La base de los medios fue harina de trigo tipo 550 (harina todo uso, con
w 0,55 % de fracción de cenizas) con un contenido de proteína de 11 %
de masa seca y una fracción de gluten húmedo de 27 %. La fracción de
almidón (65 %
masa seca) de harina de trigo era degradable a glucosa antes de la
fermentación en dos pasos, por licuefacción del almidón y por
sacarificación de oligosacáridos (hidrólisis separada y fermentación).
Se prepararon tres tipos de medios.
Harina básica de trigo medio I. (sin gluten):
después de agregar 166 mL de agua del grifo a 200 g de harina de trigo,
se amasó durante 1 hora y se agregaron 208 mL de agua del grifo y
16,4 L de enzima Shearzyme® 500 L (Novo Nordisk, Dinamarca) para
el proceso de aglomeración de proteínas. La fracción de gluten se
separó por centrifugación (centrífuga Janetzky K70 D de 30 min, 3000
rpm), seguido de lavado con agua y dilución de la suspensión de
almidón hasta 1000 ml. Después de preparar el medio libre de gluten,
se llevaron a cabo las etapas de hidrólisis del almidón.
Medio básico de harina de trigo II. (con gluten):
Se suspendieron 200 g de harina de trigo en agua corriente hasta un
volumen final de 1000 mL, luego se procedió a la hidrólisis del almidón.
se realizaron los pasos.
Medio de harina de trigo optimizado (con gluten y extracto de levadura):
después de la separación del gluten del medio básico de harina de trigo
I, se añadieron gluten vital (Victory 2001 Ltd., Hungría) y extracto de
levadura (Reanal Budapest, Hungría) en una proporción adecuada, y el
Se llevó a cabo el proceso de licuefacción y sacarificación.
Los suplementos adicionales, es decir, extracto de levadura, licor de
maceración de maíz (Hungrana, Szabadegyháza, Hungría), autolisado
de levadura se añadieron a los medios básicos antes de la esterilización
en experimentos de matraces agitadores o antes de la hidrólisis en el
caso de biorreactores. El autolisado de levadura se elaboró a partir de
50 g de levadura de panadería (Lesaffre, Budapest, Hungría) mediante
la adición de una gota de tolueno, que ayuda a la desintegración de la
pared celular y la actividad autoproteolítica de las células de levadura.
The base of media was wheat flour type 550 (all-purpose flour, with w 0.55 % ash fraction) with a
protein content of 11 % dry mass and a wet gluten fraction of 27 %. The starch fraction (65 %
dry mass) of wheat flour was degradable to glucose before fermentation in two steps, by
liquefaction of starch and by saccharification of oligosaccharides (separate hydrolysis and
fermentation).
Three types of media were prepared. Basic wheat flour medium I. (without gluten):
after adding 166 mL tap water to 200 g wheat flour, 1 hour kneading and addition of 208 mL tap
water and 16.4 L Shearzyme® 500 L enzyme (Novo Nordisk, Denmark) was carried out for the protein
agglomeration process. Gluten fraction was separated by centrifugation (30 min, 3000, rpm Janetzky
K70 D centrifuge), followed by washing with water, and diluting the starch suspension up to 1000
mL. After preparing gluten-free medium starch hydrolysis steps were performed.
Basic wheat flour medium II. (with gluten):
200 g wheat flour was suspended in tap water to a final volume of 1000 mL, then starch hydrolysis
steps were performed.
Optimized wheat flour medium (with gluten and yeast extract): after gluten separation of basic
wheat flour medium I. vital gluten (Victory 2001 Ltd., Hungary)and yeast extract (Reanal Budapest,
Hungary) were added in an appropriate ratio, and the liquefaction and saccharification process was
carried out.
The additional supplements, i.e. yeast extract,corn steep liquor (Hungrana, Szabadegyháza,
Hungary), yeast autolysate were added to the basic media before sterilization in shaking flask
experiments or before hydrolysis in case of bioreactors. Yeast autolysate was made from 50 g baker’s
yeast (Lesaffre, Budapest, Hungary) by adding one drop of toluene, which helps the disintegration
of cell wall and the auto-proteolitic activity of yeast cells.
Una cepa de Propionibacterium acidipropionici
NRRL B 3569 fue
utilizado en este estudio. El cultivo se hizo crecer
en medio de cultivo de semillas.
contiene (g/l): glucosa (20), extracto de levadura
(10), tripticasa (5),
fosfato dihidrógeno de potasio (0,25) y sulfato de
manganeso
(0,05) a pH 6,5. Se transfirieron 5 ml de
suspensión celular a
95 ml de medio de cultivo de semilla estéril en
100 ml en anaeróbico
frascos de suero empaquetados para reducir la
presencia de oxígeno
y se incubó a 37 C durante 48 h.
