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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL DE LOS GENES KTR4 Y KTR5 DE
Sporothrix Schenckii.
Magnolia Michele Rodríguez Jaime, Ciencias Químico Biológicas y Farmacéuticas de la
Universidad Autónoma de Nayarit, [email protected]. Asesor Dr. Héctor Manuel
Mora Montes, Universidad de Guanajuato, [email protected] .
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA.
Sporothrix schenckii es un hongo patógeno, dimórfico, que infecta humanos y
animales, y es el agente causal de la esporotricosis, una micosis subcutánea
crónica. La glicosilación de la pared celular de S. schenckii es de gran importancia
para los procesos de adhesión, virulencia, integridad de la pared y respuesta
inmune del huésped. Esta modificación post-traduccional se lleva a cabo en el
aparato de Golgi y en el retículo endoplasmático, donde se adicionan residuos de
carbohidratos a proteínas en tránsito, gracias a la acción de enzimas con actividad
de transferasa. Los genes involucrados en la glicosilación de proteínas de S.
schenckii no han sido caracterizados; por lo que en este proyecto se busca
demostrar la función de los genes KTR4 y KTR5 mediante la complementación
heteróloga en mutantes de Candida Albicans carentes de genes de la familia
KRE2/MNT1, que codifican para manosiltransferasas en el aparato de Golgi.
METODOLOGÍA.
En experimentos anteriores se realizó la extracción de mRNA de S. schenckii para
la síntesis de cDNA, el cual se clonó en el vector TOPO, realizando una
transformación en E. coli. Se seleccionaron las clonas positivas, las cuales se
subclonaron en el vector pACT1 y se usaron dichas construcciones para
transformar en C. Albicans. A partir de estas cepas se obtuvo DNA genómico y se
procedió a comprobar cuales contenían los genes KTR5 (1539pb) y KTR4
(1182pb). Las cepas seleccionas se sometieron a un ensayo con el colorante azul
Alciano, que tiene afinidad a los carbohidratos con carga negativa, para lo cual se
crecieron en medio YPD, posteriormente se ajustó la densidad óptica de las
células, utilizándose como controles diferentes mutantes de C. Albicans.
CONCLUSIONES.
Los resultados del ensayo con azul Alciano demuestran que los genes KTR4 y
KTR5 de S. Schenckii complementan las mutantes de C. Albicans, sugiriéndose
que son ortólogos funcionales de los miembros de la familia KRE2/MNT1 de C.
Albicans.
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Pacífico
Agosto 2014