CAPÍTULO I: PROBLEMA 1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA En la región Huancavelica existen más de 192,976 cabezas de vacunos, de las cuales en la provincia de Huancavelica reporta con un 10.8% MINAG (2011), una limitante de importancia económica para el desarrollo de la ganadería bovina son las infecciones por parásitos gastrointestinales (Mottier y Lanusse, 2008), que se reflejan en baja conversión alimenticia, pérdida del apetito y retraso en el crecimiento de los bovinos, lo que deriva en pérdidas económicas para los ganaderos Sangster (2001). El control de los parásitos ha sido ineficientemente porque no se han establecido criterios técnicos integrales y se han usado exclusivamente compuestos químicos por largo tiempo McKenna (1996). Esta situación se agudiza si se tiene en cuenta que la disponibilidad comercial de nuevos antiparasitarios está comprometida por la aparición de resistencia y por los cada vez mayores costos que implica la investigación y desarrollo de nuevas moléculas antihelmínticas (Coles, 2002b; Besier, 2006). La resistencia de la Fasciola hepática tiene una cepa de individuos para tolerar dosis tóxicas de medicamentos que serían letales para la mayoría de individuos de una población normal de la misma especie. La resistencia es de naturaleza genética (Jackson, 1993; Kaplan, 2004), y es un problema que se ha convertido en un asunto de vital importancia en la industria ganadera debido a que se ha venido extendiendo de manera alarmante en la última década. El problema de resistencia antihelmíntica se está expandiendo a la mayoría de los principios químicos, lo que representa una amenaza a la viabilidad de la industria pecuaria Coles et al. (2006). En la mayor parte de nuestra serranía peruana donde la ganadería bovina es un recurso importante y la sanidad constituye uno de los pilares de la producción, el uso de los antiparasitarios ha generado la selección de resistencia por parte de la Fasciola hepática. En las producciones bovinas este fenómeno se ha constituido en una limitante sanitaria productiva de gran trascendencia debido a que la resistencia de la Fasciola hepática ha alcanzado a todos los antiparasitarios disponibles en el mercado. Por el contrario, el hallazgo de resistencia antihelmíntica en Fasciola hepática bovina es un fenómeno poco frecuente, poco citado en el mundo, aunque en la actualidad pareciera estar observándose cada vez con más frecuencia en países donde predominan los sistemas pastoriles como Nueva Zelanda, Brasil y Argentina. En Nueva Zelanda McKenna, (1996) se ha detectado resistencia a los benzimidazoles y a las avermectinas. 1.2 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA Problema principal: ¿Cuál es la eficacia del Nitro 34 (Nitroxinil al 30%) y del Trisan (Triclabendazol al 12%) en el control de la Fasciola hepática en vacunos, Comunidad de Antaccocha – Huancavelica? Problemas secundarios: ¿Cuál es la eficacia del Nitro 34 (Nitroxinil al 30%) en el control de la Fasciola hepática en vacunos, Comunidad de Antaccocha – Huancavelica? ¿Cuál es la eficacia del Trisan (Triclabendazol al 12%) en el control de la Fasciola hepática en vacunos, Comunidad de Antaccocha – Huancavelica? 2 1.3 OBJETIVOS OBJETIVO PRINCIPAL Determinar la eficacia del Nitro 34 (Nitroxinil al 30%) y del Trisan (Triclabendazol al 12%) en el control de la Fasciola hepática en vacunos, Comunidad de Antaccocha – Huancavelica. OBJETIVOS SECUNDARIOS Determinar la eficacia del control con Nitro 34 (Nitroxinil al 30%) en relación a la carga parasitaria expresada por la presencia de huevos de Fasciola hepática en heces de vacunos, Comunidad de Antaccocha – Huancavelica. Determinar la eficacia del control con Trisan (Triclabendazol al 12%) en relación a la carga parasitaria expresada por la presencia de huevos deFasciola hepática en heces de vacunos, Comunidad de Antaccocha – Huancavelica. 1.4 JUSTIFICACIÓN La producción bovina de carne y leche en nuestro país se encuentra afectadaen su rendimiento, por una serie de factores, uno de ellos la Fasciolosis oDistomatosis, que es una zoonosis parasitaria, producida por la Fasciola hepática, conocida también en nuestro medio por los pobladores quechua hablantes,como“jallo jallo”, “alicuya” que traducido quiere decir “gusano plano”. La Fasciola hepática es uno de los parásitos que más gastos ocasionan en el negocio de la ganadería. Esta enfermedad es calificada como asesina del ganado, porque muchos animales mueren por esta causa. La importancia de esta enfermedad radica principalmente, en las pérdidas económicas causadas por los trastornos ocasionados al desempeño de las funciones zootécnicas en los animales domésticos y el constante decomiso de hígados en los camales a causa de este parasito. 3 El desarrollo de las empresas farmacéuticas, ha conducido a un uso descontrolado de los recursos quimioprofilacticos como vía para la reducción de los niveles de estas infecciones Leathwick, et al.(2001); en parte lo que a su vez ha provocado la pérdida paulatina de la eficacia de los antiparasitarios, a través de la transformación genética de las poblaciones de parásitos o aumento de la frecuencia genética de las ya existentes, con el objetivo evolutivo de desarrollar resistencia a estos productos FAO(2003). El uso extensivo, con mal manejo en la dosificación de productos antihelmínticos en unión con otros factores, conducen a la aparición de resistencia, definida como la pérdida de sensibilidad en poblaciones que fueron previamente sensibilizadas a una droga en particular (Sangster y Gill, 1999). Para el control de la Fasciola hepática es necesario emplear compuestos químicos que sean altamente eficaces contra estadios adultos e inmaduros. Se ha señalado que el Triclabendazol, es un antiparasitario que pertenece a la familia de las bencimidazoles, que tiene una eficacia del 100% para fasciola hepática adulta y de 99% contra formas inmaduras de hasta una semana de edad. El mecanismo de acción de este compuesto se basa en su conjugación con las tubulinas parasitarias, y de esta forma el parásito no puede obtener energía de la glucosa y pierde sus funciones vitales de motilidad como de reproducción, es por ello que se dice que el Triclabendazolejerce un efecto fasciolicida (Sumanoy Ocampo, 1997). El Nitroxinil es otro fármaco fasciolicida, indicado para el control de la Fasciola hepática en su estado juvenil y adulto, porque su eficacia es del 90% contra formas maduras y de 85% contra formas inmaduras de 6 a 8 semanas de edad. El mecanismo de acción de este fármaco actúa como bloqueador neuromuscular, por lo que el parasito muere paralizado y con deficiencia de energía (Sumano y Ocampo, 1997). 4 CAPÍTULO II: MARCO TEORICO 2.1 Antecedentes Las investigaciones acerca de eficacia del tratamiento con fármacos en vacunos infestados por Fasciola hepática en condiciones naturales, son escasos. Sin embargo existen estudios aislados, como muestra de estos estudios tenemos a la Universidad Nacional del Altiplano donde: Vilca y Tito (2006);evaluaron la eficacia del Triclabendazol al 15% (Trivantel® 15), Closantel al 10% (Cloxantel Inyectable 10%) del Nitroxinil al 34% (Nitronix® 34), en el tratamiento de la Fasciolosis en 40 Bovinos criollos, naturalmente infectado con Fasciola hepática Chuquibambilla, para el procedentes del C.I.P. cual los animales fueron distribuidos en grupos: A: Triclabendazol al 15%, B: Closantel al 10%, C: Nitroxinil al 34% y D: Grupo Testigo (sin tratamiento). Los resultados obtenidos mostraron que la eficacia obtenida para los días 7, 14, 21 y 28 post tratamiento fue del 50%, 70%, 70% y 80% para el grupo tratado con Triclabendazol al 15%; del 50%, 50 %, 60% y 70 % para el grupo tratado con Closantel al 10 % y del 40%, 50%, 60 y 70% para el grupo tratado con Nitroxinil al 34% respectivamente. Núñez y Quiroz(1994); al evaluar la eficacia del Nitroxinilen dosis de 10 mg/kg de p.v., aplicadas cada 75 días, durante 7 meses (tres tratamientos), encontraron una eficacia del 43.74% a los 31 días del primer tratamiento, luego del segundo tratamiento la eficacia fue del 48.1% y después del tercer tratamiento, la eficacia fue del 94.3%. 5 Cruz et al.(1999); en México, indica que después de aplicar 4 tratamientos con Triclabendazola dosis de 12 mg/kg cada 56 días por 7 meses, la eficacia es del 78.58% al día 28, mientras que en los animales aplicadoscada 112 días, la eficacia es del 85.72% al día 28, señalando que esto pudo deberse a que el fasciolicida no es eficaz al 100% contra estadios inmaduros. Núñez y Quiroz(2001); al evaluar dos modelos quimioterapéuticos con Triclabendazolpara el control de la Fasciola hepática bovina, encontraron una eficacia del 78.3% al día 45 en el grupo tratado con un solo tratamiento. Mientras que en el grupo tratado en dos oportunidades (enero y mayo), la eficacia fue del 96.4%; los resultados del primer grupo (78.3%) Ibarra et al. (2002); señalan que la eficacia del Triclabendazolen ganado bovino a los 14 y 21 días es del 91% y 96% respectivamente. Fiel et al.(2004); quienes al realizar el control de la Fasciola hepática con Triclabendazol al 10% en dosis de 12 mg/kg de p.v., en vacunos infectados experimentalmente con 400 metacercarias, encontraron una eficacia de 93.72%, 99.16% y del 100% a los 10, 50 y 90 días. Vera et al. (2001); realizaron el control de la Fasciola hepática, en bovinos infectados con 300 metacercarias y tratados con Triclabendazole en dosis única de 12mg/gk de p.v., encontraron una eficacia del 100%, al día 45. Smeal y Hall (1984); mencionan que en los bovinos, las Fasciola hepática de 3 a 5 semanas son ligeramente más resistentes logrando sobrevivir al tratamiento con algún fármaco. Vera et al.(2002); menciona que el porcentaje de eficacia ejercida por los compuestos y valorada con base en la reducción de huevos de Fasciola hepática en los días 14 y 21 post tratamiento, fue de 90% y 85% para el compuesto alfa; 91% y 96% para 6 Triclabendazol y 82% y 92% para Closantel, respectivamente. El análisis estadístico no indicó diferencias significativas entre la eficacia conferida por los tratamientos. Sin embargo, las comparaciones entre tratamientos contra el número de huevos observados el día 15, fueron estadísticamente diferentes (P < 0.05) el día 14 y (P < 0.01) el día 21. Eckertet al. (1984);En relación con la eficacia del Triclabendazol, señalan el 93% contra Fasciola hepática. Otros estudios realizados sobre control de Fasciola hepática en clima cálido son los de Echevarría et al.(1992); en Brasil, quien señala que hay reducción en la excreción de huevos aun sin tratamiento, Rojas, J.,(2006):Determinóel grado de eficacia y resistencia antihelmíntica de Fasciolahepática al Triclabendazol 12 % en bovinos, se investigó en cinco predios de la campiña de Cajamarca: “Tartar”, “El Cortijo”, “San Vicente”, “Santa Catalina” y “Granja Porcón”; entre los años 2006 y 2008, se utilizó 10 bovinos en cada predio con infección natural a Fasciolahepática, edades entre 6 a 60 meses, con el mismo régimen de alimentación y tenencia, 12 semanas sin medicar. Se aplicó diseño experimental, la dosis terapéutica fue de 12 mg/kgp.v., con suministro vía oral y se calculó de acuerdo al peso corporal individual. Se extrajo aproximadamente 200 g de heces directamente del recto de cada animal en el día 3 antes y el día 28 post dosificación. Se usó el método Dennis, Stone y Swanson modificada para cuantificar el número de huevos por gramo de heces (hpg), la eficacia se calculó mediante la fórmula % E = C/A x 100 y C= A-B; donde: A (Número de huevos encontrados antes de la aplicación del fasciolicida), B (Número de huevos encontrados el día 28 post aplicación del fasciolicida) y C (Cantidad de huevos que restan) y se utilizó la clasificación “muy eficaz (98 a 100%)”, “eficaz (90 a 98%)”, “moderadamente eficaz (80 a 90%)” e “insuficientemente eficaz (< a 80%)”; respectivamente para determinar el grado de eficacia; declarándose resistencia antihelmíntica (RA) cuando la eficacia es menor al 95 %. En los resultados se determinó 2,8%; 3,1%; 68%; 96% y 100% de eficacia en los predios “ Tartar”, “El Cortijo”, “San Vicente”, “Santa Catalina” y “Granja Porcón”; respectivamente. Demostrándose en los tres primeros predios un grado de 7 eficacia “insuficientemente activo” y por tanto Fasciola hepática es resistente al Triclabendazol, en tanto que en los predios “Santa Catalina” y “Granja Porcón”, los grados de eficacia van de “eficaz” a “muy eficaz”; respectivamente, lo cual indica que Fasciola hepática aún es sensible al fármaco. Quispe C.(2007); Alevaluar la efectividad del Triverfen 22.2 (Triclabendazole al 12%, Fenbendazole al 10% e Ivermectina al 0.2%) en ovinos infectados naturalmente con Fasciola hepática y Melophagus ovinus, en la Comunidad de Condormilla Bajo, ubicada en la Provincia de Melgar, Departamento de Puno, a 3,910 m.s.n.m. mediante el conteo de huevos por gramo de heces, método de Mc Master modificado para la evaluación de endoparásitos, evaluación cualitativa de heces mediante el método de sedimentación lenta de Dennis modificado para la evaluación de presencia de huevos de Fasciola hepática, y uso del método de colección directa de ectoparásitos (Melophagus ovinus). Dichas muestras fueron evaluadas en el Laboratorio de Parasitología del CIP Chuquibambilla. La evaluación se realizó en 2 grupos experimentales, grupo tratado y grupo control sin tratamiento. Estos grupos fueron separados en diferentes canchas por el lapso de 3 semanas para observar el efecto contra Melophagus ovinus para evitar la reinfección del grupo tratado. El grupo control fue de 10 ovinos sin tratamiento y el grupo tratado fue de 40 ovinos tratados con Triverfen 22.2. En ambos grupos se realizó el muestreo de heces y ectoparásitos a los 0, 7, 14, 21, 28, 35 y 42 días post tratamiento de Enero a Marzo del 2007. Los resultados demostraron una efectividad del 100%, 100%, 100%, 100%, 100% y 97.6% respectivamente para el caso de huevos tipo Strongylus correspondiente a nematodos gastrointestinales), de 100%, 100%, 100%, 100%, 100% y 98.2% respectivamente para huevos de Moniezia spp. y de 100%, 100%, 100%, 100%, 100% y 100% para huevos de Fasciola hepática, no siendo así de efectiva para el ectoparásito Melophagus ovinus donde se encontró 0%, 25.3%, 1.4%, 0%, 0%, 0% y 0% Respectivamente. Cruz et al.(1999);en Pichucalco estado de Chiapas situado a 150 msnm determinó prevalencia, la intensidad en la excreción de huevos y los títulos de anticuerpos anti- 8 Fasciola hepática expresados en densidades ópticas, en ganado vacuno tratado con Triclabendazol cada 56 y 112 días durante 7 meses. Se utilizaron 42 bovinos divididos en tres grupos de 14 animales cada uno. El grupo A fue tratado con Triclabendazol cada 56 días, el B cada 112, el C fue el testigo. Se emplearon las técnicas de sedimentación y Elisa. En el grupo A el número de animales positivos se redujo del 100% (día 0) a 0% (día 168). La media de huevos se redujo de 86.57 ± 10.5 (día 0), a 0 (día 168). En el grupo B el número de animales positivos se redujo de 100% (día 0) a 14.28% (día 168), y la media de huevos de 82.85 ± 14 (día 0) a 0.85 ± 0.5 (día 168). En el grupo C la prevalencia siempre fue de 100% y la media de huevos excretados fluctuó de 68.14 a 78.85 durante el estudio. Entre el grupo A y el B se observaron diferencias estadísticas (P< 0.05) en los días 84 y 112, 140 y 168 y siempre hubo diferencias con el grupo C (P < 0.01) después del tratamiento, concluye que el tratamiento con Triclabendazol en ganado vacuno, aplicado cada 56 días, reduce significativamente (P= 0.05) la excreción de huevos de F. hepática en comparación con el aplicado cada 112 días, 2.2 BASES TEORICAS A. Fasciola hepática o duela del hígado.- Es una especie de platelmintotrematodo (duela) de la subclase Digenea, caracterizado por su forma lanceolada, con dos ventosas, una bucal y otra ventral, y un ciclo biológico con dos generaciones (digeneo) en dos hospedadores, un molusco gasterópodo anfibio y un mamífero. Es parásito de los canales biliares y la vesícula biliar de herbívoros y omnívoros, incluido el hombre; es el agente causal de una de las parasitosis más difundidas del ganado, la fascioliasis (o fasciolosis), que es considerada como una de las enfermedades parasitarias más importantes del mundo de los rumiantes domésticos. La duela del hígado es un gusano plano, sin segmentos, carnoso, que mide de 2 a 3,5 cm de largo por 1 a 1,5 cm de ancho. Es de color blanquecino y posee 9 tonalidades que van desde el cenizo hasta coloraciones parduscas. La porción anterior o cefálica presenta una ventosa bucal que mide 1 mm aproximadamente y otra de mayor tamaño en la zona ventral, de aproximadamente 1,6 mm. Agatsuma, T. (2000). B. La Distomatosis (o Fasciolasis).- Es una enfermedad interna causada por parásitos del género Fasciola, que puede afectar a cualquier mamífero y ocasionalmente al Hombre (zoonosis), pero es en los rumiantes donde cobra mayor importancia. El agente causal de esta enfermedad es un trematodo (verme chato) que se ubica en los canalículos biliares del hígado del hospedador. Esta afección es causa de decomisos de hígados en frigoríficos y de bajas en el potencial productivo de los animales afectados. Blood, D. (2002). El género Fasciola acarrea graves pérdidas económicas al incidir sobre animales productivos como bovinos, ovinos y caprinos. Se ha estimado que en el mundo hay más de 550 millones de estos animales expuestos a sufrir de Distomatosis. C. Etiología Taxonómicamente se clasifica al agente causal de la Distomatosis de la siguiente manera: Phylum : Platyhelminthes Clase : Trematoda Orden : Digenea Familia : Fasciolidae Género : Fasciola Especie : Fasciola hepática y Fasciola gigantica Coburnet al.(1991). 10 D. Morfología Estado Adulto La duela del hígado es un gusano plano, sin segmentos, carnoso, que mide de 2 a 3,5 cm de largo por 1 a 1,5 cm de ancho. Es de color blanquecino y posee tonalidades que van desde el cenizo hasta coloraciones parduscas. La porción anterior o cefálica presenta una ventosa bucal que mide 1 mm aproximadamente y otra de mayor tamaño en la zona ventral, de aproximadamente 1,6 mm Es hermafrodita. El útero es corto. Los diversos componentes del huevo se juntan en el segmento proximal del útero; las células vitelinas son abundantes, en forma de racimos de uvas y distribuidas por todas las porciones laterales; de ellas se desprenden gránulos vitelógenos que contienen proliferol y proteínas. El ovario se encuentra situado a la derecha de la línea media, en una posición anterior con respecto a los dos testículos, uno detrás del otro, muy ramificados y situados en los dos tercios anteriores del cuerpo. Blood, D. (2002). Huevos Los huevos son depositados en los conductos biliares. Miden de 130 a 150 micras de longitud por 60 a 90 micras de ancho; tienen opérculo, son de color amarillento, la cubierta formada por esclerotina (proliferol y proteínas). Al ser eliminados con las heces todavía no son maduros (sin embrionar). La maduración se efectúa en el agua a los 9 a 15 días a temperatura de 22 a 25ºC. Miracidio Es una larva ciliada que eclosiona tras la maduración de los huevos. Por acción enzimática desprenden el opérculo del huevo y salen a nadar libremente con movimientos activos que se favorecen por la luz del sol; así encuentran al hospedador intermediario, un caracol pulmonado de agua dulce 11 del género Fossaria o Pseudosuccinea, o de la familia Lymnaeidae, a los que deben encontrar en unas 8 horas e invadirlos por el pie, perforando las células epiteliales y subepiteliales del caracol.Acuna, R. (1998). Esporoquistes y redias Las larvas miracidio se transforman en esporoquistes o esporocistos dentro del caracol. Los esporocistos originan la primera generación de redias (sucede en unas 3 semanas). Pasando una semana más se forma la segunda generación de redias y posteriormente aparecen las cercarías. Acuña, R. (1998). Cercaría Las cercarías son larvas libre que nadan activamente en el agua, donde maduran después de abandonar el caracol en grandes cantidades (1 miracidio produce unas 500 a 650 cercarías). Nadan con su cola, durante 8 a 12 horas; se adhieren a plantas acuáticas, luego pierden la cola, se hacen redondas y se enquistan formando la metacercaria. Blood, D.(2002). Metacercaria La metacercaria es la forma infectante para el hombre y para los demás animales que sirven de hospedador definitivo. Generalmente se encuentran enquistadas en la vegetación acuática semisumergida que normalmente comen los animales, pero el hombre también acostumbra a ingerirlas. También se adquiere la infección tomando aguas contaminadas. Al llegar al duodeno se desenquistan liberando un parásito juvenil que perfora la pared intestinal y en unas 3 horas, se aloja en la cavidad peritoneal en donde pasa de 3 a 16 días; posteriormente avanza por el peritoneo, llega a la cápsula de Glisson, la perfora, penetra al parénquima hepático del cual se alimentan los parásitos juveniles durante su migración hacia los conductos biliares en donde se desarrolla hasta el estado adulto, lo que sucede en unos 2 meses; después empezará a reproducir huevos que salen al exterior con la bilis y materias fecales, complementando así el ciclo biológico. Dreyfuss, G. (1999). 12 E. Hospedadores definitivos Fasciola hepática afecta principalmente a bovinos, ovinos y caprinos, pero también puede afectar a otros mamíferos herbívoros y omnívoros, entre los que se encuentran los equinos, los porcinos, los lagomorfos, los roedores y el hombre, siendo unas de las 20 principales enfermedades parasitarias en el hombre, dándose en ciertos lugares parasitemias del 50% de la población, por lo que ya no se puede considerar como un problema propio del ganado, sino más bien un problema de salud pública. Este parásito se encuentra en su forma larvaria en el peritoneo parietal derecho y en el parénquima hepático. Una vez que alcanza su madurez se localiza en los conductos biliares. Tiene la posibilidad de encontrarse en otros tejidos, como el músculo, pero allí no complementa su ciclo biológico. Dreyfuss, G. (1999). F. Hospedadores intermediarios La distribución de la enfermedad depende de la presencia de caracoles pulmonados acuáticos pertenecientes al género Lymnaea. La concha de estos caracoles es cónica, delgada y puntiaguda. Si se observa desde la cúspide muestra cuatro o cinco espirales, muy marcadas, de derecha a izquierda, profundamente gravadas y con aspecto de escalera. El color de las conchas de estos caracoles varía ostensiblemente en dependencia del medio en que se encuentran. La concha se abre hacia un lateral y aparece situada hacia el lado derecho siendo elíptica u oval. El caracol es hermafrodita y pone los huevos en forma de masa envuelta en una cápsula gelatinosa que contiene generalmente de 8 a 16 huevos y se le denomina cocón. La puesta de cocones tiene lugar generalmente en el agua, lugares húmedos o pequeñas ramas. La capacidad de reproducción depende de las condiciones ecológicas y de nutrición, se estima que en condiciones óptimas la producción diaria es de 40 a 60 huevos. El caracol alcanza su madures y empieza a poner los huevos entre 3 y 4 semanas después de su salida del cocón. En general los caracoles prefieren como zonas de cría los terrenos bajos, zonas inundadas; el agua debe ser estancada o con poca corriente, clara y rica en oxígeno. El pH del agua debe ser entre 5 y 9. Prefieren 13 sustratos fangosos o de arcilla fina, pero también puede ser arenoso si los caracoles disponen de los alimentos precisos, el cual consiste principalmente en polen, plantas en putrefacción y cianobacterias de los géneros Lyngbya, Leptolyngbya, Phormidium y Schimidlei.Dreyfuss, G. (1999). G. Biotopos del hospedador intermediario Los biotopos pueden dividirse en temporales o permanentes, influidos por las condiciones climáticas de la región como son épocas de lluvia y seca, altas temperaturas, que inciden directamente sobre la evaporación, etc. Desde el punto de vista epidemiológico los biotopos temporales son más peligrosos que los permanentes debido a que en estos últimos existe cierto equilibrio entre la fauna autóctona del lugar y la intensidad de reproducción de los caracoles, la cual se ve limitada por la depredación y competencia de los otros organismos residentes del lugar, en los biotopos temporales los caracoles encuentran abundante alimento, la reproducción es muy intensa y masiva, además el desarrollo de las formas larvarias de F. hepática en el caracol es más rápida. En los meses del verano boreal (julio, agosto, septiembre) se observan limitaciones de la reproducción de los caracoles producto de la intensa radiación solar, debido a esto la temperatura del agua en los biotopos durante el día puede llegar hasta los 45-50 grados centígrados; en los meses de octubre, noviembre y diciembre las lluvias son más continuadas y las temperaturas más favorables para su desarrollo. Agatsuma, T. (2000). H. Síntomas Existen tres formas de presentación de la Distomatosis: la aguda, la subaguda y la crónica. Dependiendo de la época del año y el clima puede haber infestaciones masivas en bovinos y ovinos que luego de dos o tres semanas se puede manifestar como una fasciolosis aguda especialmente en animales jóvenes. Los animales muestran síntomas clínicos de fasciolosis como son la fiebre ligera, abatimiento, debilidad, aumento del volumen del hígado, con dolor y ascitis. Estos síntomas de aparición rápida, son acompañados de muerte de animales. 14 La forma subaguda es aquella donde la patogenia del proceso presenta unos síntomas clínicos compatibles con la permanencia de la infestación durante un largo periodo de tiempo, relacionados con las lesiones sufridas por el parénquima y con la presencia de parásitos adultos en los conductos biliares. Las muertes se producen meses más tarde que en el caso de la fasciolosis aguda. El examen clínico de los hospedadores permite observar la presencia de mucosas pálidas. En general los síntomas aparecen en los casos crónicos. Estos son: falta de peso, debilidad general, edema sub mandibular y palidez de mucosas. En casos de muerte las lesiones y las fasciolas son muy evidentes. Agatsuma, T. (2000).Como los signos clínicos de la Distomatosis son inespecíficos se necesita la confirmación del laboratorio o a través de una necropsia para arribar a un diagnóstico definitivo. I. Diagnóstico El conocimiento de la existencia del caracol en la zona y la correlación con la sintomatología antes descripta ayuda a un diagnóstico clínico más rápido. El diagnóstico de certeza es la confirmación de la presencia de huevos en materia fecal por laboratorio. Los dos métodos que se detallan a continuación buscan concentrar los huevos para poder visualizarlos. La técnica de sedimentación es sencilla y aprovecha el alto peso específico del huevo que sedimenta rápido (le falta cámara de aire como los tienen los huevos de nematodos gastrointestinales). Agatsuma, T. (2000). J. Tratamiento Puede tratar de eliminarse el caracol, pero sólo es posible en campos donde existan pocas fuentes de agua. Se emplea sulfato de cobre, que puede colocarse en pequeñas bolsas de arpillera, para que su liberación sea lenta dentro del flujo de agua. Dreyfuss, G. (1999). 15 K. Prevención Todos los factores que inciden en el ciclo de vida del parásito y en su transmisión deben de ser estudiados en cada caso para poder establecer medidas racionales de prevención y control de la enfermedad. La clave es proteger al máximo a los animales jóvenes, que son lo más susceptibles, a través de técnicas de manejo (que no pastoreen campos cercanos a cuerpos de agua), desparasitaciones estratégicas y control de la población de caracoles a través del uso de químicos. Dreyfuss, G. (1999)L. Espectro de actividad del Triclabendazol El triclabendazol es un antiparasitario interno benzimidazólico para uso sobre todo en bovinos y ovinos con efecto exclusivamente fasciolicida. Algunos benzimidazoles (sobre todo el albendazol, pero también el probenzimidazol netobimin) caracterizados por su alta eficacia contra nematodos también son eficaces contra los estadios adultos de Fasciola o Dicrocoelium, pero no contra los estadios inmaduros. En cambio, el Triclabendazol es ineficaz contra gusanos nematodos y cestodos, pero muestra una excelente eficacia contra todos los estadios, adultos e inmaduros, de Fasciola hepática, incluidos los estadios inmaduros de 1 a 6 semanas, contra los que apenas hay otros compuestos eficaces. Es igualmente eficaz contra otros helmintos trematodos como Fasciola gigantica y Fascioloides magna. M. Formulaciones del Triclabendazol El Triclabendazolestá disponible sobre todo como suspensión para la administración oral, pero también hay tabletas. Son frecuentes las mezclas con nematicidas (por ejemplo, con levamisol, Ivermectina, etc.) para ampliar el espectro de acción. 16 N. Mecanismo de acción del Triclabendazol El Triclabendazolmata lentamente a las duelas y, a diferencia de otros benzimidazoles, no parece afectar la funcionalidad de los microtúbulos de las células de las duelas. O. Farmacocinética del Triclabendazol El Triclabendazolse absorbe rápidamente a sangre y da lugar bioquímicamente a varios metabolitos. El metabolito sulfoxídico parece ser el mayor responsable del efecto fasciolicida. Los niveles máximos en plasma sanguíneo se alcanzan 24 horas tras la administración. Los metabolitos están ligados a proteínas plasmáticas, lo que parece favorecer la eficacia contra los estadios inmaduros. La excreción se lleva a cabo a través de la bilis y las heces. P. Espectro de actividad del Nitroxinil El Nitroxinil, es un análogo del hexaclorofeno, para uso en el ganado bovino, ovino, caprino y porcino, es un fasciolicida altamente eficaz contra los adultos de Fasciola hepática, con cierta eficacia contra los estadios inmaduros (mayores de 6 semanas). Pero es ineficaz contra los estadios juveniles de Fasciolahepática (menos de 6 semanas), las duelas del estómago (Paramphistomum spp.) y otros trematodos. También controla varios helmintos nematodos como Bunostomum, Haemonchus, Oesophagostomum y Parafilaria. No es eficaz contra gusanos cestodos. Q. Formulaciones del Nitroxinil El Nitroxinilsuele estar disponible sobre todo como inyectable subcutáneo o intramuscular, ocasionalmente como suspensión para la administración oral. También hay mezclas con otros nematicidas, sobre todo ivermectina. 17 R. Mecanismo de acción del Nitroxinil El Nitroxinil es un desacoplante de la fosforilación oxidativa en las mitocondrias, un proceso bioquímico que tiene lugar en las mitocondrias de todo tipo de células, en todo tipo de animales y plantas. S. Farmacocinética del Nitroxinil El Nitroxiniltiene un largo efecto residual. Su eliminación del cuerpo del hospedador a través de las heces y la orina dura cerca de un mes. T. Seguridad del Nitroxinil El periodo de espera para el sacrificio suele ser de 30 días (60 días si se usó contra Parafilaria a una dosis mayor). No está aprobado para uso en ganado en lactación cuya leche está destinada al consumo humano. 2.3 HIPOTESIS HIPÓTESIS NULA Ho = El Nitro 34 (Nitroxinilal 30%) y Trisan(Triclabendazol al 12%) son eficaces en el control de la Fasciola hepática en vacunos,Comunidad de Antaccocha – Huancavelica. HIPOTESIS ALTERNA Ha = El Nitro 34 (Nitroxinilal 30%) y Trizan (Triclabendazol al 12%)no son eficaces en el control de Fasciola hepática en vacunos,Comunidad de Antaccocha – Huancavelica. 2.4 DEFINICIÓN DE TÉRMINOS Fasciolosis.- Es una zoonosis parasitaria causada por el trematodo hermafrodita Fasciola hepática; afecta principalmente al ganado ovino, bovino, caprino, porcino, equino, otros animales herbívoros y accidentalmente al hombre. 18 Fasciola hepática.- Es una especie de platelmintotrematodo (duela) de la subclase Digenea, caracterizado por su forma lanceolada, con dos ventosas, una bucal y otra ventral. Vacuno.- Se aplica al animal mamífero rumiante, de una subfamilia de los bóvidos, de cuerpo grande y robusto, generalmente con cuernos, el hocico ancho y desnudo. Nitroxinil.- Es un análogo del hexaclorofeno, para uso en el ganado bovino, ovino, caprino y porcino, es un fasciolicida, altamente eficaz contra los adultos de Fasciola hepática, con cierta eficacia contra los estadios inmaduros (mayores de 6 semanas). Triclabendazol.-Es un antiparasitario interno benzimidazólico para uso sobre todo en bovinos y ovinos con efecto exclusivamente fasciolicida. Dosis.- Cantidad específica y graduada de una sustancia que se ingiere en cada toma. Eficacia.- Eshacerlo necesario para alcanzar o lograr los objetivos deseados o propuestos. Prevalencia.- Es el número de casos de una enfermedad o evento en una población y en un momento dado. Variable dependiente.- Es el objeto de estudio, sobre la cual se centra la investigación en general. Variable independiente.- Es aquella propiedad, cualidad o característica de una realidad, evento o fenómeno, que tiene la capacidad para influir, incidir o afectar a otras variables. Se llama independiente, porque esta variable no depende de otros factores para estar presente en esa realidad en estudio. 19 2.5 VARIABLES EN ESTUDIO VARIABLE DEPENDIENTE: Eficacia de los fármacos en el del control de la Fasciola hepática VARIABLEINDEPENDIENTE: Fasciola hepática, Las dosificaciones. - Nitroxinilal 30%. - Triclabendazol al 12%. - Grupo control INDICADORES Evaluar la eficacia de los fármacos. OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES VARIABLE DIMENSIÓN INDICADOR TÉCNICA O MEDIDA VARIABLE Se trabajo con 45 Eficacia de los fármacos La DEPENDIENTE vacunos Eficacia fármacos control de de los comunidad en el Antaccocha de Fasciola hepática la distribuidos de ; parasitaria 3 porla carga sedimentación expresada por presencia de 15 huevosde animales de las hepática en heces de cuales: INDEPENDIENTE 25 en producción 20 secas. vacuno. Carga parasitaria: Leve: + Moderado: ++ Grave: +++ 20 Dennis de modificado. grupos VARIABLE Los tratamientos la evaluados en función a la utilizadafue de cantidad en técnica Fasciola CAPITULO III: METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN 3. 1 ÁMBITO DE ESTUDIO El presente estudio de investigación se realizó en los ambientes del laboratorio de sanidad animal de la Universidad Nacional de Huancavelica, ubicado en la ciudad universitaria Paturpampa, del distrito, provincia y departamento de Huancavelica, a una altura aproximada de 3670 m.s.n.m. Se ubica a 74° 98’ longitud oeste y 12° 78’ latitud sur. El clima es frio, siendo la temperatura media anual que varía entre 5 y 8 °C y una precipitación pluvial de 829,6 mm. INEI(2008). Las muestras recolectadas para el trabajo de investigación, fue de la comunidad de Antaccocha aproximadamente a 3720 m.s.n.m. del distrito de Huancavelica donde se trabajo con productores dedicados a la producción de vacunos. 3. 2 TIPO DE INVESTIGACIÓN : Aplicada 3. 3 NIVEL DE INVESTIGACIÓN : Tecnológico 3. 4 METODO DE INVESTIGACIÓN : Experimental 3. 5 DISEÑO DE INVESTIGACIÓN : Experimental G O1 X O2; Donde: 21 G : Grupo control de vacunos O1 : Observación de huevos de fasciola hepática en heces de vacuno antes del control. X : Control en función a los fármacos. O2 : Observación de huevos de fasciola hepática en heces de vacuno postcontrol. 3. 6 LA POBLACIÓN, MUESTRA, MUESTREO 3.6.1 Población La comunidad de Antaccocha cuenta con aproximadamente 350 vacunos. 3.6.2 Muestra 45 vacunos hembras de entre 3 y 4 años de edad. 2.6.3 Muestreo El tamaño de muestra se determinó mediante la siguiente fórmula: n = Z2 x p x q x N____; E2 x (N-1) + Z2 x p x q Donde: n : Tamaño muestral. Z : Grado de confianza 95 %(1.96). p : Proporción de ganado que tiene fasciola hepática (97%). q : Proporción de ganado que no tiene fasciola hepática (3%). N : Población (350). E : Máximo error permisible 5%. 22 n= (1.96) 2 x 0.97 x 0.03 x 350______ (0.05)2 x (350-1) + (1.96)2 x 0.97 x 0.03 n = 40 animales Por lo tanto se seleccionarón al azar 45 animales hembras que resultaron positivo a Fasciola hepática mediante un análisis coproparasitologico. 3. 7 TÉCNICA E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS 1° Se realizó la selección y marcación con aretes de plástico de 45 vacunos infectados conFasciola hepática en condición natural. 2° Los vacunos que resultaron positivos a fasciola hepática al análisis coproparasitologico, fueron distribuidos en 3 grupos de 15 animales cada uno. En el grupo T1 los vacunos fueron administradosNitroxinil al 30%;a nivel intramuscular (de acuerdo a la posología del medicamento); en el grupo T2fuerondosificados con Triclabendazol al 12% por vía oral y en el grupo T3nofuerondosificados (grupo testigo) se mantuvieron positivos con infección de Fasciola hepática hasta el final del control. 3. 8 PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS A. Etapa pre experimental (Inicial) En la etapa inicial se colectó muestras de los 350 animales con que cuenta la Comunidad de Antaccocha, muestras de heces colectados directamente del recto del animal y colocados en bolsas de polietileno con su respectiva identificación y posterior análisis en el laboratorio. De estas muestras colectadas comprobamos que el 97% tenían presentes los huevos de este parasito llamado Fasciolahepática que se mostraba en el rango de moderado (++) a grave (+++). 23 Tito Y Vilca (2006); De acuerdo a la clasificación de rangos de infección en relación a la carga parasitaria expresada por la presencia de huevos de Fasciola hepática en 1 a 2 gr. de heces de vacunos se detalla: Leve (+) = 1-2 huevos de Fasciola hepática Moderado (++) = 3-4 huevos de Fasciola hepática Grave (+++) = 5 a más huevos de Fasciola hepática B. Identificación y administración del fármaco Los animales fueron identificados con aretes de plástico para su mejor registro. Además se evaluó el peso vivo de cada vacuno (mediante una cinta bovinometrica), para determinar la dosis que le correspondía a cada animal. Luego, previa sujeción del animal se administro los fármacos a nivel intramuscular (Nitroxinil) y por vía oral el Triclabendazol. Cuadro N° 01: Distribución de material experimental Fármaco Nº de Principio Dosis (ml/kg vía de animales Activo p.v.) administración T1 (Nitro 34) 15 Nitroxinil 1.5ml/50kg. P.v. Intramuscular T2 (Trisan al 12%) 15 T3(Grupo control) 15 total 45 GRUPO Triclabendazol 1 ml/10kg. P.v. oral Grupo control sin dosificación Fuente: Vilca y Tito, (2006). De acuerdo al cuadro Nº 1 se observa que el Nitro 34 (Nitroxinil al 30%), se administró por vía intramuscular(de acuerdo a la posología del fármaco) en dosis de 1.5ml/50kg. de peso vivoen los bovinos; para el Trisan (Triclabendazol al 12%)la dosificación del fármaco fue de 1 ml/10kg. de peso vivopor vía oral, y para el grupo control los vacunos no fueron dosificados,se mantuvieron positivos a Fasciola hepática hasta el final del control. 24 C. Recolección de muestras Las muestras fueron tomadas cada 7 días, desde el día 0 hasta el día 28, estas muestras de heces se colectaron directamente del recto del animal y colocadas en bolsas de polietileno con su respectiva identificación y posterior análisis en el laboratorio. D. Análisis de las muestras Las muestras recolectadas fueron analizados mediante el método de sedimentación de Dennis modificado, debido a que está recomendado para el diagnóstico de Fasciolahepática, la que tiene una sensibilidad del 80.85% y una especificidad de 98.69% Quispe, A. (1998), cuyo procedimiento se detalla a continuación: Se peso2 a 3 gr. de heces de una muestra aproximada de 100 gr. Posteriormente de desmenuzo con la ayuda del mortero y homogenizó con una vagueta, luego se agregó progresivamente 50 ml. de solución detergente. Con la ayuda de un filtro selogró precipitar en un tubo de prueba. Se dejósedimentar durante 10 – 12 minutos y luego decantar el sobrenadante. Se continuo suspendiendo el sedimento con otros 50 ml. de solución detergente y repetir el paso anterior. Al sedimento se agregó 4 – 6 gotas de lugol fuerte. Luego se agitóy evacuo en la placa Petri para observar con el microscopio Rojas, M.(1990). E. Evaluación de la eficacia El criterio para evaluar la eficacia en los grupos tratados con respecto al testigo sin dosificación, se realizo en base al número de muestras positivas que se obtuvo en los días evaluados, utilizando la formula siguiente de acuerdo a Tito y Vilca (2006), el cual se detalla a continuación: 25 Nº de animales - Nº de animales Positivos del GC positivos del GT Eficacia (%) = ------------------------------------------------------- x 100 Nº de animales positivos del GC Donde: GC = Grupo control GT = Grupo Tratado Rojas, J. (2006), describe el rango de clasificación de eficacia siendo: “muy eficaz (98 a 100%)”, “eficaz (90 a 98%)”, “moderadamente eficaz (80 a 90%)” e “insuficientemente eficaz (< a 80%)”; respectivamente para determinar el grado de eficacia; declarándose resistencia antihelmíntica (RA) cuando la eficacia es menor al 95 %. 3. 9 TÉCNICA DE PROCESAMIENTO Y ANÁLISIS DE DATOS En cada colección de muestras de heces se realizóevaluaciones de 15 repeticiones por tratamiento; para evaluar la eficacia de los fármacos (Nitroxinilal 30% y Triclabendazolal 12%)en el control de la Fasciola hepática en vacunos, se utilizó un diseño completamente al azar (DCA) después de la transformación de la función arcsen; siendo la variable a evaluar la eficacia en relación a la carga parasitaria, El modelo aditivo linealutilizado fue lo siguiente: Yij = µ +i +ij Dónde: Yij = % Eficacia de la j-ésima observación del i-esimo tratamiento, µ = Media poblacional, 26 i = Efecto del i-ésimo tratamiento. T1 : Nitroxinil al 30%. T2 : Triclabendazol al 12%. T3 : Grupo control sin dosificación ij = Error experimental. Para comprobar la diferencia estadística entre tratamiento y tratamiento se realizó la prueba de Tukey 27 CAPITULO IV: RESULTADOS Y DISCUSIÓN 4.1 PRESENTACIÓN DE RESULTADOS a. Evaluación de eficacia de los fármacos en porcentaje Cuadro N° 02. Eficacia del NITRO 34 (Nitroxinil al 30%) y del TRISAN (Triclabendazol al 12%) en el control de la Fasciola hepáticabovina a los 7, 14, 21 y 28 días post tratamiento, Mayo – Junio 2012. Grupo Días post Administración del fármaco 0 Nitro34 (Nitroxinil al 30%) Trisan (Triclabendazol 12%) Grupo control al 7 14 21 28 0% 40% 46.7% 60% 73.3% 0% 53.3% 66.7% 66.7% 80% 0% 0% 0% 0% 0% Fuente: Elaboración propia. Los resultados del cuadro N° 02, se observa quela eficaciaobtenida para los días 7, 14, 21 y 28 post tratamiento fue de: 40%, 46.7%, 60% y 73.3% para el grupo tratado con Nitro 34 (Nitroxinil al 30%), y de 53.3%, 66.7%, 66.7% y 80% para el grupo tratado con Trisan (Triclabendazol al 12%);respectivamente, para el grupo testigo, la eliminación de huevos durante el periodo de estudio siempre fue del 0% de eficacia, siendo todos los animales positivos. 28 De acuerdo a los resultados de este cuadro se determinó que el Trisan a la cuarta semana del control es moderadamente eficaz; y en el caso del Nitro 34 es insuficientemente eficaz. Rojas j. (2006). b. Eficacia de los fármacos en relación a los días de control Cuadro N° 03. Cantidad de animales infectados en relación al número de semanas,Mayo – Junio 2012. 0 Grupos NITRO 34 TRISAN CONTROL An. + An. 15 0 15 0 15 0 Días post Administración del antiparasitario 7 14 21 An. + An. - An. + An. - An. + An. 9 6 8 7 6 9 7 9 5 10 5 10 15 0 15 0 15 0 28 An. + An. 4 11 3 12 15 0 Fuente: Elaboración propia. An. +: Animales positivos a laFasciolahepática. An. -: Animales negativos a laFasciolahepática. Los resultados que se presentan en el cuadro N° 3, muestran el número de animales positivos (+) y negativos (-) post Administración del antiparasitario contra la Fasciola hepática, a los 7, 14, 21 y 28 días, podemos comprobar que el trisan resulta ser moderadamente eficaz que el Nitro 34 en el control de la Fasciola hepática en el día 28; para el caso del Nitro 34 se muestra 4 animales positivos y 11 animales libres de Fasciola hepática; para el Trisan se tiene 3 animales positivos y 12 animales libres de Fasciola hepática, y para el grupo control todos los animales se muestran positivos. 29 c. Eficacia de los fármacos en relación a la carga parasitaria expresada por huevos de Fasciola hepática en heces de vacunos Cuadro N° 04. Promedio, desviación estándar e intervalos de confianza. EFICACIA GRUPOS n Media desviación transformada T1(Nitro 34) 5 0.67 + T2(Trisan) 5 0.77 T3(G. control) 5 0.00 + estándar Intervalo de confianza para la media al 95% Límite inferior Límite superior 0.18 1.17 + 0.44a 0.22 1.32 + 0.00b 0.00 0.00 0.40a Fuente:Elaboración propia. Media transformada 𝑌 = ARCSENO√(X/100) * = Letras iguales no hay diferencia significativa.ANOVA: 0.008 (P<0.05). Los resultados del cuadro N° 04 de eficacia de los fármacos enrelación a la carga parasitaria expresada por Fasciola hepática en heces de vacunosmediante la transformación de la función arcseno obtenidos para el Nitro 34 fue de 0.67, para el Trisan de 0.77 y no se observaron eficacia para el caso del grupo control. Al ejecutar la prueba de homogeneidad de varianzas para la variable eficacia, se pudo determinar que no existe diferencia significativa (p > 0.05; α = 0.05) entre las medias de la eficacia trasformada al arcseno. (Ver cuadro N° 08del anexo). En el ANOVA (cuadro N° 07 del anexo) se puede apreciar que la interacción intergrupos si hay diferencia significativa (p < 0.05), influyendo el grupo control para la significancia. Al realizar la prueba de Tukey para la comparación de medias de eficacia de los fármacos enrelación a la carga parasitaria expresada por Fasciola hepáticaentre los 3 controles se determinó que entre los tratamientos T1 y T2no hay diferencia significativa (p > 0.05); sin embargo los tratamientos T1 Y T2 frente al T3 grupo control si hay diferencia significativa (p < 0.05), (ver cuadro N° 09 del anexo), 30 aseverando que el T2 es superior para el caso de eficacia frente a las 2 tratamientos restantes, siguiendo el T1 que es superior al T3. Grafico N° 01. Gráfico de líneas de las medias para la eficacia. Fuente: Elaboración propia. En el gráfico 1 se puede apreciar que el comportamiento del Nitro 34 y Trisan son similares y no muestran interacción ya que el grupo control ha influido en la significancia de la interacción de ambos fármacos. 31 Grafico N° 02. Gráfico de barras de las medias para laeficacia. Media de la eficaia COMPARACION DE MEDIAS DE LA EFICACIA PARA EL CONTROL DE Fasciola hepática 0,80 0,70 0,60 0,50 0,40 0,30 0,20 0,10 0,00 MEDIAS NITRO 34 TRISAN GRUPO CONTROL Tratamiento Fuente: Elaboración propia. En el grafico 2 se aprecia que el Trisan resulta ser de mayor eficacia frente al Nitro 34 y grupo control; y a su vez en Nitro 34 resulta ser mejor que el grupo control. 4.2 DISCUSIÓN De acuerdo a los resultados del cuadro N° 02 y 03, se encontró que el Nitro 34 resulto con una eficacia del 73.3%, muy parecido al Trisan con 80% de eficacia. Ninguno de los productos farmacológicos utilizados alcanzaron al 100% de eficacia, esta persistencia de infección podría deberse a la resistencia que tienen los trematodos de Huancavelica a los antiparasitarios. Según Núñez y Quiroz (1994), en México, estado Guadalajara, al evaluar la eficacia del Nitroxinilen dosis de 10 mg/kg de p.v., aplicadas cada 75 días, durante 7 meses (tres tratamientos), encontraron una eficacia del 43.74% a los 31 días del primer tratamiento, luego del segundo tratamiento la eficacia fue del 48.1% y después del tercer tratamiento, la eficacia fue del 94.3%, al comparar estos resultados con el trabajo de Huancavelica, en México 32 se observó que recién al tercer tratamiento obtuvo una eficacia mayor en 7 meses, pero en Huancavelica la mayor eficacia fue a los 28 días, contrastando con el autor se puede estimar que los trematodos en México son más resistentes que los trematodos de Huancavelica – Perú, esto podría deberse a que el Nitroxinil no es muy comercial en nuestra zona. El Trisan tampoco eliminó totalmente alos trematodos, situación comprobada por la presencia de huevos del parásito en las heces. Estos resultados concuerdan con lo señalado por Cruz et al. (1999);en México, estado de Chiapas, quien indica que después de aplicar 4 tratamientos con Triclabendazol a dosis de 12 mg/kg cada 56 días por 7 meses la eficacia fue de 78.58% al día 28; mientras que en el día 112 la eficacia fue de 85.72%, estos resultados coinciden con el trabajo realizado en Huancavelica – Perú, donde se obtuvo 80% al día 28.De igual manera,Ibarra et al.(2002) en México, señala que la eficacia del Triclabendazolen ganado bovino a los 14 y 21 días fue de 91% y 96% respectivamente, siendo estos resultados ligeramente superiores a nuestro trabajo. En Puno, Vilca y Tito (2006); al evaluar la eficacia del Triclabendazol al 15% y del Nitroxinil al 34%, en el tratamiento de Fasciolosis en 40 Bovinos criollos naturalmente infectado con Fasciola hepática procedentes del C.I.P. Chuquibambilla, los resultados obtenidos mostraron que la eficacia obtenida para los días 7, 14, 21 y 28 post tratamiento fue del 50%, 70%, 70% y 80% para el grupo tratado con Triclabendazol, y del 40%, 50%, 60 y 70% para el grupo tratado con Nitroxinil al 34%, coincidiendo con nuestro trabajo realizado en Huancavelica,ya que se puede observar que los resultados obtenidosson similares a los días 7, 14, 21 y 28 que fue de: 40%, 46.7%, 60% y 73.3% para el grupo tratado con Nitro 34 y de 53.3%, 66.7%, 66.7% y 80% para el grupo tratado con Trisan, esto se debería que en ambos lugares se trabajó con animales criollos naturalmente infectados. En Cajamarca, Rojas J. (2006); al evaluar el grado de eficacia y resistencia antihelmíntica de Fasciola hepática con Triclabendazolal 12 % en bovinos, realizo un 33 estudio en cinco predios de la campiña de Cajamarca, para lo cual utilizó 10 bovinos en cada predio infectados en forma natural conFasciolahepática, la dosis terapéutica utilizada fue de 12 mg/kgpv; en el día 28 post aplicación del fasciolicidaencontró 2,8%; 3,1%; 68%; 96% y 100% de eficacia en los predios “ Tartar”, “El Cortijo”, “San Vicente”, “Santa Catalina” y “Granja Porcón” respectivamente; el cual difiere con nuestro trabajo realizado en Huancavelica ya que al día 28 se logro un 80% de eficacia. El grado de eficacia del triclabendazol en el control de Fasciolahepáticaen los bovinos pueden ser distintos en los diferente predios, debido a muchos factores como: pisos ecológicos, tipos de pastizales, topografía del terreno y fisiología del animal, tal como muestra los resultados de Cajamarca y Huancavelica. Así mismo la resistencia de Fasciolahepatica está relacionado al uso excesivo del Triclabendazolpor muchos años. Cruz et al.(1999); en México, Pichucalco estado de Chiapas situado a 150 m.s.n.m.en verano y otoñodeterminó, la intensidad en la excreción de huevos, en ganado vacuno tratado con Triclabendazoldurante 7 meses. Se utilizaron 42 bovinos divididos en tres grupos de 14 animales cada uno. El grupo A cada 56 días, el B cada 112, el C fue el testigo. En el grupo A La media de huevos se redujo de 86.57 ± 10.5 (día 0), a 0 (día 168). En el grupo B la media de huevos se redujo de 82.85 ± 14 (día 0) a 0.85 ± 0.5 (día 168). En el grupo C la prevalencia fue del 100% durante el periodo de estudio. Al comparar nuestro trabajo con el estado de Chiapas,de a cuerdo a los resultados obtenidos en el cuadro Nº 4 , se observa para el grupo T1 que la media en relación a la carga parasitaria expresada por Fasciola hepática en heces de los vacunos redujo 0.67 + 0.40 desde el día 0 hasta el día 28, para el grupo T2 redujo 0.77 +0.44 desde el día 0 al día 28, y para el grupo T3 la prevalencia fue siempre del 100%,esto nos muestra que inicialmente nuestro trabajo en Huancavelica fue mejor, obteniendo mayor reducción de carga parasitaria, pero al final el trabajo realizado en México fue superior reduciendo al 100% los huevos en las heces de los vacunos, estas fluctuaciones podría deberse a que se utilizó un fármaco con mayor concentración del principio activo,época de evaluación, mayor tiempo de control de los fármacos y temperatura media anual. 34 CONCLUSIONES La eficacia del Nitro 34 (Nitroxinil al 30%), en relación a la carga parasitaria expresada por huevos de Fasciola hepática en heces de los vacunosestá en el rango de insuficientemente eficaz debido ya que pudo eliminar tan solo el 73.3%, de acuerdo a la clasificación de rangos que establece Rojas J. (2006),indicador que nos muestra que no es aceptable para utilizar en el control de la Fasciola hepática en los vacunos de la comunidad de Antaccocha. El Trisan (Triclabendazol al 12%), está en el rango de moderadamente eficaz, ya que elimino 80% de huevos del parasito hasta el día 28, pudiendo todavía ser utilizado en el control de la Fasciola hepáticaen los vacunos, pero que estadísticamente no hay diferencia significativa con el Nitro 34. El Nitro 34 (Nitroxinil al 30%) y El Trisan (Triclabendazol al 12%), presentan ligera resistencia a los trematodos (Fasciola hepática) en la comunidad de Antaccocha del distrito de Huancavelica, ya que estos fármacos no pudieron eliminar al 100% los huevos del parasito. 35 RECOMENDACIONES En futuras campañas de control de trematodos(Fasciola hepática) no se debe de utilizar el Nitro 34 (Nitroxinil al 30%) y el Trisan (Triclabendazol al 12%), debido a que estos fármacos no eliminan al 100% a los huevos del parásito en la comunidad de Antaccocha. Continuar con la ejecución de trabajos de investigación relacionado a esta materia, con mayor número de animales y de diversas zonas a fin de tener un mayor conocimiento de los fármacos eficaces para el control de Fasciola hepática el cual resulta de gran interés para el manejo y mejoramiento del ganado bovino. 36 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Acuña, R., (1998), Human fascioliasis: seasonal variations and female preponderance of complicated forms. J. Infect.; 37(1). p88-9. 2. Agatsuma, T., (2000), Molecular evidence of natural hybridization between Fasciola hepática and F. gigantica. Parasitol. Int., p231-38. 3. Angulo, F.(2005), Nematodosis gastrointestinales. En: Manual de ganadería doble propósito. 4. Besier, B., (2006), Newanthelmintics for livestock, the time is right. Trends in Parasitology 23(1): 20-24. 5. Blood, D., (2002), Manual de Medicina Veterinaria. 9ª ed. Editorial McGraw Hill. Interamericana. España. 6. Coburn, A.; et al., (1991),Vulnerabilidad y Evaluación de Riesgos. 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NITRO 34 TRISAN Análisis coproparasitólogico Día Día Día Día Día 0 7 14 21 28 - - - - 1 Hilton 330 9.9 ++ 2 Carlita 260 7.8 ++ - - - - 3 Cholita 275 8.25 ++ ++ + + + 4 Teresita 290 8.7 +++ ++ + + + 5 Lucha 310 9.3 ++ ++ + + - 6 Vaquilla 265 7.95 ++ - - - - 7 Matirinri 360 10.8 ++ ++ + - - 8 Jusca 285 8.55 ++ ++ - - - 9 Vaquillona 250 7.5 ++ - - - - 10 Ternera 290 8.7 ++ ++ + + + 11 Rosita 300 9 ++ - - - - 12 Carmela 350 10.5 ++ - - - - 13 Bondi 340 10.2 ++ ++ + + + 14 Yonkuntur 295 8.85 +++ ++ + + - 15 Mónica 300 9 +++ ++ + - - 1 Tancar 280 28 ++ + + + - 2 Lince 290 29 +++ + + + + 3 Pilpinto 300 30 ++ - - - - 4 Sandra 340 34 ++ ++ - - - 5 Pillca rojo 250 25 ++ - - - - 6 Pillca negro 265 26.5 ++ + - - - 7 Gitana 280 28 ++ - - - - 8 Solitaria 290 29 ++ - - - - 9 Pucacisa 275 27.5 +++ + + + - 10 Vicky 310 31 +++ - - - - 11 Gregoria 330 33 ++ + + + + 41 12 Traviesa 285 28.5 +++ + - - - 13 Lucha 260 26 ++ - + + + 14 Ingeniera 290 29 ++ ++ - - - 15 Princesa 300 30 ++ - - - - 1 Toledina 280 * ++ ++ ++ ++ ++ 2 Fredema 270 * +++ ++ +++ ++ ++ 3 Gusana 260 * ++ ++ ++ +++ +++ 4 Emilia 300 * ++ ++ ++ ++ ++ 5 Lenina 310 * ++ ++ ++ ++ ++ 6 María 330 * ++ ++ +++ +++ ++ 7 Luz 290 * ++ ++ +++ ++ ++ 8 Aurora 275 * +++ ++ ++ +++ ++ 9 Anchor 280 * ++ ++ ++ ++ +++ Grupo 10 Yola 250 * ++ ++ ++ ++ ++ control 11 Gaby 310 * ++ ++ ++ ++ ++ 12 Fiorela 320 * +++ ++ +++ ++ ++ 13 Ester 295 * ++ ++ ++ +++ +++ 14 Meche 285 * ++ ++ ++ ++ ++ 15 Liz 270 * ++ ++ ++ ++ ++ Fuente: elaboración propia. * No se aplicó ningún medicamento +, ++, +++ Grado de infección de la Fasciola hepática - Muestras negativas a la Fasciola hepática Cuadro N° 06. Eficacia del NITRO 34 (Nitroxinil al 30%) y del TRISAN (Triclabendazol al 12%) en el control de la fasciola hepática bovina a los 7, 14, 21 y 28 días post tratamiento, transformado al arcsen. Grupo Días post tratamiento 0 7 14 21 28 Nitro34 0 0.69 0.75 0.89 1.03 Trisan 0 0.82 0.96 0.96 1.11 Grupo control 0 0 0 0 0 Fuente: Elaboración propia. 42 Cuadro N° 07. Anova de un factor Eficacia Suma de Media cuadrados gl cuadrática Inter-grupos 1.736 2 .868 Intra-grupos 1.396 12 .116 Total 3.131 14 F Sig. 7.463 .008 Fuente: Elaboración propia. Cuadro N° 08. Prueba de homogeneidad de varianzas Eficacia Estadístico de Levene gl1 gl2 2,901 2 Sig. 12 ,094 Fuente: Elaboración propia. Cuadro N° 09. Diferencias significativas entre grupos de acuerdo a la prueba de Tukey para la eficacia de los fármacos. Variable dependiente: Eficacia Intervalo de confianza al 95% HSD de (I) (J) Diferencia de Tratamiento Tratamiento medias (I-J) Nitro 34 Trisan -,09800 ,21732 ,895 -,6778 ,4818 Grupo ,67200* ,21732 ,024 ,0922 1,2518 Nitro 34 ,09800 ,21732 ,895 -,4818 ,6778 Grupo ,77000* ,21732 ,010 ,1902 1,3498 Tukey Límite Error típico Sig. Límite inferior superior control Trisan control Grupo Nitro 34 -,67200* ,21732 ,024 -1,2518 -,0922 control Trisan -,77000* ,21732 ,010 -1,3498 -,1902 Fuente: Elaboración propia. *. La diferencia de medias es significativa al nivel 0.05. 43 ANEXO DE FOTOGRAFÍAS FOTO Nº 1: Fotos de los equipos utilizados en la presente investigación. FOTO Nº 2: Fotos de los materiales utilizados en la presente investigación. 44 FOTO Nº 3: Fármacos utilizados para la dosificación de los animales. FOTO Nº 4: Muestras de las heces de los vacunos colectadas de la comunidad de Antaccocha. 45 FOTO Nº 5: Aplicación del trisan (triclabendazol al 12%) vía oral. FOTO Nº 6: Aplicación del nitro 34 (nitroxinil al 30%) vía intramuscular. 46 FOTO Nº 7: Colección de las heces del ano del animal. FOTO Nº 8: Sujeción del animal para la colección de las heces del ano del vacuno. 47 FOTO Nº 9: Procedimiento del método de Dennis modificado en el laboratorio de sanidad animal de la universidad nacional de Huancavelica. Pesar 3 gr. de heces. FOTO Nº 10: Desmenuzar y homogenizar con una vagueta agregandoprogresivamente 50 ml. de solución detergente. 48 FOTO Nº 11: Filtrar en la copa de sedimentación. FOTO Nº 12: Dejar sedimentar durante 10 – 12 minutos y luego decantar el sobrenadante. 49 FOTO Nº 13: Resultados del proyecto de tesis. FOTO Nº 14: observación de los huevos de Fasciola hepáticateñidos con lugol. 50
