REPLICACIÓN POR DESPLAZAMIENTO DE CADENA EN PLÁSMIDOS ANA MARCHENA AVRIL BRITO JOSE GÓMEZ GABRIEL LOPERA MIGUEL MARRUGO GRUPO B CONTENIDO 01 Definición de plásmidos 02 Estructura de los plásmidos 03 Replicación por desplazamiento de cadena ¿QUÉ SON LOS PLASMIDOS? Los plásmidos son moléculas de ADN de doble cadena extracromosómico, con información genética que se encuentran dentro de la mayoría de bacterias. Estas estructuras circulares, que son independientes del ADN bacteriano, contienen un conjunto de genes beneficiosos para la vida de las bacterias. ESTRUCTURA DEL PLASMIDO Origen de replicación (OR) 01 02 03 04 05 Se refiere a una ubicación específica en la hebra donde comienza el proceso de replicación. En los plásmidos, esta región es rica en A=T ya que es más fácil separar las hebras durante la replicación. Sitio de marcador seleccionable Esta región consta de genes de resistencia a antibióticos que son útiles en la identificación y selección de bacterias que contienen plásmidos. Región promotora Esta es la región transcripcional. donde se carga la maquinaria Sitio de unión del cebador Esta es la secuencia corta de ADN monocatenario que es útil en la amplificación y secuenciación del ADN. Múltiples sitios de clonación Este sitio contiene varias secuencias donde las enzimas de restricción pueden unirse y escindir la estructura de doble cadena. REPLICACIÓN POR DESPLAZAMIENTO DE CADENA DESPLAZAMIENTO DE CADENA La replicación por desplazamiento de cadena es propia de los plásmidos del grupo de incompatibilidad Q (InQ) MODELO RSF1010 Este replicón consta de 3 proteínas: Rep A (Helicasa) Rep B (Primasa) Rep C (Proteína de unión específica de ADN) DESPLAZAMIENTO DE CADENA I Parte de una cadena doble parental (lineas negras continuas) que representan los dos sitios de iniciación de replicación monocatenarios (ssiA y ssiB). La cadena doble de ADN se separa por la unión de RepC dentro del origen de replicación OriV junto a la helicasa RepA, lo que permite que los dos sitios formen horquillas de replicación. II III La base de la horquilla es reconocida por RepB, que inicia la síntesis de un cebador de ARN, y la extensión del 3´-OH libre es llevado a cabo por la ADN polimerasa III. Se forman dos bucles D, uno a cada dirección de síntesis. DESPLAZAMIENTO DE CADENA IV La síntesis continúa en ambas direcciones, extendiendo el área de formación del bucle D. Se completa la elongación y se produce la terminación de la replicación en ambas hebras en los sitios ssi en los que comenzó la replicación. En este punto, se restauran los sitios ssi en las hebras hijas recién sintetizadas. V VI Las dos hebras hijas se ligan, lo que da como resultado dos dúplex de ADN, cada uno de los cuales contiene una hebra parental y una hebra hija. DESPLAZAMIENTO DE CADENA RESULTADO 1. Cadenas sencillas de ADN circular covalentemente cerrado. Corresponden a las cadenas desplazadas durante la replicación, que contienen cualquiera de los sitios ssi y que serán usados como punto de inicio para la síntesis de su cadena complementaria y su conversión de moléculas de doble cadena. 2. Moléculas de ADN de doble cadena, súper-enrollado por la actividad de la helicasa. 3. Cualquier estadio intermedio, como círculos con solo una parte de su secuencia de doble cadena. MUCHAS GRACIAS POR VER ESTA PRESENTACIÓN