo 2 y d) Prototipo 3 ....................................................... 59 Figura 15. Variación del pH en el afluente y efluentes de los PHCA ................... 63 Figura 16. Variación del ORP en el afluente y efluentes de los PHCA ................ 65 Figura 17. Variación de la CE en el afluente y efluentes de los PHCA ................ 67 Figura 18. Variación del TDS en el afluente y efluentes de los PHCA ................ 68 Figura 19. Variación de la temperatura en el afluente y efluentes de los PHCA . 68 Figura 20. Variación del sulfato y metales de mayor concentración en el afluente y efluentes de los PHCA: a) Sulfato, b) Fe, c) Mg y d) Al ........................................ 73 Figura 21. Variación de metales de menor concentración en el afluente y efluentes de los PHCA: a) Mn, b) Zn, c) Co y d) B .............................................................. 76 xii xiii Figura 22. Variación de metales de menor concentración en el afluente y efluentes de los PHCA: e) Cu, f) Cd y g) As ........................................................................ 78 Figura 23. Variación de la eficiencia en los PHCA para la remoción de metales: a) Co, b) Zn, c) Al y d) Cu ......................................................................................... 82 Figura 24. Variación de la eficiencia en los PHCA para la remoción de sulfato y metales: a) Fe, b) Cd y c) Sulfato ......................................................................... 83 Figura 25. Variación de la eficiencia en los PHCA para la remoción de metales: a) Mg, b) B, c) Mn y d) As ......................................................................................... 86 xiii xiv LISTA DE ACRÓNIMOS ACRÓNIMO DENOMINACIÓN B Fracción biodegradable CCCB Comunidad Campesina Cordillera Blanca CE Conductividad eléctrica CIAL Comité de Investigación Agropecuaria Local DAM Drenaje ácido de mina DAR Drenaje ácido de roca EAS Sustancia fácilmente disponible ORP Potencial óxido-reducción pH Potencial de hidrógeno PHCA Prototipo de humedal construido anaerobio SV Sólidos volátiles TDS Sólidos disueltos totales xiv CAPÍTULO I INTRODUCCIÓN En el Perú se encuentra el 68% de los glaciares tropicales del mundo y se ven afectados por el cambio climático global, evidenciándose en las últimas seis décadas la pérdida del 56% de superficie y volumen de masa glaciar (Instituto Nacional de Investigación en Glaciares y Ecosistemas de Montaña [INAIGEM], 2023). Una de las consecuencias de este proceso de retroceso glaciar en la Cordillera Blanca dentro de varias subcuencas (p. ej. Quillcayhuanca, río Negro, Shallap y Pastoruri) es el impacto en la calidad del agua de las corrientes superficiales; que se agrava por encontrarse asentada sobre rocas sedimentarias de la formación Chicama rica en pirita (Martel, 2016), que al quedar expuesta generan drenajes ácidos de roca (DAR; Zimmer et al., 2018). Los DAR son originados por un proceso natural geoquímico, en el que los afloramientos rocosos de masas sulfurosas se meteorizan y oxidan espontáneamente; es decir, cuando entran en contacto con el oxígeno y agua producen sulfatos solubles, que posteriormente son arrastrados por las lluvias (Grande et al., 2005) y llegan a afectar las aguas superficiales y acuíferos subyacentes (Amos & Younger, 2003), además ocasionan perdida de la biodiversidad, contaminación de suelos (Gallardo Martínez et al., 2020) e incluso impactos sobre la salud de las personas (Zamora & Meza, 2022). 1 2 Como alternativa tecnológica para el tratamiento de los DAR, los humedales construidos surgen como una estrategia viable, ya que son más económicos que los métodos tradicionales, además, son eco-amigables, se autorrenovan, son fáciles de mantener y tienen baja producción de lodos (Sheoran, 2017). Los humedales para el tratamiento de DAR se pueden clasificar en aerobios y anaerobios (Aduvire, 2006). Los humedales anaerobios son relativamente profundos (> 30 cm), compuestos por un sustrato de tierra, compost, paja, aserrín u otros materiales orgánicos ricos en carbono (Jeff Skousen et al., 2017), así como también, estos sistemas son sustentados por piedra caliza y especies fitorremediadoras; todo ello con el fin de disminuir la acidez y remover los metales principalmente como precipitados de sulfuros (Ford, 2003). En estos sistemas, la remoción de metales se debe a una combinación de procesos físicos, químicos y biológicos que incluyen la dilución, dispersión, oxidación/reducción, precipitación/co-precipitación, adsorción, intercambio iónico y, la sorción por parte de los materiales orgánicos (Aduvire, 2006; J. G. Skousen et al., 2019). Estos procesos tienen lugar entre los sedimentos en suspensión y el sustrato del humedal (Aduvire, 2006); siendo así, el sustrato orgánico uno de los componentes más importantes en la mejora de la calidad del agua, ya que es fuente de energía para el metabolismo de las bacterias sulfato reductoras (BSR), permiten el crecimiento de plantas fitorremediadoras, son sustancias quelantes de iones metálicos, eliminan el sulfato y aumentan el pH del agua (Singh & Chakraborty, 2020). La elección de los materiales del sustrato orgánico en humedales anaerobios es un paso crítico para asegurar la eficiencia del sistema, por lo que en varios países se han realizado estudios a escala de laboratorio para evaluar la eficiencia en el tratamiento mediante la combinación de diferentes materiales orgánicos como los residuos de la agricultura, compost (p.ej. municipales, hongos, etc.), estiércol (p.ej. vaca, oveja, caballo, cabra, aves, etc.), viruta de madera entre otros (Rose, 2010; Sekarjannah et al., 2021). La composición de esta mezcla de sustrato orgánico usualmente se define teniendo en cuenta la biodisponibilidad de carbono orgánico y nutrientes (carbohidratos, proteínas y grasas) que sean fácilmente oxidados por las BSR para reducir los sulfatos (Gibert et al., 2004; Neculita et al., 2 3 2011). Asimismo, la disponibilidad de celulosa y lignina proporcionan información de su biodegradabilidad (Place et al., 2006) y su capacidad de mantener la permeabilidad del sistema, además de asegurar la fuente de carbono a largo plazo (Jeff Skousen et al., 2017). Adicionalmente, la inclusión de sustratos con contenido de BSR como el estiércol de vaca, caballo y otros propicia la activación de los procesos microbianos en la primera fase de tratamiento (Sekarjannah et al., 2021). De acuerdo a las experiencias de implementación de humedales construidos en la región Áncash estuvieron compuestos por vegetación, bacterias y sustratos (Zimmer et al., 2018); como sustrato orgánico se ha venido utilizando el estiércol de ovino, humus, turba, compost y otros (Garro Padilla, 2015; Luna, 2018; Palomino Cadenas, 2007; Zimmer et al., 2018), siendo seleccionados debido a su existencia y disponibilidad en la zona. Además, es importante ver la composición de estos materiales, el estiércol fresco de vaca contiene BSR (Choudhary & Sheoran, 2011), ácidos orgánicos y actúa como agente quelante de metales. En cuanto al compost presenta ácido húmico y ácido fúlvico (Sekarjannah et al., 2019). Mientras que el estiércol de oveja aporta carbono y contiene menor cantidad de lignina y celulosa (Li et al., 2020), todo ello contribuye al funcionamiento adecuado del sistema. Si bien es cierto, diferentes estudios muestran resultados positivos en el tratamiento de drenajes ácidos (Gamonal, 2012), en la actualidad aún no se conoce con exactitud el tipo de sustrato orgánico a emplear y sus proporciones óptimas, que aseguren la eficiencia de los humedales en condiciones climáticas altoandinas en un corto y largo plazo (Sekarjannah et al., 2021). Es por ello, que la presente investigación busca evaluar los prototipos de humedales construidos anaerobios con diferente composición de sustrato orgánico (compost, tierra negra, estiércol de vaca y oveja) para el tratamiento de drenajes ácidos de roca del canal Chonta (3.09 pH, 5.00 mg/L hierro total, 68.24 mg/L acidez), ubicado en la Comunidad Campesina Cordillera Blanca del distrito y provincia de Recuay. A ese fin, se caracterizó el sustrato orgánico para determinar su fracción biodegradable y ser considerado en el diseño e implementación de los prototipos de humedal, luego se analizó la eficiencia de remoción de metales, sulfatos, pH, conductividad eléctrica, sólidos disueltos totales, potencial óxido reducción y temperatura, considerando los datos del afluente y efluente para 3 4 evaluar el sistema integralmente. Además, la investigación generará información importante sobre la elección y proporción del sustrato orgánico a emplear, para optimizar los humedales construidos para el tratamiento de aguas contaminadas con DAR y el mantenimiento de sistemas existentes en las comunidades campesinas a nivel local, regional y nacional, con la finalidad de mejorar la calidad de agua y aumentar la oportunidad de reúso del agua tratada. 1.1. Formulación del problema ¿Cuál es el desempeño de los prototipos de humedales construidos anaerobios con diferente composición de sustrato orgánico (compost, estiércol de vaca y oveja) para el tratamiento de drenajes ácidos de roca del canal Chonta – Recuay, Áncash? 1.2. Objetivos 1.2.1. Objetivo General Evaluar prototipos de humedales construidos anaerobios con diferente composición de sustrato orgánico (compost, estiércol de vaca y oveja) para el tratamiento de drenaje ácido de roca del canal Chonta – Recuay, Áncash. 1.2.2. Objetivo Específicos • Determinar la fracción biodegradable de los sustratos orgánicos a emplear (compost, estiércol de vaca y oveja) en los prototipos de humedales construidos anaerobios para el tratamiento de drenaje ácido de roca del canal Chonta – Recuay, Áncash. • Diseñar e implementar los prototipos de humedales construidos anaerobios con diferente composición de sustrato orgánico (compost, estiércol de vaca y oveja) para el tratamiento de drenaje ácido de roca del canal Chonta – Recuay, Áncash. • Analizar y comparar la eficiencia de la remoción de metales (As, Cd, Fe, Mn, Pb, Al, B, Hg), sulfatos, pH, conductividad eléctrica y solidos totales disueltos en los prototipos de humedales construidos anaerobios con diferente composición de sustrato orgánico 4 5 (compost, estiércol de vaca y oveja) para el tratamiento de drenaje ácido de roca del canal Chonta – Recuay, Áncash. 1.3. Hipótesis Los prototipos de humedales construidos anaerobios con diferente composición de sustrato orgánico (compost, estiércol de vaca y oveja) para el tratamiento de DAR del canal Chonta presentan diferentes eficiencias, siendo el prototipo 3 el más eficiente. Teniendo > 70% remoción de metales (As, Cd, Fe, Mn, Pb, Al, B, Hg) y > 70% remoción de sulfatos. 1.4. Variables 1.4.1. Variable independiente Composición de sustrato orgánico (compost, estiércol de vaca y oveja) en los prototipos de humedales construidos anaerobios. 1.4.2. Variable dependiente Calidad del agua en el efluente de los prototipos de humedales construidos anaerobios. 1.4.3. Operacionalización de variables 5 6 Tabla 1. Operacionalización de variables Dependiente Variables Definición teórica Indicador Unidad pH Unidad de pH Conductividad eléctrica µS/cm Medida de las cargas iónicas que circulan dentro del agua. mg/l Contenido de sustancias orgánicas e inorgánicas en el agua. mV Medida de la capacidad de una solución para actuar como agente oxidante o reductor. °C Magnitud física que indica el nivel de calor de una sustancia mg/L Cantidad de metales totales encontrados en el agua. mg/l Cantidad de sulfato Método colorimétrico encontrados en el agua. Calidad de agua: Conjunto de parámetros que indican que el agua puede ser usada para Sólidos disueltos diferentes propósitos totales Calidad del (Leyva, 2017). agua en el Efluente: Agua tratada efluente de los que sale del prototipo de Potencial óxido prototipos de humedal construido reducción humedales (Sing y Chacraborti, construidos 2020). anaerobios Prototipo de humedales (Dependiente) Temperatura construidos anaerobio: Construcción de un humedal acondicionado a escala de laboratorio Concentración de (Riaño Cárdenas, 2019). metales totales Concentración de sulfato Descripción Medida de acidez alcalinidad del agua. Método Instrumento Potenciometría Multiparamétrico Portátil Hach Sension 156 Espectrometría de masa con plasma acoplado inductivamente Espectrofotómetro de masa inducida o Columna cromatográfica 6 Independiente 7 Sustrato orgánico: Material orgánico importante para el Composición proceso de tratamiento de sustrato del drenaje ácido de orgánico: roca, se tiene en cuenta compost, su composición y estiércol de disponibilidad de vaca y oveja carbono como fuente de (Independiente) energía para las bacterias sulfato reductoras (Ji et al, 2022). Lignina * % p/p Contenido de lignina en el Método de sustrato orgánico. extracción sucesiva Análisis en laboratorio Celulosa * % p/p Contenido de celulosa en el Método de sustrato orgánico. extracción sucesiva Análisis en laboratorio Modelo de ecuación para estimar la de fracción un biodegradable del sustrato orgánico B= -0.028X + 0.830 Ecuación de Chandler Fracción biodegradable * (B) - Sólidos volátiles * % p/p Sólidos que se volatilizan a Método Estándar una cierta temperatura. APHA-AWWA-WEF Horno de mufla, balanza analítica % p/p Porción orgánica de un sustrato que puede ser Método gravimétrico usado fácilmente por los organismos. Estufa y balanza analítica mg/kg Cantidad de metales totales encontrados en el sustrato orgánico. Espectrometría de masa con plasma acoplado inductivamente Espectrofotómetro de masa inducida Sustancias fácilmente disponibles (EAS) * Concentración de metales totales * Potencial degradabilidad de sustrato orgánico. Nota. * Indicadores analizados para la caracterización inicial del sustrato orgánico 7 8 CAPÍTULO II MARCO TEÓRICO 2.1. Antecedentes 2.1.1. Antecedentes Internacionales Muchos estudios han destacado la aplicación potencial de sustratos ricos en materia orgánica en diferentes humedales construidos para la remoción de metales pesados. Singh & Chakraborty (2020) en su estudio denominado “Performance of organic substrate amended constructed wetland treating acid mine drainage (AMD) of North-Eastern India”, evaluaron un humedal construido de flujo subterráneo horizontal a escala de laboratorio compuesto por grava, material orgánico (estiércol de vaca, astillas de bambú y suelo) y macrófitos para remediar el drenaje ácido de mina que presentaba un pH < 2.5 y contenía metales pesados como Fe, Mn y Al; así como también sulfato (900–1500 mg/l), su sistema tuvo un tiempo de retención hidráulica (TRH) de 7 d. Posteriormente, caracterizaron las muestras de sustratos y analizaron su efluente, en el cual calcularon la eficiencia de remoción de iones metálicos (%). En su investigación obtuvieron como resultado el incremento de pH (< 2.5 a 6.4) con la simultanea eliminación de metales y la reducción del sulfato (44 - 75%); su eficiencia de remoción del Fe fue 91.6% y de Al el 59.7%. Por otro lado, al inicio de la operación de su sistema registraron valores 8 9 altos de conductividad eléctrica (CE) y solidos disueltos totales (SDT) en el efluente, que podría ser producto de la liberación de iones durante el proceso de mineralización de la materia orgánica. Los autores concluyeron que el sistema fue efectivo para el tratamiento de drenaje ácido de mina (DAM), habiendo un incremento del pH, eliminación de metales y reducción del sulfato. Por su parte Gibert et al. (2004) en su estudio denominado “Chemical characterisation of natural organic substrates for biological mitigation of acid mine drainage”, enfatizan en la elección del sustrato orgánico adecuado, al actuar como donantes de electrones para los reductores de sulfato. Para ello, en su metodología emplean cuatro materiales orgánicos: el compost municipal, estiércol de oveja, estiércol de aves y hoja de roble, en estos componentes se analizaron el contenido de lignina, celulosa, sustancias fácilmente disponibles y sólidos volátiles, seguidamente evaluaron su relación con el incremento del pH y reducción del sulfato; además, consideraron un incremento del TRH de 0.73 a 9 d. Los resultados de su estudio mostraron que en el estiércol de oveja se obtuvo una remoción de sulfato mayor al 99% y un incremento de pH (de 2 a 7.7). También, se muestra que cuanto menor es el contenido de lignina en el sustrato orgánico mayor es su degradabilidad y capacidad para desarrollar actividad bacteriana; en el que se obtuvo 0.56 de fracción biodegradable para el estiércol de oveja. En el estudio los autores concluyeron que el estiércol de oveja produce condiciones reductoras para la actividad bacteriana y es el donante de electrones más exitoso para la eliminación de sulfato. También, Choudhary & Sheoran (2011) en su estudio denominado “Comparative study of cellulose waste versus organic waste as substrate in a sulfate reducing bioreactor”, mencionan que en la elección del sustrato orgánico se debe considerar su biodegradabilidad, ya que la eficacia del sustrato depende de su capacidad de biodegradación. Por lo que en su metodología emplearon 10 biorreactores compuestos por estiércol de vaca y cabra, aserrín, desechos celulósicos 9 10 entre otros materiales orgánicos, cada uno de ellos contaba con una base de canto rodado, después de un mes de adaptación, en la etapa de monitoreo tomaron muestras de fluidos en la entrada y salida de cada sistema, para analizar algunos parámetros del efluente previamente filtraron sus muestras dos veces. Los resultados del estudio muestran que el estiércol de vaca incrementó el pH de 2.7 a 7.1; mientras que las concentraciones de sulfato disminuyeron de 4103 mg/l a 2183 mg/l en su primera fase, finalizando con una reducción del 54% de sulfato en la segunda fase. Asimismo, las concentraciones de Fe y Mn en el afluente fueron de 183.48 mg/l y 32.46 mg/l, removiéndose en el 87.7% y 17.9% respectivamente. El estudio concluyó que los sistemas compuestos por estiércol fueron muy eficientes en la remoción de metales pesados, sulfatos e incremento del pH. Sekarjannah et al. (2019) en su estudio denominado “Management of mine acid drainage in a constructed wetland using hyacinth plants and addition of organic materials”, para encontrar la mejor combinación de sustrato orgánico emplearon un tratamiento de humedal anaerobio compuesto de una mezcla de material orgánico diferenciado en 4 niveles: A0 como testigo (sin materia orgánica), A1 la combinación de compost de estiércol de vaca + aserrín (1:2), A2 de compost de estiércol de vaca + aserrín (1:1) y A3 de compost de estiércol de vaca + aserrín (2:1), preliminarmente se realizó la caracterización de la materia orgánica en contenido de Fe y Mn. Para su análisis estadístico utilizaron el análisis de varianza al nivel del 5% seguido de la prueba de rango múltiple de Duncan con un nivel del 5% al haber diferencias significativas. Como resultado de la investigación, en la caracterización del compost de estiércol de vaca se tuvo 0.05 mg/l Fe y 0.04 mg/l Mn, el tratamiento A3 fue el sistema más eficiente al incrementar el pH de 2.85 a 4.15; mientras que, el A1 removió el Fe hasta los 1.55 mg/l y el A2 removió el Mn hasta los 14.23 mg/l. El autor concluye que la adición de la materia orgánica tuvo un efecto significativo en la neutralización del pH y la disminución de la concentración de algunos metales como el Mn en el agua; siendo así, 10 11 el tratamiento A3 el que presentó la mejor composición de materia orgánica para la remediación del agua. Considerando los antecedentes descritos anteriormente, se puede decir que los humedales construidos son una opción viable para el tratamiento de aguas ácidas. Siendo apoyado también por la investigación de Sheoran (2017) denominado “Management of Acidic Mine Waste Water By Constructed Wetland Treatment Systems: a Bench Scale Study”, en el cual emplea un humedal a escala de banco compuesto por sustrato (estiércol de cabra en polvo, virutas de madera y suelo) y macrófitos, su sistema fue evaluado en 5 etapas de período de retención. Obteniendo como resultado en la primera etapa de su investigación la neutralización del pH de 2.93 a 7.22; la reducción de la conductividad, sulfato y acidez hasta el 35.93%, 28.09% y 88.89% respectivamente. Mientras que las tasas potenciales de remoción de metal fueron 95.20 a 95.51% para Fe, de 88.80 a 90.12% Pb y 35.90 a 76.44% para Mn. En el estudio se concluyó que, entre los metales pesados el Fe fue el primer elemento en ser removido, seguido de cerca por Pb y otros metales pesados presentes en el agua. En la Tabla 2, se presenta los tipos de materiales orgánicos examinados para neutralizar el drenaje ácido de mina (DAM) y el tiempo de retención proporcionado por cada método. Tabla 2. Materiales orgánicos utilizados para el tratamiento de drenaje ácido de mina Método Sistema Utilizado de materia Columna. orgánica (mazorca de maíz 90.6 g, madera 90.6 g y estiércol de vaca 422.9 g), arena caliza 38.1 g, arena de sílice 373.8 g y sedimento de un estanque como inóculo bacteriano. El tiempo Tiempo de retención Menos de 40 d. Resultados Fuente • Aumentó del pH de 2.85 Ruehl 2020 a cerca de 6. • Remediación de 1 g de Fe, 5.5 g de Cu, 0.5 g de Zn y 21.4 g de sulfato por litro por año. y 11 Hiibel, 12 de residencia medio fue de 5.0 ± 0.3 d en función de un caudal de 376.3 mL/d. Una mezcla de 15% de sedimento de arroyo, 55% de piedra caliza, 30% de material orgánico (2 tipos: estiércol de oveja y compost municipal), añadida con DAM sintético (1:10). Columna, en la Menos de 30 d. 2da semana, 1 g/dm3 de acetato de sodio y 1 g/dm3 de oxalato de potasio en el reactor de compost. Una mezcla de 15% de sedimento de riachuelo, 30% de calcita, 40% de cuarzo, 15% de materiales orgánicos (compost municipal, estiércol de oveja y aves y hoja de roble), adicionado con DAM sintético de 1:10. Por lotes, el Menos de 30 d. día 27 se añadió al reactor 1 g/dm3 de acetato de sodio y 1 g/dm3 de oxalato de potasio. 66 l de DAM con un caudal de 9.43 L/d tratados con un humedal artificial compuesto por 20% astillas de bambú, 60% estiércol de vaca, 10% tierra y 10% grava sembrada con Typha latifolia con una densidad de 25 plantas/m2. Humedal Menos de 10 d. construido de flujo subsuperficial horizontal a escala de laboratorio. Se trataron 800 mL de Lote. DAM con 200 g de mezclas de materias orgánicas (30% de compost de hojas, 18% de estiércol de ave y 2% de astillas de madera de arce), 3% de urea, 30% de arena, sedimento de arroyo 15%, 2% de CaCO3. 5d • Aumento del pH de 2.4 a > 7 (estiércol de oveja). • Disminución del sulfato de 528.33 a <480.3 mg/L. • Aumenta el sulfuro de 0 a >64.14 mg/L en el tratamiento del estiércol de oveja. • El compost municipal tiene la capacidad de remediación más baja. • pH de 2.4 a >6. • Potencial redox de +500 mV a < -100 mV. • Disminuye el sulfato de 1057.66 mg/L a <768 mg/l. • Aumenta el sulfuro de 0 a >96.21 mg/L en el tratamiento de estiércol de ovino. • pH de 2 ± 0.25 a >7. • La eliminación de sulfato fue del 92.1 %. • Eliminación de Cr (99.7 %), Ni (97.8 %), Co (93.7 %), Fe (91.6 %) y Al (59.7 %). Gibert et al., 2004 Gibert et al., 2004 Singh y Chakrabort, 2020 Zagury • pH de 3.9 - 4.2 a 8. • Potencial redox <-350 2006 mV. • Tasas de reducción de sulfato ±71 mg/L/d. • Disminución de sulfuro de 0 a 0.2 mg/L. • Eliminación de metales pesados Fe (100%), Zn (94%), Mn, Cd y Ni (99%). 12 et al., 13 En un medio de una mezcla de suelo arenoso (0-4 mm), estiércol de vaca, turba y dolomita, se sembraron 45 Typha latifolia de cinco meses de edad a una densidad de 2.84/m2 y se llenaron con DAM a un caudal de 1.5 mL/min, durante 5 d. • Incremento del pH de Dufresne et al., 2015 4.2 a 7.6. • Remoción de Fe (86.9%) y Zn (91.2%); sin embargo, se aumentó Mn en 35.2% y Ni en 6%. Humedal 5d artificial de flujo superficial horizontal a escala piloto realizado en 0.2 m2. En los • Aumentó el pH de 3.13 Newcombe próximos 3 d. Brenan, 2010 a 6.32. • Remoción de Mn de 10.4 a 6 mg/L, Fe de 15 a <10 mg/L, Al de 8.1 a <1 mg/L y Zn de 0.5 a 0.01 mg/L. • Reducción de sulfato en un 39% (a los 63 d). Fuente: Modificado de Sekarjannah et al. (2021) 0.5 g de sedimento y Lote. 0.25 g de materia orgánica (50% caparazón de cangrejo y 50% compost de champiñón gastado) para tratar 100 mL de drenaje ácido de mina. 2.1.2. Antecedentes Nacionales Se realizaron estudios de tratamiento de drenajes ácidos de mina mediante humedales construidos, teniendo en cuenta el sustrato orgánico en la remoción de metales pesados (Fe, Mn y otros) e incremento de pH. Es así que Núñez (2021) en su estudio denominado “Tratamiento de drenaje ácido de mina, mediante humedal artificial en condiciones de laboratorio”, emplea 3 humedales construidos con diferentes sustratos, el S1 (roca caliza y compost), S2 (roca caliza, compost y microorganismos) y S3 (roca caliza, compost, microorganismos y macrófitos) bajo condiciones de laboratorio teniendo un flujo permanente de 1 l/h de drenaje ácido y un TRH de 2.93 d. De ello obtuvo como resultado la neutralización de pH de 2 a 7.9, 7.5 y 7.7 en el S1, S2 y S3 respectivamente, dichos cambios estarían relacionados a la oxidación del sustrato orgánico (compost) o disolución de la capa de roca caliza. Sus 3 humedales fueron eficientes en la remoción de Fe, teniendo una máxima eficiencia en el S1 con 99.8%, seguido del S3 en 99.5% y el S2 en 98.6%, sin mostrar diferencias significativas entre ellos; de igual manera ocurrió con el Mn 13 y 14 teniendo en el S1 la máxima eficiencia de remoción (99.8%). Concluyendo de su investigación que los sustratos incorporados en los humedales construidos permitieron disminuir contaminantes de aguas ácidas de mina. Viendo así importante la composición del sustrato en un humedal construido para la remoción de metales del drenaje ácido, tal como lo evalúa Licapa (2015) en su estudio denominado “Influencia del Tiempo de Retención y Composición del Sustrato en la Remoción de Hierro y Cobre del Drenaje Ácido de Mina en Humedales Artificiales”, mediante 2 sistemas de humedales construidos con características de 1.08m de largo, 0.72 m de ancho y 1.00 m de profundidad, compuestos por grava , caliza, macrófitos y sustrato orgánico de la mezcla de estiércol de vaca predescompuesto y musgo/aserrín, en una proporción de 20 a 80% para el humedal 1 y su inversa en el humedal 2; los sistemas estuvieron en una etapa de adaptación por 3 meses antes de su monitoreo y su análisis estadístico fue aplicando el análisis de varianza (ANOVA). Los resultados de su estudio muestran que ambos humedales construidos han sido eficientes, obteniendo una remoción de Fe hasta un 97.33% en el humedal 1 y 97.66% en el segundo. Por lo que el autor concluye que la composición del sustrato influye significativamente sobre la remoción de metales en el tratamiento de drenaje ácido y estadísticamente el mejor sistema es el segundo humedal. Estudios semejantes de tratamiento de aguas acidas han sido desarrollados por Huamán (2018), en su investigación denominada “Tratamiento de drenaje ácido del depósito de desmonte unsuitable IV Yanacocha Norte por el proceso de humedales en Serpentín”, donde diseñó humedales construidos en dos fases, en la primera utilizó un humedal que tuvo como sustrato el compost (yanahumus) y macrófitos; mientras que para la segunda implementó 2 humedales, que estuvieron compuestos por cuarzo, compost y macrófitos, con la variación del caudal y un TRH de 4.31 h. De todo ello, obtuvo como resultado en la primera fase la neutralización del pH de 3.4 a 7.2 durante una 14 15 evaluación de 8 h; asimismo, obtuvo resultados similares en la segunda fase, donde la eficiencia de remoción de los principales metales fue de Cd 91.4%, Fe 97.9% y Pb 27.5%. También, Calle Galindo (2021) en su estudio denominado “Propuesta de mejoramiento de la calidad de aguas de drenaje ácido de minas (DAM), mediante un diseño de remediación combinada con tratamientos pasivos en la zona industrial de la Corporación Minera Toma La Mano S.A.” para mejorar la calidad del agua implementó un sistema de tratamiento que consta de 2 etapas: el pretratamiento y el sistema remediador, éste último tuvo una fase aerobia y anaerobia. La primera fase estuvo compuesta por un lecho de grava, estiércol y macrófitos nativos (Juncus arcticus), en tanto los materiales empleados para la segunda fase fueron arena gruesa, abono y piedra, este sistema remediador tuvo un caudal de ingreso de 34.25 m3/d y un tiempo de retención de 30 h; posteriormente realizó la evaluación de parámetros físicos y químicos en la entrada y salida del sistema. De su investigación obtuvo como resultado en el primer proceso el incremento de pH, la precipitación de iones metálicos y evitó la movilización de hidróxidos; mientras que en el segundo proceso generó biopelículas que aceleraron la reacción de oxidación de contaminantes. Concluyendo el autor que la mejor opción de tratamiento del drenaje ácido es un sistema combinado entre métodos químicos y biológicos. Asimismo, Lovera et al. (2001) en su estudio denominado “Simulación de la producción y remediación de aguas provenientes del drenaje de rocas ácidas (ARD)”, investigaron la remediación del agua contaminada mediante un estudio experimental de pruebas en columnas de percolación. Para la remediación emplearon procesos de neutralización, precipitación química de los iones metálicos presentes y el uso apropiado de floculantes, para finalmente, obtener un efluente que cumpla con los límites máximos permisibles internacionales al tener un pH de 7, sulfatos 627.3 mg/l y Fe3+ 0.05 mg/l. Concluyendo de 15 16 su investigación, que la remediación del agua ácida puede ser lograda mediante variadas tecnologías según sus resultados obtenidos. 2.1.3. Antecedentes regionales Torres (2015) en su investigación “Determinación de la eficiencia de la remoción del plomo y cobre a través del sistema de tratamiento de los humedales en Mesapata- Catac 2014”, para evaluar la eficiencia del sistema de humedales construidos (compuesto por piedra porosa, compost y suelo orgánico-turba) en el tratamiento de aguas acidas tuvo 2 puntos de monitoreo. En su estudio obtuvo resultados positivos, la última medición del pH en el afluente y efluente fue de 6.09 y 5.33 respectivamente; de la misma manera redujo la conductividad de 3750 µS/cm a 1397 µS/cm y los sólidos totales en suspensión de 463 mg/l a 91 mg/l. En el caso de metales en el efluente resultó una remoción de Pb de 1.15 mg/l a < 0.59 mg/l. El autor concluye que, durante los años 2012 y 2013 la remoción del Pb es eficiente (33%). Estudios similares fueron realizados por Vergaray et al. (2022) en su investigación denominada “Humedal estacionario construido para el tratamiento de drenaje ácido de mina de la Planta Concentradora de Mesapata-Catac”, donde emplearon prototipos de humedales construidos compuestos por BSR, grava, compost y especie fitorremediadora, y analizadas estadísticamente mediante la regresión polinómica y análisis de varianza (p < 0.05) muestran la neutralización del pH de 2.6 a 7.92; mientras que el comportamiento de la concentración de Fe en el humedal a inicio de su investigación fue de 300 mg/l y finalizó en 1.6 mg/l, obteniendo así una eficiencia de remoción del 99.8%. Los autores concluyeron que el prototipo de humedal construido alcanza su estabilidad en un mes y presenta una gran capacidad remediadora al elevar el pH e inmovilizar el Fe. 16 17 2.1.4. Antecedentes Locales Con referencia a los estudios locales no se tienen antecedentes sobre la proporción y tipo de sustrato orgánico ideal para la remoción de metales pesados; sin embargo, se han venido desarrollando investigaciones referentes a la eficiencia de humedales. Según Garro Padilla (2015) en su estudio denominado “Eficiencia de un humedal artificial de tres celdas para el tratamiento de drenaje ácido de roca en el canal Chonta - Canrey Chico - Recuay - Áncash periodo: octubre 2014 - abril 2015”, el humedal que evaluó estuvo compuesto por: arena gruesa, estiércol de ovino, BSR y Juncus arcticus. Para determinar la eficiencia del humedal relacionó el % de remoción de los parámetros de Fe, Pb, As y Cd entre el porcentaje de cobertura de la especie fitorremediadora. Obteniendo como resultados en su estudio el incremento de pH de 3.38 a 5.7, la conductividad disminuyó de 870 a 600 µS/cm y la eficiencia del humedal en la remoción de Fe fue del 42.31%, Pb 14.37%, As 66.66% y Cd 17.86%. Siendo respaldado sus resultados años posteriores por Zimmer et al. (2018), en el cual menciona que el humedal es una estrategia eficaz y de bajo costo para remediar las aguas del canal Chonta. En el estudio realizado por Zimmer et al. (2018) denominado “Implementación de dos Sistemas de Biorremediación como Estrategia para la Prevención y Mitigación de los efectos del Drenaje Ácido de Roca en la Cordillera Blanca, Perú” propusieron la biorremediación como una estrategia eficaz y de bajo costo para mitigar los efectos del DAR. En la Comunidad Campesina Cordillera Blanca implementaron un humedal de tres celdas con forma sinusoidal, compuestos por capas de arena gruesa, turba, estiércol y arena gruesa, y trasplantaron el Juncus arcticus para el tratamiento de agua ácida (pH 3.00); mientras que, con el Comité de Usuarios de Agua Shallap-Huapish-Toclla implementaron solo una celda de humedal compuesto por capas arena gruesa, mezcla de turba y estiércol, arena gruesa y grava, se emplearon las especies Calamagrostis ligulata, C, ovata, Juncus 17 18 arcticus, J. bufonius L. y Distichia sp., para tratar el agua (4.01 de pH, alta concentración de Al, Fe, Mn, As, Cd y Cr). La metodología que aplicaron fue mediante la investigación acción participativa, trabajando en conjunto con la población para el análisis de la calidad del agua, donde analizaron parámetros de pH, oxígeno disuelto, conductividad eléctrica, temperatura, turbiedad, sólidos totales en suspensión y metales totales. Observándose la mejora de la calidad del agua en el efluente y consecuentemente la mejora en la producción de los pastos cultivados. En el estudio realizado por Leyva (2017) denominado “Capacidad secuestradora de metales pesados en el sedimento del humedal alto andino Collotacocha - Canrey - Recuay - Ancash, periodo abril setiembre 2015”, la evaluación del humedal Collotacocha presentó 3 estaciones de muestreo que fueron monitoreados durante dos épocas del año. De su estudio obtuvo como resultado en la época de lluvia un pH de 4.10, 4.73 y 4.21 en la entrada, parte central y salida del humedal respectivamente, a diferencia de la conductividad eléctrica que decreció de 969 µS/cm, 525 µS/cm y 439 µS/cm en el mismo orden de las estaciones de muestreo; añadiendo a ello, se removió metales pesados como Al (de 2.88 mg/l a 1.05 mg/l), As (<0.001 mg/l), Fe (de 7.93 mg/l a 4.76 mg/l), Mn (de 0.54 mg/l a 0.28 mg/l) y Pb (<0.0038 mg/l). Mientras que en la época de estiaje su estudio muestra un mínimo incremento de pH de 3.09 a 3.10, en el caso de la conductividad disminuyó de 977 µS/cm a 532 µS/cm; adicionalmente hay una variación en la remoción de metales, en Al (de 6.88 mg/l a 6.62 mg/l), As (<0.001 mg/l), Fe (de 13.03 mg/l a 53.15 mg/l), Mn (de 1.80 mg/l a 1.36 mg/l) y Pb (de 0.0022 mg/l a 0.0024 mg/l). El autor concluye que al recuperar la calidad del agua del río Uquian por medio del humedal se mejorará la actividad ganadera de la zona. 18 19 2.2. Bases teóricas 2.2.1. Generación de Drenajes Ácidos de Roca Los DAR son originados por un proceso natural geoquímico, donde la roca sedimentaria rica en material sulfurado (pirita) se oxida y lixivia por la exposición al agua y el oxígeno (Grande et al., 2005; Loayza et al., 2014; Valverde et al., 2018). En la Cordillera Blanca, el DAR se produce por el retroceso glaciar de las últimas décadas que deja a la intemperie las formaciones Chicama y Chimú (Martel, 2016). El DAR se caracteriza por un pH bajo y altas concentraciones de metales y metaloides disueltos (INAP-International Network for Acid Prevention, 2014) como se muestra en la Tabla 3, estos son arrastrados por las lluvias o escorrentías contaminando las aguas superficiales y subterráneas (Ma et al., 2019), suelos circundantes y ecosistemas (Sheoran & Sheoran, 2006) por lo que es difícil y costoso prevenir o minimizar la oxidación de sulfuros en la fuente (INAP, 2014). Tabla 3. Caracterización del drenaje ácido de roca en Canrey Chico Parámetro Unidad Valor Unidad de pH 3.38 Conductividad eléctrica µS/cm 870.00 Hierro total mg/L 8.00 Plomo total mg/L 0.283 Cadmio total mg/L 0.074 Arsénico total mg/L 0.150 Aluminio total mg/L 2.350 Boro total mg/L 0.484 Mercurio total mg/L 0.251 pH Fuente: Garro Padilla (2015) 19 20 2.2.2. Tratamiento de Drenajes Ácidos de Roca El tratamiento de DAR tiene como finalidad mejorar la calidad del agua para que sea adecuada en el uso de diferentes actividades (riego, bebida de animales y otros), como también la protección de la salud humana y la ecológica (INAP, 2014). Existen dos tipos de tratamiento, el activo y el pasivo (López Pamo et al., 2002). Tratamiento activo Son sistemas en los que se utilizan reactivos químicos básicos o alcalinos (carbonato de calcio, piedra caliza, cal apagada, ceniza de soda, soda caustica, hidróxido de amonio y oxido de calcio) para el proceso de neutralización (Chang et al., 2000; Kefeni et al., 2017), porque suelen ser más eficaces que los tratamientos pasivos en términos de capacidad y tiempo de tratamiento (Alsaiari & Tang, 2018). Sin embargo, estos sistemas poseen algunas desventajas que limitan su implementación para el tratamiento de DAR. Entre ellos encontramos que requieren de una operación continua en una planta química de tratamiento, además de un control constante y mantenimiento de sus instalaciones (Aduvire, 2006), por lo que sus costos son elevados (López Pamo et al., 2002). Por otro lado, se generan grandes volúmenes de lodo en los procesos, que necesitan de un manejo especial para evitar impactos negativos, lo que incurre a gastos adicionales (Alakangas et al., 2013). En la actualidad se sigue investigando para mejorar la eficiencia de los procesos activos y reducir los problemas asociados con lodos (Johnson & Hallberg, 2005). Tratamiento pasivo Se han desarrollado sistemas de tratamiento pasivo para la remediación del drenaje ácido (Biermann et al., 2014) con un enfoque basado en procesos químicos y biológicos naturales. Estos sistemas son viables económicamente, generan menos impactos ambientales comparados con los sistemas activos, requieren bajos insumos y son sencillos de operar y mantener (Chen et al., 2021). Tienen la finalidad de incrementar el pH y remover los metales pesados de las aguas ácidas 20 21 (Denegri-Muñoz & Iannacone, 2020) mediante procesos microbianos, físicos y químicos. Además, este tipo de tratamiento presenta las siguientes ventajas (Ford, 2003). • No requieren energía eléctrica. • No requieren ningún equipo mecánico, químicos peligrosos o edificaciones. Entre los métodos pasivos destacan los humedales aerobios, los humedales anaerobios o balsas orgánicas, los drenajes anóxicos calizos, los canales óxicos calizos, los sistemas sucesivos de producción de alcalinidad, entre otros (Aduvire, 2006); estos métodos se emplean solos o combinados, dependiendo del tipo de drenaje ácido y de los requerimientos de tratamiento (López Pamo et al., 2002). Figura 1. Esquema de clasificación de algunos de los tratamientos pasivos de aguas contaminadas más utilizados Nota. Modificado de Rodríguez & García-Cortés (2006) 21 22 La elección del tratamiento pasivo según las características del drenaje ácido se basa en un análisis químico inicial en función a mediciones de pH, alcalinidad, acidez y en el caso se considere un drenaje anóxico se debe medir las concentraciones de Fe+3, Al y oxígeno disuelto; asimismo, la calidad del agua se debe analizar en diferentes épocas y en condiciones climáticas representativas (Robert S. Hedin et al., 1994). A continuación, se muestra el tipo y la secuencia de tratamiento pasivo en función a las características del drenaje ácido de roca a tratar. Figura 2. Diagrama de flujo para seleccionar el sistema o la combinación de sistemas para el tratamiento pasivo de drenajes ácidos Nota. Adaptado de López Pamo et al. (2002) 2.2.3. Humedales construidos para el tratamiento de DAR Los humedales naturales desempeñan un rol protector importante en los ecosistemas, debido a que mejoran la calidad de fuentes de agua 22 23 contaminadas de forma natural o por las actividades humanas (von der Heyden & New, 2005). De ellos, surgen los humedales construidos que son reconocidos como sistemas de ingeniería biológico pasivo (Chen et al., 2021) que puede ser controlado y manipulado, obteniendo mejores resultados en la eficiencia de remoción de metales (Mays & Edwards, 2001) y siendo una alternativa rentable para la remediación de aguas acidas (Sheoran, 2017). Además, los humedales construidos son sostenibles, de bajo consumo de energía y fácil operación (Jia et al., 2020); sin embargo, para su implementación requieren áreas grandes de terreno (Zhang et al., 2020). Entre los sistemas de humedales construidos para tratar los drenajes ácidos se encuentran los humedales aerobios y anaerobios (Ford, 2003). Humedal construido aerobio Son humedales poco profundos de gran superficie, compuestos por materia orgánica, grava y macrófitos, considerándose un tratamiento eficaz para afluentes alcalinos y aguas residuales (Seervi. et al., 2017). Dentro de estos sistemas se propician ambientes para el desarrollo de plantas y comunidades de organismos (algas y bacterias) que participan en la depuración del agua (López Pamo et al., 2002); además, se promueven la oxidación y la hidrolisis en el agua superficial del humedal (J. Skousen et al., 1999) ayudando a la remoción de metales por medio de la oxidación y precipitación natural (Jeff Skousen & Ziemkiewicz, 2005); Estos humedales presentan una lámina de agua que inunda el sustrato y al tener un flujo lento alcanzan el tiempo de retención necesario para la eficacia de los procesos. También, el sustrato oxigenado del humedal propicia el desarrollo de ciertas colonias de bacterias que actúan como catalizadoras en la reacción de oxidación de los contaminantes presentes en el humedal (Aduvire, 2006). 23 24 Humedal construido anaerobio Son sistemas que se emplean para el tratamiento de aguas netamente ácidas y se componen comúnmente de piedra caliza, sustratos ricos en materia orgánica y plantas (Jeff Skousen & Ziemkiewicz, 2005) como se muestra en la Figura 2. Para el mantenimiento de las condiciones anaeróbicas en el sistema, la lámina de agua debe estar cercana a los 0.30m (J Skousen et al., 1998). Figura 3. Esquema de un humedal construido anaerobio Nota. Esquema extraído de Núñez (2021) La mejora de la calidad del agua en un humedal anaerobio se debe a la materia orgánica biodegradable que se metaboliza y produce ácidos orgánicos disponibles para el consorcio de bacterias anaerobias (Kuyucak, 2002), quienes realizan el proceso de reducción de sulfato a sulfuro de hidrógeno (Ec. 1) que reacciona con los iones metálicos disueltos formando precipitados de sulfuro metálico; estos precipitados se pueden eliminar debido a su baja solubilidad, densidad favorable y propiedades de sedimentación (Kieu et al., 2015; Kuyucak, 2002; Xu & Chen, 2020). Las BSR consumen al mismo tiempo iones de hidrógeno y producen dióxido de carbono que genera alcalinidad, incrementando así los niveles de pH; esto se debe a la reducción de la concentración de iones hidrógeno (Kuyucak, 2002) y al efecto amortiguador del bicarbonato 24 25 producido en la reducción (Seervi. et al., 2017; J Skousen et al., 1998), como se muestra en la siguiente ecuación: 2𝐻2 𝑂 + 𝑆𝑂42− + 𝐶(𝑚𝑎𝑡𝑒𝑟𝑖𝑎 𝑜𝑟𝑔á𝑛𝑖𝑐𝑎) ⇔ 𝐻2 𝑆 + 2𝐻𝐶𝑂3− (𝑏𝑖𝑐𝑎𝑟𝑏𝑜𝑛𝑎𝑡𝑜 𝑎𝑙𝑐𝑎𝑙𝑖𝑛𝑜) … Ec. (1) Bajo este proceso los metales también pueden precipitar en forma de carbonatos e hidróxidos (Henrot & Wieder, 1990). Según los procesos explicados para mantener la eficiencia del humedal anaerobio en la etapa de mantenimiento se debe renovar el sustrato agotado y reemplazarlo con materia orgánica fresca (Jeff Skousen & Ziemkiewicz, 2005). 2.2.4. Composición típica de los humedales anaerobios Los humedales anaerobios cuentan con los siguientes componentes: Grava Es un tipo de material granular que tiene como principal característica el apoyo físico, siendo el soporte estructural del humedal, permite la infiltración y conductividad hidráulica suficiente para el paso del agua a través del humedal construido (Delgadillo et al., 2010). Además, constituye una superficie para la formación de biopelículas de microorganismos como las bacterias (Vergaray et al., 2022). Bacterias sulfato reductoras (BSR) Son un conjunto de procariotas que se caracterizan por una respiración anaeróbica que utiliza sulfato como aceptor terminal de electrones y una fuente orgánica como donante de electrones (Sheoran et al., 2010); además, se desarrollan en un rango de pH de 5.0 a 9.0. El proceso de las BSR tiene una mayor eficiencia en la precipitación de metales pesados a bajas concentraciones de metales (Xu & Chen, 2020). 25 26 Entre el consorcio de bacterias principalmente se encuentran algunos géneros de Desulfovibrio y Desulfotomaculum (J. Skousen et al., 1999). Sustrato orgánico Los humedales construidos anaerobios cuentan con una capa de sustrato orgánico como el compost, estiércol, aserrín, turba, astillas de madera o heno, entre otros (Seervi. et al., 2017). Este sustrato puede estar compuesto por varios materiales orgánicos entremezclados y dispuestos sobre la capa de grava (Aduvire, 2006). Además, su degradación implica la disponibilidad de nutrientes, temperatura, desnitrificación, procesos de reducción como la sulfato reducción y otros (García et al., 2010; Tanner & Sukias, 1995). Macrófitos Los macrófitos de los humedales, como Typha sp., Juncus sp. y Scirpus sp., fomentan un flujo más uniforme, ayudan a estabilizar el sustrato, a mantener las poblaciones microbianas y brindan cualidades estéticas al humedal (Jeff Skousen & Ziemkiewicz, 2005). Una característica de los macrófitos fitorremediadores es su tolerancia a la presencia de metales pesados, acumulando este contaminante en su parte área (Macnair, 2002) y suministran materia orgánica al humedal a lo largo del tiempo proporcionando sitios para la sorción de metales, así como fuentes de carbono para el metabolismo bacteriano (Marchand et al., 2010). 2.2.5. Mecanismos de remoción de metales pesados en humedales anaerobios Los mecanismos de eliminación de metales pesados del DAR ocurren en tres componentes de un humedal, en su sustrato, vegetación e hidráulica; este último es el factor determinante para establecer y mantener los procesos en el humedal. Además, todos los procesos que ocurren en un humedal construido dependen unos de otros, teniendo un 26 27 mecanismo de remoción complejo que implica procesos físicos, químicos y biológicos (Sheoran & Sheoran, 2006). Procesos físicos Mediante el proceso de sedimentación se logra remover metales pesados asociados con la partícula en el agua ácida (Hammer, 2014), este proceso considera la velocidad de sedimentación de las partículas y la longitud del humedal (Sheoran & Sheoran, 2006). Para las partículas menos densas que el agua, la sedimentación se da cuando las partículas en suspensión se adhieren a los metales u otros para ganar mayor peso y decantar en el humedal, de esta manera los contaminantes llegan a ser filtrados o retenidos en el sistema (Matagi et al., 1998). Procesos químicos Los procesos químicos que ocurren generalmente para la remoción de metales son la sorción, adsorción, precipitación y coprecipitación. La sorción, es la retención a corto plazo o la inmovilización a largo plazo de contaminantes a través de la transferencia de iones del agua al suelo, es decir, de la fase de solución a la fase sólida (Sheoran & Sheoran, 2006). La adsorción es un fenómeno superficial en el que la acumulación de iones metálicos tiene lugar en la superficie (Sheoran et al., 2010) e implica que los metales pesados se adhieren en la arcilla y materia orgánica por atracción electrostática (Patrick et al., 1977) y una vez adsorbidos en coloides húmicos o arcillosos, los metales pesados permanecerán como átomos metálicos (Matagi et al., 1998). La precipitación es uno de los principales mecanismos por lo que se remueve el metal del agua y se deposita en los sedimentos; donde los metales pueden precipitar para formar sulfuros metálicos insolubles muy estables en condiciones anaeróbicas limitando su biodisponibilidad en ecosistemas acuáticos (Matagi et al., 1998). Añadiendo a ello, muchos 27 28 metales a menudo sufren coprecipitación con hidróxidos, óxidos u oxihidróxidos de Fe y Mn y sulfuros metálicos producidos por bacterias, posteriormente se eliminan del sistema (Jong & Parry, 2003; Metcalf et al., 2002). Otro proceso químico complementario es la hidrolisis que está relacionado con el pH del agua; por ejemplo, la hidrolisis u oxidación del Al se da a un pH neutro de 7.0 para la formación de óxidos, oxihidróxidos e hidróxidos insolubles siendo la principal forma de remover el aluminio (Lesage, 2006). Por otro lado, el Mn, bajo condiciones anaerobias, se encuentra principalmente en su forma reducida (Mn²⁺), la cual es más soluble y, por lo tanto, difícil de eliminar. Esto representa un desafío en los sistemas de tratamiento, ya que su precipitación puede ser complicada y poco efectiva; además, el Mn retenido puede llegar a liberarse, lo que afectaría la calidad del efluente de los humedales construidos (Hallberg & Johnson, 2005a; Kröpfelová et al., 2009). La remoción inicial del As es por medio de la coprecipitación con sulfuros de Zn, Cu, Fe y Ni o son absorbidos por sulfuros metálicos. Así como también su eliminación puede atribuirse a las condiciones reductoras establecidas por la actividad de las BSR (Jong & Parry, 2003). Procesos biológicos Es considerada la vía más importante en la remoción de metales pesados en humedales construidos que involucra a los microorganismos (bacterias) y plantas (Sheoran & Sheoran, 2006). Las bacterias anaerobias mediante su metabolismo absorben y almacenan en su estructura una cantidad de metales, también intervienen en la remoción de metales mediante procesos de reducción (Kojima et al., 2006), adsorción y bioadsorción (Matagi et al., 1998). Por otro lado, el incremento del pH facilita la eliminación de metales en el DAR, que a su 28 29 vez ayuda en la precipitación de los metales como hidróxidos o sulfuros (López Pamo et al., 2002). Las especies fitorremediadoras contribuyen en el tratamiento mediante la absorción directa y secuestro de contaminantes por procesos físicos que ocurren en la raíz (rizomas) de la planta (León, 2020); sin embargo, el aporte de la biomasa vegetal en la remoción de metales es aproximadamente de 2 a 10% (Lee & Scholz, 2007; Singh & Chakraborty, 2020). 2.2.6. Función del sustrato orgánico en los humedales anaerobios Los sustratos son un componente importante en los humedales construidos, ya que llegan a influir significativamente en el costo, la eficiencia del tratamiento y la sostenibilidad de estos sistemas; desempeñan un papel central en el proceso de tratamiento mediante la filtración física, intercambio iónico (Ji et al., 2022), adsorción de iones metálicos y la formación de compuestos complejos y quelatos (Sekarjannah et al., 2019). Este debe contener suficiente carbono y nutrientes para el crecimiento de las plantas y desarrollo de las BSR (Sekarjannah et al., 2021); así como también cumple el rol de eliminar el oxígeno disuelto en el humedal (J Skousen et al., 1998). Según Chang et al. (2000), Ji et al. (2022), Scholz & Lee (2005), Seervi. et al. (2017) y J Skousen et al. (1998) la propiedad de donador de electrones del sustrato orgánico es uno de los factores más importantes que determinan el éxito del proceso microbiano, ya que apoya el proceso de sulfidogénesis. En condiciones anaeróbicas las BSR utilizan el sulfato como aceptor final de electrones en lugar del oxígeno y, reducen el sulfato (SO42-) a sulfuro de hidrógeno (H2S), como se muestra en la Ecuación 1. En esta reacción la materia orgánica se oxida y descompone. Además, el H2S liberado en el proceso reacciona con los metales disueltos en el agua contaminada (como el hierro, zinc, cobre, plomo) formando sulfuros metálicos insolubles. Estas reacciones pueden describirse de la siguiente manera (Aduvire, 2006): 29 30 𝐹𝑒 2+ + 𝐻2 𝑆 → 𝐹𝑒𝑆(𝑠) + 2𝐻 + … Ec. (2) 𝑍𝑛2+ + 𝐻2 𝑆 → 𝑍𝑛𝑆(𝑠) + 2𝐻 + … Ec. (3) Resultando la precipitación de sulfuros metálicos como FeS, ZnS, CuS, que son insolubles en agua, quedando retenidos en el humedal. Esto reduce significativamente la cantidad de metales tóxicos en el efluente. Al mismo tiempo, la oxidación de la materia orgánica y la liberación de bicarbonato (HCO3⁻) ayudan a neutralizar la acidez y elevan el pH del agua. Este incremento en el pH favorece la precipitación de otros metales, como el hierro, en forma de hidróxidos (Kolmert & Johnson, 2001; Kuyucak, 2002). Por lo que, la composición y proporción del sustrato orgánico debe ser considerado cuidadosamente, teniendo en cuenta las siguientes propiedades (Batty & Younger, 2004; Sekarjannah et al., 2021). a) Contener suficiente fibra para mantener la permeabilidad tras la saturación y la autocarga, permitiendo el flujo de agua a través del humedal. b) Contener bacterias sulfato reductoras, que generalmente existen en el estiércol de animales. c) Debe ser alcalino, para no agravar el problema de acidez del agua. d) Por seguridad no debe contener virus que sean potencialmente dañinos. e) Considerar una mezcla de materiales orgánicos de fácil biodegradación junto con otros de degradación lenta, con la finalidad de optimizar la eficiencia del humedal a largo del tiempo. Los materiales orgánicos seleccionados también influyen en la determinación del tiempo de retención hidráulica requerido por el afluente; siendo el mejor material orgánico el que se relaciona con un menor tiempo de retención hidráulica, por lo tanto, menor área de tratamiento necesario (Sekarjannah et al., 2021). 30 31 2.2.7. Características químicas del sustrato orgánico La disponibilidad del carbono orgánico (CnH2nOn) afecta el grado de actividad microbiológica en un humedal, y consecuentemente la eficiencia del tratamiento biológico, dado que el drenaje ácido presenta poco carbono orgánico disuelto (Kolmert & Johnson, 2001; Neculita et al., 2007); además, la disponibilidad de fuentes de carbono es el factor limitante crítico para el trabajo de las bacterias sulfato reductoras (Riaño Cárdenas, 2019). Todo ello, se basa en la biodegradabilidad del sustrato orgánico, por lo que se tiene como objetivo primordial la selección del sustrato orgánico adecuado para que el proceso sea eficiente y viable (Gibert et al., 2004). Según Gibert et al. (2004), las bacterias sulfato reductoras (BSR) pueden metabolizar un conjunto limitado de sustratos orgánicos, que generalmente son ácidos orgánicos y alcoholes. Los compuestos que se degradan con mayor facilidad son las sustancias específicas como proteínas, carbohidratos, grasas, etc. Esto implica, que el material orgánico tenga un valor nutritivo basado en la fracción poco digerible por la presencia de compuestos orgánicos estructurales como la celulosa, lignina, y la fracción de digestión rápida. Para predecir que el sustrato orgánico provee de nutrientes a las BSR se basa en la fracción biodegradable, que está en relación al contenido de lignina en el sustrato orgánico. En el caso de los materiales orgánicos generalmente empleados en los humedales anaerobios, se puede decir que el estiércol de vaca presenta un contenido lignocelulósico (celulosa, lignina y otros) debido a que su principal alimento ya ha sido procesado por los microorganismos en el rumen y como resultado presenta una hidrolisis lenta. Mientras que, el estiércol de oveja posee compuestos de lignina inferiores y contiene microbios hidrolíticos que impulsan el paso de la descomposición (Li et al., 2020). El compost, contiene ácidos húmico y fúlvico que ayudan a absorber metales pesados por los grupos funcionales en ambas 31 32 sustancias (Sekarjannah et al., 2019). La tierra negra, contiene altos niveles de Ca, Na y Mg como macronutrientes y el Mn entre los micronutrientes, también nitratos, celulosa, hemicelulosa, lignina y otros (Barbaro et al., 2011; Chang et al., 2000). En la Tabla 4 se muestra los compuestos químicos que contienen los sustratos orgánicos usualmente empleados en un humedal construido anaerobio. Tabla 4. Componentes químicos de algunos sustratos orgánicos Sustrato orgánico Estiércol Compost Tierra negra Composición química Lignina, celulosa, proteínas, hemicelulosa, lípidos, macroelementos (C, H, O, N, S, P), fibra, ceniza. Celulosa, hemicelulosa, lignina, ácidos húmico y fúlvico, macroelementos (C, H, N, S, P). Celulosa, lignina, hemicelulosa, macronutrientes (N, C, P, K, Ca, Na, S, Zn, Mn, Cu, Fe y Mg), nitratos, cenizas y otros. Fuente (Anakalo et al., 2009; Gibert et al., 2004; Li et al., 2020; Xu & Chen, 2020) (Gibert et al., 2004; Sekarjannah et al., 2019; Jeff Skousen et al., 2017) (Barbaro et al., 2011; Chang et al., 2000; Cohen et al., 1986; Oliver, 2017) Siendo así importante la caracterización química del sustrato orgánico en contenido de lignina, celulosa, sustancias fácilmente disponibles, solidos volátiles y la fracción biodegradable. La lignina en el sustrato orgánico La caracterización previa del sustrato orgánico ayudará a predecir su degradabilidad antes de llevar a cabo la implementación del humedal; respecto a la lignina, se menciona que cuanto menor es su contenido en el sustrato orgánico, mayor es su biodegradabilidad y capacidad para desarrollar actividad bacteriana (Gibert et al., 2004); esto quiere decir, que la lignina no se degrada significativamente (Place et al., 2006). 32 33 La celulosa en el sustrato orgánico La presencia de celulosa genera una barrera protectora para evitar su descomposición y ser fuente de carbono por más tiempo (Irfan et al., 2011). Sustancias fácilmente disponibles del sustrato orgánico Es la porción orgánica de un sustrato que los microorganismos pueden usar fácilmente; sin embargo, no todos los constituyentes son usados por las bacterias anaerobias (Prasad et al., 1999). Entre las sustancias fácilmente disponibles están los azúcares solubles, almidón, proteínas, aceites, hemicelulosa, aminoácidos, entre otros (Jeff Skousen et al., 2017; Zagury et al., 2006). Solidos volátiles del sustrato orgánico El análisis de los sólidos volátiles es considerado como la materia que realmente es transformada por las bacterias. Siendo este el peso de los sólidos orgánicos quemados cuando el material seco se calcina a 550 °C (Sanabria et al., 2018). La fracción biodegradable del sustrato orgánico La fracción biodegradable que está relacionada con la composición química del sustrato orgánico, la cuantificación de fracciones poco digeribles (como la lignina y la celulosa que son resistentes a la descomposición microbiana), fracciones de digestión rápida, la relación C/N o sustancias específicas (Gibert et al., 2004). En la Tabla 5 se muestra las características químicas de los sustratos orgánicos usualmente empleados en el humedal construido anaerobio. Tabla 5. Caracterización química de algunos sustratos orgánicos Unidad Lignina Celulosa % p/p % p/p Estiércol de oveja 8.32 ± 1.28 7.45 ± 1.87 Compost Tierra negra 15.34 ± 1.85 37.21 ± 3.08 14.5 49.3 33 34 Sustancias fácilmente disponibles Solidos volátiles Fracción biodegradable % p/p 44.87 ± 4.13 33.95 ± 3.25 - % p/p 86.70 ± 2.58 59.32 ± 1.15 - - 0.56 ± 0.05 0.10 ± 0.07 - Nota. Adaptado y traducido de Chang et al. (2000) y Gibert et al. (2004) 2.3. Definición de términos básicos • Bacterias anaerobias: Son bacterias que se desarrollan bajo una condición de potencial redox reducido y ausencia de oxígeno, sin embargo, la sensibilidad frente al oxigeno varia de una especie a otra (Rivas & Mota, 2006). • Bacterias sulfato reductoras: Son procariotas que se caracterizan por una respiración anaeróbica, utilizan sulfato en sus procesos de reducción y se desarrollan en un rango de pH de 5 a 9 (Sheoran et al., 2010; Xu & Chen, 2020). • Calidad de agua: Conjunto de parámetros que indican que el cuerpo de agua puede ser usada para diferentes propósitos (UNESCO/WHO/UNEP, 1996). • Celulosa: Es un polisacárido que tiene como estructura base los enlaces glucosídicos, con coloración semicristalina (Gañán et al., 2017). Su descomposición es lenta y aporta carbono orgánico (Irfan et al., 2011). • Condiciones anaerobias: Es un estado en el cual la condición de oxígeno es demasiado baja para favorecer el correcto funcionamiento de sistemas de tratamiento (Aduvire, 2006). • Drenajes ácidos de roca: Es un lixiviado generado por la oxidación de los afloramientos rocosos superficiales de masas sulfurosas, que contaminan los cuerpos de agua (Grande et al., 2005). • Estiércol: Residuo orgánico proveniente de animales (oveja, vaca, caballo, entre otros) ricos en nutrientes aprovechados en la agricultura y sistemas de tratamiento (Younger et al., 2002). 34 35 • Fracción biodegradable: Es la porción de degradabilidad que presentan los desechos orgánicos, basados en la cuantificación de las fracciones poco digeribles (Gibert et al., 2004). • Humedal: Ecosistema que depende de la inundación constante o saturación recurrente sobre o cerca de la superficie del suelo. Las características esenciales aparte de la inundación son los suelos hídricos y vegetación hidrófita (Mendez, 2018). • Humedales construidos: Son diseños acondicionados con capacidad de reproducir las características de los humedales naturales, para aprovechar su potencial depurador (Denegri-Muñoz & Iannacone, 2020). • Lignina: Es un biopolímero abundante en las plantas que se deriva principalmente de monolignoles básicos (Chávez Marvin & Domine Marcelo, 2013); además, su baja presencia en el material orgánico representa su mayor degradación (Gibert et al., 2004). • Metales pesados: Son aquellos elementos químicos que presentan una densidad igual o superior a 5 g/cm3 cuando están en forma elemental, y en concentraciones excesivas son tóxicos para la célula (Navarro et al., 2007). • Precipitación: Es el proceso mediante el cual los iones de los metales solubles y biodisponibles se precipitan del agua ácido en forma de hidróxidos, para lo cual se hace uso de alcalizantes como la piedra caliza (Aduvire, 2006). • Prototipo de humedal: Construcción de un humedal, fabricado a escala de laboratorio o pequeña escala (Riaño Cárdenas, 2019). • Sustrato orgánico: Es la materia orgánica que contiene ácidos húmicos y fúlvicos, celulosa, lignina, proteínas, fibra, macroelementos, entre otros; siendo fuente de nutrientes para las plantas y desarrollo de BSR (Anakalo et al., 2009; Gibert et al., 2004; Li et al., 2020; Sekarjannah et al., 2021). 35 36 CAPÍTULO III MARCO METODOLÓGICO 3.1. Tipo de investigación Considerando la clasificación de Hernández-Sampieri, R. & Mendoza, C. (2018), el tipo de investigación desarrollada se define en: • Según el propósito: Aplicada, porque busca resolver problemas específicos en contextos concretos utilizando conocimientos ya existentes o generando nuevo conocimiento aplicable. • Según el enfoque de la investigación: Cuantitativa, ya que se basa en la recolección y análisis de datos numéricos, con un enfoque en la medición y el uso de estadísticas para probar la hipótesis. • Según el diseño temporal: Longitudinal, ya que se evalúan los cambios y desarrollos del fenómeno a lo largo del tiempo. • Según el grado de manipulación de las variables: Experimental, porque se manipula la variable independiente para observar el efecto sobre la variable dependiente. 36 37 3.2. Diseño de la investigación La presente investigación se divide en tres etapas: la caracterización del sustrato orgánico, el diseño e implementación de los prototipos de humedal, y evaluar su monitoreo y eficiencia, descritos en el siguiente esquema. 37 35 Figura 4. Esquema de investigación de los prototipos de humedal construido anaerobio Caracterización sustrato orgánico del • Análisis de celulosa, lignina, solidos volátiles y sustancias facilmente disponibles en los materiales orgánicos. • Determinación de la fracción biodegradable de los materiales orgánicos. • Análisis de la concentracion de metales en los materiales orgánicos. Diseño e Implementación de los prototipos de humedal • Caracterización del afluente. • Diseño de la infraestructura de los humedales construidos. • Condiciones de operación del humedal. • Implementación de los prototipos de humedal. • Incorporación de los componentes de los PHCA: grava, material orgánico (compost, tierra negra, estiércol de oveja y vaca) y macrófitos. • Adaptación y puesta en marcha de los prototipos de humedales. Monitoreo y eficiencia del humedal • Monitoreo del afluente y efluentes de los prototipos de humedal. • Determinación de la eficiencia de la remoción de metales y sulfato. • Comparación del comportamiento del pH, conductividad eléctrica, sólidos disueltos totales, temperatura, potencial óxido-reducción del efluente de los prototipos de humedal. 35 36 3.3. Localización La implementación de los Prototipos de Humedal Construido Anaerobio (PHCA) se realizó en la Comunidad Campesina Cordillera Blanca – sector Quisuar, ubicado en el centro poblado de Canrey Chico, distrito y provincia de Recuay, a una altitud de 3661 m s.n.m. En la Figura 5 se presenta el mapa de ubicación. Figura 5. Ubicación de los prototipos de humedales construidos anaerobios 3.4. Descripción de la zona de estudio La Comunidad Campesina Cordillera Blanca (CCCB) se ubica en las alturas de la unidad hidrográfica del Río Negro, tiene un espacio geográfico variado y presenta una condición climática frígida, la época de lluvia inicia en setiembre y finaliza en marzo; mientras que, la época seca es entre junio y agosto (Instituto de Montaña, 2017). 36 37 Las principales actividades con la que se sustenta la población de esta localidad es la ganadería y agricultura, por lo que la calidad del recurso hídrico es fundamental para su desarrollo (Zimmer et al., 2018). Entre los productos cultivados se encuentra la papa, cebada, avena, oca, olluco, mashua y otros; además, en sus áreas extensas de bosques (queñual, aliso, pino, eucalipto) y pastizales se pueden encontrar vacunos, ovinos, equinos y más. Asimismo, la CCCB, con el fin de fortalecer su organización y ser partícipes en proyectos de investigación que beneficien a la comunidad y los ecosistemas constituyó el Comité de Investigación Agropecuario Local (CIAL), Comité de defensa, Comité de producción y el Comité de pastos del Parque Nacional Huascarán (Instituto de Montaña, 2017). 3.5. Métodos y técnicas de investigación 3.5.1. Caracterización química del sustrato orgánico El sustrato orgánico es uno de los componentes más importantes del humedal, ya que brinda nutrientes y es fuente de energía para los microorganismos y macrófitos que contribuyen en la remoción de contaminantes; sin embargo; es difícil predecir con exactitud que composición y proporción es la adecuada para asegurar y mejorar la eficiencia del sistema. Por lo que, su caracterización química es importante, al brindar información sobre su biodegradabilidad y biodisponibilidad de nutrientes (Gibert et al., 2004; Neculita et al., 2011; Sekarjannah et al., 2021; Singh & Chakraborty, 2020). Teniendo en cuenta ello, en la presente investigación se recolectaron y emplearon los siguientes materiales orgánicos: el compost fue obtenido de la Municipalidad Provincial de Carhuaz; mientras que, los estiércoles de vaca y oveja fueron traídos de los corrales y campos de la CCCB. Al conjunto de este sustrato se agregó la tierra negra, con la finalidad de tener un balance en la mezcla de sustrato y que contribuya con nutrientes al sistema a largo plazo, este material también se obtuvo de la CCCB. 37 38 Para la caracterización del sustrato orgánico se colectó y homogenizó un 1 kg de muestra de estiércol de oveja y vaca, compost y tierra negra. Luego en el laboratorio, se secaron muestras de 300g a 100° C por 4 h empleando un horno estufa. Después, las muestras secas (150 g) fueron enviadas al Laboratorio de Investigación y Certificaciones – LABICER, donde realizaron el análisis del contenido de lignina y celulosa mediante el método de extracción sucesiva, propuesto por Irfan et al. (2011). En el caso del análisis de las sustancias fácilmente disponibles (EAS) se empleó el método gravimétrico, propuesta por Gibert et al. (2004). Los sólidos volátiles (SV) del sustrato orgánico se analizaron en el Laboratorio Académico de la Facultad de Ciencias del Ambiente – UNASAM. Para ello, se secó una porción de cada muestra de material orgánico y se calcinó 25g en un horno de mufla a 550 °C por 2 h; esta fracción de SV se determinó según el método Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 21st Edition. 2005. 2540E (APHA, 2005). Además, la concentración de metales en el sustrato orgánico se determinó por medio del análisis de espectrometría de masa con plasma acoplado inductivamente (IPC-MS) en el laboratorio de Servicios Analíticos Generales S.A.C. – SAC. Este análisis se realizó con la finalidad de ver la influencia de su concentración en los resultados de la calidad del agua. Determinación de la fracción biodegradable La fracción biodegradable (B) se determinó en base al contenido de lignina en el sustrato orgánico, según el modelo de ecuación de Chandler, citada en la investigación de Gibert et al. (2004). 𝐵 = −0.028𝑋 + 0.830 … Ec. (4) Donde: X: Contenido de lignina en los materiales orgánicos. 38 39 Figura 6. Esquema de actividades desarrolladas para la caracterización del sustrato orgánico 3.5.2. Diseño e implementación de los prototipos de humedales Durante el diseño e implementación de los PHCA se tuvo en cuenta las siguientes actividades: Selección del sistema de tratamiento del DAR La caracterización fisicoquímica inicial del agua contaminado por DAR nos permitió identificar la calidad del agua y su nivel de contaminación; tambien, a tener una línea base para la elección y el diseño del sistema de tratamiento y mejorar su calidad. Considerando ello, se realizó un análisis de parámetros como pH, temperatura, conductividad eléctrica, solidos disueltos totales y oxígeno disuelto del agua del canal Chonta (captación hacia los prototipos) empleando un Multiparámetro Portátil Hach Sension 156, en 3 momentos del día (8:00 a.m., 12:00 p.m. y 4:00 p.m.). Además, se colectaron muestras de agua (1L) para el análisis de acidez, sulfatos y determinación de hierro. La acidez se determinó en el laboratorio SAG a través del método SMEWW-APHA-AWWA-WEF.Part 2310 B. Acidity y el sulfato 39 40 mediante la determinación de aniones inorgánicos por cromatografía iónica; mientras que la concentración de hierro fue realizada a través del Iron Test MQuant 114438 en el Laboratorio de la FCAM – UNASAM. En la Tabla 6, se muestran los resultados obtenidos en la caracterización inicial del agua del canal Chonta. Tabla 6. Caracterización inicial del DAR del canal Chonta Parámetro Unidad Valor promedio Unidad de pH 3.09 ± 0.07 °C 10.87 ± 2.58 Conductividad eléctrica µs/cm 216.43 ± 46.03 Sólidos Disueltos Totales mg/L 112.30 ± 4.46 Oxígeno disuelto mg/L 21.43 ± 0.70 Acidez mg/L 68.24 ± 4.49 Fe total mg/L 5.00 Sulfato mg/L 156.5 pH Temperatura Según las consideraciones planteadas por Aduvire (2006), para corrientes de agua con pH < 4.5, oxígeno disuelto > 5 mg/l, y concentraciones de Fe y Al mayores a 1 mg/l, se recomienda un sistema de humedal anaerobio. Teniendo en cuenta los resultados de la caracterización inicial del canal Chonta descritos en la Tabla 6, la presente investigación optó por la tecnología de humedal anaerobio. Figura 7. Caracterización del agua del canal Chonta contaminado por DAR 40 41 Diseño de los prototipos de humedales anaerobios El sistema de tratamiento estuvo conformado por una captación y un tanque de almacenamiento y distribución de caudal, que permitió alimentar el sistema a un flujo constante. Seguidamente se tuvieron los PHCA (control, 1, 2 y 3) que integraron el tratamiento del agua contaminada por DAR. En la Figura 8 se muestra el sistema de PHCA implementados. Figura 8. Sistema de prototipos de humedal construido anaerobio Los PHCA presentaron las siguientes dimensiones: 0.97 m de ancho, 1.17 m de largo y 0.97 m de alto. Asimismo, en cada uno de ellos se instalaron conexiones hidráulicas (tuberías de ingreso, salida y de purga, llaves de control) con la finalidad de asegurar la conducción del afluente y efluente. Los componentes fijos que integraron cada prototipo de humedal fueron la grava de 3/8”-1/2”, el Juncus arcticus Willd. y espejo de agua. El sustrato orgánico varió para cada prototipo, según se muestra en la Tabla 7. 41 42 Tabla 7. Composición del sustrato orgánico en cada prototipo de humedal Prototipo de humedal Sustrato orgánico Control - 1 75% estiércol de oveja + 12.5% compost + 12.5% tierra negra 2 75% estiércol de vaca + 12.5% compost + 12.5% tierra negra 3 37.5% estiércol de oveja + 37.5 % de estiércol de vaca + 12.5% compost + 12.5% tierra negra La altura de la columna de los PHCA estuvo determinada por el espesor de sus componentes como se muestra en la Tabla 8, y presentó un borde libre de 0.37 m, para los aportes de exceso de precipitación o eventos no predecibles. Condiciones de operación de los PHCA Según Aduvire (2006), para el diseño de un humedal anaerobio para el tratamiento de drenaje ácido de mina puede considerarse mediante la metodología de carga aplicada, basado en el caudal de tratamiento, donde la principal variable a tener en cuenta es la acidez del afluente. Para la determinación de la carga hidráulica de los PHCA se empleó la siguiente ecuación modificada: q= Carga acidez Ca … Ec. (5) Donde: q: Carga hidráulica en L/m2.d. Ca: Eliminación de acidez por carga contaminante en gAcidez/m2.d. Carga acidez: se expresa en g/L. 42 43 El valor teórico de eliminación de acidez por carga contaminante es de 3.5 a 8 g/m2.d. (Aduvire, 2006), para la presente investigación se empleó un valor de 7 g/m2.d. El caudal de tratamiento se definió como el producto de la carga hidráulica y el área superficial del humedal (López Pamo et al., 2002). 𝑄 =𝑞∗𝐴 … Ec. (6) Donde: Q: Caudal de tratamiento en L/d o m3/d. q: Carga hidráulica en m/d. A: Área superficial del humedal en m2. Además, el prototipo de humedal presentó un área superficial de 1.135 m2 y un volumen efectivo de 0.681 m3. El tiempo de retención hidráulica (TRH) se determinó a través del volumen efectivo del sistema y el caudal de tratamiento, teniendo la siguiente ecuación: 𝑉 𝑇𝑅𝐻 = 𝑄 … Ec. (7) Donde: TRH: Tiempo de retención hidráulica en d. V: Volumen efectivo del humedal en m3. Q: Caudal de tratamiento en L/d o m3/d. Implementación de los PHCA Se realizó la recolección, transporte y preparación de los componentes que conformaron cada humedal. Los macrófitos fueron extraídos y trasplantados cada 6 individuos por prototipo en 1.135 m2, luego se tomaron muestras y fueron secadas para su identificación. Además, para calcular la cobertura inicial de macrófitos en los PHCA, se tuvo en cuenta el área superficial del prototipo, seguido se halló el área estándar de cobertura de cada mata de macrófito, luego este valor se multiplicó por el número de macrófitos presentes en cada humedal, aplicando la regla de tres simple (Garro Padilla, 2015; Rodríguez & Vargas, 2019). 43 44 La grava de 3/8” – 1/2" fue obtenida de las canteras del distrito de Cátac. En cuanto al sustrato orgánico, se empleó estiércol de oveja y vaca, compost y tierra negra en las proporciones descritas en la Tabla 7. Para determinar el volumen total de los diferentes componentes que integraron los PHCA se tuvo en cuenta la dimensión superficial del recipiente y el espesor de cada componente, como se describe en la Tabla 8. Tabla 8. Volumen total de los componentes utilizados en los prototipos de humedales Componente Grava (3/8” – 1/2") Estiércol de vaca Estiércol de oveja Sustrato orgánico Compost Tierra negra Espejo de agua (DAR) Espesor (m) 0.15 0.20 0.25 Volumen (m3) 0.91 0.26 0.26 0.09 0.09 1.13 En la Figura 9, se presenta el esquema de las actividades desarrolladas para la implementación de los PHCA, que abarca desde la excavación para la captación y línea de conducción del agua, hasta la puesta en marcha del sistema. 44 45 Figura 9. Esquema de las actividades desarrolladas para la implementación de los PHCA Además, para verificar la operación de cada PHCA se realizó la medición de caudales y regulación mediante el método volumétrico, 2 veces por semana. Periodo de adaptación de los PHCA La adaptación de los prototipos fue de 6 meses, en el cual se verificó su operación y se realizaron actividades de mantenimiento para asegurar su correcto funcionamiento y comprensión; asimismo, se tuvo este periodo de tiempo por temas logísticos y de presupuesto. Al finalizar la fase de adaptación se inició con la etapa de monitoreo. Figura 10. Adaptación de los PHCA 45 46 Estaciones de monitoreo en los PHCA Las estaciones de monitoreo principalmente se ubican en el afluente (muestra compuesta de los prototipos de humedal) y efluentes de cada prototipo, como se muestra en la Tabla 9. Tabla 9. Estaciones de monitoreo en los PHCA Estación de monitoreo Afluente * PH0 Efluente control PH01 Efluente prototipo 1 PH02 Efluente prototipo 2 PH03 Efluente prototipo 3 PH04 Nota. * Muestra compuesta del afluente de los PHCA. 3.5.3. Análisis de la eficiencia de la remoción de metales y sulfatos, y comparación de parámetros fisicoquímicos en los PHCA Para analizar la eficiencia de remoción de metales pesados y sulfatos, así como también comparar el pH, conductividad eléctrica (CE), sólidos disueltos totales (TDS), potencial óxido-reducción (ORP) y temperatura en los PHCA se consideraron las siguientes actividades: Monitoreo del PHCA El monitoreo se realizó durante 6 meses (11.06.23 al 03.12.23), dentro de este periodo se analizó la calidad de agua cada 15 días, para ello se tomaron muestras del afluente y efluente de los prototipos. Se midieron los parámetros fisicoquímicos de pH, CE, TDS, ORP y temperatura en campo, mediante el método de potenciometría empleando un Multiparámetro Portátil Hach Sension 156. Para el análisis de la concentración de metales, las muestras fueron preservadas con ácido nítrico (HNO3) a un pH < 2, antes de su envío al laboratorio SGS del Perú S.A.C, el cual empleó el método ICPMS; mientras que, el sulfato se analizó mediante la determinación de aniones inorgánicos por cromatografía iónica. 46 47 Figura 11. Monitoreo de la calidad del agua en PHCA Comparación de los parámetros fisicoquímicos de campo Se analizaron los datos de los parámetros fisicoquímicos como pH, CE, ORP, TDS y temperatura, visualizándolos mediante gráficas estadísticas en Excel versión 2019, posteriormente se llevó a cabo un análisis estadístico descriptivo. Una vez procesados los datos, se compararon los resultados entre los prototipos de humedales: control, prototipo 1, prototipo 2 y prototipo 3. Determinación de la eficiencia del PHCA La eficiencia de cada prototipo de humedal se analizó en base a la remoción de metales totales (As, Cd, Fe, Mn, Pb, Al, B, Hg, Mg, Zn, Co, Cu) y sulfato, como lo menciona (R. S. Hedin et al., 1994) empleando la siguiente ecuación. 𝐸 (%) = [𝐶0 − 𝐶1 ] x 100 𝐶0 … Ec. (8) Donde: E: Eficiencia del prototipo de humedal (%). 𝐶𝑜 : Concentración inicial de metal en el afluente (mg/L). 𝐶1 : Concentración final de metal en el efluente (mg/L). De igual manera se evaluó la eficiencia de la remoción de sulfato en cada prototipo de humedal. 47 48 Por otro lado, un aspecto importante a considerar fue la evaluación del prototipo control, teniendo en cuenta la variación de parámetros fisicoquímicos, sulfato y metales totales en comparación con el afluente contaminado por DAR. Esta evaluación nos permitirá evidenciar el efecto de los macrófitos y agregados en la remoción de contaminantes; así como también, entender la contribución del sustrato orgánico en el humedal al comparar la eficiencia de los prototipos de humedal. 3.6. Condiciones climáticas El Centro Poblado de Canrey Chico, al ubicarse en la sierra, presenta un clima frígido (SENAMHI, 2021). Asimismo, durante el periodo (enero hasta diciembre 2023) de adaptación y monitoreo de los PHCA se trabajó bajo las condiciones climáticas que se presentan en la Tabla 10, donde la data de los parámetros meteorológicos de temperatura, humedad relativa y precipitación fueron recolectados de la estación meteorológica ubicada en Recuay (7960934.38N 15580371.00E), en el departamento de Áncash. Resultando que, la temperatura máxima y mínima fueron 25.80 °C y 2.10 °C respectivamente y la humedad relativa promedio fue 64.53%. La precipitación anual fue 490.30 mm; además, los meses de mayor precipitación fueron diciembre, noviembre y octubre. Tabla 10. Condiciones climáticas durante la operación del PHCA Año Mes Enero Febrero Marzo Abril 2023 Mayo Junio Julio Agosto Septiembre Estación meteorológica Recuay Temperatura (°C) Humedad Máximo Mínimo Promedio relativa (%) 21,50 1,90 10,65 75,38 21,70 4,10 11,99 72,64 23,10 1,70 10,99 75,64 22,60 2,90 11,53 73,74 24,10 1,50 11,97 64,19 23,70 -2,10 10,54 47,65 25,00 -1,50 11,19 44,20 25,80 -1,60 11,64 45,05 24,40 1,50 12,29 58,08 Precipitación (mm) 9,10 33,20 34,00 52,50 7,80 0,20 8,50 1,20 46,50 48 49 Octubre Noviembre Diciembre 22,50 23,50 23,60 2,50 1,90 5,70 12,20 11,89 12,64 71,41 69,56 76,80 81,00 83,80 132,50 Nota. SENAMHI 3.7. Participación comunitaria La implementación, operación y monitoreo del sistema de PHCA se realizó en conjunto con la participación de la CCCB y el Comité de Investigación Agropecuaria Local (CIAL) “Alli Yacu, Alli Pastu”, con la finalidad de contribuir en conocimientos y fortalecer sus capacidades para el tratamiento del agua contaminada por drenajes ácidos de roca. 3.8. Población y muestra 3.8.1. Población Agua del canal Chonta contaminada con drenaje ácido de roca (DAR) con altas concentraciones de metales totales y valores de pH ácidos, en la Comunidad Campesina Cordillera Blanca. 3.8.2. Muestra La muestra fue representada por el caudal de ingreso (116.42 L/d) al sistema de los prototipos de humedales construidos. 3.9. Instrumentos validados de recolección de datos La recolección de datos para los parámetros fisicoquímicos, como pH, conductividad eléctrica (µS/cm), solidos disueltos totales (mg/L), potencial óxido-reducción (mV) y temperatura (°C) se tomaron muestras del afluente y efluente y se analizaron en campo. Mientras que, para determinar las concentraciones de metales totales (As, Cd, Fe, Mn, Pb, Al, B, Hg, Mg, Zn, Co, Cu en mg/L) y sulfato (mg/L SO4-2) en el afluente y efluente se tomaron muestras que fueron enviadas a laboratorio para su análisis. Asimismo, para la caracterización química (lignina, celulosa y sustancias fácilmente disponibles) del sustrato orgánico y su concentración de metales pesados se recolectaron muestras en campo y fueron analizadas en laboratorio. Los instrumentos utilizados se detallan en la Tabla 11. 49 50 Tabla 11. Instrumentos de recolección de datos Parámetro Materiales e instrumentos Contenido de lignina, celulosa, solidos volátiles, sustancias fácilmente disponibles, fracción biodegradable y metales totales del sustrato orgánico Fichas de campo Bolsa hermética con cierre Horno mufla Balanza analítica Rotulador Pala Caudal del afluente de los Jarra graduada de 0.5 L. PHCA Cronómetro Fichas de campo Parámetros fisicoquímicos (pH, CE, TDS, ORP y temperatura) del agua. Multiparámetro Portátil Hach Sension 156 Cooler Piseta Vasos acrílicos. Rotulador Concentración de metales totales en el afluente y efluente Papel toalla Guantes de nitrilo Soluciones buffer de pH 4 y 7 Solución de conductividad eléctrica Sulfato Frascos estériles de 30 mL Solución de ácido nítrico Ice-pack 3.10. Procesamiento y análisis estadístico de datos Para la gestión y procesamiento de los resultados obtenidos, se realizó la visualización de datos mediante gráficas estadísticas en Excel versión 2019, posteriormente se realizó las estadísticas descriptivas, continuando con la verificación de plausibilidad para determinar si la variación de los resultados es razonable y coherente basándonos en el conocimiento bibliográfico previo. 50 51 El análisis estadístico se realizó para el pH, CE, TDS, ORP, , metales totales (As, Cd, Fe, Mn, Pb, Al, B, Mg, Zn, Co, Cu) y sulfatos mediante el RStudio. Primero, se aplicó la normalidad para contrarrestar que los resultados obtenidos provienen de poblaciones de muestras normalmente distribuidas o no. Para ello, se utilizó Shapiro-Wilk-test la cual se puede aplicar cuando se tienen muestras pequeñas (<50), lo que lo hace adecuado para aplicar en esta investigación. Se plantearon dos hipótesis: H0: La población de muestras tomadas se distribuyen normalmente. Ha: La población de muestras tomadas no se distribuyen normalmente. Con un nivel de significancia (α) = 0.05, de lo cual podemos decir que: p-value > 0.05: Existe distribución normal de la población de muestras. p-value < 0.05: No existe una distribución normal de la población de muestras. Seguidamente, se analizó la homogeneidad de varianzas, para los que cumplieron la normalidad se empleó el test de Bartlett; mientras que, para los grupos que no cumplieron con la normalidad se analizó mediante el test Levenne. Que se evaluó con un nivel de significancia (α) = 0.05, de lo cual podemos decir que: p-value > 0.05: Existe homogeneidad de varianza. p-value < 0.05: No existe una homogeneidad de varianza. Segundo, en base a la normalidad y la homogeneidad de varianza se realizó el test paramétrico y no paramétrico, teniendo en cuenta la cantidad de grupos analizados (04). Cuando la distribución fue normal y presentó una distribución homogénea se empleó la prueba paramétrica ANOVA, debido a la evaluación de más de 2 grupos. Para los casos que no presentaron una distribución normal o no tuvieron una distribución homogénea se evaluó mediante la prueba no paramétrica Kruskal-Wallis. En todas las pruebas paramétricas y no paramétrica se utilizó α = 0.05, y de acuerdo al p-value se puede decir que: p-value > 0.05: No existe diferencia estadística significativa. p-value < 0.05: Existe diferencia estadística significativa. 51 52 Finalmente, adicional a la pruebas paramétricas y no paramétricas que presentaron diferencia estadística significativa para la comparación entre grupos se emplearon las pruebas de Tukey y Dunn, de acuerdo al p-value se puede decir que: p-value > 0.05: No existe diferencia estadística significativa entre los grupos. p-value < 0.05: Existe diferencia estadística significativa entre los grupos. El diseño estadístico explicado anteriormente para la presente investigación, se resume en la Figura 12. Figura 12. Esquema del diseño estadístico de la investigación 52 53 CAPÍTULO IV RESULTADOS 4.1. Determinación de la fracción biodegradable del sustrato orgánico a) Fracción biodegradable del sustrato orgánico Previo a determinar la fracción biodegradable del sustrato orgánico se analizó su composición química, donde la concentración de lignina (% w/w) fue mayor en la tierra negra respecto a los demás sustratos, la celulosa (% w/w) es mayor en el compost; mientras que, las Sustancias Fácilmente Disponibles (EAS) presentan un mayor valor en el estiércol de oveja y la de Solidos Volátiles (SV) en el estiércol de vaca, como se indica en la Tabla 12. Finalmente, al calcular la fracción biodegradable (B) en base a la concentración de la lignina (ecuación 4), se observó que el estiércol de oveja presentó el mayor valor, respecto a los otros sustratos como son el estiércol de vaca, compost y tierra negra. Tabla 12. Caracterización química del sustrato orgánico utilizado en los PHCA Unidad Lignina Celulosa EAS % w/w % w/w % w/w Estiércol Oveja Vaca 8,01 9,42 8,37 9,62 43,64 40,94 Compost Tierra negra 14,01 34,92 34,07 20,83 17,64 29,05 53 54 SV B b) % w/w - 78,26 0,61 89,36 0,57 37,33 0,44 80,00 0,25 Concentración de metales totales en el sustrato orgánico El análisis de la concentración de metales totales en el sustrato orgánico empleado en los PHCA, revela una variabilidad significativa. El estiércol de vaca presenta las mayores concentraciones de K, Ca, Mg, P, Fe y Mn, lo que sugiere un alto contenido de estos nutrientes. Por otro lado, el compost destaca por tener una mayor concentración de Zn y B, además de niveles notables de P y Al. El estiércol de oveja, muestra una alta concentración de K y Mg, siendo comparables con las concentraciones observadas en la tierra negra, que contiene niveles elevados de Ca y K. En general, en la Tabla 13, se observa que el sustrato orgánico (estiércol de vaca y oveja, compost y tierra negra) presenta concentraciones significativas de varios metales pesados, lo que podría influir en la dinámica y efectividad de los PHCA. Tabla 13. Concentración de metales totales en el sustrato orgánico Sustrato orgánico Metales totales Unidad L.D.M. Potasio Calcio Magnesio Fósforo Hierro Aluminio Manganeso Sodio Estroncio Zinc Boro Cobre Plomo mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg mg/kg 3,50 2,40 3,70 0,30 0,24 1,40 0,08 3,90 0,07 0,23 0,20 0,07 0,08 Estiércol Oveja Vaca 15334,20 18586,80 12344,40 9928,70 2774,30 3305,60 2405,40 2747,40 1814,09 1920,85 863,90 858,20 748,22 1006,55 471,60 541,40 88,18 92,99 88,02 82,17 26,50 21,90 13,80 11,67 7,77 3,52 Compost Tierra negra 1602,70 34786,00 3163,50 4872,70 11667,67 4820,70 354,39 3403,90 195,91 243,32 19,10 131,48 29,87 5817,30 11207,00 2604,60 3413,20 8697,04 4114,10 962,05 181,60 97,07 177,27 15,00 26,43 16,07 54 55 mg/kg Mg/kg mg/kg mg/kg Arsénico Cobalto Cadmio Mercurio 0,17 0,05 0,03 0,10 3,94 1,96 0,86 <0,10 2,59 2,17 0,66 <0,10 16,32 3,79 7,01 <0,10 12,44 2,13 2,70 <0,10 Nota. L.D.M.: Límite de detección del método. 4.2. Diseño e implementación de los prototipos de humedales Las condiciones de operación en la que trabajaron los PHCA fueron a una carga hidráulica de 102.58 L/m2.d obtenido a partir de la Ecuación 5, en el cual se empleó una carga de acidez de 0.068 g/L. El caudal de diseño para la operación de los prototipos fue 0.12 m3/d o 116.42 L/d (empleando Ec. 6); sin embargo, mediante el análisis de la Tabla 14, podemos mencionar que el prototipo control operó en promedio a 110.8 L/d de DAR a flujo continuo; mientras que el prototipo 1 a 111.8 L/d, el prototipo 2 a 118.4 L/d y finalmente el prototipo 3 a 109.8 L/d. Los prototipos de humedal tuvieron un TRH de 5.85 d (con Ec. 7), considerándose un margen de tiempo de tratamiento alto, donde se estima que los componentes de los prototipos (grava, sustrato orgánico, macrófitos y agua) interactúen de manera eficiente, permitiendo así evaluar las diferencias entre los resultados de cada humedal. Los diseños de los prototipos de humedales construidos anaerobios se presentan en la Figura 14. Tabla 14. Variación de caudal de operación de los PHCA Caudal (L/d) N° Campaña 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Prototipo control Prototipo 1 Prototipo 2 Prototipo 3 129,6 129,6 115,2 72,0 100,8 115,2 100,8 115,2 115,2 105,6 129,6 110,4 103,2 115,2 115,2 100,8 115,2 115,2 110,4 115,2 129,6 129,6 115,2 112,8 115,2 129,6 115,2 110,4 127,2 100,8 100,8 72,0 112,8 108,0 124,8 115,2 55 56 10 11 12 Promedio SD* 120,0 115,2 100,8 110,8 15,6 120,0 115,2 96,0 111,8 9,2 120,0 115,2 112,8 118,4 7,1 115,2 115,2 115,2 109,8 14,3 Nota. * SD: Desviación estándar Respecto a los macrófitos trasplantados en los prototipos de humedales se identificó principalmente a la especie Juncus arcticus Willd. Y según Garro Padilla (2015) tiene una alta capacidad de bioacumular metales; además, es una especie de la zona facilitando su adaptación y desarrollo. La cobertura inicial del Juncus arcticus Willd. fue muy similar en el prototipo control, 1, 2 y 3 que tuvieron un área superficial de 1.135 m2, cada mata trasplantada tuvo en promedio un área de 0.055 m2, considerando que se tuvieron 6 individuos, podemos decir que la cobertura de macrófito en cada prototipo de humedal fue 0.33 m2, que representa el 29.07% de cobertura inicial. Ap = 1.135 m2 (área de prototipo) Am = 0.055 m2 (área promedio de cobertura de mata en el prototipo) Nm = 6 (número de matas en el prototipo) Atm = 0.055 m2 x 6 = 0.330 m2 (área total de macrófito) 1.135 m2 → 100% 0.330 m2 → X0 X0 = 29.07 % (porcentaje de cobertura de macrófito en el prototipo) Finalmente, la cobertura alcanzada por el Juncus arcticus Willd. al finalizar la etapa de monitoreo en el prototipo control fue de 28.55%; mientras que, en el prototipo 1 fue del 75.07%, en el prototipo 2 de 54.45% y el prototipo 3 de 73.48%. a) Determinación de la cobertura alcanzada en el prototipo control Ap = 1.135 m2 (área de prototipo) Am = 0.054 m2 (área promedio de cobertura de mata en el prototipo) 56 57 Nm = 6 (número de matas en el prototipo) Atm = 0.054 m2 x 6 = 0.324 m2 (área total de macrófito) 1.135 m2 → 100% 0.324 m2 → XPC XPC = 28.55 % (porcentaje de cobertura de macrófito en el prototipo control) b) Determinación de la cobertura alcanzada en el prototipo 1 Ap = 1.135 m2 (área de prototipo) Am = 0.142 m2 (área promedio de cobertura de mata en el prototipo) Nm = 6 (número de matas en el prototipo) Atm = 0.142 m2 x 6 = 0.852 m2 (área total de macrófito) 1.135 m2 → 100% 0.852 m2 → XP1 XP1 = 75.07 % (porcentaje de cobertura de macrófito en el prototipo 1) c) Determinación de la cobertura alcanzada en el prototipo 2 Ap = 1.135 m2 (área de prototipo) Am = 0.103 m2 (área promedio de cobertura de mata en el prototipo) Nm = 6 (número de matas en el prototipo) Atm = 0.103 m2 x 6 = 0.618 m2 (área total de macrófito) 1.135 m2 → 100% 0.618 m2 → XP2 XP2 = 54.45 % (porcentaje de cobertura de macrófito en el prototipo 2) d) Determinación de la cobertura alcanzada en el prototipo 3 Ap = 1.135 m2 (área de prototipo) Am = 0.139 m2 (área promedio de cobertura de mata en el prototipo) Nm = 6 (número de matas en el prototipo) 57 58 Atm = 0.139 m2 x 6 = 0.834 m2 (área total de macrófito) 1.135 m2 → 100% 0.834 m2 → XP3 XP3 = 73.48 % (porcentaje de cobertura de macrófito en el prototipo 3) Figura 13. Cobertura de macrófito en el prototipo 3 58 59 Figura 14. Diseño de los prototipos de humedal construido anaerobio: a) Control, b) Prototipo 1, c) Prototipo 2 y d) Prototipo 3 59 60 4.3. Análisis y comparación de la eficiencia en la remoción de metales totales, sulfato y parámetros fisicoquímicos en los PHCA A continuación, se presentan los resultados obtenidos de las campañas de monitoreo a lo largo de los 6 meses (junio a diciembre) en el año 2023, tras un periodo de adaptación de 6 meses de los prototipos de humedal construido. Se tuvo en cuenta el análisis de parámetros de campo como pH, conductividad eléctrica (CE), sólidos disueltos totales (TDS), potencial de óxido-reducción (ORP) y temperatura. Mientras que, los parámetros analizados en laboratorio fueron: sulfato y metales totales (Fe, Mg, Al, Mn, Zn, Co, B, Cu, Cd, As, Pb y Hg). a) Características del Drenaje Ácido de Roca La Tabla 15, muestra el promedio y la desviación estándar de los parámetros fisicoquímicos, concentración de metales totales y sulfato del afluente (PH0) durante los seis meses de monitoreo de la investigación. El valor de pH promedio del agua contaminada por DAR fue de 3.29±0.21 indicando que es moderadamente ácida, y la temperatura promedio fue de 11.54±1.88 °C. El valor promedio de ORP fue de 227.28±11.37 mV; asimismo, los valores promedios de CE y TDS fueron 381.55±172.10 µS/cm y 205.27±111.79 mg/L respectivamente, estos dos últimos parámetros presentan una alta desviación estándar; es decir, los datos están dispersos con respecto al promedio. En cuanto a los metales totales notamos que el Fe (12.63 ± 5.24 mg/L) presenta una mayor concentración, seguido de Mg (9.13 ± 3.45 mg/L) y Al (2.82 ± 0.88 mg/L); mientras que las concentraciones de As (0.00053 ± 0.0 mg/L), Cd (0.00023 ± 0.0 mg/L), Mn (0.64 ± 0.22), B (0.017 ± 0.01 mg/L), Zn (0.14 ± 0.05 mg/L), Co (0.033 ± 0.01 mg/L) y Cu (0.0034 ± 0.0 mg/L) son cercanos a cero; sin embargo, el Pb (0.0039 ± 0.0 mg/L) y el Hg (0.00009 ± 0.0 mg/L) resultaron menor al límite de cuantificación del método analizado en laboratorio. 60 61 Tabla 15. Características del afluente contaminado con drenaje ácido de roca Unidad Afluente - PH0 Promedio SD** 3 3 3 3 3 3,29 11,54 227,28 381,55 205,27 0,21 1,88 11,37 172,10 111,79 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0,00053 0,00023 12,62778 0,63683 0,00390 2,82258 0,01700 0.00009 9,13758 0,13663 0,03321 0,00345 121,93583 0,00 0,00 5,24 0,22 0,00 0,88 0,01 0,00 3,45 0,05 0,01 0,00 44,19 NC NR Parámetros de campo pH 12 T °C 12 ORP mV 12 CE µS/cm 12 TDS mg/L 12 Parámetros de laboratorio As mg/L 12 Cd mg/L 12 Fe mg/L 12 Mn mg/L 12 Pb* mg/L 12 Al mg/L 12 B mg/L 12 Hg* mg/L 12 Mg mg/L 12 Zn mg/L 12 Co mg/L 12 Cu mg/L 12 Sulfato mg/L 12 Nota. *: Valor promedio menor al límite de cuantificación del método (L.C.). SD**: Desviación estándar. NC: Número de campañas de monitoreo. NR: Número de réplica. b) Evaluación del Prototipo control La Tabla 16, muestra el promedio y la desviación estándar de los parámetros fisicoquímicos del efluente del prototipo control (PH01) durante los seis meses de monitoreo de la investigación. El valor de pH promedio del efluente PH01 fue de 3.22±0.12, manteniéndose similar de ácida que el afluente; y la temperatura promedio fue de 12.41±2.28 °C, resultando un leve incremento que puede estar relacionado con la exposición ambiental. El valor promedio de ORP fue de 231.77±7.03 mV, incrementándose ligeramente en comparación al afluente; asimismo, los valores promedios de CE y TDS fueron 426.36±162.88 µS/cm y 226.11±96.96 mg/L respectivamente. 61 62 En general, los resultados comparativos entre el afluente (PH0) y el efluente (PH01) del prototipo control indican que no hay una variación significativa en los parámetros fisicoquímicos del agua; por lo tanto, el efecto del macrófito y agregado en el tratamiento de aguas contaminadas por DAR es baja. Tabla 16. Características del efluente del prototipo control Unidad Efluente - PH01 NC NR Promedio SD** Parámetros de campo pH 12 T °C 12 ORP mV 12 CE µS/cm 12 TDS mg/L 12 Parámetros de laboratorio As mg/L 12 Cd mg/L 12 Fe mg/L 12 Mn mg/L 12 Pb mg/L 12 Al mg/L 12 B mg/L 12 Hg* mg/L 12 Mg mg/L 12 Zn mg/L 12 Co mg/L 12 Cu mg/L 12 Sulfato mg/L 12 3 3 3 3 3 3,22 12,41 231,77 426,36 226,11 0,12 2,28 7,03 162,88 96,96 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0,00027 0,00052 2,19312 0,71189 0,00497 4,14683 0,01033 0.00009 9,54458 0,19283 0,03629 0,05444 124,25583 0,0002 0,0003 1,6443 0,2326 0,0019 1,5791 0,0066 0,0000 3,3528 0,0678 0,0117 0,0288 45,4126 NC: número de campañas. NR: número de réplicas. SD**: desviación estándar. Por otro lado, los resultados de la concentración promedio en el efluente del prototipo control (PH01) para sulfato fue 124.26±45.41 mg/L, con una eficiencia promedio de remoción de -3.24±12.70 %. En cuanto a los metales totales, se obtuvo una eficiencia promedio de remoción positiva para Fe (85.06±7.81 %) y B (1.63±6.97 %); mientras que los demás metales resultaron con una eficiencia negativa como: Mg (-7.42±16.51 %), Al (-40.86±17.65 %), Mn (-8.28±7.14 %), Zn (62 63 46.31±28.32 %), Co (-4.21±5.78 %), Cu (-1328.41±754.95 %), Cd (84.35±17.09 %) y Pb (-673.59±274.65 %), indicando que el prototipo control podría estar liberando ciertos metales al efluente o que la remoción no es efectiva en estos casos. Finalmente, la concentración del Hg en el efluente no presenta ninguna variación respecto al afluente, presentando siempre una concentración <0.00009 mg/L durante el periodo de monitoreo. c) Comparación de los parámetros fisicoquímicos de campo en los PHCA con sustrato orgánico Los parámetros fisicoquímicos analizados en campo fueron: pH, ORP, CE, TDS y T. Respecto al pH (Figura 15), se evidenció el mayor valor promedio en el efluente PH04 (6.37±0.15) del prototipo 3, indicando una mejora en la calidad del agua; asimismo, los efluentes PH03 (6.27±0.11) y PH02 (6.24±0.15) presentan un comportamiento similar, mostrando valores cercanos a la neutralización. Además, en la Tabla 17 se muestran las medidas descriptivas del análisis del pH en los PHCA con diferente composición de sustrato orgánico. Figura 15. Variación del pH en el afluente y efluentes de los PHCA 63 64 Tabla 17. Medidas descriptivas del pH en los efluentes del PHCA con diferente composición de sustrato orgánico Prototipo 1 Campaña Media Prototipo 2 Prototipo 3 Desviación Percentil Percentil Desviación Percentil Percentil Desviación Percentil Percentil Mediana Media Mediana Media Mediana estándar 25 75 estándar 25 75 estándar 25 75 01 6,13 0,17 6,22 6,08 6,23 6,24 0,02 6,25 6,24 6,26 6,25 0,09 6,26 6,21 6,30 02 5,89 0,18 5,97 5,83 6,00 6,10 0,03 6,12 6,10 6,12 6,17 0,01 6,17 6,17 6,18 03 6,19 0,17 6,22 6,12 6,29 6,18 0,03 6,19 6,17 6,20 6,38 0,11 6,34 6,32 6,42 04 6,43 0,06 6,43 6,40 6,46 6,39 0,04 6,40 6,37 6,41 6,58 0,05 6,58 6,56 6,60 05 6,44 0,01 6,44 6,44 6,45 6,46 0,02 6,47 6,46 6,48 6,64 0,07 6,64 6,61 6,68 06 6,38 0,09 6,39 6,34 6,43 6,35 0,12 6,31 6,29 6,40 6,54 0,06 6,56 6,52 6,58 07 6,30 0,04 6,32 6,29 6,33 6,32 0,01 6,32 6,32 6,33 6,40 0,04 6,38 6,38 6,42 08 6,27 0,04 6,29 6,26 6,30 6,30 0,01 6,30 6,30 6,31 6,32 0,03 6,32 6,31 6,33 09 6,24 0,07 6,21 6,20 6,27 6,28 0,02 6,27 6,27 6,29 6,25 0,03 6,26 6,24 6,27 10 6,15 0,05 6,17 6,14 6,18 6,24 0,03 6,25 6,23 6,26 6,34 0,02 6,33 6,33 6,35 11 6,16 0,06 6,17 6,14 6,19 6,12 0,03 6,12 6,11 6,14 6,20 0,02 6,19 6,19 6,21 12 6,22 0,02 6,21 6,21 6,23 6,23 0,04 6,23 6,21 6,25 6,37 0,03 6,38 6,36 6,39 64 65 En términos de ORP (Figura 16), se registró un valor promedio menor en el efluente PH04 (57.91±6.84 mV) del prototipo 3, evidenciando las condiciones de reducción que atraviesa el agua. Además, se obtuvieron valores ligeramente cercanos en los efluentes PH03 (63.45±5.43 mV) y PH02 (65.38±7.25 mV); esta reducción se debe a las condiciones anóxicas en las que se encontraron los prototipos de humedal con sustrato orgánico. Además, en la Tabla 18 se muestran las medidas descriptivas del análisis de ORP en los PHCA con diferente composición de sustrato orgánico. Figura 16. Variación del ORP en el afluente y efluentes de los PHCA 65 66 Tabla 18. Medidas descriptivas del ORP (mV) en los efluentes del PHCA con diferente composición de sustrato orgánico Prototipo 1 Campaña Media Prototipo 2 Prototipo 3 Desviación Percentil Percentil Desviación Percentil Percentil Desviación Percentil Percentil Mediana Media Mediana Media Mediana estándar 25 75 estándar 25 75 estándar 25 75 01 62,50 9,20 57,80 57,20 65,45 56,67 1,03 56,40 56,10 57,10 56,13 4,85 55,90 53,65 58,50 02 82,53 9,86 78,30 76,90 86,05 71,10 1,30 70,40 70,35 71,50 67,13 0,40 67,20 66,95 67,35 03 65,53 9,27 64,20 60,60 69,80 65,80 1,55 65,70 65,00 66,55 55,30 6,07 57,70 53,05 58,75 04 52,77 3,25 52,80 51,15 54,40 55,30 2,14 54,60 54,10 56,15 44,83 2,70 44,90 43,50 46,20 05 61,27 2,63 59,80 59,75 62,05 59,00 1,21 58,30 58,30 59,35 49,37 3,30 49,50 47,75 51,05 06 60,70 4,97 60,20 58,10 63,05 62,20 6,44 64,60 59,75 65,85 52,17 3,52 51,10 50,20 53,60 07 63,43 2,22 62,20 62,15 64,10 62,17 0,25 62,20 62,05 62,30 58,10 2,55 59,10 57,15 59,55 08 63,00 2,19 62,10 61,75 63,80 61,23 0,55 61,20 60,95 61,50 60,57 1,56 60,40 59,75 61,30 09 63,10 4,04 64,70 61,60 65,40 61,13 0,99 61,60 60,80 61,70 62,63 1,69 62,20 61,70 63,35 10 70,40 2,67 69,50 68,90 71,45 65,47 1,85 64,50 64,40 66,05 59,73 1,00 60,10 59,35 60,30 11 70,30 3,18 69,80 68,60 71,75 72,33 1,55 72,80 71,70 73,20 67,90 1,04 68,40 67,55 68,50 12 69,07 1,37 69,70 68,60 69,85 69,03 1,82 68,70 68,05 69,85 61,03 1,76 60,50 60,05 61,75 66 67 En cuanto a la CE (Figura 17) y los TDS (Figura 18), se observó que la CE promedio disminuyó en los efluentes de las estaciones PH03 (208.50±57.05 µS/cm), PH04 (194.59±58.83 µS/cm) y PH02 (186.88±53.52 µS/cm), donde el efluente de esta última estación presentó menor concentración. Este patrón se repite en los resultados de TDS, donde la menor concentración promedio se registra también en el efluente de PH02 (99.61±41.25 mg/L), seguido por PH04 (102.88±42.81 mg/L) y finalmente el PH03 (111.50±48.20 mg/L). Estos resultados se deben a que la concentración de iones disminuye por los procesos químicos y biológicos que ayudan a retener los iones (metales, sulfatos, etc.) en los prototipos de humedal, por ello, hay una menor concentración en los efluentes. Además, realizando una comparación entre las Figuras 17 y 18, podemos mencionar que, a mayor CE, mayor es el TDS, debido a que una mayor concentración de iones en el agua aumenta tanto la conductividad como la cantidad de sólidos disueltos, por lo que resultan directamente proporcionales. Asimismo, en la Tabla 19 y 20 se muestran las medidas descriptivas del análisis de CE y TDS en los PHCA con diferente composición de sustrato orgánico. Figura 17. Variación de la CE en el afluente y efluentes de los PHCA 67 68 Figura 18. Variación del TDS en el afluente y efluentes de los PHCA Por otra parte, los resultados de la variación de temperatura (Figura 19) demuestran que el efluente del prototipo 3 (PH04) presenta mayor temperatura de 13.08±3.05 °C, seguida por el efluente en la estación PH03 (12.62±3.93 °C) y PH02 (12.38±2.57 °C). El incremento de temperaturas en los efluentes puede estar relacionado a los procesos internos que ocurre en los prototipos de humedal. Figura 19. Variación de la temperatura en el afluente y efluentes de los PHCA 68 69 Tabla 19. Medidas descriptivas de la CE (µS/cm) en los efluentes del PHCA con diferente composición de sustrato orgánico Prototipo 1 Campaña Media Prototipo 2 Prototipo 3 Desviación Percentil Percentil Desviación Percentil Percentil Desviación Percentil Percentil Mediana Media Mediana Media Mediana estándar 25 75 estándar 25 75 estándar 25 75 01 216,33 6,35 220,00 214,50 220,00 263,67 5,13 265,00 261,50 266,50 223,67 6,81 226,00 221,00 227,50 02 249,00 2,00 249,00 248,00 250,00 294,67 1,53 295,00 294,00 295,50 266,00 2,65 265,00 264,50 267,00 03 206,67 2,08 206,00 205,50 207,50 228,00 1,73 229,00 227,50 229,00 219,67 2,52 220,00 218,50 221,00 04 223,00 5,57 222,00 220,00 225,50 231,00 6,00 231,00 228,00 234,00 243,33 3,06 244,00 242,00 245,00 05 238,00 3,00 238,00 236,50 239,50 242,67 3,51 243,00 241,00 244,50 231,67 2,52 232,00 230,50 233,00 06 204,00 2,65 203,00 202,50 205,00 222,00 3,00 222,00 220,50 223,50 221,67 0,58 222,00 221,50 222,00 07 226,00 4,00 226,00 224,00 228,00 238,00 3,00 238,00 236,50 239,50 236,67 2,31 238,00 236,00 238,00 08 152,43 2,04 153,30 151,70 153,60 176,77 1,86 175,90 175,70 177,40 159,23 0,87 159,00 158,75 159,60 09 124,80 1,93 125,60 124,10 125,90 144,87 0,45 144,90 144,65 145,10 122,63 1,33 122,30 121,90 123,20 10 186,90 0,00 186,90 186,90 186,90 208,50 0,00 208,50 208,50 208,50 194,60 0,00 194,60 194,60 194,60 11 118,00 0,20 118,00 117,90 118,10 137,67 0,96 137,50 137,15 138,10 121,27 0,32 121,40 121,15 121,45 12 97,43 0,15 97,40 97,35 97,50 114,17 0,51 114,30 113,95 114,45 94,70 0,60 94,70 94,40 95,00 Tabla 20. Medidas descriptivas del TDS (mg/L) en los efluentes del PHCA con diferente composición de sustrato orgánico Prototipo 1 Campaña Media Desviación Mediana estándar Prototipo 2 Prototipo 3 Percentil 25 Percentil 75 Desviación Media Mediana estándar Percentil 25 Percentil 75 Media Desviación Mediana estándar Percentil 25 Percentil 75 01 156,00 1,73 157,00 155,50 157,00 187,33 4,51 187,00 185,00 189,50 155,33 5,51 155,00 152,50 158,00 02 179,67 7,23 176,00 175,50 182,00 209,00 2,65 208,00 207,50 210,00 187,00 4,00 187,00 185,00 189,00 03 98,97 1,07 98,40 98,35 99,30 109,30 0,95 109,80 109,00 109,85 105,20 1,10 105,20 104,65 105,75 69 70 04 106,73 2,61 106,10 105,30 107,85 110,77 2,95 110,80 109,30 112,25 116,73 1,68 117,10 116,00 117,65 05 114,00 1,35 113,90 113,30 114,65 116,40 1,70 116,40 115,55 117,25 111,00 1,25 110,90 110,35 111,60 06 97,70 1,25 97,30 97,00 98,20 106,23 1,45 106,20 105,50 106,95 106,10 0,40 106,10 105,90 106,30 07 108,23 2,06 108,40 107,25 109,30 114,03 1,60 114,10 113,25 114,85 113,43 1,17 113,90 113,00 114,10 08 72,70 0,96 73,10 72,35 73,25 84,47 0,90 84,00 83,95 84,75 75,97 0,40 75,90 75,75 76,15 09 59,37 0,93 59,80 59,05 59,90 69,07 0,25 69,10 68,95 69,20 58,30 0,62 58,10 57,95 58,55 10 99,60 0,00 99,60 99,60 99,60 111,50 0,00 111,50 111,50 111,50 102,90 0,00 102,90 102,90 102,90 11 56,10 0,10 56,10 56,05 56,15 65,60 0,46 65,50 65,35 65,80 57,67 0,15 57,70 57,60 57,75 12 46,20 0,10 46,20 46,15 46,25 54,27 0,25 54,30 54,15 54,40 44,90 0,30 44,90 44,75 45,05 Tabla 21. Medidas descriptivas de la temperatura (°C) en los efluentes del PHCA con diferente composición de sustrato orgánico Prototipo 1 Campaña Media Prototipo 2 Prototipo 3 Desviación Percentil Percentil Desviación Percentil Percentil Desviación Percentil Percentil Mediana Media Mediana Media Mediana estándar 25 75 estándar 25 75 estándar 25 75 01 9,70 0,20 9,70 9,60 9,80 10,37 0,23 10,50 10,30 10,50 9,57 0,06 9,60 9,55 9,60 02 9,13 0,35 9,10 8,95 9,30 8,97 0,21 8,90 8,85 9,05 8,90 0,10 8,90 8,85 8,95 03 8,90 0,26 8,80 8,75 9,00 8,10 0,10 8,10 8,05 8,15 8,63 0,25 8,60 8,50 8,75 04 12,13 0,25 12,10 12,00 12,25 11,60 0,53 11,40 11,30 11,80 13,03 0,42 12,90 12,80 13,20 05 10,83 0,25 10,80 10,70 10,95 11,83 0,45 11,80 11,60 12,05 12,30 0,26 12,40 12,20 12,45 06 10,83 0,49 10,60 10,55 11,00 11,20 0,10 11,20 11,15 11,25 12,40 0,36 12,30 12,20 12,55 07 12,60 0,46 12,50 12,35 12,80 11,83 0,15 11,80 11,75 11,90 11,83 0,12 11,90 11,80 11,90 08 13,30 0,20 13,30 13,20 13,40 14,17 0,21 14,10 14,05 14,25 14,93 0,25 14,90 14,80 15,05 09 13,87 0,12 13,80 13,80 13,90 14,00 0,17 13,90 13,90 14,05 15,43 0,76 15,60 15,10 15,85 10 15,13 0,46 15,40 15,00 15,40 15,20 0,53 15,40 15,00 15,50 15,33 0,90 15,40 14,90 15,80 11 16,60 0,20 16,60 16,50 16,70 17,50 0,36 17,40 17,30 17,65 17,57 0,06 17,60 17,55 17,60 12 15,50 0,30 15,50 15,35 15,65 16,67 0,35 16,70 16,50 16,85 17,07 0,21 17,00 16,95 17,15 70 71 d) Comparación de los parámetros de laboratorio en los PHCA con sustrato orgánico Los parámetros analizados de calidad de agua en laboratorio fueron: sulfato y metales totales como hierro (Fe), aluminio (Al), manganeso (Mn), cadmio (Cd), arsénico (As), plomo (Pb), boro (B), mercurio (Hg), magnesio (Mg), zinc (Zn), cobalto (Co) y cobre (Cu). De acuerdo a los resultados obtenidos, los parámetros de laboratorio de mayor concentración en el afluente de los prototipos de humedales fueron: sulfatos > Fe > Mg > Al, en una concentración promedio que varía de 2.82 mg/L a 121.94 mg/L, como se muestra en la Tabla 15. En la Figura 20 a) se compararon los resultados del sulfato, mostrando una disminución de su concentración a partir de la campaña 7 en todos los efluentes. La concentración promedio de sulfato fue menor en PH02 (86.96±36.09 mg/L), seguida del PH04 (89.61±34.46 mg/L) y finalmente el PH03 (92.84±32.94 mg/L). Asimismo, en la estación PH03 se registró la concentración máxima de sulfato (139.89 mg/L) en la campaña 5; sin embargo, la menor concentración de sulfato (35.05 mg/L) se registró en la estación PH02 durante la campaña 12. En la Figura 20 b) se observa la comparación entre los resultados obtenidos del Fe, lo cual indica que los efluentes de las estaciones PH02, PH03 y PH04 mantuvieron sus concentraciones bajas, permaneciendo por debajo de 3.4 mg/L durante todo el periodo de monitoreo, con variaciones mínimas. La concentración promedio del Fe fue menor en PH04 (1.21±0.45 mg/L), seguida del PH02 (1.23±0.71 mg/L) y finalmente el PH03 (1.75±0.76 mg/L). Asimismo, en la estación PH03 se registró la concentración máxima de Fe (3.33 mg/L) en la campaña 7; sin embargo, la menor concentración de Fe (0.50 mg/L) se registró en la estación PH02 durante la campaña 11. En la Figura 20 c) se presenta los resultados obtenidos del Mg, donde los efluentes de las estaciones PH02, PH03 y PH04 mostraron tendencias similares entre sí, con niveles de Mg que fluctúan entre 5 y 71 72 14 mg/L, mostrando un patrón de aumento y disminución a lo largo del periodo de monitoreo. La concentración promedio de Mg fue menor en PH03 (9.26±2.82 mg/L), seguida del PH02 (9.52±3.26 mg/L) y finalmente el PH04 (9.62±3.36 mg/L). Asimismo, en la estación PH02 mencionada se registró la concentración máxima de Mg (14.33 mg/L) en la campaña 5; sin embargo, la menor concentración de Mg (5.11 mg/L) se registró en la estación PH04 durante la campaña 12. En la Figura 20 d) se compararon los resultados obtenidos del Al, donde los efluentes de las estaciones PH02, PH03 y PH04 mantuvieron concentraciones bajas, cercanas a 0 mg/L a lo largo de todas las campañas, sin variaciones significativas. La concentración promedio del Al fue menor en PH04 (0.055±0.009 mg/L), seguida por PH03 (0.065±0.009 mg/L) y finalmente PH02 (0.083±0.029 mg/L). Asimismo, en la estación PH02 mencionada se registró la concentración máxima de Al (0.152 mg/L) en la campaña 7; sin embargo, la menor concentración de Al (0.044 mg/L) se registró en la estación PH04 durante la campaña 01. En general, en los efluentes (PH02, PH03 y PH04) se muestran concentraciones significativamente más bajas y más estables, con menor variabilidad en el tiempo; añadiendo a ello, la estación PH04 presenta una menor concentración en Fe y Al, principales contaminantes presentes en el agua con DAR. 72 73 Figura 20. Variación del sulfato y metales de mayor concentración en los efluentes del PHCA: a) Sulfato, b) Fe, c) Mg y d) Al 73 74 Mientras que, los parámetros de laboratorio de menor concentración estuvieron en un rango promedio entre 0.64 mg/L a 0.0006 mg/L, ordenados de mayor a menor como sigue: Mn > Zn > Co > B > Cu > Cd > As > Pb > Hg. Estos fueron detectados tanto en el afluente como en los efluentes de los prototipos de humedal, según se observa en la Tabla 15 y la Figura 21 y 22. En la Figura 21 a) se compara los resultados obtenidos del Mn, mostrando que los efluentes de las estaciones PH02, PH03 y PH04 presentan concentraciones más elevadas en comparación con el afluente, oscilando entre 0.46 y 1.56 mg/L, con un aumento inicial seguido de una disminución notable a partir de la campaña 7 y estabilizándose en niveles más bajos hacia el final del monitoreo. Las concentraciones promedio de Mn en los efluentes fue 0.96±0.26 mg/L en PH02, seguida del PH04 (0.97±0.31 mg/L) y finalmente el PH03 (1.04±0.31 mg/L). En la Figura 21 b) se presentan los resultados de Zn, donde los efluentes de las estaciones PH02, PH03 y PH04 mantienen concentraciones significativamente más bajas y estables, cercanas a 0 mg/L durante todo el periodo de monitoreo. La concentración promedio de Zn en los efluentes fue uniformemente bajo (0.003 mg/L), con variaciones mínimas en la desviación estándar. Asimismo, en la estación PH02 mencionada se registró la concentración máxima de Zn (0.0076 mg/L) en la campaña 2; sin embargo, la menor concentración de Zn (0.0026 mg/L) se registraron mayormente en la estación PH04 desde la campaña 05 en adelante. En la Figura 21 c) se muestra la comparación entre los resultados obtenidos del Co, lo cual indica que los efluentes de las estaciones PH02, PH03 y PH04 tienen concentraciones mucho más bajas, manteniéndose cerca de 0 mg/L durante toda la campaña de monitoreo. La concentración promedio de Co fue menor en PH04 (0.0003±0.0001 mg/L), seguida del PH03 (0.0005±0.0001 mg/L) y finalmente el PH02 (0.0006±0.0005 mg/L). 74 75 En la Figura 21 d) compara los resultados obtenidos para B, indicando que los efluentes de las estaciones PH02, PH03 y PH04 muestran concentraciones un poco elevadas y variables en comparación con el afluente, con picos que oscilan entre 0.006 y 0.25 mg/L; y un patrón de aumento y disminución a lo largo del monitoreo, estabilizándose hacia el final con proyección a continuar disminuyendo. La concentración promedio de B fue menor en PH04 (0.014±0.006 mg/L), seguida del PH02 (0.015±0.007 mg/L) y finalmente el PH03 (0.016±0.007 mg/L). Asimismo, en la estación PH03 mencionada se registró la concentración máxima de B (0.025 mg/L) en la campaña 1; sin embargo, la menor concentración de B (0.006 mg/L) se registró en la estación PH03 y PH02, ambos en la campaña 12. En general, en la estación del afluente se presentan concentraciones más bajas de Mn y B, pero más altos de Zn y Co en comparación con los puntos de monitoreo en los efluentes, con tendencia a disminuir gradualmente en la mayoría de los casos. Además, en las estaciones de efluentes PH02, PH03 y PH04 se muestran las concentraciones más altas y variables de Mn y B, pero niveles consistentemente bajos de Zn y Co, con menor variabilidad a lo largo del tiempo. 75 76 Figura 21. Variación de metales de menor concentración en los efluentes de los PHCA: a) Mn, b) Zn, c) Co y d) B 76 77 En la Figura 22 e) se muestra la comparación entre los resultados obtenidos del Cu, lo cual indica que los efluentes de las estaciones PH02, PH03 y PH04 presentan concentraciones mucho más bajas y estables, manteniéndose alrededor de 0.001 mg/L o menor a este valor durante todo el periodo de monitoreo. La concentración promedio de Cu en los efluentes PH02 y PH03 son de 0.00013 mg/L, habiendo una diferencia entre el PH04 (0.00035 mg/L). Asimismo, en la estación PH04 mencionada se registró la concentración máxima de Cu (0.00088 mg/L) en la campaña 4; además, en esta misma estación se registró la menor concentración (0.00009 mg/L) a partir de la campaña 8. En la Figura 22 f) se muestra la comparación entre los resultados obtenidos del Cd, lo cual indica que los efluentes de las estaciones PH02, PH03 y PH04 presentan concentraciones más bajas, con valores menores al límite de cuantificación (0.00003 mg/L) durante la mayoría de las campañas de monitoreo. La concentración promedio de Cd en los efluentes PH02 y PH03 fue 0.00013 mg/L, habiendo una diferencia entre el PH04 (0.00035 mg/L). En la Figura 22 g) se muestra la comparación entre los resultados obtenidos del As, lo cual indica que los efluentes de las estaciones PH02, PH03 y PH04 presentaron concentraciones un poco más altos y variables en comparación con el afluente, con picos que oscilan entre 0.001 y 0.009 mg/L; estas estaciones muestran un patrón de aumento y disminución a lo largo del monitoreo, con una tendencia de estabilización hacia el final. La concentración promedio de As fue menor en PH02 (0.0040±0.0015 mg/L), seguida del PH04 (0.0047±0.0024 mg/L) y finalmente el PH03 (0.0053±0.0012 mg/L). 77 78 Figura 22. Variación de metales de menor concentración en los efluentes de los PHCA: e) Cu, f) Cd y g) As 78 79 En el caso particular del Pb y Hg, los resultados reflejan que no hubo diferencia en la concentración entre el afluente y los efluentes de PH02, PH03 y PH04, manteniéndose constante a un valor < 0.0006 mg/L y < 0.00009 mg/L, respectivamente; en general las concentraciones se mantienen por debajo del límite de cuantificación. e) Eficiencias de remoción de sulfato y metales totales de los PHCA con sustrato orgánico Los parámetros analizados para determinar la eficiencia de remoción de contaminantes en los PHCA fueron: Sulfatos y metales totales (Fe, Al, Mn, Cd, As, Pb, B, Hg, Mg, Zn, Co y Cu). De acuerdo a la data generada, los parámetros que resultaron con mayor eficiencia de remoción (+) de contaminantes en los prototipos de humedales fueron: Co > Zn > Al > Cu > Fe > Cd > Sulfato, en orden de mayor a menor eficiencia, como se muestran en la Figura 22 y 23. En la Figura 22 a) se observa la variación de la eficiencia para la remoción del Co, con la mayor eficiencia promedio registrada en la estación PH04 (99.13±0.25 %) en el prototipo 3, su eficiencia se mantuvo alta y consistente, cercana al 100% a lo largo de las campañas; seguida por PH03 (98.36±0.25 %), en el cual hubo variaciones pequeñas que no bajan del 90% en ninguna de las campañas; y finalmente PH02 (98.16±0.25 %), que presentó una pequeña fluctuación en la 6ta campaña. En general, comparando las eficiencias de los 3 prototipos de humedal resultaron tener una baja desviación estándar, por lo que son estables a lo largo del monitoreo. La Figura 22 b) muestra la variación de la eficiencia para la remoción del Zn, donde PH03 destacó con la eficiencia promedio más alta (97.54±1.34 %); esta estación mantuvo altos niveles de eficiencia, cercanos al 100% en la mayoría de las campañas, aunque con una ligera reducción en la 11va campaña. Mientras que, el PH04 presentó una eficiencia promedio de 97.41±1.36 %, en el cual se presentaron pequeñas variaciones, pero siempre por encima del 95%; y finalmente PH02 (97.18±1.37 %), que presentó una pequeña fluctuación en la 79 80 11va campaña. En general, comparando las eficiencias de los 3 prototipos de humedal resultaron tener una baja desviación estándar, por lo que se observan estables a lo largo del monitoreo. En la Figura 22 c) se observó la variación en la eficiencia de remoción del Al, donde la mayor eficiencia promedio resultó en la estación PH04 (97.82±0.94 %) del prototipo 3, su eficiencia se mantiene alta y cercana al 100% en la mayoría de las campañas; seguida por PH03 (97.41±1.05 %), en el cual se presentan ligeras variaciones, pero siempre por encima del 95%; y finalmente PH02 (96.77±1.39 %), que presenta eficiencias altas con ligeras fluctuaciones. En general, comparando las eficiencias de los 3 prototipos de humedal resultan tener una baja desviación estándar, por lo que se observan estables a lo largo del monitoreo. En la Figura 22 d) se muestra la variación de la eficiencia para la remoción del Cu, donde la mayor eficiencia promedio resulta darse en la estación PH03 (95.86±2.76 %), su eficiencia varía con una reducción moderada en la 12va campaña; seguida por PH02 (95.01±2.52 %), en el cual se presenta una fluctuación del 89 al 98%; y finalmente PH04 (87.71±12.71 %) que muestra una variabilidad significativa, con caídas en la 4ta, 9na y 11va campaña, además, es la estación en la que se encuentra la menor eficiencia de todo el periodo de monitoreo. En general, se observa que la eficiencia de remoción del Cu es más estable hasta la 8va campaña y posterior a ello presentan mayores fluctuaciones; sin embargo, tienden a recuperarse en la 12va campaña. En la Figura 23 e) se refleja la variación de la eficiencia para la remoción del Fe, donde la mayor eficiencia promedio resulta darse en la estación PH02 (90.01±4.01 %), su eficiencia se mantiene consistentemente alta, oscilando entre el 80 y 95%, los picos más altos se observan en la 3ra y 4ta campaña; seguida por PH04 (89.47±3.44 %), en el cual se evidencia una variación similar a la estación anterior y mantiene su eficiencia por encima del 85%, con picos en la 3ra y 9na campaña; y finalmente PH03 (84.68±5.99 %), que presenta una 80 81 pequeña fluctuación en la 11va campaña. En general, comparando las eficiencias de los 3 prototipos de humedal resultan tener una alta eficiencia de remoción de Fe durante todas las campañas de monitoreo, con picos particularmente altos en la 3ra y 9na campaña. La Figura 23 f) muestra la variación de la eficiencia para la remoción del Cd, donde la mayor eficiencia promedio resulta darse en la estación PH02 (85.49±5.81 %), su eficiencia de remoción se mantiene alta, oscilando alrededor del 70 y 90%, con picos más altos en la 4ta y 8va campaña; seguida por PH04 (84.82±6.14 %), en el cual se evidencia una variación similar a la estación anterior y mantiene su eficiencia por encima del 70%, con picos máximos en la 4ta y 8va campaña; y finalmente PH03 (84.33±6.43 %), que muestra una fluctuación hasta la 9na campaña y posteriormente tiende a disminuir. En general, comparando las eficiencias de los 3 prototipos de humedal demuestran una alta eficiencia de remoción de Cd durante hasta la 9na campaña para luego a disminuir progresivamente. En la Figura 23 g) se comparó la variación de la eficiencia para la remoción del sulfato, donde la mayor eficiencia promedio resulta darse en la estación PH02 (28.64±11.54 %), su eficiencia es variable, iniciando alrededor del 41.31% en la primera campaña, con fluctuaciones significativas a lo largo del monitoreo y observando los picos más altos en la 1ra, 6ta y 9na campaña. Un comportamiento similar se da en PH04 (25.35±12.68 %), en el cual la eficiencia tambien presenta fluctuaciones importantes, con picos en la 1ra, 6ta y 9na campaña; y finalmente PH03 (21.39±14.67 %), que presenta picos más altos en la 2ra y 6ta campaña; sin embargo, hay una caída negativa en la 11va campaña (-11.60%). En general, la eficiencia de remoción del sulfato en los 3 prototipos de humedal es mucho más variable y menos consistente que la de los otros metales, con picos significativos en las primeras campañas y una disminución drástica en la 7ma y 11va campaña. 81 82 Figura 23. Variación de la eficiencia en los PHCA para la remoción de metales: a) Co, b) Zn, c) Al y d) Cu 82 83 Figura 24. Variación de la eficiencia en los PHCA para la remoción de sulfato y metales: a) Fe, b) Cd y c) Sulfato 83 84 Por otro lado, los parámetros que resultaron con menor eficiencia de remoción (-) de contaminantes en los prototipos de humedales fueron: Mg > B > Mn > As, en orden de mayor a menor eficiencia, como se muestra en la Figura 24. En la gráfica a) se muestra la variación de la eficiencia para la remoción del Mg, donde la mayor eficiencia promedio resulta darse en la estación PH03 (-1.64±20.59 %), su eficiencia es variable, iniciando con valores positivos entre 27.66% a 11.52% desde la 1ra hasta la 6ta campaña, a excepción de la 5ta campaña siendo negativa (-2.34%), posteriormente de la 7ma a la 12va campaña se aprecia eficiencias negativas con un valor máximo negativo en la 7ma campaña (-35.77%). Un comportamiento similar se da en PH02 (-3.69±20.11 %), en el cual las eficiencias positivas se encuentran entre la 1ra (máx. 29.56%) y 4ta campaña, incluyendo la 6ta campaña, para luego disminuir progresivamente alcanzando eficiencias negativas. Finalmente, en el PH04 (-3.83±17.47 %), se presenta la mayor eficiencia negativa en la 7ma campaña (-41.40%). En general, comparando las eficiencias de los 3 prototipos de humedal resultan tener una eficiencia positiva hasta 6ta campaña y continúan disminuyendo progresivamente hasta alcanzar valores negativos. En la gráfica b) se observa la variación de la eficiencia para la remoción del B, donde la mayor eficiencia promedio resulta darse en la estación PH04 (-39.24±52.73 %), su eficiencia es variable, iniciando con un valor máximo positivo en la 1ra campaña (17.39%) para luego disminuir progresivamente alcanzando una máxima deficiencia de remoción en la 6ta campaña (-166.67%); además, se observa una eficiencia nula en la 5ta y 7ma campaña. Un comportamiento similar de deficiencia se da en PH03 (-47.08±40.85 %), en el cual se encuentran eficiencias nulas en la 2da, 7ma y 12va campaña, para luego disminuir progresivamente alcanzando eficiencias negativas. Finalmente, en el PH02 (-54.21±68.27 %), la mayor eficiencia de remoción se da en la 1ra campaña (8.70%), en contraste el pico más negativo ocurre en la 84 85 8va campaña (-216.67%). En general, comparando las eficiencias de los 3 prototipos de humedal resultan tener una eficiencia positiva o nula únicamente hasta la 2da campaña, para posteriormente disminuir hasta alcanzar valores negativos. En la gráfica c) se refleja la variación de la eficiencia para la remoción del Mn, donde la eficiencia promedio negativa más cercana al 0% resulta darse en la estación PH04 (-46.28±9.87 %), su eficiencia es variable, el pico menos negativo se observa en la 6ta campaña (31.63%) y su máximo en la 9na campaña (-59.07%). El comportamiento es similar en la estación PH02 (-58.64±35.76 %), en el cual las eficiencias fluctúan entre -21.02% y -146.85%, presentando la mayor deficiencia en comparación a las demás estaciones de monitoreo. Finalmente, en el PH03 (-62.09±18.23 %), se presenta el pico menos negativo en la 6ta campaña (-38.18%) y su máximo en la 7ma campaña (-101.64%). En general, comparando los 3 prototipos de humedal resultan tener una eficiencia negativa en todo el periodo de monitoreo. En la gráfica d) se muestra la variación de la eficiencia para la remoción del As, donde la eficiencia promedio negativa más cercana al 0% resulta darse en la estación PH04 (-2077.77±1931.43 %), su eficiencia es variable, el pico menos negativo se observa en la 12va campaña (-327.27%) y su máximo en la 3ra campaña (-5900.00%). El comportamiento es similar en la estación PH02 (-2038.57±1963.32 %), en el cual las eficiencias fluctúan entre -256.36% y -5650.00%. Finalmente, en el PH03 (-2496.22±2198.81 %), se presenta el pico menos negativo en la 11va campaña (-476.14%) y su máximo en la 3ra campaña (-6570.00%), presentando la mayor deficiencia en comparación a las demás estaciones de monitoreo. En general, comparando los 3 prototipos de humedal resultan tener una eficiencia negativa en todo el periodo de monitoreo, que llega a su pico máximo en la 3ra campaña para después disminuir progresivamente acercándose a la nulidad. 85 86 Figura 25. Variación de la eficiencia en los PHCA para la remoción de metales: a) Mg, b) B, c) Mn y d) As 86 87 4.4. Análisis estadístico de datos Para el análisis estadístico de los datos de efluentes obtenidos de los parámetros de campo (pH, ORP, CE, TDS, temperatura) y los parámetros de laboratorio como metales totales (Fe, Mg, Al, Mn, Zn, Co, B, Cu, Cd, As, Pb y Hg) y sulfato se tuvo en cuenta la metodología estadística del apartado 3.10, donde se realizó un análisis de la normalidad y de homogeneidad de varianzas, seguido de la contrastación de hipótesis. Se realizó la prueba de normalidad Shapiro-Wilk para las concentraciones de los efluentes en términos de parámetros de campo y laboratorio en los PHCA, donde se obtuvo una distribución normal en los efluentes de Mn y sulfato; además, presentan una distribución homogénea de varianza. Mientras que, en los efluentes de Fe, Al, As, Cd, Pb, B, Mg, Zn, Co, Cu y los parámetros de pH, ORP, CE y TDS no presentaron una distribución normal. El análisis de la prueba de hipótesis mediante ANOVA para los datos paramétricos indica solamente una diferencia significativa en el Mn. Mientras que, para los datos no paramétricos mediante el análisis de la prueba de Kruskal-Wallis resultaron con diferencia significativa los efluentes de Al, As, Cd, Pb, Zn, Co, Cu, además, de los parámetros de pH, ORP, CE y TDS. Añadiendo a ello, mediante el análisis del test de Tukey para pruebas paramétricas resulta una diferencia significativa para el Mn entre el prototipo control y prototipo 2. Mientras tanto, para la prueba no paramétrica por medio del test de Dunn se obtuvo diferencia significativa para Al, As, Cd, Pb, Zn, Co, Cu, pH, ORP, CE y TDS entre el prototipo control y los prototipos 1, 2 y 3. Sim embargo, al comparar los prototipos con diferente composición de sustrato orgánico no presentan diferencia significativa entre ellos. 87 88 Tabla 22. Resultados del análisis estadístico de los efluentes en los PHCA Análisis de normalidad Parámetro Prototipo Shapiro - Wilk p-value Distribución Análisis de homogeneidad de varianzas Levenne ANOVA Test Bartlett pvalue Kruskal - Wallis Diferencia pDiferencia significativa value significativa Comparación por parejas Test P1 P2 P3 Parámetro de laboratorio P2 Fe total Al total P3 0,0004 No normal 0,0000 - No paramétrico 0,346 - - 0,271 No existe Dunn 1 0,5253 Control 0,4718 1 P2 0,832 P3 0,0000 No normal 0,0000 - No paramétrico - - 0,000 Si existe Dunn Control P2 As total Cd total Mn total Pb total P3 0,0119 No normal 0,0123 - No paramétrico 0,645 0,0066* 0,0001* 0,0000* 0,387 - - 0,000 Si existe Dunn 1,000 0,0017* P2 1,000 0,0000 No normal 0,0019 - No paramétrico - - 0,000 Si existe Dunn 0,0000* 0,0001* 1,000 1,000 Control 0,0000* 0,0000* 0,0000* P2 0,8889 P3 0,9950 Normal - 0,7766 Paramétrico 0,035 Si existe - - Tukey 0,9990 0,9377 Control 0,1584 0,0321 P2 1,000 P3 0,0000 No normal 0,0000 - No paramétrico - - 0,000 Si existe Dunn Control P2 B total 0,060 Control P3 0,6956 P3 Control 0,0000 No normal 0,4513 - No paramétrico 0,1199 1,000 1,000 0,0000* 0,0000* 0,0000* 1,000 - - 0,142 No existe Dunn 1,000 1,000 0,209 0,090 88 0,420 89 P2 Mg total P3 0,0083 No normal 0,8172 - No paramétrico 1,000 - - 0,989 No existe Dunn Control P2 Zn total P3 0,0000 No normal 0,0000 - No paramétrico P2 P3 0,0000 No normal 0,0000 - No paramétrico - - 0,000 Si existe Dunn Cu total P3 0,0000 No normal 0,0000 - No paramétrico - 0,000 Si existe Dunn - - 0,000 Si existe Dunn P2 P3 Normal - 0,7086 P2 P3 Paramétrico 0,066 No existe - - Tukey 0,0000 No normal 0,7548 - No paramétrico P2 P3 - - 0,000 Si existe Dunn 0,0000 No normal 0,8710 - No paramétrico P2 P3 - 0,000 Si existe Dunn 0,0000 No normal 0,0000 - No paramétrico P2 P3 Control 0,0000* 0,0000* 0,293 0,053 0,0003* 0,0045* 0,0000* 1,000 1,000 0,0001* 0,0000* 0,0002* 0,0000 No normal 0,0011 - No paramétrico 0,9981 0,9966 0,0855 0,1858 0,1231 0,3773 0,687 0,0010* 0,0003* 0,0000* 0,1281 0,4226 0,0025* 0,0003* 0,0000* 1,000 - - 0,000 Si existe Dunn Control TDS 0,0000* 1,000 - Control CE 1,000 1,000 Control ORP 1,000 0,9805 0,0849 Control Parámetros de campo pH 1,000 1,000 Control Sulfato 1,000 1,000 - Control P2 1,000 1,000 1,000 Control Co total 1,000 1,000 1,000 0,0003* 0,0086* 0,0016* 1,000 - - 0,001 Si existe Dunn 1,000 1,000 0,0016* 0,0229* 0,0049* 89 90 CAPÍTULO V DISCUSIÓN DE RESULTADOS 5.1. Fracción biodegradable del sustrato orgánico El sustrato orgánico que presentó mayor fracción biodegradable según la Tabla 12, es el estiércol de oveja (0.61), esto debido a que incluye en su composición una menor cantidad de fracciones poco digeribles como la lignina y celulosa que son resistentes a la descomposición microbiana, según lo menciona Gibert et al. (2004). Asimismo, los demás sustratos como el compost, tierra negra y estiércol de vaca contienen lignina menor al 21%, lo cual beneficia su degradación a largo plazo (Baquerizo et al., 2016). Otro aspecto importante a considerar es que, la velocidad de descomposición del sustrato orgánico en los prototipos de humedal se incrementa con la temperatura, independientemente del compuesto de que se trate (Santolaria, 2014) influyendo en la eficiencia de los PHCA. Además, el estiércol de oveja (43.64%) y vaca (40.90%) presentaron una alta proporción de EAS, que pueden ser usados por los microorganismos como fuente de nutrientes y aporte de energía, para contribuir en la remoción de contaminantes (Prasad et al., 1999). Mientras que, la mayor proporción de SV resultó en el estiércol de vaca (89.36%) y tierra negra (80.00%). Entonces podemos decir, que el prototipo 1 al presentar una alta proporción de estiércol de oveja (75%), proporcionará una fuente adecuada 90 91 de carbono fácilmente biodegradable que puede favorecer la actividad microbiana, especialmente en las primeras etapas del humedal; sin embargo, el bajo % de celulosa y el moderado contenido de lignina pueden ralentizar la eficiencia a largo plazo. En el caso del prototipo 2, el sustrato orgánico puede proporcionar una mayor cantidad de carbono a largo plazo, lo que puede mantener la actividad microbiana durante un período más extenso; a pesar de ello, la proporción de lignina y celulosa sugiere que este sustrato será más resistente a la degradación, lo que puede resultar en una liberación más lenta de nutrientes. Finalmente, el sustrato orgánico del prototipo 3 al combinar el estiércol de vaca (37.5%), oveja (37.5%), compost (12.5%) y tierra negra (12.5%), proporciona una mezcla más equilibrada de materia orgánica de rápida y lenta biodegradación; esta combinación optimiza el aporte de nutrientes y favorece la actividad microbiana, mejorando el rendimiento del prototipo de humedal tanto a corto como a largo plazo. Realizando una comparación con la investigación desarrollada por Gibert et al. (2004), el estiércol de oveja obtuvo un menor valor de fracción biodegradable (0.56); sin embargo, presenta una mayor proporción de EAS (44.84%). En el caso del compost la B es mucho menor (0.10) y la EAS es ligeramente menor (33.95%). Estos cambios se deben principalmente a la distinta procedencia del sustrato orgánico. Por otro lado, según la Tabla 13, los diferentes sustratos orgánicos utilizados en los PHCA presentan una alta concentración de metales como K, Ca, Mg, P, Fe, Al, Mn, Na, Sr, Zn, B y As. El prototipo 3, tiene un compuesto más balanceado entre el aporte de nutrientes y la capacidad de retener metales, debido a la proporción de combinación del estiércol de vaca (37.5%), oveja (37.5%), compost (12.5%) y tierra negra (12.5%). El prototipo 1, al tener una mayor proporción de estiércol de oveja (75%), podría verse limitado en su capacidad de retener ciertos metales, mientras que el prototipo 2, con más estiércol de vaca (75%), podría liberar más metales solubles como el Mn en el efluente (Kröpfelová et al., 2009). Las concentraciones de metales en el sustrato orgánico pueden haber influido en los resultados de los efluentes de 91 92 los PHCA, debido a la liberación de estos metales por la variación de pH (Singh & Chakraborty, 2022), principalmente de Mg, Mn, B y As. 5.2. Diseño e implementación de los prototipos de humedales Los PHCA fueron diseñados en base a la carga de acidez aplicada, obteniendo una carga hidráulica de 102.58 L/m2.d y un TRH de 5.85 d; además, operaron bajo condiciones reales y a flujo continuo, a un caudal promedio de 110.8 L/d en el prototipo control (PH01), 111.8 L/d en el 1er prototipo (PH02), 118.4 L/d en el 2do prototipo (PH03) y 109.8 L/d en el 3er prototipo (PH04), como se presenta en la Tabla 13. Todos los PHCA estuvieron compuestos de grava, espejo de agua y Juncus arcticus Willd. tal como se muestra en la Figura 14. La única diferencia entre ellos fue el componente del sustrato orgánico, el prototipo control no lo contuvo, ya que permitió evaluar el efecto de sus demás componentes en la remoción de contaminantes, resultando ser baja. Mientras que, los prototipos 1, 2 y 3 si presentaron diferente composición de sustrato orgánico, como se indica en la Tabla 7, lo cual contribuyó en obtener mejores eficiencias de remoción de contaminantes en comparación al prototipo control. Además, en relación con las investigaciones de Calle Galindo (2021), Garro Padilla (2015), Licapa (2015), Sekarjannah et al. (2019), Sheoran (2017) y Singh & Chakraborty (2020) optaron por emplear un humedal anaerobio para el tratamiento de aguas ácidas. Este tipo de humedal está compuesto principalmente por grava, macrófitos y sustrato orgánico, siendo este último integrado en su mayoría por compost y estiércol de animales. Según Sekarjannah et al. (2021), el estiércol, al contener BSR, propicia la activación de los procesos microbianos en la primera fase de tratamiento; mientras que, el compost presenta proporciones más altas de compuestos poco biodegradables; lo cual, contribuyen y aseguran la eficiencia de los humedales en un corto y largo plazo. Estas consideraciones fueron tomadas en cuenta para el diseño e implementación de los prototipos de humedal bajo condiciones climáticas altoandinas que implica la presente investigación. 92 93 5.3. Análisis de la eficiencia de la remoción de metales y sulfatos, y comparación de parámetros fisicoquímicos en los PHCA Evaluación del prototipo control Según los resultados de los parámetros fisicoquímicos mostrados en la Tabla 16, el prototipo control no presentó diferencia significativa entre el afluente (PH0) y efluente (PH01); siendo el pH promedio incluso más ácida (3.22±0.12) que el ingreso, esto se debe a la ausencia del sustrato orgánico y escaza presencia de nutrientes para las BSR que generan alcalinidad para el incremento del pH (Kuyucak, 2002; Neculita et al., 2007), por lo que el prototipo control no cuenta con la suficiente capacidad de neutralización para incrementar el pH. Mientras que, la temperatura promedio fue de 12.41±2.28 °C, resultando en un leve incremento que puede estar relacionado con la exposición ambiental; de igual manera se percibió un incremento en el ORP promedio (231.77±7.03 mV) debido a una mayor oxigenación en el prototipo. Los valores promedios de CE y TDS fueron 426.36±162.88 µS/cm y 226.11±96.96 mg/L respectivamente, ligeramente menor que el afluente por los procesos de sedimentación de los sólidos en el sistema (Hammer, 2014). Asimismo, los resultados de eficiencia en el prototipo control para la remoción de Fe (85.06±7.81 %), As (37.45±51.75 %) y B (1.63±6.97 %) fueron positivos; esto principalmente por procesos de sedimentación y precipitación donde se logra remover metales asociados a partículas del agua (Hammer, 2014; Matagi et al., 1998). Mientras que, los demás metales resultaron con una eficiencia negativa, posiblemente por la saturación del sistema y liberación hacia el efluente; así como también a la escasa presencia de nutrientes para el desarrollo de las BSR que contribuyen en la eliminación de metales pesados y sulfato (Neculita et al., 2007; Singh & Chakraborty, 2022; Zhang et al., 2020). Estadísticamente al comparar la calidad del efluente del prototipo control con los efluentes de los prototipos que contienen sustrato orgánico podemos ver que presentan diferencia significativa (p < 0.05) para los parámetros de Al, As, Cd, Mn (solo con el prototipo 2), Pb, Zn, Co, Cu, pH, ORP, CE y TDS. 93 94 Comparación de parámetros fisicoquímicos de campo en los PHCA con sustrato orgánico Las características fisicoquímicas en términos de pH se muestran en la Figura 15; resultando un mayor incremento en el efluente del prototipo 3 (6.37±0.15), seguido por los valores cercanos en el prototipo 2 (6.27±0.11) y prototipo 1 (6.24±0.15); estos incrementos de pH se dan debido a la oxidación del sustrato orgánico fácilmente disponible por las BSR para la formación de especies carbonatadas (carbonatos y bicarbonatos) como se apreció en los PHCA, además, las BSR que consumen iones de hidrógeno durante la reducción del sulfato producen dióxido de carbono que genera alcalinidad; esto se debe a la reducción de iones hidrógeno y al efecto amortiguador del bicarbonato producido en la reducción (Kuyucak, 2002; Seervi. et al., 2017; J Skousen et al., 1998). Además, comparando el comportamiento del pH con las investigaciones desarrolladas por Singh & Chakraborty (2020) y Torres (2015) los resultados son muy parecidos a los obtenidos en la presente investigación; sin embargo, en referencia a la investigación de Sekarjannah et al. (2019) nuestros PHCA presentan mayor incremento de pH. Según la Figura 16, en términos de ORP el valor promedio en el efluente del prototipo 3 (57.91±6.84 mV) fue menor en comparación al prototipo 2 (63.45±5.43 mV) y prototipo 1 (65.38±7.25 mV). Estos valores son bajos en relación al afluente ya que los PHCA se encontraron bajo condiciones anóxicas, que se ha evidenciado por el ennegrecimiento de la superficie del sustrato y la presencia de gases de sulfuro por el olor a huevo podrido (Lopez & Fuentes, 2015). Mientras que, la CE se reduce en mayor medida en el Prototipo 3 (194.59±58.83 µS/cm) y prototipo 1 (186.88±53.52 µS/cm), donde el efluente de esta última presentó menor concentración. Del mismo modo con los resultados de TDS en los efluentes del prototipo 1 (99.61±41.25 mg/L) y prototipo 3 (102.88±42.81 mg/L), como se muestran en las Figuras 17 y 18. La reducción de las concentraciones de CE y TDS se da por medio de procesos como la dilución y dispersión, donde el flujo lento y el TRH 94 95 prolongado permiten la sedimentación, dilución y dispersión de sólidos, disminuyendo la concentración de iones disueltos en el efluente (Younger et al., 2002). Asimismo, el incremento promedio de la temperatura en los efluentes es mayor en el prototipo 3 con 13.08±3.05 °C; seguido por el prototipo 2 (12.62±2.93 °C) y prototipo 1 (12.38±2.57 °C), en comparación al afluente como se representa en la Figura 19. Según Denegri-Muñoz & Iannacone (2020) y Gómez (2023), este comportamiento puede explicarse por la actividad microbiana y por la descomposición de la materia orgánica, que al ser reacciones exotérmicas liberan calor al ambiente, elevando de esta manera la temperatura en los efluentes del humedal; además, la temperatura juega un rol muy importante en la actividad de las BSR, disminuyendo la eficiencia en los meses más fríos, ya que la velocidad de reacción es más lenta. Con lo mencionado, al realizar la comparación de los parámetros analizados en los efluentes de los PHCA con sustrato orgánico, podemos decir que no existen diferencias significativas (p > 0.05) entre los efluentes de PH02, PH03 y PH4 para todos los parámetros. Sin embargo, si hay diferencia significativa entre el prototipo control y los prototipos 1, 2 y 3. Comparación de las eficiencias de remoción del sulfatos y metales en los PHCA con sustrato orgánico Para la remoción de sulfato y metales pesados del agua contaminada por DAR un componente importante es el sustrato orgánico, ya que la materia orgánica realiza la retención de metales pesados por medio de la adsorción y precipitación. Mediante la adsorción los metales pesados se adhieren en las partículas de arcilla y colides húmicos presentes en la materia orgánica (Sheoran & Sheoran, 2006). Los metales una vez adsorbidos en colides húmicos o arcillosos, permanecen como átomos metálicos, permitiendo ser eliminados del afluente (Groudev et al., 2007; Tipping & Hurley, 1992). Asimismo, muchos de los metales a menudo sufren coprecipitación con hidróxidos, óxidos u oxihidróxidos de Fe, Mn y sulfuros metálicos producidos 95 96 por bacterias, posteriormente se retienen en el sistema (Jong & Parry, 2003; Metcalf et al., 2002); otro factor importante es el TRH y la velocidad del flujo, que influyen en la actividad general de los microorganismos para neutralizar la acidez y precipitar los metales Younger et al. (2002). Considerando ello, podemos realizar la comparación de las eficiencias de remoción del sulfato y metales. De acuerdo a los resultados, los parámetros con mayor eficiencia de remoción (+) son el: Co > Zn > Al > Cu > Fe > Cd > sulfato, en orden de menor a mayor eficiencia, como se muestran en las Figuras 22 y 23. En relación a los metales de Co y Al, el prototipo 3 (PH04) presenta la mayor eficiencia promedio de remoción, siendo 99.13±0.25 % y 97.82±0.94 %, respectivamente. Mientras que, en el Zn y Cu destaca la mayor eficiencia de remoción en el prototipo 2 (PH03), siendo 97.54±1.34 % y 95.86±2.76 %, respectivamente. Finalmente, el Fe, Cd y sulfato se remueve en mayor medida en el prototipo 1 (PH02), obteniendo eficiencias de 90.01±4.01 %, 85.49±5.81 % y 28.64±11.54 %, respectivamente. La remoción de metales pesados como Cu, Zn, Fe y Cd se realiza principalmente por precipitación química y adsorción en los sedimentos y sustratos del humedal; la precipitación inicia por la neutralización del pH y la formación de hidróxidos metálicos insolubles, y la adsorción que se da en la superficie de los materiales del humedal como arcilla, materia orgánica, óxidos e hidróxidos (Bhuyan et al., 2022; Pat-Espadas et al., 2018; Sasaki et al., 2003; Sheoran & Sheoran, 2006; Sobolewski, 1999). Además, los macrófitos intervienen produciendo sinergia con otros componentes para la eliminación de metales, mediante mecanismos de retención sobre los tejidos vegetales y procesos de precipitación con interacción de bacterias en la raíz, lo que permite la formación de una capa de oxihidroxidos de Fe, que tambien podría absorber otros metales (Marchand et al., 2010). Asimismo, la remoción del Al es por medio de la hidrólisis u oxidación a pH superior a 5 para formar óxidos insolubles, (oxi)hidróxidos e hidróxidos (Falagán et al., 2017). En el caso del sulfato, las BSR realizan el proceso de reducción de sulfato a sulfuro de 96 97 hidrógeno para la formación de precipitados (Kieu et al., 2015; Kuyucak, 2002; Xu & Chen, 2020). Por otro lado, los PHCA presentaron una menor eficiencia de remoción (-) para: As < Mn < B < Mg, de acuerdo a los resultados mostrados en la Figura 24. En relación a los metales de As, Mn y B, el prototipo 3 presenta la menor eficiencia promedio de remoción, siendo -2077.77±1931.43 %, -46.28±9.87 % y -39.24±52.73 %, respectivamente. Mientras que, que el prototipo 2, tuvo la menor eficiencia en Mg (-1.64±20.59 %). Esto puede deberse a la liberación de los metales concentrados en el sustrato orgánico por la variación de pH o por procesos de descomposición o mineralización de dicha materia orgánica (Sheoran & Sheoran, 2006; Singh & Chakraborty, 2022), lo cual influyó en la dinámica y efectividad de los PHCA. Según mencionan Hallberg & Johnson (2005b), a un pH < 9.0 la precipitación del Mn como (oxi)hidróxidos es más lenta que la del hierro ferroso; por tanto, es difícil de eliminar biológicamente mediante las BSR, ya que los efluentes de los PHCA presentan un pH entre 6.24 a 6.37. Comparando las eficiencias de los PHCA para el tratamiento de DAR con la investigación desarrollada por Singh & Chakraborty (2020), vemos que hay una similar eficiencia para Fe y sulfato; mientras que, en Al la presente investigación obtuvo mejores eficiencias. Sin embargo, en términos de Mn Choudhary & Sheoran (2011) y Sheoran (2017), obtuvieron eficiencias positivas para su remoción, lo cual no fue el caso para nuestra investigación. Asimismo, comparando con la investigación local de Garro Padilla (2015), vemos que los resultados de las eficiencias de remoción en Fe y Cd son menores que la presente investigación; sin embargo, él obtiene eficiencia positiva en As, contrario a nuestros resultados descritos en la Figura 24 d). Añadiendo a ello, para el caso particular del Pb y Hg, los resultados reflejan que no hubo diferencia en la concentración entre el afluente y los efluentes de PH02, PH03 y PH04, manteniéndose constante a un valor < 0.0006±0.0 mg/L y < 0.00009±0.0 mg/L, respectivamente; e incluso se 97 98 mantienen por debajo del límite de cuantificación, por lo que no fue posible hallar su eficiencia. Finalmente, las eficiencias para la remoción de metales totales se supera el 70% para el Cd, Fe, Pb, Al, Co, Zn y Cu en los prototipos 1, 2 y 3, que contienen sustrato orgánico; mientras que, para el sulfato solo se alcanza una eficiencia máxima del 47.6%¨mediante el prototipo 1. Para los demás metales no se llegó a alcanzarlo. 98 99 CAPÍTULO VI CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 6.1. Conclusiones • La mayor fracción biodegradable en el sustrato orgánico se presenta en el estiércol de oveja (0.61), seguida del estiércol de vaca (0.57), compost (0.44) y tierra negra (0.25); además, la concentración más alta de lignina se encuentra en la tierra negra; mientras que en celulosa en el compost y hay una mayor cantidad de sustancias fácilmente disponibles en el estiércol de oveja. • Se diseñaron los PHCA en base a la carga de acidez aplicada, obteniendo una carga hidráulica de 102.58 L/m2.d y un TRH de 5.85 d. Considerando el área superficial de 1.14 m2, los prototipos operaron a un caudal de flujo continuo de 111.8 L/d en el 1er prototipo (PH02), 118.4 L/d en el 2do prototipo (PH03) y 109.8 L/d en el 3er prototipo (PH04). Cada uno estuvo compuesto por grava, espejo de agua y Juncus arcticus Willd., con la única diferencia en la composición del sustrato orgánico (compost, tierra negra, estiércol de vaca y oveja). Los PHCA han demostrado funcionar con normalidad bajo condiciones climáticas frígidas y promovieron las condiciones necesarias (pH) para la remoción de metales y sulfato. • El prototipo 3 presentó mejores resultados promedios en términos de pH (6.37), ORP (57.91 mV) y T (13.08 °C) en comparación con los demás; 99 100 mientras que, el prototipo 1 mostró mejores resultados en CE (186.88 µS/cm) y TDS (99.61 mg/L). Asimismo, el efluente del prototipo 3 presentó una menor concentración promedio para Fe (1.21 mg/L), Al (0.055 mg/L), Co (0.0003 mg/L) y B (0.014 mg/L), en comparación con los demás. En contraste, el efluente del prototipo 1 obtuvo mejores resultados para sulfato (86.96 mg/L), Mn (0.96 mg/L) y As (0.0040 mg/L). En los casos de Zn y Cd no hubo variaciones entre los efluentes, similar para Pb y Hg que se encontraron por debajo del límite de cuantificación. • El prototipo 3 presentó la mejor eficiencia de remoción para Co y Al (99.13%, 97.82% resp.), el prototipo 2 para Zn y Cu (97.54%, 95.86% resp.) y el prototipo 1 para Fe, Cd y sulfato (90.01%, 85.49% y 28.64% resp.); entre estos podemos determinar que en 6 de los parámetros se superando el 70% de eficiencia. Además, los PHCA presentaron una eficiencia negativa de remoción para Mg, B, Mn y As. Inferimos, que hay diferencia estadística significativa entre el prototipo control y los prototipos que contienen sustrato orgánico; sin embargo, al analizar los prototipos con sustrato orgánico no se encontraron diferencia significativa. 6.2. Recomendaciones • Se recomienda continuar con investigaciones en los prototipos de humedal construido para optimizar el diseño antes de su implementación definitiva en campo, con la finalidad de adaptar estos sistemas a zonas altoandinas con condiciones climáticas frías, que pueden afectar las reacciones químicas y procesos de remoción de contaminantes del drenaje ácido de roca. Además, sería útil fomentar nuevas investigaciones sobre la aplicabilidad de las Soluciones Basadas en la Naturaleza (SbN) en distintas regiones con características similares. • Se recomienda continuar con el monitoreo de los prototipos de humedal construido para generar una base sólida y consistente para entender mejor el comportamiento a largo plazo de estos sistemas, lo cual permitirá ahondar en su sostenibilidad. 100 101 • Investigar la acumulación y distribución de metales en los sedimentos de los prototipos para evaluar la cantidad generada en un periodo de tiempo y posteriormente proponer una estrategia de gestión. La recopilación de esta información permitirá estudiar la vida útil de los sistemas, ayudando a prever cuántos años pueden mantenerse en operación eficiente antes de requerir intervención o mejoras. • Establecer controles regulares en la operación de los prototipos de humedales, especialmente en la regulación de caudales, para asegurar su funcionamiento eficiente. Sugerir estas acciones a os encargados de la operación y mantenimiento en campo, como comunidades locales o autoridades responsables del recurso hídrico (gobierno local, gobierno regional, ONGs, empresas privadas y otros). • Proponer la complementariedad del tratamiento con otros sistemas para asegura la reutilización del agua en actividades agrícolas y ganaderas. Esta recomendación debe presentarse a los responsables de la gestión de recursos (gobierno local, gobierno regional, ONGs, empresas privadas y otros) en las comunidades donde se implementen estos sistemas, asegurando que se consideres aspectos como viabilidad económica, impacto ambiental y aceptación social. 101 102 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Aduvire, O. (2006). Drenaje ácido de mina: Generación y tratamiento. Instituto Geológico y Minero de España, 140. Alakangas, L., Andersson, E., & Mueller, S. (2013). Neutralization/prevention of acid rock drainage using mixtures of alkaline by-products and sulfidic mine wastes. Environmental Science and Pollution Research, 20(11), 7907–7916. https://doi.org/10.1007/s11356-013-1838-z Alsaiari, A., & Tang, H. L. (2018). Field investigations of passive and active processes for acid mine drainage Treatment: Are anions a concern? Ecological Engineering, 122, 100–106. https://doi.org/10.1016/j.ecoleng.2018.07.035 Amos, P. W., & Younger, P. L. (2003). Substrate characterisation for a subsurface reactive barrier to treat colliery spoil leachate. Water Research, 37(1), 108–120. https://doi.org/10.1016/S0043-1354(02)00159-8 Anakalo, S., Abdul, F., & Anakalo, M. (2009). Enhancement of the nutritive value of bagasse using chicken manure. African Journal of Food, Agriculture, Nutrition and Development, 9(8), 1712–1724. https://doi.org/10.4314/ajfand.v9i8.48409 APHA. (2005). Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. American Public Health Association/American Water Works Association/Water Environment Federation, 21st Edition. Baquerizo, R., Pagés, J., & Pereda, I. (2016). El modelo de Buswell . Aplicación y comparación . Principales factores que influyen en su aplicación. Revista Virtual Pro, 168(March 2017). Barbaro, L., M., K., S., I., & D., M. (2011). Caracterización de la turba subtropical del departamento Islas del Ibicuy (Entre Ríos, Argentina). 28(2), 137–145. Batty, L. C., & Younger, P. L. (2004). The use of waste materials in the passive remediation of mine water pollution. Surveys in Geophysics, 25(1), 55–67. https://doi.org/10.1023/B:GEOP.0000015387.12390.ab Bhuyan, S. C., Bhuyan, S. K., & Sahu, H. B. (2022). Performance Evaluation of Waste Materials for the Treatment of Acid Mine Drainage to Remove Heavy Metals and Sulfate. In Water Quality - Factors and Impacts. 102 103 https://doi.org/10.5772/intechopen.99669 Biermann, V., Lillicrap, A. M., Magana, C., Price, B., Bell, R. W., & Oldham, C. E. (2014). Applicability of passive compost bioreactors for treatment of extremely acidic and saline waters in semi-arid climates. Water Research, 55, 83–94. https://doi.org/10.1016/j.watres.2014.02.019 Calle Galindo, C. I. (2021). Propuesta de mejoramiento de la calidad de aguas de drenaje ácido de minas (DAM), mediante un diseño de remediación combinada con tratamientos pasivos en la zona industrial de la Corporación Minera Toma La Mano S.A. Universidad Peruana Cayetano Heredia. Chang, I. S., Shin, P. K., & Kim, B. H. (2000). Biological treatment of acid mine drainage under sulphate-reducing conditions with solid waste materials as substrate. Water Research, 34, No.4(4), 1269–1277. Chávez Marvin, & Domine Marcelo. (2013). Lignin, Structure and Applications Depolymerization Methods for Obtaining Aromatic Derivatives of Industrial Interest. In Avances en Ciencias e Ingeniería (Vol. 4, Issue 4). Chen, J., Deng, S., Jia, W., Li, X., & Chang, J. (2021). Removal of multiple heavy metals from mining-impacted water by biochar-filled constructed wetlands: Adsorption and biotic removal routes. Bioresource Technology, 331(February), 125061. https://doi.org/10.1016/j.biortech.2021.125061 Choudhary, R. P., & Sheoran, A. S. (2011). Comparative study of cellulose waste versus organic waste as substrate in a sulfate reducing bioreactor. Bioresource Technology, 102(6), 4319–4324. https://doi.org/10.1016/j.biortech.2010.08.126 Cohen, A., Raymond, R., Mora, S., Alvarado, A., & Malavassi, L. (1986). Caracteristicas geológicas de los depósitos de turba en Costa Rica (estudio preliminar). Rev. Geol. Amer. Central, 47–67. Delgadillo, O., Camacho, A., & Serie, M. A. (2010). Depuración de aguas residuales por medio de humedales artificiales. http://www.infoandina.org/sites/default/files/publication/files/depuracion_de_aguas_r esiduales_por_medio_de_humedales_artificiales.pdf%5Cnhttp://www.aguasresiduales .info/revista/libros/depuracion-de-aguas-residuales-por-medio-de-humedales103 104 artificiales Denegri-Muñoz, J. E., & Iannacone, J. A. (2020). Tratamiento de Drenaje Ácido de Minas mediante Humedales Artificiales. Biotempo, 17(2), 345–369. https://doi.org/10.31381/biotempo.v17i2.3349 Falagán, C., Yusta, I., Sánchez-España, J., & Johnson, D. B. (2017). Biologically-induced precipitation of aluminium in synthetic acid mine water. Minerals Engineering, 106, 79–85. https://doi.org/10.1016/j.mineng.2016.09.028 Ford, K. . (2003). Passive Treatment Systems for Acid Mine Drainage. National Science and Technology Center, 1–20. Gallardo Martínez, D., Bruguera Amarán, N., Díaz Duque, J. A., & Cabrera Díaz, I. (2020). Drenaje ácido de minas y su influencia en ecosistemas asociados al yacimiento Santa Lucía, Cuba. Revista Iberoamericana Ambiente & Sustentabilidad, 3(2), 67–81. https://doi.org/10.46380/rias.v3i2.79 Gamonal, P. (2012). Tratamiento de drenaje de ácidos de minas en humedales construidos. 1–16. http://biblioteca.unmsm.edu.pe/redlieds/recursos/archivos/MineriaDesarrolloSostenibl e/MedioAmbiente/DAMhumedales.pdf Gañán, P., Zuluaga, R., Castro, C., Restrepo-Osorio, A., Velásquez, C., Osorio, M., Montoya, U., Vélez, L., Álvarez, C., Correa, C., & Molina, C. (2017). Celulosa: Un polímero de siempre con muchi futuro. Revista Colombiana de Materiales, 11, 01–04. García, J., Rousseau, D. P. L., Morató, J., Lesage, E., Maramoros, V., & Bayona, J. M. (2010). Contaminant Removal Processes in Subsurface-Flow Constructed Wetlands: A Review. Critical Reviews in Environmental Science and Technology, 40(7), 561–661. Garro Padilla, V. A. (2015). Eficiencia de un humedal artificial de tres celdas para el tratamiento de drenaje ácido de roca en el canal Chonta - Canrey Chico - Recuay Áncash periodo: octubre 2014 - abril 2015. Universidad Nacional Santiago Antúnez de Mayolo, 1–123. http://repositorio.unasam.edu.pe/bitstream/handle/UNASAM/4200/T033_45834977_ T.pdf?sequence=1&isAllowed=y Gibert, O., De Pablo, J., Luis Cortina, J., & Ayora, C. (2004). Chemical characterisation of 104 105 natural organic substrates for biological mitigation of acid mine drainage. Water Research, 38(19), 4186–4196. https://doi.org/10.1016/j.watres.2004.06.023 Gómez, J. (2023). Humedales Construidos Para el Tratamiento de Drenaje Ácido de Roca en Zonas Altoandinas. Universidad Politécnica de Catalunya. chrome- extension://efaidnbmnnnibpcajpcglclefindmkaj/https://upcommons.upc.edu/bitstream/ handle/2117/399325/memoria.pdf?sequence=2&isAllowed=y Grande, J. A., Beltrán, R., Sáinz, A., Santos, J. C., De La Torre, M. L., & Borrego, J. (2005). Acid mine drainage and acid rock drainage processes in the environment of Herrerías Mine (Iberian Pyrite Belt, Huelva-Spain) and impact on the Andevalo Dam. Environmental Geology, 47(2), 185–196. https://doi.org/10.1007/s00254-004-1142-9 Groudev, S. N., Georgiev, P. S., Spasova, I., & Nicolova, M. (2007). Bioremediation of Acid Mine Drainage in an Uranium Deposit. Advanced Materials Research, 20–21, 248– 257. https://doi.org/10.4028/www.scientific.net/amr.20-21.248 Hallberg, K. B., & Johnson, D. B. (2005a). Biological manganese removal from acid mine drainage in constructed wetlands and prototype bioreactors. Science of The Total Environment, 338, 115–124. https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2004.09.011 Hallberg, K. B., & Johnson, D. B. (2005b). Microbiology of a wetland ecosystem constructed to remediate mine drainage from a heavy metal mine. Science of the Total Environment, 338(1-2 SPEC. ISS.), 53–66. https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2004.09.005 Hammer, D. A. (2014). Creating Freshwater Wetlands. In Creating Freshwater Wetlands. https://doi.org/10.1201/9781498710800 Hedin, R. S., Nairn, R. W., & Kleinmann, R. L. (1994). Passive treatment of coal mine drainage. US Department of the Interior, Bureau of Mines. https://books.google.es/books?hl=es&lr=&id=VXcQAQAAMAAJ&oi=fnd&pg=PA1 &dq=passive+treatment+of+coal+mine+drainage&ots=AX2GtssSLN&sig=cYeofpt7 F0cFC0QfIycGbaX_XCs#v=onepage&q=passive treatment of coal mine drainage&f=false Hedin, Robert S., Nairn, R. W., & Kleinmann, R. L. P. (1994). Passive treatment of coal mine drainage. Infromation Circular 9389, 1–44. 105 106 Henrot, J., & Wieder, R. K. (1990). Processes of Iron and Manganese Retention in Laboratory Peat Microcosms Subjected to Acid Mine Drainage. Journal of Environmental Quality, 19(2), 312–320. https://doi.org/10.2134/jeq1990.00472425001900020018x Hernández-Sampieri, R., & Mendoza, C. (2018). Metodologia de la investigación: las rutas cuantativa, cualitativa y mixta. In McGRAW-HILL INTERAMERICANA EDITORES. Huamán, C. (2018). Tratamiento de drenaje ácido del depósito de desmonte unsuitable IV Yanacocha Norte por el proceso de humedales en Serpentín. In Universidad Privada del Norte. Universidad Privada del Norte. INAP-International Network for Acid Prevention. (2014). The Global Acid Rock Drainage Guide. 473. http://www.gardguide.com/images/5/5f/TheGlobalAcidRockDrainageGuide.pdf Instituto de Montaña. (2017). Plan de desarrollo de la Comunida Campesina “Cordillera Blanca” 2016-2021. 71. Instituto Nacional de Investigación en Glaciares y Ecosistemas de Montaña. (2023). Inventario Nacional de Glaciares y Lagunas de Origen Glaciar 2023. In INAIGEM. https://repositorio.inaigem.gob.pe/handle/16072021/499 Irfan, M., Gulsher, M., Abbas, S., Syed, Q., Nadeem, M., & Baig, S. (2011). Effect of various pretreatment conditions on enzymatic saccharification. Songklanakarin Journal of Science and Technology, 33(4), 397–404. Ji, Z., Tang, W., & Pei, Y. (2022). Constructed wetland substrates: A review on development, function mechanisms, and application in contaminants removal. Chemosphere, 286(P1), 131564. https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2021.131564 Jia, L., Liu, H., Kong, Q., Li, M., Wu, S., & Wu, H. (2020). Interactions of high-rate nitrate reduction and heavy metal mitigation in iron-carbon-based constructed wetlands for purifying contaminated groundwater. Water Research, 169, 115285. https://doi.org/10.1016/j.watres.2019.115285 Johnson, D. B., & Hallberg, K. B. (2005). Acid mine drainage remediation options: A review. Science of the Total Environment, 338(1-2 SPEC. ISS.), 3–14. https://doi.org/10.1016/j.scitotenv.2004.09.002 106 107 Jong, T., & Parry, D. L. (2003). Removal of sulfate and heavy metals by sulfate reducing bacteria in short-term bench scale upflow anaerobic packed bed reactor runs. Water Research, 37(14), 3379–3389. https://doi.org/10.1016/S0043-1354(03)00165-9 Kefeni, K. K., Msagati, T. A. M., & Mamba, B. B. (2017). Acid mine drainage: Prevention, treatment options, and resource recovery: A review. Journal of Cleaner Production, 151, 475–493. https://doi.org/10.1016/j.jclepro.2017.03.082 Kieu, T. Q. H., Nguyen, T. Y., Dang, T. Y., Nguyen, T. B., Vuong, T. N., & Horn, H. (2015). Optimization of sulfide production by an indigenous consortium of sulfate-reducing bacteria for the treatment of lead-contaminated wastewater. Bioprocess and Biosystems Engineering, 38(10), 2003–2011. https://doi.org/10.1007/s00449-015-1441-4 Kojima, H., Koizumi, Y., & Fukui, M. (2006). Community structure of bacteria associated with sheaths of freshwater and brackish Thioploca species. Microbial Ecology, 52(4), 765–773. https://doi.org/10.1007/s00248-006-9127-8 Kolmert, A., & Johnson, D. B. (2001). Remediation of acidic waste waters using immobilised, acidophilic sulfate-reducing bacteria. Journal of Chemical Technology and Biotechnology, 76(8), 836–843. https://doi.org/10.1002/jctb.453 Kröpfelová, L., Vymazal, J., Švehla, J., & Štíchová, J. (2009). Removal of trace elements in three horizontal sub-surface flow constructed wetlands in the Czech Republic. Environmental Pollution, 157, 1186–1194. https://doi.org/10.1016/j.envpol.2008.12.003 Kuyucak, N. (2002). Role of Microorganisms in Mining: Generation of Acid Rock Drainage and its Mitigation and Treatment. The European Journal of Mineral Processing and Environmental Protection, 2(3), 179–196. https://pdfs.semanticscholar.org/4898/183d93f0516cda37ae1dbea917eb06a7b477.pdf Lee, B. H., & Scholz, M. (2007). What is the role of Phragmites australis in experimental constructed wetland filters treating urban runoff? Ecological Engineering, 29(1), 87– 95. https://doi.org/10.1016/j.ecoleng.2006.08.001 León, V. (2020). Incremento de cargas y su efecto en la operación de un sistema Francés para tratar aguas residuales domésticas. 1–89. Lesage, E. (2006). Behaviour of heavy metals in constructed treatment wetlands. 107 108 Leyva, M. (2017). Capacidad secuestradora de metales pesados en el sedimento del humedal alto andino Collotacocha - Canrey - Recuay - Ancash, periodo abril - setiembre 2015. Universidad Nacional Santiago Antúnez de Mayolo, 1–179. http://repositorio.unasam.edu.pe/handle/UNASAM/2573 Li, Y., Achinas, S., Zhao, J., Geurkink, B., Krooneman, J., & Willem Euverink, G. J. (2020). Co-digestion of cow and sheep manure: Performance evaluation and relative microbial activity. Renewable Energy, 153, 553–563. https://doi.org/10.1016/j.renene.2020.02.041 Licapa, G. (2015). Influencia del Tiempo de Retención y Composición del Sustrato en la Remoción de Hierro y Cobre del Drenaje Ácido de Mina en Humedales Artificiales. Gestión Ambiental y Recursos Naturales, 116. http://repositorio.unc.edu.pe/handle/UNC/1553 Loayza, R. A., Duivenvoorden, J. F., Kraak, M. H. S., & Admiraal, W. (2014). Metal leaching, acidity, and altitude confine benthic macroinvertebrate community composition in Andean streams. Environmental Toxicology and Chemistry, 33(2), 404– 411. https://doi.org/10.1002/etc.2436 Lopez, P., & Fuentes, J. (2015). Las bacterias sulfato-reductoras. Geominas, 43, 93–98. https://www.researchgate.net/publication/309322176 López Pamo, E., Aduvire, O., & Barettino, D. (2002). Passive treatment of acid mine drainage: Present status and the future perspectives. Boletin Geologico y Minero, 113(1), 3–21. Lovera, D., Quiñones, J., Puente, L., Aramburú, V., Rosales, R., & Ipanaqué, O. (2001). Simulación de la producción y remediación de aguas provenientes del drenaje de rocas ácidas (ARD). Instituto De Investigación De La Facultad De Minas, Metalurgia Y Ciencias Geográficas, 4(7), 24–32. Luna, E. (2018). Biorremediación utilizando Distichia muscoides y Calamagrostis glacialis del drenaje ácido de roca proveniente del nevado de Pastoruri-2015. Universidad Nacional Santiago Antúnez de Mayolo, 103. Ma, L., Huang, C., Liu, Z. S., Morin, K. A., Aziz, M., & Meints, C. (2019). Prediction of acid rock drainage in waste rock piles Part 1: Water film model for geochemical 108 109 reactions and application to a full-scale case study. Journal of Contaminant Hydrology, 220, 98–107. https://doi.org/10.1016/j.jconhyd.2018.11.012 Macnair, M. R. (2002). Within and between population genetic variation for zinc accumulation in Arabidopsis halleri. New Phytologist, 155(1), 59–66. https://doi.org/10.1046/j.1469-8137.2002.00445.x Marchand, L., Mench, M., Jacob, D. L., & Otte, M. L. (2010). Metal and metalloid removal in constructed wetlands, with emphasis on the importance of plants and standardized measurements: A review. Environmental Pollution, 158(12), 3447–3461. https://doi.org/10.1016/j.envpol.2010.08.018 Martel, G. (2016). Los ríos rojos en la cordillera de los Andes, alteración y acidificación de las aguas superficiales. Boletín INAIGEM Año II, No 3, 51–56. Matagi, S. ., Swai, D., & Mugabe, R. (1998). A review of Heavy Metal Removal Mechanisms in wetlands. African Journal of Tropical Hydrobiology and Fisheries, 8(1), 23–35. https://doi.org/10.4314/ajthf.v8i1.1386 Mays, P. A., & Edwards, G. S. (2001). Comparison of heavy metal accumulation in a natural wetland and constructed wetlands receiving acid mine drainage. Ecological Engineering, 18(2), 487–500. https://doi.org/10.1016/S0925-8574(01)00097-0 Mendez, B. (2018). Biodisponibilidad de metales pesados en sedimentos del humedal alto andino Collotacocha – Canray – Recuay- Ancash y sus efectos en la actividad ganadera, período 2017. Universidad Nacional Santiago Antúnez de Mayolo, 1–143. http://rodin.uca.es/xmlui/bitstream/handle/10498/15776/Tes_2010_06.pdf?sequence= 1&isAllowed=y Metcalf, E., Tchobanoglous, G., Burton, F., & Stensel, H. (2002). Wastewater Engineering: Treatment and Reuse. McGraw-Hill Education. Navarro, J. P., Aguilar, I., & López, J. R. (2007). Aspectos bioquímicos y genéticos de la tolerancia y acumulación de metales pesados en plantas. Ecosistemas, 16(2), 10–25. Neculita, C. M., Yim, G. J., Lee, G., Ji, S. W., Jung, J. W., Park, H. S., & Song, H. (2011). Comparative effectiveness of mixed organic substrates to mushroom compost for treatment of mine drainage in passive bioreactors. Chemosphere, 83(1), 76–82. https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2010.11.082 109 110 Neculita, C. M., Zagury, G. J., & Bussière, B. (2007). Passive Treatment of Acid Mine Drainage in Bioreactors using Sulfate-Reducing Bacteria. Journal of Environmental Quality, 36(1), 1–16. https://doi.org/10.2134/jeq2006.0066 Núñez, E. (2021). Tratamiento de drenaje ácido de mina, mediante humedal artificial en condiciones de laboratorio [Universidad Nacional Agraria La Molina]. In Universidad Nacional Agraria La Molina. http://repositorio.lamolina.edu.pe/handle/UNALM/3271 Oliver, J. (2017). Rendimiento de dos variedades de papa (Solanum tuberosum L.) con la aplicacion de tierra negra y fertilizantes inorgánicos. Revista de Investigación e Innovación Agropecuaria y de Recursos Naturales, 4(2), 56–62. Palomino Cadenas, E. J. (2007). Sistemas de humedales para la biorremediación de drenajes ácidos de mina o roca en Áncash - Perú. Universidad Nacional de Trujillo, 1–97. Pat-Espadas, A. M., Portales, R. L., Amabilis-Sosa, L. E., Gómez, G., & Vidal, G. (2018). Review of constructed wetlands for acid mine drainage treatment. Water, 10(11), 1–25. https://doi.org/10.3390/w10111685 Patrick, W. H., Gambrell, R. P., & Khalid, R. A. (1977). Physicochemical Factors Regulating Solubility And Bioavailability Of Toxic Heavy Metals In Contaminated Dredged Sediment. Journal of Environmental Science and Health. Part A: Environmental Science and Engineering, 12(9), 475–492. https://doi.org/10.1080/10934527709374774 Place, D. L., Figueroa, L., Wildeman, T., & Reisman, D. (2006). Characterizing and tracking reactive mixture alterations: New tools for passive treatment system design and monitoring. 7th International Conference on Acid Rock Drainage 2006, ICARD - Also Serves as the 23rd Annual Meetings of the American Society of Mining and Reclamation, 2(June), 1605–1619. https://doi.org/10.21000/jasmr06021605 Prasad, D., Wai, M., Bérubé, P., & Henry, J. G. (1999). Evaluating substrates in the biological treatment of acid mine drainage. Environmental Technology (United Kingdom), 20(5), 449–458. https://doi.org/10.1080/09593332008616840 Riaño Cárdenas, A. (2019). Evaluación de la eficacia de un humedal anaerobio en la remoción de sulfatos y hierro. Universidad Pedagógica y Tecnológica de Colombia, 1– 81. 110 111 Rivas, C., & Mota, M. (2006). Bacterias anaerobias. Pfinica Del Libro FEFMUR, 355–380. https://doi.org/10.17533/udea.hm.20104 Rodríguez, R., & García-Cortés, A. (2006). Los residuos minero-metalúrgicos en el medio ambiente. Rodríguez, S., & Vargas, Y. (2019). Evaluación del potencial de humedales artificiales piloto, implementados con la especie Heliconia psittacorum, en la remediación de aguas residuales domésticas de bajo caudal para zonas rurales del Piedemonte Llanero [Universidad Santo Tomás]. In Universidad Santo Tomás. https://www.mendeley.com/catalogue/c45887cd-0e72-3f28-915ea841d0bfc814/?utm_source=desktop&utm_medium=1.19.8&utm_campaign=open_ca talog&userDocumentId=%7B0abf40e9-dae4-45d0-b49a-3b09aaceafeb%7D Rose, A. W. (2010). Advances in passive treatment of coal mine drainage 1998-2009. Joint Mining Reclamation Conf. 2010 - 27th Meeting of the ASMR, 12th Pennsylvania Abandoned Mine Reclamation Conf. and 4th Appalachian Regional Reforestation Initiative Mined Land Reforestation Conf., 2, 847–887. https://doi.org/10.21000/jasmr10010847 Sanabria, O., Sáchez, A., & Rodas, Y. (2018). Generación de biogás mediante el proceso de digestión anaerobia a partir de aprovechamiento de sustratos orgánicos (pastos y aserrín), en la ciudad de Estelí en el año 2017 [Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua, Managua]. https://repositorio.unan.edu.ni/9367/1/18880.pdf Santolaria, C. (2014). Diseño de un modelo semi empirico de co digestion anaerobia. 1–41. Sasaki, K., Ogino, T., Endo, Y., & Kurosawa, K. (2003). Field Study on Heavy Metal Accumulation in a Natural Wetland Receiving Acid Mine Drainage. Materials Transactions, 44(9), 1877–1884. https://doi.org/10.2320/matertrans.44.1877 Scholz, M., & Lee, B. H. (2005). Constructed wetlands: A review. International Journal of Environmental Studies, 62(4), 421–447. https://doi.org/10.1080/00207230500119783 Seervi., V., H.L, Y., S.K, S., & A, J. (2017). Overview of Active and Passive Systems for Treating Acid Mine Drainage. Iarjset, 4(5), 131–137. https://doi.org/10.17148/iarjset.2017.4525 Sekarjannah, F., Mansur, I., & Abidin, Z. (2021). Selection of organic materials potentially 111 112 used to enhance bioremediation of acid mine drainage. Journal of Degraded and Mining Lands Management, 8(3), 2779–2789. https://doi.org/10.15243/jdmlm Sekarjannah, F., Wardoyo, S., & Ratih, Y. (2019). Management of mine acid drainage in a constructed wetland using hyacinth plants and addition of organic materials. J. Degrade. Min. Land Manage, 6(4), 1847–1855. https://doi.org/10.15243/jdmlm SENAMHI. (2021). Climas del Perú - Mapa de Cllasificación Climática Nacional. In Ministerio del Ambiente (Vol. 53, Issue 9). https://www.senamhi.gob.pe/?p=mapaclimatico-del-peru Sheoran, A. S. (2017). Management of Acidic Mine Waste Water By Constructed Wetland Treatment Systems: a Bench Scale Study. European Journal of Sustainable Development, 6(2), 245–255. https://doi.org/10.14207/ejsd.2017.v6n2p245 Sheoran, A. S., & Sheoran, V. (2006). Heavy metal removal mechanism of acid mine drainage in wetlands: A critical review. Minerals Engineering, 19(2), 105–116. https://doi.org/10.1016/j.mineng.2005.08.006 Sheoran, A. S., Sheoran, V., & Choudhary, R. P. (2010). Bioremediation of acid-rock drainage by sulphate-reducing prokaryotes: A review. Minerals Engineering, 23(14), 1073–1100. https://doi.org/10.1016/j.mineng.2010.07.001 Singh, S., & Chakraborty, S. (2020). Performance of organic substrate amended constructed wetland treating acid mine drainage (AMD) of North-Eastern India. Journal of Hazardous Materials, 397, 122719. https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2020.122719 Singh, S., & Chakraborty, S. (2022). Biochemical treatment of coal mine drainage in constructed wetlands: Influence of electron donor, biotic–abiotic pathways and microbial diversity. Chemical Engineering Journal, 440(March), 135986. https://doi.org/10.1016/j.cej.2022.135986 Skousen, J. G., Ziemkiewicz, P. F., & McDonald, L. M. (2019). Acid mine drainage formation, control and treatment: Approaches and strategies. Extractive Industries and Society, 6(1), 241–249. https://doi.org/10.1016/j.exis.2018.09.008 Skousen, J., Sexstone, A., Cliff, J., Sterner, P., Calabrese, J., & Ziemkiewicz621, P. (1999). Acid Mine Drainage Treatment With a Combined Wetland/Anoxic Limestone Drain: Greenhouse and Field Systems. Journal American Society of Mining and Reclamation, 112 113 13, 621–633. https://doi.org/10.21000/jasmr99010621 Skousen, J, Rose, A., Geidel, G., Foreman, J., Evans, R., & Hellier, W. (1998). Handbook of technologies for avoidance and remediation of acid mine drainage. National Mine Land Reclamation Center, Morgantown, 1–6. https://www.osmre.gov/resources/library/ghm/hbtechavoid.pdf Skousen, Jeff, & Ziemkiewicz, P. (2005). Performance of 116 passive treatment systems for acid mine drainagft. 22nd American Society of Mining and Reclamation Annual National Conference 2005, 2, 1100–1133. https://doi.org/10.21000/jasmr05011100 Skousen, Jeff, Zipper, C. E., Rose, A., Ziemkiewicz, P. F., Nairn, R., McDonald, L. M., & Kleinmann, R. L. (2017). Review of Passive Systems for Acid Mine Drainage Treatment. Mine Water and the Environment, 36(1), 133–153. https://doi.org/10.1007/s10230-016-0417-1 Sobolewski, A. (1999). A review of processes responsible for metal removal in wetlands treating contaminated mine drainage. International Journal of Phytoremediation, 1(1), 19–51. https://doi.org/10.1080/15226519908500003 Tanner, C. C., & Sukias, J. P. (1995). Accumulation of organic solids in gravel-bed constructed wetlands. Water Science and Technology, 32(3), 229–239. https://doi.org/10.1016/0273-1223(95)00624-9 Tipping, E., & Hurley, M. A. (1992). A unifying model of cation binding by humic substances. Geochimica et Cosmochimica Acta, 56(10), 3627–3641. https://doi.org/10.1016/0016-7037(92)90158-F Torres, S. (2015). Determinación de la eficiencia de la remoción del plomo y cobre a través del sistema de tratamiento de los humedales en Mesapata- Catac 2014. Universidad Nacional Santiago Antúnez de Mayolo. UNESCO/WHO/UNEP. (1996). Water Quality Assessments - A Guide to Use of Biota , Sediments and Water in Environmental Monitoring - Second Edition (2. ed). Valverde, G., Torres, J., & Jara, W. H. (2018). Variación del pH en Aguas Superficiales debido a Drenajes Ácidos de Roca en la Subcuenca Quillcay, Huaraz, Ancash. Revista de Glaciares y Ecosistemas de Montaña, 1(5), 57–68. https://doi.org/10.36580/rgem.i5.57-68 113 114 Vergaray, L., Palma, L., Palomino, J., Loayza, R., Moreno, M., & Leyva, M. (2022). Humedal estacionario construido para el tratamiento de drenaje ácido de mina de la Planta Concentradora de Mesapata-Catac. Aporte Santiaguino, 15(1), 117–133. https://doi.org/10.32911/as.2022.v15.n1.927 von der Heyden, C. J., & New, M. G. (2005). Differentiating dilution and retention processes in mine effluent remediation within a natural wetland on the Zambian Copperbelt. Applied Geochemistry, 20(7), 1241–1257. https://doi.org/10.1016/j.apgeochem.2004.12.006 Xu, Y. N., & Chen, Y. (2020). Advances in heavy metal removal by sulfate-reducing bacteria. Water Science and Technology, 81(9), 1797–1827. https://doi.org/10.2166/wst.2020.227 Younger, P. L., Banwart, S. A., & Hedin, R. S. (2002). Passive treatment of polluted mine waters. In Mine Water, 311–396. https://doi.org/10.4324/9781315129518-5 Zagury, G. J., Kulnieks, V. I., & Neculita, C. M. (2006). Characterization and reactivity assessment of organic substrates for sulphate-reducing bacteria in acid mine drainage treatment. Chemosphere, 64(6), 944–954. https://doi.org/10.1016/j.chemosphere.2006.01.001 Zamora, G., & Meza, R. (2022). Formación, prevención e innovación en el tratamiento de drenajes ácidos en operaciones mineras. Revista de Medio Ambiente Minero y Minería, 7(1), 3–21. Zhang, X., Wang, T., Xu, Z., Zhang, L., Dai, Y., Tang, X., Tao, R., Li, R., Yang, Y., & Tai, Y. (2020). Effect of heavy metals in mixed domestic-industrial wastewater on performance of recirculating standing hybrid constructed wetlands (RSHCWs) and their removal. Chemical Engineering Journal, 379(July 2019), 122363. https://doi.org/10.1016/j.cej.2019.122363 Zimmer, A., Brito Rodríguez, M., Alegre Oropeza, C., Sánchez León, J., & Recharte Bullard, J. (2018). Implementación de Dos Sistemas de Biorremediación como Estrategia para la Prevención y Mitigación de los Efectos del Drenaje Ácido de Roca en la Cordillera Blanca, Perú. Revista de Glaciares y Ecosistemas de Montaña, 4(4), 57–76. https://doi.org/10.36580/rgem.i4.57-76 114 115 115 116 ANEXOS 116 117 Anexo 1: Figura de la generación de drenajes ácidos de roca en la parte alta de la subcuenca Río Negro. Anexo 2: Figura de la etapa inicial de los prototipos de humedal construido anaerobio para el tratamiento de DAR. Anexo 3: Figura de la etapa de adaptación de los prototipos de humedal construido anaerobio para el tratamiento de DAR. 117 118 Anexo 4: Figura de la posible generación de carbonatos y bicarbonatos en los prototipos de humedal construido anaerobio con diferente composición de sustrato orgánico. Anexo 5: Monitoreo de la calidad de agua en campo 118 119 Anexo 6: Resultados de la caracterización química del sustrato orgánico. 119 120 Anexo 7: Informe de ensayo MA2330810 de los resultados del análisis de sulfato y metales totales en el afluente y efluentes del PHCA. 120 121 Anexo 8: Proceso del análisis estadístico mediante el software RStudio. a) Lectura e inducción de los datos en el software RStudio b) Análisis de normalidad de datos 121 122 c) Homogeneidad de datos mediante el test Bartlett y Levenne d) Análisis de prueba paramétrica y no paramétrica 122 123 e) Análisis de datos paramétricos mediante el test Tukey f) Análisis de datos no paramétricos mediante el test Dunn 123