UNIVERSIDAD NACIONAL AMAZÓNICA DE MADRE DE DIOS FACULTAD DE INGENIERIA CARRERA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA - ZOOTÉCNIA “POTENCIAL CONSUMO DE CARNE SILVESTRE EN LA REGION DE MADRE DE DIOS” PROYECTO DE TESIS PRESENTADO POR: BACHILLER: PEDRO LUIS ZAVALA CHUCO. PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE MÉDICO VETERINARIO Y ZOOTECNISTA ASESOR GRADO: LUIS ARAPA SALAS PUERTO MALDONADO, 2022 UNIVERSIDAD NACIONAL AMAZÓNICA DE MADRE DE DIOS FACULTAD DE INGENIERIA CARRERA PROFESIONAL DE MEDICINA VETERINARIA – ZOOTÉCNIA “POTENCIAL CONSUMO DE CARNE SILVESTRE EN LA REGION DE MADRE DIOS PROYECTO DE TESIS PRESENTADO POR: BACHILLER: PEDRO LUIS ZAVALA CHUCO PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE MÉDICO VETERINARIO Y ZOOTECNISTA ASESOR GRADO: LUIS ARAPA SALAS PUERTO MALDONADO, 2022 PRESENTACIÓN Existe la necesidad de investigar y seguir aportando conocimientos científicos para continuar generando aprendizaje de los diferentes roedores y mamíferos; Es importante poder conocer parte del sistema inmune de las diferentes especies ya que gracias a ello el organismo tiene la capacidad de reaccionar frente a agentes patógenos que causan un desequilibrio en el desarrollo de las especies. El presente trabajo tiene el objetivo de describir anatómica e histológicamente las placas de Peyer en el intestino delgado del Picuro (cuniculus paca) con el fin de generar información de esta especie ya que para dar un buen diagnóstico de las patologías es necesario conocer la forma, tamaño y niveles de desarrollo de las placas de Peyer. Mas adelante este estudio ayudará a próximas investigaciones con la información que quedará de este proyecto; por tanto, por medio de técnicas anatómicas e histológicas se estudiaran aspectos morfológicos macroscópicos y microscópicos de las placas de Peyer, esto permitirá clasificar a la especie en función a este componente del sistema inmunológico. Las muestras se obtendrán mediante los cazadores indígenas ya que en la zona de madre de Dios este animal es cazado por su aporte alimenticio; por ende, se recurrirá a ellos para obtener las vísceras y hacer el estudio descriptivo anatómico e histológico. INTRODUCCIÓN el extractivismo de la fauna silvestre mamíferos, lo que representa un porque el “caboclo” amazónico hace que la fauna biomasa total estimada en 67.173 a un importante recurso del bosque, ya que 164.692 toneladas³. que su explotación constituye un estudios económico son actividad rutinaria, siendo importante necesario por indicar a generador de ingresos para las poblaciones de oportunidades y riesgos inherentes a región. en el sin embargo, o actividad, con el objetivo de subsidiar a los productores en desarrollo existente da áreas rurales y agencias de desarrollo para hacer la mayoría de las comunidades amazónicas decisiones para implementar un alimenta la pobreza y el abandono, y nueva alternativa economica4. la consiguiente explotación irracional de este estudio tuvo como objetivo fauna, es decir, caza de subsistencia comprobar la demanda y el potencial se vuelve depredador, sin una gestión comercializacion de carne animal apto para la explotación sostenible silvestre en el municipio de rio branco – de los recursos faunísticos, promoviendo acre / brasil, para que uno pueda por lo tanto, las actividades comerciales ilegales obtener una perspectiva de su animales y sus productos¹. consumo y comercialización y posible además, el tráfico de animales valores del producto. salvaje es el tercer comercio más grande ilegal, sólo superada por el tráfico de armas y drogas y brasil participa en En la Amazonía, la población rural de región consume, cada año, entre 9 y 6 millones. La fauna silvestre contribuye a la alimentación humana del país, especialmente en la selva, donde se estima un consumo de 13,000 TM de carne de monte. El añuje (Dasyprocta fuliginosa) constituye parte importante de la dieta del poblador rural de la región amazónica, en particular cuando escasean los animales grandes (Brack, 1987). En cautiverio, estos animales puede alcanzar un peso de 7 kg, con un rendimiento de canal del 70% (Ojasti, 1993). La eficiencia productiva y valor nutricional de la carne del añuje comparado con el bovino y otras especies tradicionales es aparentemente superior (Negret, 1984). Además, las vísceras, sangre y huesos se utilizan para la preparación de potajes de la zona, o son empleados para la elaboración de alimentos balanceados para otros animales (Tapia, 1997). El picuro (Cuniculus paca) pertenece al grupo de mamíferos roedores que habitan las regiones tropicales; se distribuyen desde las regiones tropicales de Centroamérica y la región de la selva de Sudamérica (1); en el Perú se encuentra en los pisos ecológicos de selva baja y alta, encontrándose en altitudes desde los 1500 msnm aproximadamente. (2); tiene características propias de tamaño, constitución física, alimentación, hábitos de vida y comportamiento gregario; su carne es utilizada en la alimentación por los habitantes de las comunidades nativas y rurales de la selva. . INDICE Contenido CAPITULO I: PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN ................................................... 1 1.1 DESCRIPCIÓN DEL PROBLEMA .......................................................................... 1 1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ........................................................................ 1 1.3. OBJETIVOS ............................................................................................................... 2 1.3.1 General ................................................................................................................. 2 1.3.2 Específicos ......................................................................................................... 2 1.4 VARIABLES ................................................................................................................ 2 1.5 OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES......................................................... 3 1.6 HIPOTESIS.................................................................................................................. 4 1.7 JUSTIFICACIÓN ........................................................................................................ 4 1.8 CONSIDERACIONES ÉTICAS ...................... Ошибка! Закладка не определена. CAPITULO II: MARCO TEÓRICO ........................................................................... 4 2.1 MODELO TEÓRICO .................................................................................................. 4 2.2 MARCO TEÓRICO ............................................................................................... 4 2.2.1 ANTECEDENTES ............................................................................................... 4 2.2.2 GENERALIDADES ............................................................................................. 5 1. TAXONOMIA............................................................................................................. 5 2. ANATOMIA COMPARADA .................................................................................... 6 3. HISTOLOGÍA COMPARADA ............................................................................... 13 2.3 DEFINICIÒN DE TÉRMINOS ................................................................................. 20 CAPITULO III: METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN ....................................21 3.1 TIPO DE ESTUDIO .................................................................................................. 21 3.2 DISEÑO DEL ESTUDIO.......................................................................................... 21 3.3 POBLACIÒN Y MUESTRA .................................................................................... 21 3.4 MÉTODOS Y TÉCNICAS ....................................................................................... 21 3.5 TRAMIENTO DE LOS DATOS .............................................................................. 22 3.6 RECURSOS .............................................................................................................. 23 3.7 PRESUPUESTO ....................................................................................................... 23 3.8 CRONOGRAMA ....................................................................................................... 24 BIBLIOGRAFIA............................................................................................................... 25 ÍNDICE DE FIGURAS Figura 1. Árbol de Problemas.............................................................................................. 1 Figura 2. Placa de Peyer en la base del ciego del cuy (Cavia porcellus). ...... Ошибка! Закладка не определена. Figura 3.Esquema topográfico de la cavidad abdominal del picuro (Cuniculus Paca). ................................................................................................................................................. 7 Figura 4. Anatomía de las placas de Peyer en cerdos. .................................................. 9 Figura 5. Anatomía de las placas de Peyer de la alpaca (Lama pacos). ..................... 9 Figura 6. Distribución de las placas de Peyer en el intestino delgado de la alpaca (Vicugna pacos)................................................................................................................... 10 Figura 7.Clasificación anatómica de las placas de Peyer en alpacas (Vicugna pacos). ............................................................................................................................................... 11 Figura 8.Diagrama de la distribución de PP en 4 especies. ......................................... 13 Figura 9. Vista panorámica de placa de Peyer del íleon de gatos. ............................. 14 Figura 10. Esquema estructural de la placa de Peyer. ................................................. 15 Figura 11. Histología de las placas de Peyer de ratón. ................................................ 15 Figura 12. Histología de las placas de Peyer en rumiantes. ........................................ 19 Figura 13. Histología de la placa de Peyer de ratones. ................................................ 19 CAPITULO I: PROBLEMA DE INVESTIGACIÓN 1.1 DESCRIPCIÓN DEL PROBLEMA No se conoce el patrón anatómico e histológico de las placas de Peyer para el picuro (Cuniculus paca) lo cual no permite contar con información básica que sea especifica y útil para la comparación de patrones normales y patológicos. 1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA SE PUEDE VER UNA OFERTA DE ESTA CARNE PRECIADA AYUDARA A TENER INFORMACION Y REGISTROS PARA LA CONSERVACION AYUDARA A FORMAR PROYECTOS FUTURO Y APROVECHAMIENTO ECONOMICO AYUDARÁ A SABER CUANTAS PERSONAS CONSUMEN CARNE SILVESTRE Potencial consumo de carne silvestre, en la región de madre de dios NO SE SABE QUE CANTIDAD DE PERSONAS CONSUMEN CARNE NO HAY DATOS NI REGISTROS Figura 1. Árbol de Problemas NO SE HAN REALIZADO ESTUDIOS MAL APROVECHAMIENTO DE ESTA CARNE 1.3. OBJETIVOS 1.3.1 General Determinar el consumo de carne silvestre en la región de madre dios 1.3.2 Específicos 1. Delimitar el tamaño de población a realizar encuestas. 2. Describir las regiones con alto indice de consumo de carne silvestre. 1.4 VARIABLES CUALITATIVAS NOMINALES: Consumidor, poblacion) Las especies consumidas) 1.5 OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES PROBLEMA VARIABLES DEFINICION CONCEPTUAL No se determina Consumo de carne cuantas personas silvestre en una consumen carne poblacion silvestre El consumo de carne silvestre es frecuente en la población, no se conoce cuanto en total. Carne silvestre Existe una gran variedad de carne silvestre en la region de madre de dios DEFINICIÓN OPERACIONAL DIMENSIONES 1. Realizar encuestas 2. Realizar preguntas determinadas 1. Variedad especie. 1. Poblacion a ser encuestado 2. Modo de realizar la encuesta 3. Analis de los datos de 1. Sectores de extracion de la carne silvestre 2. Recoleccion de informacion INDICADORES 1. encuestas 1. registrados de los albergues. 3 POTENCIAL CONSUMO DE CARNE SILVESTRE EN LA REGION DE MADRE DE DIOS Pedro luis zavala chuco PROBLEMAS OBJETIVOS HIPOTESIS VARIABLES / INDICADORES METODOLOGIA GENERAL No se determina la cantidad de demanda de carne silvestre GENERAL DETERMINAR EL CONSUMO DE CARNE EN LA REGIO.. GENERAL Se da un alto consumo de carne silvestre en la región de madre de dios VARIABLE INDEPENDIENTE consumidor ESPECFICOS Sectores con alto consumo de carne silvestre que comprometen a la supervivencia de algunas especies. ESPECIFICOS Determinar los sectores y regiones sometidos a encuesta. Determinar la base de las preguntas cave de la encuestas. Determinar tipo de especies cosumidas. ESPECIFICOS En sectores predeterminados se observa una alta incidencia de consumo de carne silvestre. DIMENSIONES Cantidad de personas encuestadas Delimitacion del sector Analizis de los datos. Objetivos predeterminados ENFOQUE región de madre de dios DISEÑO encuestas NIVEL informativo TIPO basico METODOS informativo analitico entre otros TECNICAS INSTRUMENTALES DE MUESTREO Encuestas determinadas Fichas Aniliss revisiones INDICADORES Encuestas realizadas JUSTIFICACION La región de madre de dios capital de biodiversidad, por su incidencia alta en especies silvestres y la sostenibilidad en la conservación. VARIABLE DEPENDIENTE Animales silvestres DIMENCIONES Tipo de especies consumidas Sectores donde se consumen especies. IMPORTANCIA El consumo de carne silvestre es un factor prescindible en la vida de muchas personas tanto económica como de subsistencia. INDICADORES Registros las DE RECOLECCION DE DATOS Datos, registros,encuestas DE PROCESAMIENTO DE DATOS estadisticas DE ANALISIS registros POBLACION todo tipo de personas MUESTRA aun no delimitada PROCEDIMIENTO movilidad, equipo, cantidad de dias. 4 1.6 HIPOTESIS Se da el consumo de carne silvestre en la region de madre de dios 1.7 JUSTIFICACIÓN Este trabajo busca describir el consumo de carne silvestre en la region de madre de dios. Informar, la cantidad de demanda y oferta de esta carne silvestre. CAPITULO II: MARCO TEÓRICO 2.1 MODELO TEÓRICO 2.2 MARCO TEÓRICO 2.2.1 ANTECEDENTES De los 550 encuestados, 121 (22%) no consume o nunca ha consumido carne salvaje y 429 (78%), consumir. Con respecto al género, 291 hombres entrevistados, 236 (81,1%) afirmó haber comido o ya ha comido carne de caza. De las 259 mujeres entrevistados 193 (74,52%) ya habían comido o 4 comer carne salvaje. De los encuestados que consumen carnes silvestres, 164 se encuentran en el grupo de edad de 10 a 30 años (38,23%), 157 están en el grupo de edad de 31 a 50 (36.60%) y 108 están en el grupo de edad de 51 a 70 años (25,17%). (Vânia Maria França Ribeiro, Yuri Karaccas de Carvalho 2017) El análisis descriptivo general de las frecuencias de consumo demuestra que las proteínas más consumidas en los sitios muestreados fueron en orden descendente: el pollo industrial (22 %) el pescado (17 %), el huevo industrial (16 %) la carne de res (13 %), los embutidos (6 %), la gallina criolla (5 %), la carne de monte (5 %), los enlatados (4 %), el cerdo (3 %), el pato de cría (1,4 %), el chivo (1,5 %), el cordero (0,4 %) y el conejo de cría (0,3 %). Entre las 1.808 encuestas realizadas, en 157 ocasiones (5 %) los estudiantes encuestados declararon no haber comido proteína de origen animal el día anterior (Liliana venegas, Daniel cruz 2017) Los resultados revelaron que el consumo de carne de animales salvajes no está disminuyendo en las zonas urbanas. De acuerdo al estudio, alrededor de la mitad de los hogares en las dos ciudades comen carne de animales salvajes al menos una vez al mes, y casi un 80 % de los hogares en las zonas urbanas habían comido carne de animales salvajes el año anterior. (Parry, L. Barlow, J. Pereira, H. 2018) 2.2.2 GENERALIDADES 1. TAXONOMÍA El Cuniculus paca anteriormente estaba considerada dentro del género Agouti. La CINZ (La Comisión Internacional de Nomenclatura Zoológica) la incluyó dentro del género Cuniculus (9). Este animal vive en climas de hábitat diferentes, como cálidos, acuoso, sub acuoso, a las orillas de los ríos con 5 bastante vegetación, en altitudes que van desde el nivel del mar hasta los 1,800 msnm. El picuro (cuniculus paca) está distribuido por las zonas cálidas acuosas y parte céntrica de américa llegando al sur de Brasil y norte de Argentina y al sur de Perú (10). Los nombres comunes de acuerdo a la Real Academia de la lengua española son “paca”, como también en portugués, francés e inglés y alemán es “paka” (11),Según Rengifo et al. (12) Reportan los nombres comunes en el Perú: Loreto y Selva Baja; Majáz, Kashai, wajúman y kyats. Madre de Dios; Picuro o Mazaño. Selva Central; Picuro o Zamaño, Codo del Pozuzo; Liebre. (13). La mayoría de los estudios sobre la biología y ecología del picuro han sido realizados en cautiverio (14) . El picuro es apreciado por su carne (15), considerado así un recurso importante para los que habitan en la selva baja de Perú. En el Perú se encuentra a lo largo de toda la selva baja y en selva alta hasta aproximadamente 1500 msnm. (2), la cuenca del río Alto Itaya enclavada entre los ríos Amazonas, Marañón y Nanay comprende un área aproximada de 1,200 km2. En esta área habitan diferentes especies de mamíferos entre ellas el picuro (16). 2. ANATOMíA COMPARADA El duodeno, la primera porción del intestino delgado, es un segmento corto a diferencia con los otros segmentos intestinales de este roedor. En promedio tiene una longitud de 33 cm, correspondiente al 3,62% de la longitud intestinal total, hecho que difiere, en parte, por lo descrito al picuro por García y Silva (17), ya que, según estos autores, el duodeno de un picuro adulto de 4 kg tiene una extensión de 50 cm. Como en todos los animales domésticos (18) (19) (20) (21) el duodeno de éste comienza en secuencia al píloro, a través de un divertículo delimitado por pliegues, y sigue caudalmente al nivel de la quinta o sexta vértebra lumbar, en la que se curva y toma una dirección craneal, dirigiéndose al nivel de la transición entre la doceava vertebra dorsal 6 y la primera lumbar, donde continúa como yeyuno. En el siguiente diagrama mostramos como están ubicados las vísceras del picuro craneal y caudalmente como también las partes laterales. CRANEAL f LATERAL DERECHO LATERAL IZQUIERDO e b i CAUDAL Figura 2.Esquema topográfico de la cavidad abdominal del picuro (Cuniculus Paca). e. estómago, f. hígado, b. duodeno, I. asa intestinal (Machado, 2015). Las PP son órganos del sistema linfático ubicados en las paredes del intestino delgado; su forma y labor puede variar de acuerdo a las especies; en rumiantes, porcinos, equinos, caninos y seres humanos (grupo I), del 80 al 90% de las PP se encuentran en la última porción del intestino delgado, donde conforma una silueta simple continua que se extiende hacia el frente de la unión del íleon y el intestino grueso. En rumiantes jóvenes y en porcinos las PP ileales pueden llegar a los 2 m (27). 7 Figura 1. Distribución de las placas de Peyer en yeyuno e íleon en animales domésticos. En el grupo uno se observa una gran PP en el íleon a diferencia del grupo dos donde las PP son pequeñas (Tizar, 2009). La extensa Placa de Peyer del íleon de los mamíferos del grupo I es un órgano linfoide primario que involuciona en torno al año de vida. Una PP está constituido por folículos con zonas importantes como la parte oscura periférica, región parafolicular o Inter folicular, región del domo y el centro germinal y finalmente cubierta por el epitelio asociado al intestino (22). La túnica submucosa del duodeno, como la del estómago del picuro, está formada por tejido conectivo laxo y vasos sanguíneos y se asemeja a las descripciones hechas en animales domésticos y roedores (18) (23) (19) (24) (25) (20) (26) (27) (17) (28).En cuanto a la túnica muscular del duodeno podemos informar que es similar a la túnica muscular del duodeno del ronsoco (Hydrochoerus hydrochaeris) (23) y del agutí(Dasyprocta),no confundir al Agutí con el picuro, pertenecen a grupos familiares diferentes. Además, el agutí es más largo y delgado, pesando sólo una tercera parte del picuro (26), ya que está constituida por músculo liso, fibras dispuestas en dos capas: una interna circular, gruesa, y otra externa longitudinal, delgada. En el ciego y en el colon del cerdo se pueden ver numerosos agregados linfáticos, macroscópicamente se observan a través de la serosa y mucosa como focos circulares blanquecinos de 4-6 mm de diámetro (29). En la figura 4 podemos apreciar una PP de un porcino. 8 Figura 3. Anatomía de las placas de Peyer en cerdos. Fotografía de la mucosa de yeyuno de cerdo tomada con estereoscopio 10X, la flecha señala la PP (Raquel et al., 2014) En el reconocimiento anatómica de las PP de la alpaca (Vicugna pacos) nota que estuvieron repartidas en los tres partes del intestino delgado, en lo cual se encontró mayor número en el yeyuno, continuando el duodeno seguido por el íleon (30). En la figura 5 vemos una imagen de una PP en la alpaca en forma de copa. Figura 4. Anatomía de las placas de Peyer de la alpaca (Lama pacos). 9 Fotomicrografía en estereoscópico de las PP de la mucosa del íleon. 15X “Estudio Histológico e histoquímico del intestino de la alpaca (Lama pacos)”. (Montalvo, 1966). UNMSM Lima Perú. En la alpaca el 65.88% de las PP en el intestino delgado se encontró en los bordes anti mesentéricos, el 37.90 % en el borde lateral y el 15.50 % en el borde mesentérico (30). Figura 5. Distribución de las placas de Peyer en el intestino delgado de la alpaca (Vicugna pacos). Anatomía gráfica de las PP en el intestino delgado de la alpaca (Flores et al., 2020). En la alpaca se encontraron PP en forma nodular con una fina capa rugosa como redecilla que estaban ubicas desde la primera porción del duodeno hasta la parte proximal del yeyuno. Hubo PP faviformes que sobresalían de la mucosa intestinal de superficie rugosa a manera de fina malla, detectables con mayor facilidad a trasluz. A la exploración se encontraron gran variedad de formas, como: circulares, alargadas, ovaladas, rectangulares o simplemente irregulares. De tamaño variables. Lo que se notó más fue la de forma en copa, ubicados mayormente en yeyuno e íleon. 10 Figura 6.Clasificación anatómica de las placas de Peyer en alpacas (Vicugna pacos). A, en duodeno. B, C, en yeyuno. D, en íleon (Flores et al., 2020). En caninos se observó 20 placas de Peyer aproximadamente, en el intestino delgado según Stewart y asociados (31), las que en su mayoría se ubican en todo el intestino delgado, pero se hacen más prominentes hacia las partes distales del íleon (19). El tejido linfoide asociado a intestino (GALT) se encuentra en el bovino como placas en el yeyuno, uno en el íleon, uno en la entrada ileocecal, otro en la parte proximal del colon ascendente y varios pequeños a lo largo hasta el anillo anal (32). Se ha observado que en la etapa de feto tienen de 24 a 49 placas en el yeyuno y de 5 a 7 en el íleon que involucionan mientras el bovino va aumentando de edad (32) (33). 11 En las ovejas y cabras las PP se encuentran pequeñas en el yeyuno e íleon y en la entrada ileocecal, parte proximal del colon ascendente se encuentran de 2 a 12cm de largo y en el recto hasta el anillo anal. Al nacimiento del ovino se encuentran de 25 a 40 PP en el yeyuno y en el íleon puede alcanzar hasta 3m. En especies ovinos viejos las PP involucionan en el íleon a diferencia del yeyuno que en él pueden permanecer toda la vida (32). En el porcino se encontraron 18 PP en fetos de 95 días y se mantuvieron hasta el nacimiento (34).En cerdos adultos el número de PP en el yeyuno varía entre 20 y 30 (35). Mientras el porcino está en crecimiento las PP en el íleon aumentan en número y tamaño para luego involucionar a diferencia de las PP que se encuentran en el yeyuno que solo aumentan de tamaño y estos pueden estar toda la vida (36). En el equino se encontraron PP en el yeyuno, íleon y nódulos linfáticos en el intestino grueso. En recién nacidos se han encontrado 245 a 320 placas en el yeyuno y estos están presentes en los primeros años de vida del equino (32). Schummer A, Nickel R, Eingeweide describieron encontrar de 100 a 200 placas en el yeyuno en caballos adultos (37).En el íleon se encontraron placas de 20 a 25 cm en caballos jóvenes y que desaparece en caballos mayores (32). 12 Bovino Ovino Porcino Equinos Figura 7.Diagrama de la distribución de PP en 4 especies. A. Bovino, B. Ovino, C. Porcino, D. Equino (Schummer.,1978) 3. HISTOLOGÍA COMPARADA En cuanto a la histología de las placas de Peyer aún no hay estudios realizados en la especie de cuniculus paca, pero si hay estudios que se han realizado en otras especies. En general la histología del íleon corresponde a la de un órgano membranoso, presenta cuatro capas diferenciadas la mucosa, submucosa, muscular y serosa; la mucosa a la vez está conformada por subcapas como el epitelio de revestimiento, la lámina propia y la muscular de la mucosa; la mucosa presenta proyecciones digitiformes y depresiones hacia la lámina propia que da origen a las vellosidades y criptas intestinales, en el íleon a diferencia de duodeno y yeyuno estás se observan en menor cantidad, morfológicamente son de menor tamaño, pero de mayor diámetro (38). 13 En la figura 9 podemos observar las partes de las PP, células M, el lumen, el epitelio asociado a intestino, región del domo, centro germinal, región para folicular y la placa en sí (19). Figura 8. Vista panorámica de placa de Peyer del íleon en el gato. a, b, vellosidades y mucosa intestinal. c, submucosa. d, muscular. e, serosa (Nickel et al., 1979). Las PP se observan como agregados linfoides múltiples se encuentran engrosando el tejido conjuntivo que se encuentra en la lámina propia y submucosa (39). La arquitectura morfológica de las PP presenta cuatro zonas bien definidas como son: Epitelio asociado a folículo (FAE, follicle associated epithelium); el domo subepitelial (SED, subepithelial dome), el área folicular y el área Inter folicular (figura 10) (40) 14 Figura 9. Esquema estructural de la placa de Peyer. E, linfoepitelio; FA, área folicular (C, corona; GC, centro germinal; DPA, área densamente poblada; TPA, área débilmente poblada); IFA, área Inter folicular con venas de endotelio alto (HEV); M, túnica muscular; SE, área subendotelial; V, vellosidades intestinales. Fuente: Abe e Ito, 1977 Figura 10. Histología de las placas de Peyer de ratón. C1 vista panorámica de placa de Peyer (40X, Hematoxilina - Eosina). C2, Acercamiento de domo de placa de Peyer (400X, Hematoxilina - Eosina). F, Folículos linfoides (C, corona; GC, centro germinal); IFR, área Inter folicular; FAE, Epitelio asociado a folículo, SE, área subendotelial; VE, vellosidades intestinales. Fuente: Cesta, 2006. 15 Epitelio asociado a folículo Se denomina también linfoepitelio o epitelio del domo, forma la interfaz entre el GALT y el microentorno luminal y su contenido; está constituido por un epitelio simple cilíndrico que lo conforman principalmente enterocitos, junto a células caliciformes, células entero endocrinas, células de Paneth, células M y finalmente células madre pluripotenciales que se encuentran en el fondo de las criptas de Lieberkühn y dan origen a todos los tipos celulares (41). En el epitelio de recubrimiento existen diferentes líneas celulares distribuidos de manera estratégica en la mucosa como son: Linfocitos intraepiteliales y células M, que desempeñan la función de captación, transporte de antígenos, así también regulan la respuesta inmune adquirida la cual se detalla más adelante (42). En bovinos las células M sirven como puerta de entrada para los patógenos, como Brucella abortus y Mycobacterium paratuberculosis. Se han demostrado varios agentes infecciosos, como astrovirus, bredavirus, rotavirus, clamidia y Cryptosporidium (43). Por otra parte, las células de Paneth se ubican en la base de las criptas y cumplen la función de secretar defensinas α conocidas como criptidinas las que están involucradas en el control de infecciones bacterianas, mientras que los macrófagos se encargan de la producción de lisozima con similares funciones de defensa pasiva de varios mamíferos (38). Domo subepitelial Llamada también lámina propia, se ubica entre el epitelio y la muscular de la mucosa sobre la parte apical de los folículos linfoides (Figura 10), está constituida por tejido conjuntivo rico en fibras reticulares; en general la zona se caracteriza por ser dinámica debido a la interacción de poblaciones 16 celulares que la componen como: linfocitos, macrófagos, células dendríticas, células plasmáticas y algunos eosinófilos y mastocitos (44). Área folicular Está conformado por folículos linfoides de 1-2 mm de diámetro que descansan en la submucosa, la clasificación depende de la presencia del centro germinal (GC); así, en los folículos linfoides primarios está ausente; sin embargo, en los folículos linfoides secundarios es visible muchas veces se encuentra ocupando gran parte del área folicular; su composición celular varia constantemente a medida que las células migran, se multiplican y se diferencian como consecuencia de la estimulación antigénica; las células linfoides B proliferan dentro del GC y luego se diferencian en células secretoras de memoria o inmunoglobulinas; los linfocitos B son los más abundantes y en menor cantidad de linfocitos T (45). El GC presenta una zona clara hacia el epitelio en la parte apical del folículo denominada área ligeramente poblada (TPA), está constituida de alta cantidad de fibras reticulares entre los que se diseminan linfocitos B de citoplasma grande, estas aparecen como precursoras de las células plasmáticas (45). Por otra parte, en la parte basal se encuentra la zona oscura o área densamente poblada (DPA) debido a una densa población de linfocitos de tamaño grande y citoplasma basófilo que son principalmente linfocitos B, junto a estos también se observan macrófagos de cuerpo tingible y células plasmáticas (38); entre ellos existe una red estromal de células dendríticas foliculares (CDF) de morfología estrellada, dando sostén y soporte se observa también células y fibras reticulares (44). La corona folicular (C) se encuentra rodeando el centro germinal es en especial notorio y engrosado a nivel de la zona clara del centro germinal, está conformado por linfocitos pequeños establecidos densamente que corresponden a linfocitos T CD4+ y algunos CD8+ entre los cuales en menor 17 cantidad hay también linfocitos grandes constituidos mayoritariamente por linfocitos B (45), la proporción de volumen celular es similar entre el GC y la corona, sin embargo el volumen celular de la corona equivale al del área densamente poblada del centro germinal de los folículos secundarios de otras placas incluidas las de yeyuno (46). Área Inter folicular Es el área que colinda y rodea los folículos, se encuentran densamente compactado aunque tiene menor densidad celular que el área folicular, presentan forma triangular debido al espacio entre los folículos adyacentes, están relacionados por la parte superior con las vellosidades y criptas intestinales, en este área es posible observar venas de endotelio alto (HEV) las que son vénulas intermedias post-capilares que conectan capilares del área folicular a nivel de la muscular de la mucosa y las vénulas de la capa muscular (47); se observan también una compleja red de senos linfáticos, en los cuales se realiza la migración y recirculación de linfocitos y otras células del sistema inmune y se conectan con vasos linfáticos que drenan de las vellosidades intestinales, así como con sinusoides adyacentes, desde aquí emergen finos vasos linfáticos los cuales se unen a nivel de la serosa para formar los vasos linfáticos eferentes que llevan la linfa a los nódulos linfáticos mesentéricos (42). Las células que las constituyen principalmente son linfocitos especializados como linfocitos T y en menor cantidad linfocitos B, presenta también una población de células dendríticas llamadas células interdigitantes que se encuentran muy cercanos a los linfocitos T. Por otra parte, las células reticulares o fibroblastos reticulares sintetizan las fibras reticulares constituidas por colágeno tipo III; estas fibras están rodeadas por los procesos citoplasmáticos de las células reticulares estableciendo contacto unas con otras (46). En los conejos y los roedores (grupo II), las PP están de forma dispersa en íleon y el yeyuno (48). 18 En la siguiente figura se puede apreciar la conformación de dos tipos de placas de Peyer que se encontraron en el ovino 2 3 4 Figura 11. Histología de las placas de Peyer en rumiantes. A, placa de Peyer ileal. B, placa de Peyer yeyunal (Reynolds y Morris, 1983). Figura 12. Histología de la placa de Peyer de ratones. A, vista panorámica. B, acercamiento al epitelio asociado a folículo (Kuramoto y Tokushima, 2012). 19 2.3 DEFINICIÒN DE TÉRMINOS Placas de Peyer: Es parte del sistema linfático asociado a mucosas que están distribuidos en todo el intestino, conformado por compartimentos y células especiales para reconocer antígenos. Picuro: Mamífero roedor sudamericano, grande y de cuerpo robusto, color pardo y rojizo y pies y cola reducidos, es herbívoro y vive en zon a selváticas. Morfología: Estudio de las formas, abarcan aspectos biométricos con el fin de establecer criterios de diferenciación de otras estructuras. Anatomía: Estudio del cuerpo en los individuos. Histología: Estudio de los tejidos. Roedor: Mamífero provisto de dientes incisivos que los utiliza para gastar o cortar las cosas en pequeños trozos. Duodeno: parte proximal del intestino delgado. Microbiota: organismos que se asocian en general a tejido sano. Patógeno: Agente que causante de enfermedad. Macroscópico: Que se puede ver a simple vista sin ayuda de algún artefacto. Microscópico: Por el tamaño diminuto que tiene solo se puede observar por medio del microscopio. Histoquímica: Concerniente a las células y los tejidos. Antigénico: Estructuras que el anticuerpo reconoce como cuerpo extraño. Inmunoglobulinas: Proteínas presentes en el suero sanguíneo. 20 CAPITULO III: METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN 3.1 TIPO DE ESTUDIO El tipo de estudio es descriptivo morfológico, ya que al obtener las muestras se tendrá que observar de una forma macroscópica en caso de la parte anatómica y microscópica en caso de la parte histológica, y posteriormente describir específicamente las formas, tamaños y numero de placas de Peyer el espécimen de investigación (cuniculus paca). 3.2 DISEÑO DEL ESTUDIO El diseño de estudio es observacional no experimental-transversal puesto que no se hará ningún experimento más que describir lo observado en el estudio, y no será por un tiempo prologado 3.3 POBLACIÒN Y MUESTRA Se seleccionarán mediante muestreo por conveniencia (cacería de comuneros indígenas) 10 vísceras de picuros adultos (cuniculus paca), sin evidencia clínica de enfermedad aparente, procedentes del distrito las piedras, del departamento de Madre de Dios. 3.4 MÉTODOS Y TÉCNICAS Las vísceras del sistema digestivo se fijarán en formalina al 10% en el lugar de muestreo y se remitirán al taller de Anatomía de la Carrera Profesional de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Nacional Amazónica de Madre de Dios (UNAMAD). 21 La apreciación macroscópica consistirá en observación “ex situ” mediante la disección y micro disección de acuerdo a Gil (49), se determinará la localización del intestino y su relación con los órganos adyacentes; se delimitará y separará el duodeno, yeyuno, íleon, ciego, colon y recto retirándose todo el epiplón para registrar la biometría del intestino delgado; se incidirá el borde mesentérico para quitar el contenido del ID para luego poder visualizar la mucosa intestinal. La preparación de láminas histológicas se realizará en la Facultad de Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM). Se registrarán aspectos como: Tipo de presentación de placas de Peyer, cantidad, ubicación, se realizará también biometría con ayuda de calibre tipo Vernier; la descripción se realizará de acuerdo a las pautas dadas por la Nómina Anatómica Veterinaria sexta edición (50). Para la afirmación de agregados linfoides se remitirán muestras para la evaluación histológica según los protocolos establecidos por Bancroft (51), las imágenes serán tomadas con cámara digital Canon HD35X y editadas con Adobe Photoshop 8.0; todos los datos obtenidos serán analizados usando programa estadístico SPSS. La lectura de láminas se realizará en el laboratorio de la Escuela Profesional de Medicina Veterinaria Y Zootecnia de la Universidad Nacional Amazónica de Madre de Dios (UNAMAD). El biomaterial se obtendrá de animales cazados por los aldeanos de las comunidades nativas. 3.5 TRAMIENTO DE LOS DATOS Los datos se procesarán con medidas de tendencia central como media, desviación estándar, coeficiente de variación y pruebas de comparación de medias de Chi cuadrado. 22 3.6 RECURSOS Vísceras de picuro. Laminas histológicas. Equipo de disección. Material de fijación para anatomía. Formaldehido al 10%. Baldes para almacenar las muestras. Movilidad. 3.7 PRESUPUESTO El financiamiento del estudio histológico procesamiento de láminas, reactivos y materiales serán asumidos por el fondo concursable de Proyectos de investigación docente 2020, RESOLUCIÓN Nro.152-2020-UNAMAD-VRI, el estudio anatómico será financiado por el tesista. 23 3.8 CRONOGRAMA Detalle Abr Presentación x May Jun Jul Ago x x x x Sep Oct x x x x x x Nov x de proyecto Solicitud de Comité x de ética Recolección de muestras Disección y descripción Análisis de información Redacción de borrador Presentación de borrador Sustentación x 24 BIBLIOGRAFIA 1. Pérez.E.M. 1983. La lapa,recurso natural aprovechabele .Trabajo de Ascenso. Venezuela: Universidad Simón Rodriguez, Venezuela;. Report. 64 p. 2. Grimwood I.R. 1969. Notes on the distribution and status of some Peruvian mammals.1968. Bronx, N. Y. American Committee for International Wild Life ProtectionSpecial Publication, American Committee for International Wild Life Protection. kayo; (21) 1-86 p. 3. 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