Práctica de Laboratorio: Pruebas de Tolerancia a la Glucosa

Práctica 1
GLUCOSA POSPRANDIAL
OBJETIVO
Conocer el fundamento y llevar a cabo la medición de la glucosa posprandial.
INTRODUCCIÓN
Los hidratos de carbono son ingeridos en la dieta diaria en forma de polisacáridos
(almidón), disacáridos (sacarosa y lactosa) y una pequeña porción de
monosacáridos (glucosa y otros). En el intestino por acción de diversas enzimas
se convierten en monosacáridos, que son absorbidos hacia el torrente circulatorio.
El metabolismo de los hidratos de carbono incluye procesos de glucogénesis,
glucólisis, glucogenolisis y neoglucogénesis. Los niveles de glucosa en la sangre
se mantienen entre unos límites muy estrechos y constantes, y se encuentran
regulados fundamentalmente por dos hormonas: insulina y glucagón.
La diabetes mellitus es una enfermedad metabólica caracterizada por un
incremento en los niveles de glucosa en sangre, y que cursa de manera
característica con poliuria, polifagia, polidipsia. La existencia de diabetes mellitus
en una persona durante años lleva a complicaciones relacionadas con la vista, la
circulación periférica, y el sistema renal.
La prueba de glucosa posprandial es una prueba simple de detección que
demuestra la habilidad del cuerpo para ajustar y disponer de una carga de
glucosa. Por lo general, se extrae una primera muestra de sangre en ayunas,
luego, se administra a la persona 75 g de glucosa, por dieta y exactamente dos
horas después se toma una segunda muestra. En un individuo sano, los niveles de
glucosa retornan a la normalidad, indicando una homeostasis; en cambio, si la
concentración sanguínea no ha regresado al límite superior normal en la muestra
tomada dos horas después de la carga de glucosa, el mecanismo se considera
anormal y pueden requerirse más pruebas para identificar la naturaleza precisa del
problema.
Fundamento de la prueba
La glucosa se determina después de una oxidación enzimática en presencia de
glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado reacciona, catalizado por la
peroxidasa, con fenol y 4-aminofenazona para formar un indicador de
quinoneimina rojo-violeta.
GOD
Glucosa + O2 + H2O ⎯⎯⎯⎯⎯⎯→ Ácido glucónico + H2O2
PAP
2 H2O2 + 4-aminofenazona + fenol ⎯⎯⎯⎯⎯⎯→ Quinoneimina + 4 H2O
DESARROLLO EXPERIMENTAL
Material y equipo
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2 tubos al vacío para toma de muestras en sistema cerrado, con activador de
coagulación, tamaño 13 X 100 mm, volumen para 6 mL de muestra, tapón
hemogard rojo convencional
2 agujas para toma de muestras múltiple en sistema cerrado con dispositivo de
seguridad calibre 21 X 31 mm, color verde convencional
1 soporte para aguja de toma de muestras en sistema cerrado
Alcohol al 70º
Torundas de algodón
Tubos de ensaye de 13 X 75 mm
1 pipeta de 10 µL
1 pipeta de 1000 µL
Centrifuga
Espectrofotómetro
Muestra
Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma. La glucosa permanecen estable
durante 24 horas entre 2 y 8 ºC si el suero o plasma se separa en los 30 min que
siguen a su colecta.
Reactivos
1. Reactivo de GOD-PAP (MARCA:
Tampón fosfatos
Fenol
4-aminofenazona
Glucosa oxidasa
Peroxidasa
2. Patrón de Glucosa
mg/dL)
)
50.0 mmol/L, pH 7.0
11.0 mmol/L
0.77 mmol/L
≥ 1.5 k U/L
≥ 1.5 k U/L
5.55 mmol/L (100
Procedimiento
1.- Obtener una muestra de sangre sin anticoagulante de un paciente en ayunas y
otra después de dos horas de haber ingerido una carga de glucosa de 75 g vía
oral.
2.- Dejar que coagule la sangre, entre 10 – 20 min.
3.- Centrifugar el tubo con la sangre a 3000 r.p.m. durante 15 min.
4.- Separar el suero, pasándolo en un tubo de ensayo (10 x 75) previamente
rotulado con el número correspondiente a la muestra.
5.- Realizar la determinación de glucosa en suero de cada muestra de acuerdo al
ensayo de glucosa GOD-PAP sin desproteinizar.
Pipetear en tubos de ensayo
Patrón o muestra
Reactivo
Blanco
Patrón o muestra
10 µL
----
Reactivo
1000 µL
1000 µL
Mezclar, incubar durante 10 min. entre 15 – 25 ºC ó 5 min. a 37 ºC y medir la
absorbancia del patrón (A patrón) y de la muestra (A muestra) frente al reactivo blanco,
a 500 nm, antes de 60 min, con una cubeta de 1 cm de espesor.
Interpretación (De acuerdo a la ADA, 2019)
Cálculos
A muestra
Concentración de glucosa (mg/dL) = ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯
A patrón
X
Concentración del patrón
Valores de referencia
Linealidad
El método es lineal hasta una concentración de glucosa de 400 mg/dL. Para
muestras con valores superiores a dichas concentraciones diluir 1+2 con agua
destilada y multiplicar el resultado por 3.
RESULTADOS
OBSERVACIONES
DISCUSIÒN DE RESULTADOS
Práctica 2
PRUEBA DE TOLERANCIA ORAL A LA GLUCOSA (TTGO)
OBJETIVO
Conocer el fundamento y llevar a cabo la prueba de Tolerancia Oral a la Glucosa
(TGO).
INTRODUCCIÓN
Si existe patología en el metabolismo de los hidratos de carbono, el organismo es
incapaz de metabolizar una sobrecarga de glucosa en un tiempo determinado
persistiendo la hiperglucemia al cabo de ese tiempo.
Fundamento de la prueba
Se debe emplear cuando se sospeche la existencia de diabetes mellitus,
especialmente en aquellas condiciones en las que exista una alteración de la
glucemia en ayunas (valores entre 100 -125 mg/dL). Es útil para evaluar, tras el
parto, a las mujeres que hayan desarrollado una diabetes gestacional.
En situaciones en las que la glucemia basal es normal, pero concurren factores de
riesgo para desarrollar una diabetes mellitus: antecedentes familiares de diabetes,
obesidad, dislipidemia importantes, presencia de manifestaciones tardías de
diabetes (retinopatía, nefropatía, neuropatía), presencia de lesiones
arterioscleróticas precoces, abortos de repetición sin causa aparente, partos
prematuros, alta mortalidad perinatal, toxemia o fetos con sobrepeso, etc.
DESARROLLO EXPERIMENTAL
Material y equipo
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3 tubo al vacío para toma de muestras en sistema cerrado, con activador de
coagulación, tamaño 13 X 100 mm, volumen para 6 mL de muestra, tapón
hemogard rojo convencional
3 agujas para toma de muestras múltiple en sistema cerrado con dispositivo de
seguridad calibre 21 X 31 mm, color verde convencional
1 soporte para aguja de toma de muestras en sistema cerrado
Alcohol al 70º
Torundas de algodón
Tubos de ensaye de 13 X 75 mm
1 pipeta de 10 µL
1 pipeta de 1000 µL
Centrifuga
Espectrofotómetro
Muestra
Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma. La glucosa es estable durante 24
horas entre 2 y 8 ºC si el suero o plasma se separa en los 30 min que siguen a su
colecta.
Reactivos
1. Glucosa 75 g
2. 1. Reactivo de GOD-PAP: (MARCA:
Tampón fosfatos
Fenol
4-aminofenazona
Glucosa oxidasa
Peroxidasa
3. Patrón de Glucosa
mg/dL)
)
50.0 mmol/L, pH 7.0
11.0 mmol/L
0.77 mmol/L
≥ 1.5 k U/L
≥ 1.5 k U/L
5.55 mmol/L (100
Procedimiento
1.- Se administran 75 g de glucosa oral. Deben disolverse en 400 mL de agua e
ingerirse en menos de 5 minutos.
Se realizan tres tomas de muestra, la primera en ayuno, la segunda a la hora
después de haber administrado la carga de glucosa y la tercera a las dos
horas posterior a la administración de la carga de glucosa.
En el embarazo alternativamente se administran 100 g de glucosa y en este caso
se toman cuatro muestras, ayuno, a la hora, a las dos horas y a las tres horas
después de la administración de la glucosa.
En los niños la dosis es de 1.75 g/Kg. de peso
2.- La obtención del suero se tiene como se indica en glucosa posprandial
3.- La determinación de glucosa en suero se realiza igual que la descrita en
glucosa posprandial.
Interpretación (De acuerdo a la ADA 2019)
RESULTADOS
OBSERVACIONES
DISCUSIÒN DE RESULTADOS