4.2 Calibradores y controles: Preparados a partir de una mezcla de suero humano, se suministran en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de EACA y 0,01% de benzamidina. 4.3 Buffer de reacción: Contiene 0,099% de azida sódica como conservante. 5 PRECAUCIONES Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), de los anticuerpos del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH1 y VIH2) y del virus de la hepatitis C. Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (USA) o aprobadas para el diagnóstico in vitro en la UE (Directiva 98/79/EC, Anexo II); sin embargo dichos ensayos no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos, incluyendo el uso de guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. Los procedimientos deben ser accesibles sólo a personal con formación específica. Kit Freelite Kappa Libre Optilite® Sólo para uso diagnóstico in vitro Código de Producto: LK016.OPT Producto fabricado por: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, Reino Unido www.bindingsite.co.uk ADVERTENCIA: Este producto contiene azida sódica y ProClin 300 y debe ser manipulado con precaución; se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. No trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas (especialmente si hay heridas). En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico. Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. Este producto debe ser utilizado por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación. Se recomienda observar estrictamente el procedimiento indicado. No se garantizan resultados válidos obtenidos utilizando parámetros diferentes que los indicados. Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables. 6 The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es Optilite y Freelite son marcas registradas de The Binding Site Group Limited (Birmingham, UK) en ciertos países. El resto de marcas y nombres de productos pueden ser marcas comerciales de sus respectivos propietarios. Aviso: debido a diferencias entre métodos de ensayo y especificidad de reactivos, para ciertos especímenes, pueden variar los resultados de cadenas ligeras libres kappa determinados con ensayos de distintos fabricantes o sobre diferentes sistemas. Los resultados de que deberá informarse al médico por parte del laboratorio deberán incluir la identidad del ensayo de cadenas ligeras libres kappa utilizado. Los valores obtenidos con diferentes ensayos o sistemas no se deberán usar de manera intercambiable. Si durante el proceso de monitorización de un paciente se cambia el ensayo o sistema utilizado para determinar los niveles de cadenas ligeras libres kappa, se deberán llevar a cabo análisis secuenciales adicionales. Antes de cambiar ensayos o sistemas, el laboratorio DEBERÁ confirmar los valores de base de los pacientes que se estén monitorizando de forma seriada. 1 RESUMEN Y EXPLICACIÓN Las moléculas de inmunoglobulinas se componen de dos cadenas pesadas idénticas (α, µ, γ, δ o ε) que definen el tipo de inmunoglobulina y dos cadenas ligeras idénticas (κ o λ). Cada cadena ligera está unida covalentemente a una cadena pesada y las dos cadenas pesadas están entre si enlazadas covalentemente en la región bisagra. En el suero de individuos sanos la mayoría de las cadenas ligeras se presentan ligadas a la cadena pesada. Sin embargo, también se encuentran niveles bajos de cadenas ligeras en el suero de individuos sanos, ya que las células plasmáticas las producen y segregan en exceso. El peso molecular de ambas cadenas ligeras es de aproximadamente 22,5kD. En el suero se encuentra la cadena ligera libre Kappa (κ) mayormente como monómero, la cadena ligera libre Lambda (λ) como dímero covalentemente ligado, con un peso molecular de aproximadamente 45kD. Esto conlleva a índices de filtración glomerular distintos para κ y λ, lo que podría ser una posible explicación para la relación κ / λ de 0,625 en el suero comparada con la relación κ ligada / λ ligada de 2,0. Una concentración elevada de las cadenas ligeras libres monoclonales en suero está asociada con la proliferación maligna de células plasmáticas (por ejemplo mieloma múltiple), AL amyloidosis y la deposición de cadenas ligeras. Con enfermedades autoinmunes como el SLE pueden aparecer unas concentraciones elevadas de cadenas ligeras libres policlonales en suero (1-13). 3 PRINCIPIO La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodíodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente en referencia a una curva de calibración almacenada en el instrumento. 4 Los kits no abiertos deben conservarse a 2-8°C y se pueden usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del kit. NO CONGELAR. El reactivo, el calibrador y los controles pueden conservarse refrigerados a 2-8°C durante tres meses como máximo tras la apertura, tomando precauciones para evitar la evaporación. El reactivo se puede conservar, sin proteger, hasta 30 días en el analizador Optilite, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 7 Las muestras de sangre deben proceder de extracciones venosas, y en el caso del plasma separarlo lo antes posible. La sangre se ha de dejar que coagule de modo natural y separar el suero lo antes posible para prevenir la hemólisis. El suero debe conservarse a 28°C si el ensayo se ejecuta dentro de 21 días. Para periodos más largos, se recomienda conservar el suero a -20°C o temperatura inferior (Ref 16). No congelar y descongelar los sueros más de una vez. Centrifugue las muestras que contengan precipitados antes de realizar el ensayo. Evitar el uso de sueros lipémicos, hemolizados o contaminados por microbios, o de muestras que contengan partículas. Es responsabilidad de cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio (Ref 14). 8 METODOLOGÍA 8.1 Material suministrado 8.1.1 8.1.2 8.1.3 8.1.4 1 x 100 Tests Optilite Kappa Free Reagent (reactivo Kappa Free Optilite) 1 x 2,7 mL Optilite Kappa Free Calibrator (calibrador Kappa Free Optilite) 1 x 1,6 mL Optilite Kappa Free High Control (control elevado Kappa Free Optilite) 1 x 1,6 mL Optilite Kappa Free Low Control (control bajo Kappa Free Optilite) 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 Materiales necesarios para la preparación de las muestras, como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento Optilite, código INS700.OPT Diluyente 1 Optilite, código de producto IK709 8.3 Preparación de los reactivos 8.2.2 8.2.3 Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. 8.4 Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. 8.4.1 Los parámetros de la prueba para este ensayo se indican en el de código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert016.OPT). Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: Dilución del analizador Optilite 1+1 1+9 1+99 1+999 1+9999 Rango aproximado (mg/L) 0,6 – 25,3 2,9 - 127 29 – 1270 290 – 12700 2900 - 127000 REACTIVOS 8.6 4.1 OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN Nota: Con el fin de poder realizar una interpretación completa de los resultados, se debería determinar la relación kappa libre/lambda libre. Por lo tanto las muestras deberían analizarse también con el Kit Freelite Lambda Libre Optilite de Binding Site (LK018.OPT). APLICACIÓN El Kit Freelite Kappa Libre Optilite está diseñado para la cuantificación in vitro de las cadenas ligeras libres kappa en suero, o en plasma obtenido con heparina litio o EDTA en el analizador Optilite de Binding Site. El análisis de las distintas cantidades de cadenas ligeras libres es de gran ayuda en el diagnóstico y monitorización del mieloma múltiple, neoplasias linfocíticas, la macroglobulinemia de Waldenström, AL amyloidosis, síndrome de deposición de cadenas ligeras y enfermedades del tejido conjuntivo como por ejemplo el lupus eritematoso sistémico (SLE), junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 2 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Reactivo látex: anticuerpo monoespecífico policlonal fijado a partículas látex poliestireno. Conservantes: 0,1% de ácido E-amino-n-caproico (EACA), 0,01% de benzamidina y 0,05% de ProClin. Interpretación de los resultados Los resultados del ensayo siempre se deben evaluar junto con el historial y exámenes clínicos del paciente, y los resultados de otras pruebas, incluyendo resultados previos de Freelite si están disponibles. Insert Code: INS016.OPT.E, Version: 11th August 2015, Page 1 of 2 Debido a la naturaleza de las proteínas monoclonales, algunas muestras pueden presentar no linealidad al ser analizadas a diferentes diluciones. Para poder cuantificar estas muestras de manera adecuada, se recomienda seguir el protocolo de dilución descrito en la sección 8.5 e informar del primer resultado plausible. Todos los inmunoensayos son susceptibles de mostrar exceso de antígeno. Para poder identificar muestras con exceso de antígeno, Optilite tiene un sistema de monitorización de la cinética de reacción. Cualquier muestra que presente una cinética de reacción atípica se marcará con “Alta actividad”. Las muestras que hayan generado una marca “Alta actividad” se volverán a analizar automáticamente a una dilución superior. Si una muestra da un resultado que se considera poco plausible, se debe volver a analizar. Consulte más información sobre la interpretación de marcas en el Manual del usuario Optilite (INS700.OPT) suministrado junto con el analizador. Aviso importante: Ningún sistema de comprobación automática puede identificar todos los casos de exceso de antígeno, y un porcentaje muy bajo de muestras con exceso de antígeno pueden no provocar la marca “Alta actividad”. Se recomienda que se adjunte lo siguiente a todos los resultados de cadenas ligeras libres. “La falta de detección del exceso de antígeno es poco habitual pero no se puede descartar. Si estos resultados de cadenas ligeras libres no concuerdan con otras determinaciones clínicas y de laboratorio, o si la muestra proviene de un paciente que ha demostrado previamente exceso de antígeno, el resultado se debe comprobar volviendo a analizar la muestra a una dilución más alta. Los resultados siempre se deben interpretar junto con otras pruebas de laboratorio y evidencias clínicas: cualquier anomalía se debe consultar con el laboratorio de análisis”. 12.2 y = 0,95x – 0,76 (mg/L) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,967 (calculado por regresión lineal) Se realizó un estudio comparativo mediante el análisis de 80 muestras emparejadas de suero y plasma con EDTA usando el kit Freelite Kappa Libre Optilite. El análisis de regresión de Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,95x – 0,23 (mg/L) CONTROL DE CALIDAD Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el manual de funcionamiento Optilite. El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. Las concentraciones de los controles suministrados están indicadas en el certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert016.OPT). Los resultados obtenidos sólo pueden aceptarse si los resultados de los controles entran dentro del ±20% de las concentraciones indicadas. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el test. Si aún después de la nueva calibración estuviera fuera de rango, deberá verificarse el instrumento y los parámetros programados. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al soporte técnico de su proveedor. 10 10.1 10.2 10.3 11 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO coeficiente de correlación r = 0,989 (calculado por regresión lineal) 12.4 12.5 13 1. 2. 3. 5. 6. 282 individuos sanos de edades comprendidas entre 20 y 90 años se sometieron a las pruebas realizadas mediante el análisis Freelite de Binding Site para BN™II* (11). El intervalo de referencia se calculó utilizando estadística no paramétrica y representa el 95% central de la población. 12.1 Conc. mediana (mg/L) 7,30 12,40 Mediana 0,60 Rango percentil 95 (mg/L) 3,30 - 19,40 5,71 - 26,30 Rango total 0,26 - 1,65 7. 8. 9. 10. CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO Precisión 11. El estudio de precisión se realizó siguiendo las pautas CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods. El estudio se llevó a cabo durante 21 días laborables, con 2 series al día. Un usuario midió los resultados de 8 muestras diferentes usando 1 lote de reactivo en 3 analizadores. Resumen de Precisión Intra-ensayo Inter-ensayo Media SD CV % SD CV % (units) Nivel 1* 2,48 0,07 2,6 0,02 0,8 Nivel 2 4,87 0,13 2,6 0,14 2,9 Nivel 3 8,17 0,17 2,1 0,14 1,7 Nivel 4 13,74 0,23 1,7 0,14 1,0 Nivel 5 23,19 0,34 1,5 0,42 1,8 Nivel 6 71,79 2,35 3,3 1,27 1,8 Nivel 7 105,13 5,52 5,2 0,00 0,0 Nivel 8** 329,21 13,32 4,0 5,67 1,7 * a la dilución de muestra 1+1 * a la dilución de muestra 1+99 Límite de cuantificación Linealidad Sustancias interferentes Se realizó un estudio siguiendo CLSI EP7-A2: Estudio de Interferencias en Química Clínica, Aprobadas en las directrices (CLSI documento EP7-A2). Se analizaron una muestra de suero normal, una muestra de suero con valor cercano al punto de decisión médica y una muestra de suero anormal. No se observaron interferencias significativas en los ensayos con bilirrubina (200mg/L) o triglicéridos (1000mg/dL). Intralipid y la hemoglobina muestran interferencias en muestras con 1mg/L de Cadena Ligera Libre Kappa. Por ello no deben ser analizadas, con este ensayo, muestras lipémicas o hemolíticas (véase sección 10.1 para más detalles). Intervalo de referencia en suero 12 (calculado por regresión lineal) El estudio de linealidad se basó en el documento CLSI EP6-A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures. La linearidad de este ensayo ha sido confirmada mediante diluciones seriadas de muestras de suero por encima del rango 2,60 – 140,34mg/L con desviaciones de linearidad <10%. 4. Los rangos indicados se han obtenido a partir de un número limitado de muestras y son únicamente orientativos. Los valores esperados pueden variar en función de la edad, sexo, tipo de muestra, dieta y localización geográfica. Cada laboratorio debe verificar la transmisibilidad de los valores esperados a la población a analizar y, si es necesario, establecer su propio rango de referencia. Relación Kappa/Lambda (y = plasma heparina de litio; x = suero) coeficiente de correlación r = 0,991 El límite de cuantificación (LoQ) de este ensayo se define como el punto inferior del rango de medición, 0,6mg/L. El estudio de validación del LoQ se basó en el documento CLSI EP17-A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation. VALORES ESPERADOS Kappa libre Lambda libre y = 1,06x – 0,40 (mg/L) No hay constancia de interferencia significativa con fármacos de uso habitual. Varias publicaciones ofrecen más información al respecto (Ref 15). Los tests turbidimétricos no son adecuados para la determinación de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos immunes circulantes (CICs) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. No debe realizarse el diagnóstico ni iniciarse un tratamiento basándose únicamente en la medida de la cadena ligera libre kappa. Deben tenerse en cuenta también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio Este ensayo no se ha validado en pediatría. Conc. media (mg/L) 8,36 13,43 Media 0,63 (y = plasma EDTA; x = suero) Se realizó un estudio comparativo mediante el análisis de 90 muestras emparejadas de suero y plasma heparina de litio usando el kit Freelite Kappa Libre Optilite. El análisis de regresión de Passing Bablok generó los siguientes resultados: 12.3 9 Estudio comparativo Se llevó a cabo un estudio comparativo analizando 208 muestras (135 muestras clínicas, 73 muestras normales) con el kit Freelite Kappa Libre Optilite y un kit alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing Bablok generó los siguientes resultados: Inter día SD CV % 0,09 3,5 0,32 6,6 0,34 4,1 0,55 4,0 0,61 2,7 2,13 3,0 4,48 4,2 13,18 4,0 Total SD CV % 0,11 4,4 0,38 7,7 0,41 5,0 0,61 4,5 0,82 3,5 3,42 4,8 7,11 6,7 19,58 5,9 12. 13. 14. 15. 16. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Cole PW, Durie BGM, Salmon SE (1978). Immunoquantitation of free light chain immunoglobulins: Application in multiple myeloma. J. Immunol. Meth. 19: 341349. Pescali E, Pezozoli A (1988). The clinical spectrum of pure Bence-Jones proteinuria. Cancer 61: 2408-2415. Solling K, Solling J, Romer FK (1981). Free light chains of immunoglobulins in serum from patients with rheumatoid arthritis, sarcoidosis, chronic infections and pulmonary cancer. Acta. Med. Scand. 209: 473-477. Drayson MT, Tang LX, Drew R, Mead GP, Carr-Smith HD and Bradwell AR (2001). Serum free light chain measurements for identifying and monitoring patients with non-secretory multiple myeloma. Blood 97: 2900-2902. Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP, Tang LX, Showell PJ, Drayson MT and Drew RL (2001). Highly sensitive, automated immunoassay for immunoglobulin free light chains in serum and urine. Clin. Chem. 47: 4, 673-680. Tang LX, Showell P, Carr-Smith HD, Mead GP, Drew R and Bradwell AR (2000). Evaluation of F(ab’)2-based latex-enhanced nephelometric reagents for free immunoglobulin light chains on the Behring Nephelometer ™ II. Clin. Chem 46:6, Suppl. 2000: 705, pA181. Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP, Harvey TC and Drayson MT (2003). Serum test for assessment of patients with Bence Jones myeloma. Lancet 361: 489-491. Abraham RS, Katzmann JA, Clark RJ, Bradwell AR, Kyle RA and Gertz MA (2003). Quantitative Analysis of Serum Free Light Chains: A new marker for the diagnostic evaluation of primary systemic amyloidosis. Am. J. Clin. Pathol. 119: (2): 274 – 278. Lachmann HJ, Gallimore JR, Gillmore JD, Carr-Smith HD, Bradwell AR, Pepys MB and Hawkins PN (2003). Outcome in systemic AL amyloidosis in relation to changes in concentration of circulating immunoglobulin free light chains following chemotherapy. Brit. J.Haem. 122: 78-84. Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP and Drayson MT (2002). Serum free light chain immunoassays and their clinical application. Clinical and Applied Immunology Reviews 3: 17 – 33. Katzmann JA, Clark RJ, Abraham RS, Bryant S, Lymp JF, Bradwell, AR and Kyle RA (2002). Serum reference intervals and diagnostic ranges for free kappa and free lambda immunoglobulin light chains: relative sensitivity for detection of monoclonal light chains. Clin. Chem. 48: 1437-1444. Bradwell AR (2009). Serum Free Light Chain Analysis, 5 th Edition. Publ. The Binding Site Ltd, Birmingham, UK. Mead GP, Carr-Smith HD, Drayson MT, Morgan GJ, Child JA and Bradwell AR (2004). Serum free light chains for monitoring multiple myeloma. Brit. J. Heamatol. 126, 348-354. CLSI GP44-A4, Vol. 30 No. 10, 5.5.1.1.1, May 2010, “Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests; Approved Guideline” Young D (2000). Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5th ed. AACC Press. Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2 2002 Insert Code: INS016.OPT.E, Version: 11th August 2015, Page 2 of 2 4.2 Calibradores y controles: Preparados a partir de una mezcla de suero humano, se suministran en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de EACA y 0,01% de benzamidina. 4.3 Buffer de reacción: Contiene 0,099% de azida sódica como conservante. 5 PRECAUCIONES Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), de los anticuerpos del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH1 y VIH2) y del virus de la hepatitis C. Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (USA) o aprobadas para el diagnóstico in vitro en la UE (Directiva 98/79/EC, Anexo II); sin embargo dichos ensayos no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos, incluyendo el uso de guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. Los procedimientos deben ser accesibles sólo a personal con formación específica. Kit Freelite® Lambda Libre Optilite® Sólo para uso diagnóstico in vitro Código de Producto: LK018.OPT Producto fabricado por: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, Reino Unido www.bindingsite.co.uk The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es Optilite & Freelite son marcas registradas de The Binding Site Group Limited (Birmingham, UK) en ciertos países. El resto de marcas y nombres de productos pueden ser marcas comerciales de sus respectivos propietarios. Aviso: debido a diferencias entre métodos de ensayo y especificidad de reactivos, para ciertos especímenes, pueden variar los resultados de cadenas ligeras libres lambda determinados con ensayos de distintos fabricantes o sobre diferentes sistemas. Los resultados de que deberá informarse al médico por parte del laboratorio deberán incluir la identidad del ensayo de cadenas ligeras libres lambda utilizado. Los valores obtenidos con diferentes ensayos o sistemas no se deberán usar de manera intercambiable. Si durante el proceso de monitorización de un paciente se cambia el ensayo o sistema utilizado para determinar los niveles de cadenas ligeras libres lambda, se deberán llevar a cabo análisis secuenciales adicionales. Antes de cambiar ensayos o sistemas, el laboratorio DEBERÁ confirmar los valores de base de los pacientes que se estén monitorizando de forma seriada. 1 APLICACIÓN El Kit Freelite Lambda Libre Optilite está diseñado para la cuantificación in vitro de las cadenas ligeras libres lambda en suero, o en plasma obtenido con heparina litio o EDTA en el analizador Optilite de Binding Site. El análisis de las distintas cantidades de cadenas ligeras libres es de gran ayuda en el diagnóstico y monitorización del mieloma múltiple, neoplasias linfocíticas, la macroglobulinemia de Waldenström, AL amyloidosis,, síndrome de deposición de cadenas ligeras y enfermedades del tejido conjuntivo como por ejemplo el lupus eritematoso sistémico (SLE), junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 2 4.1 Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables. 6 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Los kits no abiertos deben conservarse a 2-8°C y se pueden usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del kit. NO CONGELAR. El reactivo, el calibrador y los controles pueden conservarse refrigerados a 2-8°C durante tres meses como máximo tras la apertura, tomando precauciones para evitar la evaporación. El reactivo se puede conservar, sin proteger, hasta 30 días en el analizador Optilite, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 7 OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN Las muestras de sangre deben proceder de extracciones venosas, y en el caso del plasma separarlo lo antes posible. La sangre se ha de dejar que coagule de modo natural y separar el suero lo antes posible para prevenir la hemólisis. El suero debe conservarse a 2-8°C si el ensayo se ejecuta dentro de 21 días. Para periodos más largos, se recomienda conservar el suero a -20°C o temperatura inferior (Ref 16). No congelar y descongelar los sueros más de una vez. Centrifugue las muestras que contengan precipitados antes de realizar el ensayo. Evitar el uso de sueros lipémicos, hemolizados o contaminados por microbios, o de muestras que contengan partículas. Es responsabilidad de cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio (Ref 14). 8 METODOLOGÍA Nota: Con el fin de poder realizar una interpretación completa de los resultados, se debería determinar la relación kappa libre/lambda libre. Por lo tanto las muestras deberían analizarse también con el Kit Freelite Kappa Libre Optilite de Binding Site (LK016.OPT). 8.1 Material suministrado 8.1.1 8.1.2 8.1.3 8.1.4 1 x 100 Tests Optilite Lambda Free Reagent (reactivo Lambda Free Optilite) 1 x 2,8mL Optilite Lambda Free Calibrator (calibrador Lambda Free Optilite) 1 x 1,7mL Optilite Lambda Free High Control (control elevado Lambda Free Optilite) 1 x 1,7mL Optilite Lambda Free Low Control (control bajo Lambda Free Optilite) 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 Materiales necesarios para la preparación de las muestras, como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento Optilite, código INS700.OPT Diluyente 1 Optilite, código de producto IK709 8.3 Preparación de los reactivos 8.2.2 8.2.3 Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. 8.4 REACTIVOS Reactivo látex: anticuerpo monoespecífico policlonal fijado a partículas látex poliestireno. Conservantes: 0,1% de ácido E-amino-n-caproico (EACA), 0,01% de benzamidina y 0,05% de ProClin. Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. 8.4.1 Los parámetros de la prueba para este ensayo se indican en el de código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert018.OPT). Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición PRINCIPIO La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodíodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente en referencia a una curva de calibración almacenada en el instrumento. 4 Este producto debe ser utilizado por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación. Se recomienda observar estrictamente el procedimiento indicado. No se garantizan resultados válidos obtenidos utilizando parámetros diferentes que los indicados. RESUMEN Y EXPLICACIÓN Las moléculas de inmunoglobulinas se componen de dos cadenas pesadas idénticas (α, µ, γ, δ o ε) que definen el tipo de inmunoglobulina y dos cadenas ligeras idénticas (κ o λ). Cada cadena ligera está unida covalentemente a una cadena pesada y las dos cadenas pesadas están entre si enlazadas covalentemente en la región bisagra. En el suero de individuos sanos la mayoría de las cadenas ligeras se presentan ligadas a la cadena pesada. Sin embargo, también se encuentran niveles bajos de cadenas ligeras en el suero de individuos sanos, ya que las células plasmáticas las producen y segregan en exceso. El peso molecular de ambas cadenas ligeras es de aproximadamente 22,5kD. En el suero se encuentra la cadena ligera libre Kappa (κ) mayormente como monómero, la cadena ligera libre Lambda (λ) como dímero covalentemente ligado, con un peso molecular de aproximadamente 45kD. Esto conlleva a índices de filtración glomerular distintos para κ y λ, lo que podría ser una posible explicación para la relación κ / λ de 0,625 en el suero comparada con la relación κ ligada / λ ligada de 2,0. Una concentración elevada de las cadenas ligeras libres monoclonales en suero está asociada con la proliferación maligna de células plasmáticas (por ejemplo mieloma múltiple), AL amyloidosis y la deposición de cadenas ligeras. Con enfermedades autoinmunes como el SLE pueden aparecer unas concentraciones elevadas de cadenas ligeras libres policlonales en suero (Ref 1-13). 3 ADVERTENCIA: Este producto contiene azida sódica y ProClin 300 y debe ser manipulado con precaución; se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. No trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas (especialmente si hay heridas). En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico. Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: Dilución del analizador Optilite 1+1 1+7 1+79 1+799 1+7999 Rango aproximado (mg/L) 1,3 – 34,7 5,2 – 139 52 – 1390 520 – 13900 5200 - 139000 8.6 Interpretación de los resultados Los resultados del ensayo siempre se deben evaluar junto con el historial y exámenes clínicos del paciente, y los resultados de otras pruebas, incluyendo resultados previos de Freelite si están disponibles. Insert Code: INS018.OPT.E, Version: 11th August 2015, Page 1 of 2 Debido a la naturaleza de las proteínas monoclonales, algunas muestras pueden presentar no linealidad al ser analizadas a diferentes diluciones. Para poder cuantificar estas muestras de manera adecuada, se recomienda seguir el protocolo de dilución descrito en la sección 8.5 e informar del primer resultado plausible. Todos los inmunoensayos son susceptibles de mostrar exceso de antígeno. Para poder identificar muestras con exceso de antígeno, Optilite tiene un sistema de monitorización de la cinética de reacción. Cualquier muestra que presente una cinética de reacción atípica se marcará con “Alta actividad”. Las muestras que hayan generado una marca “Alta actividad” se volverán a analizar automáticamente a una dilución superior. Si una muestra da un resultado que se considera poco plausible, se debe volver a analizar. Consulte más información sobre la interpretación de marcas en el Manual del usuario Optilite (INS700.OPT) suministrado junto con el analizador. Aviso importante: Ningún sistema de comprobación automática puede identificar todos los casos de exceso de antígeno, y un porcentaje muy bajo de muestras con exceso de antígeno pueden no provocar la marca “Alta actividad”. Se recomienda que se adjunte lo siguiente a todos los resultados de cadenas ligeras libres. “La falta de detección del exceso de antígeno es poco habitual pero no se puede descartar. Si estos resultados de cadenas ligeras libres no concuerdan con otras determinaciones clínicas y de laboratorio, o si la muestra proviene de un paciente que ha demostrado previamente exceso de antígeno, el resultado se debe comprobar volviendo a analizar la muestra a una dilución más alta. Los resultados siempre se deben interpretar junto con otras pruebas de laboratorio y evidencias clínicas: cualquier anomalía se debe consultar con el laboratorio de análisis”. 9 CONTROL DE CALIDAD El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. Las concentraciones de los controles suministrados están indicadas en el certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert018.OPT). Los resultados obtenidos sólo pueden aceptarse si los resultados de los controles entran dentro del ±20% de las concentraciones indicadas. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el test. Si aún después de la nueva calibración estuviera fuera de rango, deberá verificarse el instrumento y los parámetros programados. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al soporte técnico de su proveedor. y = 1,01x + 0,28 (mg/L) 10.2 10.3 coeficiente de correlación r = 0,985 (calculado por regresión lineal) y = 1,04x – 0,80 (mg/L) coeficiente de correlación r = 0,996 (calculado por regresión lineal) y = 1,03x – 0,26 (mg/L) (y = plasma heparina de litio; x = suero) coeficiente de correlación r = 0,995 (calculado por regresión lineal) 12.3 Límite de cuantificación 12.4 Linealidad El estudio de linealidad se basó en el documento CLSI EP6-A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures. La linearidad de este ensayo ha sido confirmada mediante diluciones seriadas de muestras de suero por encima del rango 4.127 a 155.450mg/L con desviaciones de linearidad <10%. 12.5 Sustancias interferentes Se realizó un estudio siguiendo CLSI EP7-A2: Estudio de Interferencias en Química Clínica, Aprobadas en las directrices (CLSI documento EP7-A2). Se analizaron una muestra de suero normal, muestras de suero con valores cercano a los puntos de decisión médica y muestras de suero anormal. No se observaron interferencias significativas en los ensayos con Intralipidos (500mg/dL), bilirrubina (200mg/L), triglicéridos (1000mg/dL) o hemoglobina (5 g/L). No hay constancia de interferencia significativa con fármacos de uso habitual. Varias publicaciones ofrecen más información al respecto (Ref 15). LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los tests turbidimétricos no son adecuados para la determinación de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos immunes circulantes (CICs) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. No debe realizarse el diagnóstico ni iniciarse un tratamiento basándose únicamente en la medida de la cadena ligera libre. Deben tenerse en cuenta también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio Este ensayo no se ha validado en pediatría. 1. 2. 3. VALORES ESPERADOS Los rangos indicados se han obtenido a partir de un número limitado de muestras y son únicamente orientativos. Los valores esperados pueden variar en función de la edad, sexo, tipo de muestra, dieta y localización geográfica. Cada laboratorio debe verificar la transmisibilidad de los valores esperados a la población a analizar y, si es necesario, establecer su propio rango de referencia. 5. 6. Intervalo de referencia en suero 282 individuos sanos de edades comprendidas entre 20 y 90 años se sometieron a las pruebas realizadas mediante el análisis Freelite de Binding Site para BN™II* (Ref 11). El intervalo de referencia se calculó utilizando estadística no paramétrica y representa el 95% central de la población. Kappa libre Lambda libre Relación Kappa/Lambda Conc. media (mg/L) 8,36 13,43 Media 0,63 Conc. mediana (mg/L) 7,30 12,40 Mediana 0,60 Rango percentil 95 (mg/L) 3,30 - 19,40 5,71 - 26,30 Rango total 0,26 - 1,65 7. 8. 9. 10. *BN™ es una marca de Siemens Healthcare Diagnostics Inc. 12 (y = plasma EDTA; x = suero) Se realizó un estudio comparativo mediante el análisis de 108 muestras emparejadas de suero y plasma heparina de litio usando el kit Freelite Lambda Libre Optilite. El análisis de regresión de Passing Bablok generó los siguientes resultados: 4. 11 (y = Optilite; x = analizador predicado) Se realizó un estudio comparativo mediante el análisis de 84 muestras emparejadas de suero y plasma con EDTA usando el kit Freelite Lambda Libre Optilite. El análisis de regresión de Passing Bablok generó los siguientes resultados: 13 10.1 Estudio comparativo Se llevó a cabo un estudio comparativo analizando 191 muestras (97 muestras normales, 94 muestras clínicas) con el kit Freelite Lambda Libre Optilite y un kit alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing Bablok generó los siguientes resultados: El límite de cuantificación (LoQ) de este ensayo se define como el punto inferior del rango de medición, 1.3mg/L. El estudio de validación del LoQ se basó en el documento CLSI EP17-A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation. Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el manual de funcionamiento Optilite. 10 12.2 11. CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO 12.1 Precisión El estudio de precisión se realizó siguiendo las pautas CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods. El estudio se llevó a cabo durante 21 días laborables, con 2 series al día. Un usuario midió los resultados de 8 muestras diferentes usando 1 lote de reactivo en 3 analizadores. Resumen de Precisión Intra-ensayo Inter-ensayo Media SD CV % SD CV % (mg/L) Nivel 1* 4,66 0,10 2,1 0,13 2,7 Nivel 2 7,50 0,22 3,0 0,28 3,7 Nivel 3 14,41 0,23 1,6 0,21 1,5 Nivel 4 19,79 0,37 1,8 0,39 2,0 Nivel 5 29,96 0,60 2,0 0,53 1,8 Nivel 6 71,07 1,28 1,8 1,45 2,0 Nivel 7 115,64 3,97 3,4 4,85 4,2 Nivel 8** 335,41 4,62 1,4 10,70 3,2 * a la dilución de muestra 1+1 ** a la dilución de muestra 1+79 Inter día SD CV % 0,15 3,2 0,54 7,2 0,47 3,2 0,41 2,1 0,78 2,6 1,70 2,4 5,33 4,6 15,41 4,6 Total SD CV % 0,22 4,7 0,65 8,6 0,56 3,9 0,67 3,4 1,12 3,7 2,57 3,6 8,23 7,1 19,32 5,8 12. 13. 14. 15. 16. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Cole PW, Durie BGM, Salmon SE (1978). Immunoquantitation of free light chain immun0oglobulins: Application in multiple myeloma. J. Immunol. Meth. 19: 341349. Pescali E, Pezozoli A (1988). The clinical spectrum of pure Bence-Jones proteinuria. Cancer 61: 2408-2415. Solling K, Solling J, Romer FK (1981). Free light chains of immunoglobulins in serum from patients with rheumatoid arthritis, sarcoidosis, chronic infections and pulmonary cancer. Acta. Med. Scand. 209: 473-477. Drayson MT, Tang LX, Drew R, Mead GP, Carr-Smith HD and Bradwell AR (2001). Serum free light chain measurements for identifying and monitoring patients with non-secretory multiple myeloma. Blood 97: 2900-2902. Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP, Tang LX, Showell PJ, Drayson MT and Drew RL (2001). Highly sensitive, automated immunoassay for immunoglobulin free light chains in serum and urine. Clin. Chem. 47: 4, 673-680. Tang LX, Showell P, Carr-Smith HD, Mead GP, Drew R and Bradwell AR (2000). Evaluation of F(ab’)2-based latex-enhanced nephelometric reagents for free immunoglobulin light chains on the Behring Nephelometer ™ II. Clin. Chem 46:6, Suppl. 2000: 705, pA181. Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP, Harvey TC and Drayson MT (2003). Serum test for assessment of patients with Bence Jones myeloma. Lancet 361: 489-491. Abraham RS, Katzmann JA, Clark RJ, Bradwell AR, Kyle RA and Gertz MA (2003). Quantitative Analysis of Serum Free Light Chains: A new marker for the diagnostic evaluation of primary systemic amyloidosis. Am. J. Clin. Pathol. 119: (2): 274 – 278. Lachmann HJ, Gallimore JR, Gillmore JD, Carr-Smith HD, Bradwell AR, Pepys MB and Hawkins PN (2003). Outcome in systemic AL amyloidosis in relation to changes in concentration of circulating immunoglobulin free light chains following chemotherapy. Brit. J.Haem. 122: 78-84. Bradwell AR, Carr-Smith HD, Mead GP and Drayson MT (2002). Serum free light chain immunoassays and their clinical application. Clinical and Applied Immunology Reviews 3: 17 – 33. Katzmann JA, Clark RJ, Abraham RS, Bryant S, Lymp JF, Bradwell, AR and Kyle RA (2002). Serum reference intervals and diagnostic ranges for free kappa and free lambda immunoglobulin light chains: relative sensitivity for detection of monoclonal light chains. Clin. Chem. 48: 1437-1444. Bradwell AR (2009). Serum Free Light Chain Analysis, 5 th Edition. Publ. The Binding Site Ltd, Birmingham, UK. Mead GP, Carr-Smith HD, Drayson MT, Morgan GJ, Child JA and Bradwell AR (2004). Serum free light chains for monitoring multiple myeloma. Brit. J. Heamatol. 126, 348-354. CLSI GP44-A4, Vol. 30 No. 10, 5.5.1.1.1, May 2010, “Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests; Approved Guideline” Young D (2000). Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5th ed. AACC Press. Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2 2002. Insert Code: INS018.OPT.E, Version: 11th August 2015, Page 2 of 2 ADVERTENCIA: Este producto contiene azida sódica y debe ser manipulado con precaución; se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. No trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas (especialmente si hay heridas). En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico. Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. Este producto debe ser utilizado por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación. Se recomienda observar estrictamente el procedimiento indicado. No se garantizan resultados válidos obtenidos utilizando parámetros diferentes que los indicados. Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables. 6 Kit IgG Optilite® El kit no abierto debe conservarse a 2-8C y se puede usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del kit. NO CONGELAR. El calibrador y los controles pueden conservarse refrigerados a 2-8°C durante tres meses como máximo tras la apertura, tomando precauciones para evitar la evaporación. El reactivo se puede conservar, sin proteger, hasta 30 días en el analizador Optilite, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 7 Sólo para uso diagnóstico in vitro Código de Producto: NK004.OPT Producto fabricado por: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, Reino Unido www.bindingsite.co.uk The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es Optilite es una marca registrada de The Binding Site Group Limited (Birmingham, Reino Unido) en ciertos países. 1 2 PRINCIPIO La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodíodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente en referencia a una curva de calibración almacenada en el instrumento. 4 REACTIVOS 4.1 Antisuero: Se suministra en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de ácido E-amino-n-caproico (EACA), 1mM de ácido etilendiamino-tetraacético (EDTA) y 0,01% de benzamidina. 4.2 Calibradores y controles: Preparados a partir de una mezcla de suero humano, se suministran en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de ácido E-amino-n-caproico (EACA) y 0,01% de benzamidina. La concentración que aparece en el certificado de control de calidad se ha obtenido por comparación con el material de referencia internacional DA470k (Refs 3, 4). 4.3 5 8 METODOLOGÍA 8.1 Material suministrado 8.1.1 8.1.2 8.1.3 8.1.4 1 x 100 Tests Optilite IgG Reagent (reactivo IgG Optilite) 1 x 1,9mL Optilite IgG Calibrator (calibrador IgG Optilite) 1 x 1,5mL Optilite IgG High Control (control elevado IgG Optilite) 1 x 1,5mL Optilite IgG Low Control (control bajo IgG Optilite) 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 8.2.5 Materiales necesarios para la preparación de las muestras, como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento Optilite, código INS700.OPT Diluyente 1Optilite, código de producto IK709 Diluyente 2 Optilite, código de producto IK710 8.3 Preparación de los reactivos 8.2.2 8.2.3 Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. RESUMEN Y EXPLICACIÓN En adultos normales, IgG constituye aproximadamente el 75% del total de inmunoglobulinas en suero. Dentro de la clase IgG, el orden habitual de concentración de las 4 subclases es IgG1>IgG2>IgG3>IgG4, pero la concentración real de cada una de ellas puede variar de manera notable entre individuos. Las cuatro subclases IgG presentan diferencias considerables en sus propiedades, incluyendo la habilidad para fijar complemento, para enlazarse a macrófagos y pasar a través de la placenta. Los niveles anormales de una o más subclases pueden estar asociados con varios transtornos, incluyendo la anafilaxis, enfermedad autoinmune y enfermedades digestivas además de hipo e hiper-gammaglobulinemia (Ref 1). Este tema se ha revisado (Ref 2). 3 OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN Las muestras de sangre deben proceder de extracciones venosas, y en el caso del plasma separarlo lo antes posible. La sangre se ha de dejar que coagule de modo natural y separar el suero lo antes posible para prevenir la hemólisis. El suero puede conservarse a 2-8°C hasta un máximo de 8 días. Si el ensayo va a ejecutarse más tarde, se recomienda hacer alícuotas y congelar sin diluir a –20°C o temperatura inferior. No congelar y descongelar los sueros más de una vez. Centrifugue las muestras que contengan precipitados antes de realizar el ensayo. Es responsabilidad de cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio (Ref 5) APLICACIÓN El kit IgG Optilite está diseñado para la cuantificación in vitro de IgG en suero, o en plasma obtenido con heparina litio o EDTA en el analizador Optilite de Binding Site. La determinación de esta inmunoglobulina ayuda al diagnóstico de la metabolización anormal de proteínas y la falta de capacidad del organismo para oponer resistencia a agentes infecciosos. Este test se debe usar junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Buffer de reacción: Contiene 0,099% de azida sódica como conservante. PRECAUCIONES Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), de los anticuerpos del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH1 y VIH2) y del virus de la hepatitis C. Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (USA) o aprobadas para el diagnóstico in vitro en la UE (Directiva 98/79/EC, Anexo II); sin embargo dichos ensayos no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos, incluyendo el uso de guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. Los procedimientos deben ser accesibles sólo a personal con formación específica. 8.4 Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. 8.4.1 Los parámetros de la prueba para este ensayo se indican en el código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert004.OPT). Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: Dilución del analizador Optilite 1+0 1+9 1+39 9 Rango aproximado (g/L) 0,165 – 3,5 1,65 – 35,0 6,6 – 140 CONTROL DE CALIDAD Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el manual de funcionamiento Optilite. El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. Las concentraciones de los controles suministrados están indicadas en el certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCert004.OPT). Los resultados obtenidos sólo pueden aceptarse si los resultados de los controles entran dentro del ±15% de las concentraciones indicadas. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el test. Si aún después de la nueva calibración estuviera fuera de rango, deberá verificarse el instrumento y los parámetros programados. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al soporte técnico de su proveedor. Al realizar este ensayo junto con las subclases IgG, se puede obtener el valor de la suma de IgG añadiéndole los valores de las cuatro subclases, que debe estar dentro de un ±20% de la IgG total (ver 10.3). Insert Code: INS004.OPT.E, Version: 19th January 2015 (revision 1), Page 1 of 2 10 10.1 10.2 10.3 10.4 11 12.5 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los tests turbidimétricos no son adecuados para la determinación de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos immunes circulantes (CICs) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. No debe realizarse el diagnóstico ni iniciarse un tratamiento basándose únicamente en la medida de IgG. Deben tenerse en cuenta también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio. Si la suma de IgG (ver sección 9) queda fuera del rango aceptable, se debe repetir el análisis de las muestras a una dilución superior. No se puede excluir totalmente la potencial existencia de exceso de antígeno: en casos aislados, muestras con presencia de IgG monoclonal pueden dar resultados falsamente bajos debido al exceso de antígeno. Cuando esto ocurra o se sospeche, se recomienda analizar la muestra de nuevo a una dilución mayor para confirmar el resultado. No hay constancia de interferencia significativa con fármacos de uso habitual. Varias publicaciones ofrecen más información al respecto (Ref 6). 12.6 13 VALORES ESPERADOS 1. Rangos en suero de adultos 4. Número (n) 120 Valor medio (g/L) 10,926 Conc. mediana (g/L) 10,807 Rango percentil 95 (g/L) 6,103 – 16,16 2. 3. 5. 6. Rango en suero pediátrico Exceso de antígeno No se observó exceso de antígeno hasta el nivel de 5,5 veces el punto más alto de la curva de calibración a la dilución de muestra estándar 1+9. Esto equivale a 195,6 g/L. Existen casos aislados de muestras que pueden presentar exceso de antígeno por debajo de este nivel: vea la sección 10.4. Los rangos indicados se han obtenido a partir de un número limitado de muestras y son únicamente orientativos. Los valores esperados pueden variar en función de la edad, sexo, tipo de muestra, dieta y localización geográfica. Cada laboratorio debe verificar la transmisibilidad de los valores esperados a la población a analizar y, si es necesario, establecer su propio rango de referencia. IgG Sustancias interferentes Se realizó un estudio siguiendo CLSI EP7-A2: Estudio de Interferencias en Química Clínica, Aprobadas en las directrices (CLSI documento EP7-A2). Se analizaron una muestra de suero normal, una muestra de suero con valor cercano al punto de decisión médica y una muestra de suero anormal. No se observaron interferencias significativa en los ensayos con Chyle (1500FTU), bilirrubina (200mg/L) o hemoglobina (5g/L) REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Shakib, F & Stanworth D R (1980). Human IgG subclasses in health and disease (Part II). La Ricerca Clin. Lab. 10, 561-580. Schur, P H (1987), IgG subclasses – a review. Annals of Allergy 58, 89-99. Carr-Smith, H.D, Overton, J, Bradwell, A.R. (1997). IgG subclass value assignment to the protein reference preparation CRM470. Clin. Chem. Vol. 43, No. 56, PS238. Williams, D.R., Wilson, C.T., Carr-Smith, H.D. (2009). Assignment of IgG Subclass Values to the Protein Reference Preparation DA470k. Clin. Chem. Vol. 55, No. S6, PS C-90. CLSI GP44-A4, Vol. 30 No.10, 5.5.1.1.1, May 2010, “Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests; Approved Guideline”. Young D. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5 th ed. AACC Press, 2000. Estos rangos se han obtenido analizando la concentración de IgG de muestras de suero pediátrico procedentes de un hospital de Birmingham con los productos para inmunodifusión radial de Binding Site. Todas las concentraciones están expresadas en g/L. Edad 0-2 años 2-4 años 4-6 años 6-8 años 8-10 años 10-12 años 12-14 años 14-18 años 12 12.1 Número (n) 39 36 49 43 32 46 54 48 Valor medio (g/L) 6,640 7,770 9,280 8,860 9,700 10,200 10,500 10,100 Rango percentil 95 (g/L) 3,270 – 12,700 4,680 – 12,500 5,320 – 13,400 4,540 – 13,600 5,680 – 13,600 5,680 – 14,900 6,640 – 14,900 5,500 – 14,400 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO Precisión El estudio de precisión se realizó siguiendo las pautas CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods. El estudio se llevó a cabo durante 21 días laborables, con 2 series al día. Un usuario midió los resultados de 5 muestras diferentes usando 1 lote de reactivo en 3 analizadores. Resumen de Precisión Intra-ensayo Inter-ensayo Media SD CV% SD CV% (g/L) Nivel 1* 0,952 0,012 1,2 0,017 1,8 Nivel 2** 4,226 0,059 1,4 0,108 2,6 Nivel 3** 7,502 0,101 1,4 0,195 2,7 Nivel 4** 20,679 0,368 1,8 0,379 1,9 Nivel 5** 28,696 0,395 1,4 0,515 1,8 * a la dilución de muestra 1+0 ** a la dilución de muestra 1+9 12.2 Inter día SD CV% 0,026 2,7 0,143 3,4 0,263 3,6 0,592 2,9 0,972 3,4 Total SD CV% 0,033 3,5 0,189 4,5 0,342 4,7 0,793 4,0 1,168 4,1 Estudio comparativo Se llevó a cabo un estudio comparativo analizando 73 muestras (45 muestras clínicas, 28 muestras normales) con el kit IgG Optilite y un kit alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 1,01x – 0,28 (g/L) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,997 (calculado por regresión lineal) Se realizó un estudio comparativo mediante el análisis de 68 muestras emparejadas de suero y plasma EDTA usando el ensayo de Optilite IgG. El análisis de regresión de Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,95x + 0,19 (g/L) (y = plasma EDTA; x = suero) coeficiente de correlación r = 0,988 (calculado por regresión lineal) Se realizó un estudio comparativo mediante el análisis de 68 muestras emparejadas de suero y plasma con heparina de litio usando el ensayo de Optilite IgG. El análisis de regresión de Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,99x + 0,08 (g/L) (y = plasma heparina de litio; x = suero) coeficiente de correlación r = 0,986 (calculado por regresión lineal) 12.3 Límite de cuantificación El límite de cuantificación (LoQ) de este ensayo se define como el punto inferior del rango de medición, 0,166 g/L. El estudio de validación del LoQ se basó en el documento CLSI EP17-A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation. 12.4 Linealidad El estudio de linealidad se basó en el documento CLSI EP6-A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures. Se ha demostrado linealidad en el rango de analito 1.458 a 36.671 g/L con la dilución de muestra 1+9. Ecuación de regresión: y =1,0185x + 0,0757 (y = concentración medida, x = concentración teórica); r2 = 0,9993. Insert Code: INS004.OPT.E, Version: 19th January 2015 (revision 1), Page 2 of 2 Este producto debe ser utilizado por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación. Se recomienda observar estrictamente el procedimiento indicado. No se garantizan resultados válidos obtenidos utilizando parámetros diferentes que los indicados. Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables. 6 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD El kit no abierto debe conservarse a 2-8°C y se puede usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del kit. NO CONGELAR. El reactivo, el calibrador y los controles pueden conservarse refrigerados a 2-8°C durante tres meses como máximo tras la apertura, tomando precauciones para evitar la evaporación. El reactivo se puede conservar, sin proteger, hasta 30 días en el analizador Optilite, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 7 Kit IgA Optilite® Sólo para uso diagnóstico in vitro Código de Producto: NK010.OPT Producto fabricado por: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, Reino Unido www.bindingsite.co.uk The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es Optilite® es una marca registrada de The Binding Site Group Limited (Birmingham, Reino Unido) en ciertos países. Las muestras de sangre deben proceder de extracciones venosas, y en el caso del plasma separarlo lo antes posible. La sangre se ha de dejar que coagule de modo natural y separar el suero lo antes posible para prevenir la hemólisis. El suero puede conservarse a 2-8°C hasta un máximo de siete días. Si el ensayo va a ejecutarse más tarde, se recomienda hacer alícuotas y congelar sin diluir a -20°C o temperatura inferior. No congelar y descongelar los sueros más de una vez. No deben utilizarse muestras hemolizadas, lipémicas, con contaminación microbiana o muestras que contengan partículas. Centrifugue las muestras que contengan precipitados antes de realizar el ensayo. Es responsabilidad de cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio (Ref 7). 8 APLICACIÓN El kit IgA Optilite está diseñado para la cuantificación in vitro de IgA en suero, o en plasma obtenido con heparina litio o EDTA en el analizador Optilite de Binding Site. La cuantificación de IgA sirve de ayuda en el diagnóstico del metabolismo anómalo de proteínas y de la falta de capacidad del organismo para defenderse frente a agentes infecciosos. Este test se debe usar junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 2 RESUMEN Y EXPLICACIÓN La IgA es la inmunoglobulina principal en secreciones sero-mucosas, parte del sistema de defensa para superficies externas corporales. La forma monomérica está compuesta de dos cadenas pesadas alfa y dos cadenas ligeras. Se han identificado dos subclases de IgA en humanos, IgA1 e IgA2. Los valores normales de IgA en suero varían con la edad. Valores elevados de IgA se asocian con lactancia materna, infecciones crónicas, enfermedades hepáticas y mieloma. Niveles bajos pueden estar asociados con ciertas condiciones de pérdida proteica e inmunodeficiencia (Refs 1-6). 3 Material suministrado 8.1.1 8.1.2 8.1.3 8.1.4 1 x 100 Tests Optilite IgA Reagent (reactivo IgA Optilite) 1 x 1,9mL Optilite IgA Calibrator (calibrador IgA Optilite) 1 x 1,5mL Optilite IgA High Control (control elevado IgA Optilite) 1 x 1,5mL Optilite IgA Low Control (control bajo IgA Optilite) 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 8.2.5 Materiales necesarios para la preparación de las muestras, como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento Optilite, código INS700.OPT Diluyente 1 Optilite, código de producto IK709 Diluyente 2 Optilite, código de producto IK710 8.3 Preparación de los reactivos REACTIVOS 4.1 Antisuero: es monoespecífico y se suministra en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de ácido E-amino-n-caproico (EACA), 0,5% de BSA y 0,01% de benzamidina. 4.1 Calibradores y controles: Preparados a partir de una mezcla de suero humano, se suministran en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de EACA y 0,01% de benzamidina. La concentración que aparece en el certificado de control de calidad se ha obtenido por comparación con el material de referencia internacional ERM-DA470k. 4.2 Buffer de reacción: Contiene 0,099% de azida sódica como conservante. 5 Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. 8.4 Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. 8.4.1 Los parámetros de la prueba para este ensayo se indican en el código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert010.OPT). Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: PRINCIPIO La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodíodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente en referencia a una curva de calibración almacenada en el instrumento. 4 METODOLOGÍA 8.1 8.2.2 8.2.3 1 OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN PRECAUCIONES Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), de los anticuerpos del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH1 y VIH2) y del virus de la hepatitis C. Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (USA) o aprobadas para el diagnóstico in vitro en la UE (Directiva 98/79/EC, Anexo II); sin embargo dichos ensayos no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos, incluyendo el uso de guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. Los procedimientos deben ser accesibles sólo a personal con formación específica. ADVERTENCIA: Este producto contiene azida sódica y debe ser manipulado con precaución; se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. No trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas (especialmente si hay heridas). En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico. Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. Dilución del analizador Optilite 1+0 1+9 1+39 1+99 9 Rango aproximado (g/L) 0,02 – 0,70 0,20 – 7,00 0,80 – 28,00 2,00 – 70,00 CONTROL DE CALIDAD Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el manual de funcionamiento Optilite. El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. Las concentraciones de los controles suministrados están indicadas en el certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert010.OPT). Los resultados obtenidos sólo pueden aceptarse si los resultados de los controles entran dentro del ±15% de las concentraciones indicadas. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el test. Si aún después de la nueva calibración estuviera fuera de rango, deberá verificarse el instrumento y los parámetros programados. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al soporte técnico de su proveedor. 10 10.1 10.2 10.3 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los tests turbidimétricos no son adecuados para la determinación de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos immunes circulantes (CICs) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. No debe realizarse el diagnóstico ni iniciarse un tratamiento basándose únicamente en la medida de IgA. Deben tenerse en cuenta también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio. No se puede excluir totalmente la potencial existencia de exceso de antígeno: en casos aislados, muestras con presencia de IgA monoclonal pueden dar resultados falsamente bajos debido al exceso de antígeno. Cuando esto ocurra o se sospeche, se recomienda analizar la muestra de nuevo a una dilución mayor para confirmar el resultado. Insert Code: INS010.OPT.E, Version: 19th January 2015, Page 1 of 2 11 4. VALORES ESPERADOS Los rangos indicados se han obtenido a partir de un número limitado de muestras y son únicamente orientativos. Los valores esperados pueden variar en función de la edad, sexo, tipo de muestra, dieta y localización geográfica. Cada laboratorio debe verificar la transmisibilidad de los valores esperados a la población a analizar y, si es necesario, establecer su propio rango de referencia. Rango en suero de adultos Número (n) 258 IgA 5. 6. 7. Valor medio (g/L) 2,464 Conc. mediana (g/L) 2,297 Rango percentil 95 (g/L) 0,845-4,990 Rango en suero pediátrico (Ref 8) 8. 9. Bonilla F., Bernstein L., Khan D., Ballas Z., Chinen J., Frank M., Kobrynski L., Levinson A., Mazer B., Nelson R., Orange J., Routes J., Shearer W., Sorenson R. Practice parameter for the diagnosis and management of primary immunodeficiency. Annals of Allergy, Asthma & Immunology 2005; 94:S1-S63. Yel L. Selective IgA Deficiency. J Clin Immunol 2010; 30:10-16. Aghamohammadi A., Cheraghi T., Gharagozlou M., Movahedi M., Rezaei N., Yeganeh M., Parvaneh N., Abolhassani H., Pourpak Z., Moin M. IgA Deficiency: Correlation Between Clinical and Immunological Phenotypes. J Clin Immunol 2009; 29:130-136. CLSI GP44-A4, Vol. 30 No.10, 5.5.1.1.1, May 2010, “Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests; Approved Guideline”. Lockitch G., Halstead AC., Quigley G., MacCallum C. Age- and Sex Specific Pediatric Reference Intervals: Study Design Methods Illustrated by Measurement of Serum Proteins with Behring LN Nephelometer. Clin Chem 1988; 34:1618-1621. Young D. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5th ed. AACC Press, 2000. Rangos según el material de referencia para la estandarización de proteínas ERM-DA470k (sustituye a CRM470) (ref 8). Grupo de edad (años) Menos de 1 1-3 4-6 7-9 10-11 12-13 14-15 16-19 12 12.1 Número (n) 75 52 41 55 38 38 38 74 Rango percentil 95 (g/L) 0,00-0,83 0,20-1,00 0,27-1,95 0,34-3,05 0,53-2,04 0,58-3,58 0,47-2,49 0,61-3,48 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO Precisión El estudio de precisión se realizó siguiendo las pautas CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods. El estudio se llevó a cabo durante 21 días laborables, con 2 series al día. Un usuario midió los resultados de 5 muestras diferentes usando 1 lote de reactivo en 3 analizadores. Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 12.2 Media (g/L) 0,482 0,722 1,099 4,012 6,371 Resumen de Precisión Intra-ensayo Inter-ensayo SD CV % SD CV % 0,0131 2,7 0,0186 3,9 0,0119 1,6 0,0209 2,9 0,0209 1,9 0,0247 2,2 0,0369 0,9 0,0358 0,9 0,0629 1,0 0,0339 0,5 Inter día SD CV % 0,0207 4,3 0,0294 4,1 0,0537 4,9 0,0814 2,0 0,1634 2,6 Total SD CV % 0,0307 6,4 0,0380 5,3 0,0627 5,7 0,0963 2,4 0,1783 2,8 Estudio comparativo Suero: Se llevó a cabo un estudio comparativo analizando 121 muestras (62 muestras clínicas, 59 muestras normales) con el kit IgA Optilite y un kit alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 1,00x - 0,02 (g/L) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,991 (calculado por regresión lineal) Plasma: Se llevó a cabo un estudio comparativo analizando 74 muestras (37 heparina litio, 37 EDTA) con el kit IgA Optilite y un kit alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,94x + 0,09 (g/L) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,996 (calculado por regresión lineal) 12.3 Límite de cuantificación El límite de cuantificación (LoQ) de este ensayo se define como el punto inferior del rango de medición, 0,020 g/L. El estudio de validación del LoQ se basó en el documento CLSI EP17-A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation. 12.4 Linealidad El estudio de linealidad se basó en el documento CLSI EP6-A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures. Se ha demostrado linealidad en el rango de analito 0,142 a 8,565g/L con la dilución de muestra 1+9. Ecuación de regresión: y = 0,9849x + 0,0716 (y = concentración medida, x = concentración teórica); r2 = 0,9979 12.5 Sustancias interferentes Se realizó un estudio siguiendo CLSI EP7-A2: Estudio de Interferencias en Química Clínica, Aprobadas en las directrices (CLSI documento EP7-A2). Se analizaron una muestra de suero normal, una muestra de suero con valor cercano al punto de decisión médica y una muestra de suero anormal. No se observaron interferencias significativas en los ensayos con Chyle (1500FTU), bilirrubina (200 mg/L) o hemoglobina (5 g/L) No hay constancia de interferencia significativa con fármacos de uso habitual. Varias publicaciones ofrecen más información al respecto (Ref 9). 12.6 Exceso de antígeno No se observó exceso de antígeno hasta el nivel de 6 veces el punto más alto de la curva de calibración a la dilución de muestra estándar 1+9. Esto equivale a 40g/L. Existen casos aislados de muestras que pueden presentar exceso de antígeno por debajo de este nivel: vea la sección 10.3. 13 1. 2. 3. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Zilva, JF & Pannall, PR (1984) Clinical Chemistry in Diagnosis and Treatment. Publ. Lloyd–Luke (Medical Books) Ltd, London pp 348-352. Bradwell, AR (1995), IgG and IgA Subclasses in Disease. ISBN 0704416239 (available from The Binding Site Ltd.). European Society for Immunodeficiences (ESID); IgA deficiency diagnostic criteria www.ESID.org Insert Code: INS010.OPT.E, Version: 19th January 2015, Page 2 of 2 ADVERTENCIA: Este producto contiene azida sódica y debe ser manipulado con precaución; se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. No trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas (especialmente si hay heridas). En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico. Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. Este producto debe ser utilizado por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación. Se recomienda observar estrictamente el procedimiento indicado. No se garantizan resultados válidos obtenidos utilizando parámetros diferentes que los indicados. Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables. 6 Kit IgM Optilite® El kit no abierto debe conservarse a 2-8°C y se puede usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del kit. NO CONGELAR. El reactivo, el calibrador y los controles pueden conservarse refrigerados a 2-8°C durante tres meses como máximo tras la apertura, tomando precauciones para evitar la evaporación. El reactivo se puede conservar, sin proteger, hasta 30 días en el analizador Optilite, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 7 Sólo para uso diagnóstico in-vitro Código de Producto: NK012.OPT Producto fabricado por: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, Reino Unido www.bindingsite.co.uk The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es 1 APLICACIÓN El kit IgM Optilite está diseñado para la cuantificación in vitro de IgM en suero, o en plasma obtenido con heparina litio o EDTA en el analizador Optilite de Binding Site. La cuantificación de IgM sirve de ayuda en el diagnóstico del metabolismo anómalo de proteínas y de la falta de capacidad del organismo para defenderse frente a agentes infecciosos. Este test se debe usar junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 2 RESUMEN Y EXPLICACIÓN 3 Material suministrado 8.1.1 8.1.2 8.1.3 8.1.4 1 x 100 Tests Optilite IgM Reagent (reactivo IgM Optilite) 1 x 2,4 mL Optilite IgM Calibrator (calibrador IgM Optilite) 1 x 1,6 mL Optilite IgM High Control (control elevado IgM Optilite) 1 x 1,6 mL Optilite IgM Low Control (control bajo IgM Optilite) 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 8.2.5 Materiales necesarios para la preparación de las muestras, como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento Optilite, código INS700.OPT. Diluyente 1 Optilite, código de producto IK709. Diluyente 2 Optilite, código de producto IK710. 8.3 Preparación de los reactivos 8.2.2 8.2.3 Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. 4 REACTIVOS 4.1 Antisuero: Se suministra en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de ácido E-amino-n-caproico (EACA), 0,5% de BSA y 0,01% de benzamidina. 4.2 Calibradores y controles: Preparados a partir de una mezcla de suero humano, se suministran en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de EACA y 0,01% de benzamidina. La concentración que aparece en el certificado de control de calidad se ha obtenido por comparación con el material de referencia internacional DA470k. 4.3 5 Buffer de reacción: Contiene 0,099% de azida sódica como conservante. PRECAUCIONES 8.4.1 Los parámetros de la prueba para este ensayo se indican en el código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert012.OPT). Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: Dilución del analizador Optilite 1+9 1+19 1+399 9 Rango aproximado (g/L) 0,1- 3,8 0,2 – 7,5 4 - 150 CONTROL DE CALIDAD Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el manual de funcionamiento Optilite. El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. Las concentraciones de los controles suministrados están indicadas en el certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert012.OPT). Los resultados obtenidos sólo pueden aceptarse si los resultados de los controles entran dentro del ±15% de las concentraciones indicadas. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el test. Si aún después de la nueva calibración estuviera fuera de rango, deberá verificarse el instrumento y los parámetros programados. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al soporte técnico de su proveedor. 10 Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), de los anticuerpos del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH1 y VIH2) y del virus de la hepatitis C. Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (USA) o aprobadas para el diagnóstico in vitro en la UE (Directiva 98/79/EC, Anexo II); sin embargo dichos ensayos no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos, incluyendo el uso de guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. Los procedimientos deben ser accesibles sólo a personal con formación específica. Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. PRINCIPIO La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodíodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente en referencia a una curva de calibración almacenada en el instrumento. METODOLOGÍA 8.1 8.4 La IgM es la primera clase de inmunoglobulinas sintetizadas en respuesta a antígenos particulares. Cada unidad se compone de dos cadenas pesadas mu y dos cadenas ligeras. Una molécula IgM está formada por cinco unidades básicas unidas entre sí por una cadena J. Por lo tanto, la IgM es multivalente y es muy eficaz con antígenos polivalentes como las bacterias y los virus. La IgM también activa el complemento. En una inmunización activa la IgM aparece rápidamente en el suero, pero normalmente los niveles bajan al cabo de una semana, paralelamente al incremento en IgG. Los valores normales en suero varían con la edad. Los valores elevados se asocian con hepatitis, mieloma, macroglobulinemia de Waldenström y otras infecciones. Los niveles bajos pueden estar asociados con el síndrome de deficiencia de anticuerpos (Ref. 1). OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN Las muestras de sangre deben proceder de extracciones venosas, y en el caso del plasma separarlo lo antes posible. La sangre se ha de dejar que coagule de modo natural y separar el suero lo antes posible para prevenir la hemólisis. Las muestras pueden conservarse a 2-8°C hasta un máximo de 14 días. Si el ensayo va a ejecutarse más tarde, se recomienda congelar a -20°C o temperatura inferior. No congelar y descongelar las muestras más de una vez. No deben utilizarse muestras hemolizadas, lipémicas, con contaminación microbiana o muestras que contengan partículas. Centrifugue las muestras que contengan precipitados antes de realizar el ensayo. Es responsabilidad de cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio (Ref 2). 8 Optilite es una marca registrada de The Binding Site Group Limited (Birmingham, Reino Unido) en ciertos países. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD 10.1 10.2 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los tests turbidimétricos no son adecuados para la determinación de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos immunes circulantes (CICs) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. La marca “Blank Resp high” (respuesta elevada del blanco) indica que la muestra presenta turbidez. Todas las muestras que produzcan esta marca se deben examinar visualmente, y, si es necesario, centrifugar y volver a analizar. Se sabe que las muestras lipémicas interfieren con este ensayo, por lo tanto no se deben analizar. Insert Code: INS012.OPT.E, Version: 11th August 2015, Page 1 of 2 10.3 10.4 11 No debe realizarse el diagnóstico ni iniciarse un tratamiento basándose únicamente en la medida de IgM. Deben tenerse en cuenta también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio. No se puede excluir totalmente la potencial existencia de exceso de antígeno: en casos aislados, muestras con presencia de IgM monoclonal pueden dar resultados falsamente bajos debido al exceso de antígeno. Cuando esto ocurra o se sospeche, se recomienda analizar la muestra de nuevo a una dilución mayor para confirmar el resultado. VALORES ESPERADOS Los rangos indicados se han obtenido a partir de un número limitado de muestras y son únicamente orientativos. Los valores esperados pueden variar en función de la edad, sexo, tipo de muestra, dieta y localización geográfica. Cada laboratorio debe verificar la transmisibilidad de los valores esperados a la población a analizar y, si es necesario, establecer su propio rango de referencia. Rango en suero de adultos Número (n) IgM 12 12.1 Valor medio (g/L) Conc. mediana (g/L) 120 1,02 0,85 Rango percentil 95 (g/L) 0,35 – 2,42 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO Precisión El estudio de precisión se realizó siguiendo las pautas CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods. El estudio se llevó a cabo durante 21 días laborables, con 2 series al día. Un usuario midió los resultados de 5 muestras diferentes usando 1 lote de reactivo en 3 analizadores. Resumen de Precisión Intra-ensayo Inter-ensayo Inter día Media SD CV% SD CV% SD CV% (g/L) Nivel 1* 0,1880 0,0027 1,4 0,0044 2,3 0,0104 5,5 Nivel 2 0,3806 0,0044 1,2 0,0140 3,7 0,0157 4,1 Nivel 3 1,6483 0,0259 1,6 0,0435 2,6 0,0226 1,4 Nivel 4 2,6817 0,0317 1,2 0,0794 3,0 0,0425 1,6 Nivel 5** 10,2162 0,2589 2,5 0,3721 3,6 0,3495 3,4 * a la dilución de muestra 1+9 ** a la dilución de muestra 1+399 12.2 Total SD CV% 0,0116 6,2 0,0215 5,6 0,0554 3,4 0,0955 3,6 0,5724 5,6 Estudio comparativo Suero: Se llevó a cabo un estudio comparativo analizando 116 muestras (85 muestras clínicas, 31 muestras normales) con el kit IgM Optilite y un kit alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,98x – 0,02 (g/L) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,996 (calculado por regresión lineal) Plasma: Se llevó a cabo un estudio comparativo analizando 78 muestras (39 heparina litio, 39 EDTA) con el kit IgM Optilite y un kit alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing Bablok generó los siguientes resultados: 12.3 y = 1,07x – 0,02 (g/L) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,992 (calculado por regresión lineal) Límite de cuantificación El límite de cuantificación (LoQ) de este ensayo se define como el punto inferior del rango de medición, 0,10g/L. El estudio de validación del LoQ se basó en el documento CLSI EP17-A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation. 12.4 Linealidad El estudio de linealidad se basó en el documento CLSI EP6-A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures. Se ha demostrado linealidad en el rango de analito 0,198 a 7,662g/L con la dilución de muestra 1+19. Ecuación de regresión: y =0,9953x – 0,0253 (y = concentración medida, x = concentración teórica); r2 = 0,9993 12.5 Sustancias interferentes Se realizó un estudio siguiendo CLSI EP7-A2: Estudio de Interferencias en Química Clínica, Aprobadas en las directrices (CLSI documento EP7-A2). Se analizaron una muestra de suero normal, una muestra de suero con valor cercano al punto de decisión médica y una muestra de suero anormal. No se observaron interferencias significativas en los ensayos con triglicéridos (500 mg/dL), bilirrubina (200 mg/L) o hemoglobina (5 g/L). Intralipid mostró señales de interferencia, y se sabe que las muestras lipémicas interfieren con este ensayo. Por lo tanto las muestras lipémicas no deben de ser analizadas utilizando este ensayo (vea la sección 10.2). No hay constancia de interferencia significativa con fármacos de uso habitual. Varias publicaciones ofrecen más información al respecto (Ref 3). 12.6 Exceso de antígeno No se observó exceso de antígeno hasta el nivel de 10 veces el punto más alto de la curva de calibración a la dilución de muestra estándar 1+19. Esto equivale a 74.48g/L. Existen casos aislados de muestras que pueden presentar exceso de antígeno por debajo de este nivel: vea la sección 10.3. 13 1. 2. 3. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Zilva, JF & Pannall, PR (1984) Clinical Chemistry in Diagnosis and Treatment. Publ. Lloyd–Luke (Medical Books) Ltd, London pp 348-352. Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2 2002. Young D. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5th ed. AACC Press, 2000. Insert Code: INS012.OPT.E, Version: 11th August 2015, Page 2 of 2 Este producto debe ser utilizado únicamente por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación. Resulta esencial seguir estas instrucciones de forma estricta en todo momento. No se garantiza la validez de los resultados si se utilizan parámetros diferentes a los indicados en estas instrucciones. 6 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD El pack de reactivo no abierto debe conservarse a 2-8 °C y se puede usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la caja del kit. NO CONGELAR. El reactivo puede conservarse refrigerado a 2-8 °C durante tres meses como máximo tras la apertura, siempre que esté tapado para evitar la evaporación. El reactivo puede almacenarse, sin proteger, en el analizador Optilite durante un máximo de 30 días, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 7 Reactivo IgE Optilite® Solo para uso diagnóstico in vitro Código de producto: LK014.OPT Producto fabricado por: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, UK www.bindingsite.co.uk The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es Optilite es una marca registrada de The Binding Site Group Limited (Birmingham, Reino Unido) en determinados países. 1 APLICACIÓN El reactivo inmunoglobulina E (IgE) Optilite ® está diseñado para la cuantificación in vitro de IgE en suero o plasma (Li-hep y EDTA) en el analizador Optilite de Binding Site. La determinación de este parámetro se puede utilizar como ayuda al diagnóstico de enfermedades relacionadas con niveles elevados de IgE. Este test se debe usar junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 2 RESUMEN Y EXPLICACIÓN IgE es una de las 5 clases de inmunoglobulinas. La IgE humana tiene un peso molecular de unos 190 000 daltons y consta de dos cadenas pesadas idénticas y dos cadenas ligeras idénticas unidas mediante enlaces de disulfuro con una forma característica en Y. Una de las funciones de la IgE es la defensa específica contra los parásitos. En países desarrollados, desempeña un importante papel en la mediación de reacciones de hipersensibilidad de tipo inmediato (tipo I conforme a Coombs y Gell). Los antígenos polivalentes e inocuos (polen, ácaros) estimulan los linfocitos B en el punto de entrada para sintetizar IgE específica, la cual se une parcialmente a mastocitos. La vida media de IgE en plasma es 2-3 días, mientras que la IgE unida a mastocitos tiene una vida media de entre meses y años. Durante el siguiente contacto del antígeno con el mastocito sensibilizado, las IgE unidas se enlazan de forma cruzada. Las células pierden granulado y se liberan los mediadores (sobre todo la histamina), lo que causa, por ejemplo, los síntomas de la alergia al polen, el asma y el eczema atópico. Se aprecian niveles de IgE elevados en enfermedades atópicas, infecciones parasitarias, enfermedades con disfunciones de linfocitos T, determinados tumores malignos (vías respiratorias, tracto gastrointestinal), síndrome de hiper-IgE, enfermedad de injerto contra huésped y quemaduras graves. La medición de IgE total se realiza principalmente en el ámbito del diagnóstico de las enfermedades atópicas, en las que pueden darse niveles muy elevados de IgE. Las pruebas de IgE son una herramienta útil, sobre todo en el examen diagnóstico diferencial de cuadros clínicos con un posible trasfondo alérgico (ref. 1). 3 Las muestras deben proceder de extracciones venosas y, en caso de plasma, hay que separarlo lo más rápidamente posible. La sangre debe dejarse coagular naturalmente. Separar el suero lo más rápidamente posible para evitar la hemólisis. Las muestras pueden conservarse a 2-8 °C hasta un máximo de 1 semana. Si el ensayo va a ejecutarse más tarde, se recomienda hacer alícuotas y congelar a -20 °C o una temperatura inferior durante un máximo de 6 meses. No congelar y descongelar los sueros más de una vez. Evitar el uso de muestras lipémicas, hemolizadas o contaminadas por microbios, o de muestras que contengan partículas. Es responsabilidad de cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio (ref. 2). 8 8.1 Materiales suministrados 8.1.1 1 x 100 Tests Optilite IgE Reagent (Reactivo IgE Optilite para 100 pruebas) 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 8.2.5 8.2.6 Materiales necesarios para la preparación de las muestras como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado y operativo. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento de Optilite, código INS700.OPT Diluyente 1 Optilite, código de producto IK709 NC014.OPT Optilite IgE Calibrator (calibrador IgE Optilite NC014.OPT) NQ014.OPT Optilite IgE Controls (controles IgE Optilite NQ014.OPT) 8.3 Preparación de los reactivos 8.2.2 8.2.3 Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. 8.4 Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. 8.4.1 Los parámetros para este ensayo se indican en el código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcertR014.OPT). Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: Dilución del analizador Optilite 1+0 1+4 1+24 9 Rango aproximado (UI/mL) 10 – 200 50 - 1000 250 – 5000 CONTROL DE CALIDAD Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el Manual de funcionamiento de Optilite. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el ensayo. Si al volver a calibrar los valores del control medidos con la nueva curva siguen fuera del rango, deberán comprobarse el instrumento y los parámetros del ensayo antes de repetir el ensayo. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al servicio de asistencia técnica de su proveedor. 10 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO REACTIVOS 10.1 4.1 Reactivo: Se suministra en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099 % de azida sódica y buffer de glicina pH 7,3 <1,5 %. 4.2 Buffer de reacción: Se suministra en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099 % de azida sódica y buffer de glicina pH 8,3 <1,5 %. 5 METODOLOGÍA El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. PRINCIPIO La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodiodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente a partir de una curva de calibración almacenada en el instrumento. 4 OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN 10.2 PRECAUCIONES 10.3 ADVERTENCIA: Este producto contiene azida sódica, por lo que debe ser manipulado con precaución. Se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. No trague ni permita el contacto con la piel (especialmente si hay heridas) o las mucosas. En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico urgentemente. En caso de contacto prolongado de la azida sódica con tuberías de plomo y cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, enjuague con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. 10.4 Los ensayos turbidimétricos no son adecuados para la medición de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos inmunes circulantes (CIC) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. No puede darse un diagnóstico ni puede realizarse un tratamiento sobre la base de, únicamente, las cuantificaciones de IgE. Deben tenerse en cuenta también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio. No puede descartarse por completo la aparición potencial de exceso de antígeno; en casos poco frecuentes las muestras con IgE monoclonal pueden presentar resultados bajos falsos debido al exceso de antígeno. En los casos en los que exista esta posibilidad o sospecha, se recomienda volver a analizar la muestra a una dilución superior para confirmar el resultado (ref. 5). Se puede configurar la protección contra aviso de exceso de antígeno (marcas “Actividad elevada”) para los resultados de IgE. Insert Code: INSR014.OPT.E, Version: 23rd May 2018, Page 1 of 2 11 VALORES ESPERADOS El rango de referencia para este reactivo se ha extraído de una referencia bibliográfica (refs. 3, 4).Los valores esperados pueden variar según la edad, sexo, tipo de muestra, dieta y ubicación geográfica. Cada laboratorio debe verificar la transferibilidad de los valores esperados a su propia población y, de ser necesario, determinar su propio intervalo de referencia. Rango en suero de adulto Adultos límite superior del percentil 95 100 UI/ml Rangos en suero pediátrico Por edad 1-5 años 6 - 9 años 10 – 15 años 12 12.1 Límite superior del rango percentil 95 (UI/ml) 60 90 200 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO Precisión El estudio de precisión se basó en CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods. Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Resumen de precisión Intraensayo Valor medio Desviación Variación (UI/mL) estándar conc. % 84,1 2,6 3,04 101,8 2,4 2,32 257,4 4,1 1,59 754,6 10,6 1,51 Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Resumen de precisión Interensayo Valor medio Desviación Variación estándar conc. % (UI/mL) 84,8 4,5 5,34 106,0 3,4 3,19 240,3 4,0 1,66 754,6 19,7 2,61 12.2 Estudio comparativo Se realizó un estudio comparativo analizando 144 muestras de suero de adultos (incluyendo 59 muestras con niveles de analito dentro del intervalo de referencia) con el reactivo IgE Optilite y otro ensayo alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión de Passing-Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,97x + 0,59 (UI/ml) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,999 12.3 (calculado mediante regresión lineal) Límite de cuantificación El límite de cuantificación para este ensayo se define como el valor inferior del rango de medición, 10 UI/ml. El estudio de validación del límite de cuantificación se basó en CLSI EP17-A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation. 12.4 Linealidad Se llevó a cabo un estudio siguiendo el documento CLSI Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline (EP6A). La linealidad de este ensayo se ha confirmado analizando una serie de diluciones de una muestra de suero sobre el rango de 3,6 – 1351,5 UI/mL con desviaciones de linealidad <10 %. 12.5 Sustancias interferentes Se realizó un estudio siguiendo las pautas CLSI EP7-A2: Interference Testing in Clinical Chemistry, Approved Guideline(documento CLSI EP7-A2). No se observaron interferencias significativas en los ensayos al realizar pruebas con la dilución de muestra mínima con Intralípido (176 mg/dL), bilirrubina sin conjugar (68,5 mg/dL), billirrubina conjugada (74,3 mg/dL), factor reumatoide (446,5 UI/mL) o hemoglobina (575 UI/mL). Varias publicaciones ofrecen más información al respecto (ref. 6). 12.6 Exceso de antígeno No se observó exceso de antígeno hasta el nivel de 2 veces el punto más alto de la curva de calibración a la dilución de muestra estándar de 1+4. Esto equivale a 2000 UI/mL. En casos raros las muestras pueden presentar un exceso de antígeno por debajo de este nivel (ver la sección 10.3). 13 1. 2. 3. 4. 5. 6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 667-78,774-85. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples.1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001. p. 34-5. Ringel KP, Dati F, Buchholz E. IgE-Normalwerte bei Kindern. Laboratoriumsblätter 1982;32:26–34. Dati F, Ringel KP. Reference values for serum IgE in healthy non-atopic children and adults. Clin Chem 1982; 28:1556. Bakker AJ, Mücke M. Gammopathy interference in clinical chemistry assays: Mechanism, detection and prevention. Clin Chem Lab Med 2007; 45(9): 1240–1243. Young D. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5 th ed. AACC Press, 2000. Insert Code: INSR014.OPT.E, Version: 23rd May 2018, Page 2 of 2 heridas). En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico. Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. Este producto debe ser utilizado por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación. Se recomienda observar estrictamente el procedimiento indicado. No se garantizan resultados válidos obtenidos utilizando parámetros diferentes que los indicados. Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables. 6 Kit C3c Optilite® El kit no abierto debe conservarse a 2-8°C y se puede usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del kit. NO CONGELAR. El reactivo, el calibrador y los controles pueden conservarse refrigerados a 2-8°C durante tres meses como máximo tras la apertura, tomando precauciones para evitar la evaporación. El reactivo se puede conservar, sin proteger, hasta 30 días en el analizador Optilite, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 7 Sólo para uso diagnóstico in-vitro Código de Producto: NK023.OPT Producto fabricado por: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, Reino Unido www.bindingsite.co.uk The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es 1 APLICACIÓN El kit C3c Optilite está diseñado para la cuantificación in vitro de C3c en suero, o en plasma obtenido con heparina litio o EDTA en el analizador Optilite de Binding Site. Este test se debe usar junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 2 RESUMEN Y EXPLICACIÓN C3c es el mayor componente de las proteínas del sistema del complemento, y tiene un papel fundamental en la respuesta inflamatoria y la funcionalidad del sistema inmune. C3c se produce en el hígado, y por consiguiente la reducción en la actividad del complemento está asociada con fallo hepático severo (Ref 1). Las deficiencias de C3c, ya sean adquiridas o no, se manifiestan como infecciones graves recurrentes como infecciones pneumocócicas o meningocócicas, y un aumento en el riesgo de lupus eritematoso sistémico (Refs 1, 2). La deficiencias de C3c también está asociada con glomerulonefritis y vasculitis, así como otras condiciones. Los niveles elevados de complemento y las concentraciones de C3c en suero son indicadores de reacciones inflamatorias agudas y condiciones inflamatorias sin tratar como la artritis reumatoide (Ref 2, 3). 3 PRINCIPIO La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodíodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente en referencia a una curva de calibración almacenada en el instrumento. 4 Antisuero: Se suministra en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de ácido E-amino-n-caproico (EACA) y 0,01% de benzamidina. 4.2 Calibradores y controles: Preparados a partir de una mezcla de suero humano, se suministran en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de EACA y 0,01% de benzamidina. La concentración que aparece en el certificado de control de calidad se ha obtenido por comparación con el material de referencia internacional DA470k. 4.3 5 Buffer de reacción: Contiene 0,099% de azida sódica como conservante. PRECAUCIONES Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), de los anticuerpos del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH1 y VIH2) y del virus de la hepatitis C. Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (USA) o aprobadas para el diagnóstico in vitro en la UE (Directiva 98/79/EC, Anexo II); sin embargo dichos ensayos no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos, incluyendo el uso de guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. Los procedimientos deben ser accesibles sólo a personal con formación específica. ADVERTENCIA: Este producto contiene azida sódica y debe ser manipulado con precaución; se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. No trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas (especialmente si hay METODOLOGÍA 8.1 Material suministrado 8.1.1 8.1.2 8.1.3 8.1.4 1 x 100 Tests Optilite C3c Reagent (reactivo C3c Optilite) 1 x 2,0 mL Optilite C3c Calibrator (calibrador C3c Optilite) 1 x 1,5 mL Optilite C3c High Control (control elevado C3c Optilite) 1 x 1,5 mL Optilite C3c Low Control (control bajo C3c Optilite) 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 8.2.5 Materiales necesarios para la preparación de las muestras, como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento Optilite, código INS700.OPT Diluyente 1 Optilite, código de producto IK709 Diluyente 2 Optilite, código de producto IK710 8.3 Preparación de los reactivos 8.2.2 8.2.3 Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. 8.4 Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. 8.4.1 Los parámetros de la prueba para este ensayo se indican en el código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert023.OPT). Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: Dilución del analizador Optilite 1+0 1+9 1+19 REACTIVOS 4.1 OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN Las muestras de sangre deben proceder de extracciones venosas, y en el caso del plasma separarlo lo antes posible. La sangre se ha de dejar que coagule de modo natural y separar el suero lo antes posible para prevenir la hemólisis. El suero puede conservarse a 2-8°C hasta un máximo de tres días. Si el ensayo va a ejecutarse más tarde, se recomienda hacer alícuotas y conservar a –20°C o temperatura inferior durante un máximo de 8 días. No congelar y descongelar los sueros más de una vez. Las diluciones de la muestra deben prepararse el mismo día del ensayo. Nota: Durante el almacenamiento, el C3 se transforma en C3c. Dependiendo de las condiciones de almacenamiento, el nivel de C3c en las muestras frescas es inferior al nivel de muestras que llevan más tiempo almacenadas (Ref. 4). No deben utilizarse muestras hemolizadas, lipémicas, con contaminación microbiana o muestras que contengan partículas. Centrifugue las muestras que contengan precipitados antes de realizar el ensayo. Es responsabilidad de cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio (Ref 5). 8 Optilite es una marca registrada de The Binding Site Group Limited (Birmingham, Reino Unido) en ciertos países. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD 9 Rango aproximado (g/L) 0,025 – 0,3 0,25 – 3,0 0,5 – 6,0 CONTROL DE CALIDAD Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el manual de funcionamiento Optilite. El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. Las concentraciones de los controles suministrados están indicadas en el certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert023.OPT). Los resultados obtenidos sólo pueden aceptarse si los resultados de los controles entran dentro del ±15% de las concentraciones indicadas. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el test. Si aún después de la nueva calibración estuviera fuera de rango, deberá verificarse el instrumento y los parámetros programados. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al soporte técnico de su proveedor. 10 10.1 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los tests turbidimétricos no son adecuados para la determinación de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos immunes circulantes (CICs) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. Insert Code: INS023.OPT.E, Version: 11th August 2015 (rev. 2), Page 1 of 2 10.2 10.3 La marca “Blank Resp high” (respuesta elevada del blanco) indica que la muestra presenta turbidez. Todas las muestras que produzcan esta marca se deben examinar visualmente, y, si es necesario, centrifugar y volver a analizar. Se sabe que las muestras lipémicas interfieren con este ensayo, por lo tanto no se deben analizar. No debe realizarse el diagnóstico ni iniciarse un tratamiento basándose únicamente en la medida de C3c. Deben tenerse en cuenta también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio. 11 4. 5. 6. Okumura N, Nomura M, Tada T et al., Effects of sample storage on serum C3 assay by immunonephelometry, Clinical Laboratory Science, 1990, vol. 3/1 p5457. CLSI GP44-A4, Vol. 30 No.10, 5.5.1.1.1, May 2010, “Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests; Approved Guideline”. Young D. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5 th ed. AACC Press, 2000. VALORES ESPERADOS Los rangos indicados se han obtenido a partir de un número limitado de muestras y son únicamente orientativos. Los valores esperados pueden variar en función de la edad, sexo, tipo de muestra, dieta y localización geográfica. Cada laboratorio debe verificar la transmisibilidad de los valores esperados a la población a analizar y, si es necesario, establecer su propio rango de referencia. Rango en suero de adultos Número (n) 120 C3c 12 12.1 Valor medio (g/L) Conc. mediana (g/L) Rango percentil 95 (g/L) 1,168 1,151 0,811-1,570 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO Precisión El estudio de precisión se realizó siguiendo las pautas CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods. El estudio se llevó a cabo durante 21 días laborables, con 2 series al día. Un usuario midió los resultados de 5 muestras diferentes usando 1 lote de reactivo en 3 analizadores. Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 12.2 Media (g/L) 0,5150 0,6411 0,9803 1,3785 2,7046 Resumen de Precisión Intra-ensayo Inter-ensayo Inter día SD CV % SD CV % SD CV % 0,0166 3,2 0,0139 2,7 0,0179 3,5 0,0095 1,5 0,0226 3,5 0,0217 3,4 0,0233 2,4 0,0351 3,6 0,0251 2,6 0,0268 1,9 0,0445 3,2 0,0516 3,7 0,0636 2,4 0,0814 3,0 0,0776 2,9 Total SD CV % 0,0281 5,4 0,0327 5,1 0,0491 5,0 0,0732 5,3 0,1292 4,8 Estudio comparativo Se llevó a cabo un estudio comparativo analizando 105 muestras (77 muestras clínicas, 28 muestras normales) con el kit C3c Optilite y un kit alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,94x + 0,04 (g/L) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,988 (calculado por regresión lineal) Se realizó un estudio comparativo mediante el análisis de 74 muestras emparejadas de suero y plasma con heparina de litio usando el ensayo de Optilite C3c. El análisis de regresión de Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 1,01x - 0,02 (g/L) (y = plasma con heparina de litio; x = suero) coeficiente de correlación r = 0,976 (calculado por regresión lineal) Se realizó un estudio comparativo mediante el análisis de 73 muestras emparejadas de suero y plasma con EDTA usando el ensayo de Optilite C3c. El análisis de regresión de Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,95x + 0,00 (g/L) (y = plasma con EDTA; x = suero) coeficiente de correlación r = 0,976 (calculado por regresión lineal) 12.3 Límite de cuantificación El límite de cuantificación (LoQ) de este ensayo se define como el punto inferior del rango de medición, 0,025g/L. El estudio de validación del LoQ se basó en el documento CLSI EP17-A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation. 12.4 Linealidad El estudio de linealidad se basó en el documento CLSI EP6-A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures. Se ha demostrado linealidad en el rango de analito 0,249 a 3,892g/L con la dilución de muestra 1+9. Ecuación de regresión: y = 1,0195x + 0,049 (y = concentración medida, x = concentración teórica); r2 = 0,9976. 12.5 Sustancias interferentes Se realizó un estudio siguiendo CLSI EP7-A2: Estudio de Interferencias en Química Clínica, Aprobadas en las directrices (CLSI documento EP7-A2). Se analizaron una muestra de suero con valor cercano al punto de decisión médica y una muestra de suero anormal. No se observaron interferencias significativas en los ensayos con, triglicérido (1000mg/dL), bilirrubina (200mg/L) o hemoglobina (5g/L). Intralipid mostró señales de interferencia, y se sabe que las muestras lipémicas interfieren con este ensayo. Por lo tanto las muestras lipémicas no deben de ser analizadas utilizando este ensayo (vea la sección 10.2). No hay constancia de interferencia significativa con fármacos de uso habitual. Varias publicaciones ofrecen más información al respecto (Ref 6). 12.6 Exceso de antígeno No se observó exceso de antígeno hasta el nivel de 10 veces el punto más alto de la curva de calibración a la dilución de muestra estándar 1+9. Esto equivale a 31,5g/L. 13 1. 2. 3. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Unsworth, D. J. (2008) Complement deficiency and disease. Journal of Clinical Pathology, 61. p1013-1017. Chapel, H. Haeney, M. (1984) Essentials of Clinical Immunology. Blackwell Synergy, Oxford, UK. Milford-Ward, E. A. Riches, P. G. Fifield, R. Smith, A. M. (1999) Protein Reference Unit Handbook of Clinical Immunochemistry. Publ PRU Publications, Sheffield, UK. p76-77. Insert Code: INS023.OPT.E, Version: 11th August 2015 (rev. 2), Page 2 of 2 Este producto debe ser utilizado por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación. Se recomienda observar estrictamente el procedimiento indicado. No se garantizan resultados válidos obtenidos utilizando parámetros diferentes que los indicados. Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables. 6 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD El kit no abierto debe conservarse a 2-8°C y se puede usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del kit. NO CONGELAR. El reactivo, el calibrador y los controles pueden conservarse refrigerados a 2-8°C durante tres meses como máximo tras la apertura, tomando precauciones para evitar la evaporación. El reactivo se puede conservar, sin proteger, hasta 30 días en el analizador Optilite, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 7 Kit C4 Optilite® Sólo para uso diagnóstico in-vitro Código de Producto: NK025.OPT Producto fabricado por: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, Reino Unido www.bindingsite.co.uk Las muestras de sangre deben proceder de extracciones venosas, y en el caso del plasma separarlo lo antes posible. La sangre se ha de dejar que coagule de modo natural y separar el suero lo antes posible para prevenir la hemólisis. El suero puede conservarse a 2-8°C hasta un máximo de tres días. Si el ensayo va a ejecutarse más tarde, se recomienda hacer alícuotas y conservar a -20°C o temperatura inferior durante un máximo de 3 meses. No congelar y descongelar los sueros más de una vez. Las diluciones de la muestra deben prepararse el mismo día del ensayo. Nota: Durante el almacenamiento, el C4 se degrada. Dependiendo de las condiciones de almacenamiento, las cantidades de C4 en muestras frescas son mayores que en muestras que llevan más tiempo almacenado. No deben utilizarse muestras hemolizadas, lipémicas, con contaminación microbiana o muestras que contengan partículas. Centrifugue las muestras que contengan precipitados antes de realizar el ensayo. Es responsabilidad de cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio (Ref 4). 8 The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es Optilite es una marca registrada de The Binding Site Group Limited (Birmingham, Reino Unido) en ciertos países. 1 El kit C4 Optilite está diseñado para la cuantificación in vitro de C4 en suero, o en plasma obtenido con heparina litio o EDTA en el analizador Optilite de Binding Site. Este test se debe usar junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 2 RESUMEN Y EXPLICACIÓN REACTIVOS Antisuero: Se suministra en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de ácido E-amino-n-caproico (EACA) y 0,01% de benzamidina. 4.2 Calibradores y controles: Preparados a partir de una mezcla de suero humano, se suministran en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de EACA y 0,01% de benzamidina. La concentración de C4 que aparece en el certificado de control de calidad se ha obtenido por comparación con el material de referencia internacional DA470k. 5 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 8.2.5 Materiales necesarios para la preparación de las muestras, como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento Optilite, código INS700.OPT Diluyente 1Optilite, código de producto IK709 Diluyente 2 Optilite, código de producto IK710 8.3 Preparación de los reactivos 8.4 Buffer de reacción: Contiene 0,099% de azida sódica como conservante. PRECAUCIONES Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), de los anticuerpos del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH1 y VIH2) y del virus de la hepatitis C. Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (USA) o aprobadas para el diagnóstico in vitro en la UE (Directiva 98/79/EC, Anexo II); sin embargo dichos ensayos no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos, incluyendo el uso de guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. Los procedimientos deben ser accesibles sólo a personal con formación específica. ADVERTENCIA: Este producto contiene azida sódica y debe ser manipulado con precaución; se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. No trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas (especialmente si hay heridas). En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico. Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. 8.4.1 Los parámetros de la prueba para este ensayo se indican en el código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert025.OPT). Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: Dilución del analizador Optilite 1+0 1+9 1+19 9 4.1 4.3 1 x 100 Tests Optilite C4 Reagent (reactivo C4 Optilite) 1 x 2,1mL Optilite C4 Calibrator (calibrador C4 Optilite) 1 x 1,5mL Optilite C4 High Control (control elevado C4 Optilite) 1 x 1,5mL Optilite C4 Low Control (control bajo C4 Optilite) PRINCIPIO La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodíodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente en referencia a una curva de calibración almacenada en el instrumento. 4 Material suministrado 8.1.1 8.1.2 8.1.3 8.1.4 Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. C4 es un componente del sistema del complemento, y tiene un papel fundamental en la respuesta inflamatoria y la funcionalidad del sistema inmune. Se produce en el hígado, y por consiguiente la reducción en la actividad del complemento está asociada con insuficiencia hepática severo (Ref 1). Las deficiencias de C4 se manifiestan como infecciones recurrentes estafilocócicas y estreptocócicas, y en enfermedades del complejo inmune como glomerulonefritis, vasculitis, y endocarditis (Ref 2). Las deficiencias heredadas o adquiridas de inhibidor de C1q causan descensos en los niveles de C4 en suero, lo cual está asociado con angioedema (Ref 3). 3 METODOLOGÍA 8.1 8.2.2 8.2.3 APLICACIÓN OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN Rango aproximado (g/L) 0,0064 – 0,09 0,064 – 0,9 0,128 –1,8 CONTROL DE CALIDAD Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el manual de funcionamiento Optilite. El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. Las concentraciones de los controles suministrados están indicadas en el certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert025.OPT). Los resultados obtenidos sólo pueden aceptarse si los resultados de los controles entran dentro del ±15% de las concentraciones indicadas. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el test. Si aún después de la nueva calibración estuviera fuera de rango, deberá verificarse el instrumento y los parámetros programados. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al soporte técnico de su proveedor. 10 10.1 10.2 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los tests turbidimétricos no son adecuados para la determinación de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos immunes circulantes (CICs) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. La marca “Blank Resp high” (respuesta elevada del blanco) indica que la muestra presenta turbidez. Todas las muestras que produzcan esta marca se deben examinar visualmente, y, si es necesario, centrifugar y volver a analizar. Se sabe que las muestras lipémicas interfieren con este ensayo, por lo tanto no se deben analizar. Insert Code: INS025.OPT.E, Version: 11th August 2015 (Rev 1), Page 1 of 2 10.3 11 No debe realizarse el diagnóstico ni iniciarse un tratamiento basándose únicamente en la medida de C4. Deben tenerse en cuenta también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio. 5. Young D. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5 th ed. AACC Press, 2000. VALORES ESPERADOS Los rangos indicados se han obtenido a partir de un número limitado de muestras y son únicamente orientativos. Los valores esperados pueden variar en función de la edad, sexo, tipo de muestra, dieta y localización geográfica. Cada laboratorio debe verificar la transmisibilidad de los valores esperados a la población a analizar y, si es necesario, establecer su propio rango de referencia. Rango en suero de adultos C4 Número (n) 120 12 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO 12.1 Valor medio (g/L) 0,241 Conc. mediana (g/L) 0,234 Rango percentil 95 (g/L) 0,129-0,392 Precisión El estudio de precisión se realizó siguiendo las pautas CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods. El estudio se llevó a cabo durante 21 días laborables, con 2 series al día. Un usuario midió los resultados de 5 muestras diferentes usando 1 lote de reactivo en 3 analizadores. Resumen de Precisión Intra-ensayo Inter-ensayo Inter día Media SD CV% SD CV% SD CV% (g/L) Nivel 1* 0,019 0,0004 2,4 0,0005 2,8 0,0006 3,2 Nivel 2 0,079 0,003 3,9 0,0033 4,1 0,0062 7,9 Nivel 3 0,171 0,0029 1,7 0,0068 3,9 0,0087 5,1 Nivel 4 0,482 0,0053 1,1 0,0083 1,7 0,0136 2,8 Nivel 5 0,728 0,0083 1,1 0,0114 1,6 0,0199 2,7 * a la dilución de muestra 1+0 12.2 Total SD CV% 0,0009 4,9 0,0077 9,7 0,0114 6,7 0,0169 3,5 0,0244 3,4 Estudio comparativo Se llevó a cabo un estudio comparativo analizando 196 muestras (163 muestras clínicas, 28 muestras normales) con el kit C4 Optilite y un kit alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,98x - 0,01 (g/L) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,990 (calculado por regresión lineal) Se realizó un estudio comparativo mediante el análisis de 60 muestras emparejadas de suero y plasma EDTA usando el ensayo de Optilite C4. El análisis de regresión de Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,98x + 0,00 (g/L) (y = plasma EDTA; x = suero) coeficiente de correlación r = 0,981 (calculado por regresión lineal) Se realizó un estudio comparativo mediante el análisis de 60 muestras emparejadas de suero y plasma con heparina de litio usando el ensayo de Optilite C4. El análisis de regresión de Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,97x + 0,01 (g/L) (y = plasma heparina de litio; x = suero) coeficiente de correlación r = 0,974 (calculado por regresión lineal) 12.3 Límite de cuantificación El límite de cuantificación (LoQ) de este ensayo se define como el punto inferior del rango de medición, 0,0064g/L. El estudio de validación del LoQ se basó en el documento CLSI EP17-A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation. 12.4 Linealidad El estudio de linealidad se basó en el documento CLSI EP6-A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures. Se ha demostrado linealidad en el rango de analito 0,049 a 0,952g/L con la dilución de muestra 1+9. Ecuación de regresión: y = 0,9398x + 0,0226 (y = concentración medida, x = concentración teórica); r2 = 0,9953. 12.5 Sustancias interferentes Se realizó un estudio siguiendo CLSI EP7-A2: Estudio de Interferencias en Química Clínica, Aprobadas en las directrices (CLSI documento EP7-A2). Se analizaron una muestra de suero normal, una muestra de suero con valor cercano al punto de decisión médica y una muestra de suero anormal. No se observaron interferencias significativa en los ensayos con bilirrubina (200mg/L) o hemoglobina (5g/L). Intralipid y triglicéridos mostró señales de interferencia, y se sabe que las muestras lipémicas interfieren con este ensayo. Por lo tanto las muestras lipémicas no deben de ser analizadas utilizando este ensayo (vea la sección 10.2). No hay constancia de interferencia significativa con fármacos de uso habitual. Varias publicaciones ofrecen más información al respecto (Ref 7). 12.6 Exceso de antígeno No se observó exceso de antígeno hasta el nivel de 5 veces el punto más alto de la curva de calibración a la dilución de muestra estándar 1+9. Esto equivale a 4,76 g/L. 13 1. 2. 3. 4. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Unsworth, D. J. (2008) Complement deficiency and disease. Journal of Clinical Pathology, 61. 1013-1017. Chapel, H. Haeney, M. (1984) Essentials of Clinical Immunology. Blackwell Synergy, Oxford, UK. Milford-Ward, E. A. Riches, P. G. Fifield, R. Smith, A. M. (1999) Protein Reference Unit Handbook of Clinical Immunochemistry. Publ PRU Publications, Sheffield, UK. pp76-77. CLSI GP44-A4, Vol. 30 No.10, 5.5.1.1.1, May 2010, “Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests; Approved Guideline”. Insert Code: INS025.OPT.E, Version: 11th August 2015 (Rev 1), Page 2 of 2 producto. No trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas (especialmente si hay heridas). En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico. Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. Este producto debe ser utilizado por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación. Se recomienda observar estrictamente el procedimiento indicado. No se garantizan resultados válidos obtenidos utilizando parámetros diferentes que los indicados. Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables. 6 Kit anti-estreptolisina O Optilite® Los kits no abiertos deben conservarse a 2-8°C y se pueden usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del kit. NO CONGELAR. El reactivo, el calibrador y los controles pueden conservarse refrigerados a 2-8°C durante tres meses como máximo tras la apertura, tomando precauciones para evitar la evaporación. El reactivo se puede conservar, sin proteger, hasta 30 días en el analizador Optilite, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 7 Sólo para uso diagnóstico in vitro Código de Producto: LK189.OPT Producto fabricado por: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, Reino Unido www.bindingsite.co.uk The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es Optilite es una marca registrada de The Binding Site Group Limited (Birmingham, Reino Unido) en ciertos países. El resto de marcas y nombres de productos pueden ser marcas comerciales de sus respectivos propietarios. APLICACIÓN El kit anti-estreptolisina O Optilite tiene como objetivo la cuantificación in vitro de la antiestreptolisina O en suero en el analizador Optilite de Binding Site. Este test se debe usar junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 2 RESUMEN Y EXPLICACIÓN 8 La determinación de anti-estreptolisina O en suero ayuda al diagnóstico de enfermedades producidas por infecciones estreptocócicas como la fiebre reumática, glomerulonefritis, amigdalitis, infecciones del tracto respiratorio superior y pioderma (Ref. 1-7). 3 Material suministrado 8.1.1 8.1.2 8.1.3 8.1.4 1 x 100 Tests Optilite ASO Reagent (reactivo ASO Optilite) 1 x 2,0mL Optilite ASO Calibrator (calibrador ASO Optilite) 1 x 1,5mL Optilite ASO High Control (control elevado ASO Optilite) 1 x 1,5mL Optilite ASO Low Control (control bajo ASO Optilite) 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 Materiales necesarios para la preparación de las muestras, como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento Optilite, código INS700.OPT Diluyente 1 Optilite, código de producto IK709 8.3 Preparación de los reactivos 4.1 PRINCIPIO REACTIVOS Reactivo látex: Se suministra en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099% de azida sódica, 0,1% de ácido E-amino-n-caproico (EACA), 0,01% de benzamidina y 0,05% de ProClin™. 4.2 Calibradores y controles: Se trata de suero humano seleccionado, suministrado en forma líquida estable. La concentración indicada en el certificado de control de calidad responde al 1er estándar internacional para ASO (97/662). Contienen 0,099% de azida sódica, 0,1% de EACA y 0,01% de benzamadina como conservantes. 4.3 Buffer de reacción: Contiene 0,099% de azida sódica como conservante. 5 Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. 8.4.1 Los parámetros de la prueba para este ensayo se indican en el de código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert189.OPT). Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodíodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente en referencia a una curva de calibración almacenada en el instrumento. 4 METODOLOGÍA 8.1 8.4 El estreptococo β-hemolítico del grupo A produce un número de exotoxinas que pueden actuar como antígenos. Una de estas exotoxinas, estreptolisina O, lleva a la producción de anticuerpos específicos en sujetos infectados aumentando la concentración de ASO en suero. Esto se puede usar para establecer el grado de infección por estreptococos βhemolíticos, presente o pasado (ref. 1-7). OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN Las muestras de sangre deben proceder de extracciones venosas. La sangre se ha de dejar que coagule de modo natural y separar el suero lo antes posible para prevenir la hemólisis. El suero debe conservarse a 20-25°C si el ensayo se ejecuta dentro de 2 días o a 4-8°C si el ensayo se ejecuta dentro de 8 días. Para periodos más largos, se recomienda alicuotar y conservar a -20°C o temperatura inferior (Ref 8). No congelar y descongelar más de una vez. Evitar el uso de sueros lipémicos, hemolizados o contaminados por microbios, o de muestras que contengan partículas. Es responsabilidad de cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio (Ref 9). 8.2.2 8.2.3 1 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD PRECAUCIONES Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), de los anticuerpos del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH1 y VIH2) y del virus de la hepatitis C. Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (USA) o aprobadas para el diagnóstico in vitro en la UE (Directiva 98/79/EC, Anexo II); sin embargo dichos ensayos no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos, incluyendo el uso de guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. Los procedimientos deben ser accesibles sólo a personal con formación específica. ADVERTENCIA: Este producto contiene azida sódica y debe ser manipulado con precaución; se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este Dilución del analizador Optilite 1+0 1+9 1+19 9 Rango aproximado (IU/mL) 5 - 80 50 - 800 100 - 1600 CONTROL DE CALIDAD Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el manual de funcionamiento Optilite. El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. Las concentraciones de los controles suministrados están indicadas en el certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert189.OPT). Los resultados obtenidos sólo pueden aceptarse si los resultados de los controles entran dentro del ±15% de las concentraciones indicadas. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el test. Si aún después de la nueva calibración estuviera fuera de rango, deberá verificarse el instrumento y los parámetros programados. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al soporte técnico de su proveedor. 10 10.1 10.2 10.3 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los tests turbidimétricos no son adecuados para la determinación de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos immunes circulantes (CICs) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. No debe realizarse el diagnóstico ni iniciarse un tratamiento basándose únicamente en la medida de anti-estreptolisina O. Deben tenerse en cuenta también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio. No se ha validado el uso de muestras pediátricas en este ensayo. Insert Code: INS189.OPT.E, Version: 24th April 2015, Page 1 of 2 10.4 Las variaciones en la temperatura del reactivo puede afectar a los resultados. Asegúrese de que los reactivos se transfieran directamente desde el refrigerador al compartimento refrigerado para reactivos del analizador: no deje que pasen a temperatura ambiente. 11 VALORES ESPERADOS Los valores esperados pueden variar en función de la edad, sexo, tipo de muestra, dieta y localización geográfica. Cada laboratorio debe verificar la transmisibilidad de los valores esperados a la población a analizar y, si es necesario, establecer su propio rango de referencia. Rango en suero de adultos El intervalo de referencia de anti-estreptolisina O en suero según la bibliografía es <200 IU/mL (Ref. 10). 12 12.1 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO Precisión El estudio de precisión se realizó siguiendo las pautas CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods. El estudio se llevó a cabo durante 21 días laborables, con 2 series al día. Un usuario midió los resultados de 5 muestras diferentes usando 1 lote de reactivo diferente en 3 analizadores. Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 12.2 Media (IU/mL) 79,30 146,11 238,79 440,19 737,99 Resumen de Precisión Intra-ensayo Inter-ensayo SD CV % SD CV % 4,15 5,2 0,00 0,0 5,07 3,5 1,58 1,1 4,67 2,0 2,73 1,1 8,65 2,0 4,77 1,1 15,66 2,1 13,88 1,9 Inter día SD CV % 1,92 2,4 3,90 2,7 7,54 3,2 13,10 3,0 26,41 3,6 Total SD CV % 4,57 5,8 6,59 4,5 9,29 3,9 16,40 3,7 33,70 4,6 Estudio comparativo Se llevó a cabo un estudio comparativo analizando 121 muestras (46 muestras clínicas, 75 muestras normales) con el kit anti-estreptolisina O Optilite y un kit alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,96x + 0,92 IU/mL (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,996 12.3 (calculado por regresión lineal) Límite de cuantificación El límite de cuantificación (LoQ) de este ensayo se define como el punto inferior del rango de medición, 5,0 IU/mL. El estudio de validación del LoQ se basó en el documento CLSI EP17-A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation. 12.4 Linealidad El estudio de linealidad se basó en el documento CLSI EP6-A Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures. Se ha demostrado linealidad en el rango de analito 30,806 a 902,442 IU/mL con la dilución de muestra 1+9. Ecuación de regresión: y = 0,981x – 16,218 (y = concentración medida, x = concentración teórica); r2 = 0,997. 12.5 Sustancias interferentes Se llevó a cabo un estudio siguiendo las pautas de la CLSI EP7-A2: Interference Testing in Clinical Chemistry, Approved Guideline (documento CLSI EP7-A2). Se analizaron una muestra de suero normal, una muestra de suero con valor cercano al punto de decisión médica y una muestra de suero anorma.l No se observaron interferencias significativas en los ensayos con bilirrubina (200 mg/L) o hemoglobina (5 g/L Se observaron señales de interferencia con intralípidos y triglicéridos, y se sabe que las muestras lipémicas interfieren con este ensayo. Por lo tanto las muestras lipémicas no deben de ser analizadas utilizando este ensayo (vea la sección 10.1). 12.6 Exceso de antígeno No se observó exceso de antígeno hasta el nivel de 2 veces el punto más alto de la curva de calibración a la dilución de muestra estándar 1+9. Esto equivale a 1600 IU/mL. 13 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Klein, G.C. et al (1971). “Upper Limits of Normal” Antistreptolysin O and Antideoxyribonuclease B Titres. Appl. Micro., June, 999-1001. Gray, G.E. et al (1993). Interpreting a Single Antistreptolysin O Test: A Comparison of the “Upper Limit of Normal” and Likelihood Ratio Methods. J. Clin. Epidemiol, 46, (10), 1181-1185. Kaplan, E.L. et al (1971). Diagnosis of Streptococcal Pharyngitis: Differentiation of Active Infection from the Carrier State in the Symptomatic Child. J. Infect. Dis., 123, (5), 490-501. Dillon, K.C. and Avery Reeves, S. (1974). Streptococcal Immune Responses in Nephritis after Skin Infection. Am. J. Med., 56, 333-346. Pacifico, L. et al (1995). Comparison of Nephelometric and Haemolytic Techniques for Determination of Antistreptolysin O Antibodies. Am. J. Clin. Pathol., 103 (4), 396-399. Wannamaker L.W., (1972). Perplexity and Precision in the Diagnosis of Streptococcal Pharyngitis. Am. J. Dis. Child. 124 352-358. Kaplan, E.L. et al (1970). The Influence of the Site of Infection on the Immune Response to Group A Streptococci. Clin. Invest. 49, 1405-1414. Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations WHO/DIL/LAB/99.1 Rev.2 2002. CLSI GP44-A4, Vol. 30 No.10, 5.5.1.1.1, May 2010, “Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests; Approved Guideline”. Thomas L. Bakterielle Infektionen. In: Thomas L, ed. Labor und Diagnose. 4th ed. Marburg: Die Medizinische Verlagsgesellschaft; 1992: 1492-1530. Insert Code: INS189.OPT.E, Version: 24th April 2015, Page 2 of 2 Este producto debe ser utilizado por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación.Se recomienda seguir de forma estricta el procedimiento indicado.No se garantiza la validez de los resultados si se utilizan parámetros diferentes a los indicados. 6 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Los kits no abiertos deben conservarse a 2-8 °C y se pueden usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del kit. NO CONGELAR. El reactivo puede conservarse refrigerado a 2-8 °C durante tres meses como máximo tras la apertura, tomando precauciones para evitar la evaporación. El reactivo puede almacenarse, sin proteger, en el analizador Optilite durante un máximo de 30 días, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 7 Reactivo Proteína C reactiva Optilite ® Sólo para uso diagnóstico in vitro Código de producto:NK044.OPT Fabricado por: TheBindingSite Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, UK The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es 1 APLICACIÓN El Reactivo Proteína C reactiva Optilite está diseñado para la cuantificación in vitro de la concentración de proteína C reactiva (CRP) en suero, heparina de litio o plasma EDTA en el analizador Optilite. Este test se debe usar junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 2 Las muestras deben proceder de extracciones venosas y, en caso de plasma, hay que separarlo lo más rápidamente posible. La sangre debe dejarse coagular naturalmente. Separar el suero lo más rápidamente posible para evitar la hemólisis. Las muestras pueden conservarse a 2-8 °C hasta un máximo de dos meses. Si el ensayo va a ejecutarse más tarde, se recomienda hacer alícuotas y conservar a -20 °C o temperatura inferior durante un máximo de tres años4. No congelar y descongelar los sueros más de una vez. Evitar el uso de muestras de suero lipémicas, hemolizadas o contaminadas por microorganismos, o muestras que contengan material particulado. Es responsabilidad cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio. 8 RESUMEN Y EXPLICACIÓN La proteína C reactiva (CRP), con un peso molecular de 105 kD, forma parte de un grupo de proteínas denominadas pentaxinas. Puede unirse fácilmente a membranas celulares dañadas y polisacáridos microbianos, y está implicada en la aglutinación y precipitación de bacterias invasivas. También puede activar el complemento, resultando en inflamación, opsonización y fagocitosis de restos celulares y bacterias. La CRP se sintetiza en el hígado y las concentraciones en suero normales son muy bajas (menos de 10 mg/L). Las concentraciones aumentan rápidamente tras la inflamación y pueden detectarse niveles de suero elevados en el plazo de seis horas. Se trata, probablemente, del indicador más útil y fiable de la respuesta de fase aguda, siendo preferible a la tasa de sedimentación de eritrocitos (ESR, por sus siglas en inglés). Unos niveles en suero moderadamente elevados (10-40 mg/L) se asocian con inflamación leve e infecciones virales. Se producen concentraciones mayores (40 a 200 mg/L) con inflamación en fase aguda e infecciones bacterianas (ref. 1, 2, 3). Materiales suministrados 8.1.1 1 x 100 Tests OptiliteCRP Reagent (reactivo PCR) 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 8.2.5 8.2.6 Materiales necesarios para la preparación de las muestras como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado y operativo. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento de Optilite, código INS700.OPT Diluyente 1 Optilite, código de producto IK709 Calibrador Proteína C reactiva Optilite NC044.OPT Controles Proteína C reactiva Optilite NQ044.OPT 8.3 Preparación de los reactivos Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. 8.4 8.4.1 Los parámetros de la prueba para este ensayo se indican en el código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcertR044.OPT).Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: Dilución del analizador Optilite 1+0 1+4 REACTIVOS 4.1 Antisuero: Se suministra en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099 % de azida sódica, TRIS pH 8,0. 4.2 Buffer de reacción: Contiene un 0,099 % de azida sódica y TRIS pH 7,5 como conservantes. 5 Rango aproximado (mg/L) 5 – 285 25 - 1425 CONTROL DE CALIDAD PRINCIPIO La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodíodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente en referencia a una curva de calibración almacenada en el instrumento. 4 Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. 9 3 METODOLOGÍA 8.1 8.2.2 8.2.3 Optilite es una marca registrada de TheBindingSite Group Limited (Birmingham, Reino Unido) en ciertos países. OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el Manual de funcionamiento de Optilite. El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el test. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el test. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al soporte técnico de su proveedor. 10 10.1 PRECAUCIONES Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg) y a la presencia de los anticuerpos del virus de inmunodeficiencia humana (HIV1 y HIV2) y del virus de la hepatitis C. Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (EE. UU.) o para el diagnóstico in vitro por la UE (directiva 98/79/EC, Anexo II). Sin embargo, estas pruebas no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos, incluyendo el uso de guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. Los procedimientos deben ser accesibles sólo a personal con formación específica. AVISO: Este producto contiene azida sódica, por lo que debe debe ser manipulado con precaución. Se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto No trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas (especialmente si hay heridas). En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico urgentemente. Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. 10.2 11 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los ensayos turbidimétricos no son adecuados para la medición de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos inmunes circulantes (CIC) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. No debe realizarse el diagnóstico ni iniciarse un tratamiento basándose únicamente en la determinación de la proteína C reactiva. Deben tenerse en cuenta también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio VALORES ESPERADOS Rango de referencia en suero adulto El rango de referencia para este kit se ha extraído de una referencia bibliográfica (ref. 5). Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia. PCR Insert Code: INSR044.OPT.E, Version: 5th September 2016, Page 1 of 2 Rango (mg/L) <5 12 12.1 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO Precisión El estudio de precisión se basó en CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of ClinicalQuantitativeMeasurementMethods. El estudio se llevó a cabo durante 21 días laborables con dos análisis al día. Un usuario evaluó cinco muestras diferentes, usando tres lotes de reactivos diferentes en tres analizadores. Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 12.2 Valor medio (mg/L) 9,98 22,33 63,88 146,73 258,28 Resumen de precisión Intra-ensayo Inter-ensayo SD CV % SD CV % 0,19 1,9 0,16 1,6 0,30 1,3 0,30 1,4 0,49 0,8 0,36 0,6 0,86 0,6 1,26 0,9 2,73 1,1 1,85 0,7 Inter-día SD CV % 0,30 3,0 0,48 2,2 1,69 2,7 4,29 2,9 6,38 2,5 Total SD CV % 0,39 3,9 0,64 2,9 1,80 2,8 4,55 3,1 7,18 2,8 Estudio comparativo Se llevó a cabo un estudio comparativo analizando 193 muestras (83 sueros normales y 110 sueros clínicos) usando el reactivo para proteína C reactiva Optilite y un ensayo alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing& Bablok generó los siguientes resultados: y = 1,00 x + 5,56 mg/L (y = Optilite; x = analizador predicado) Coeficiente de correlación r = 0,998 12.3 (calculado mediante regresión lineal) Límite de cuantificación El límite de cuantificación para este ensayo se define como el valor inferior del rango de medición, 5 mg/L. El estudio de validación del límite de cuantificación se basó en CLSI EP17-AProtocolsforDetermination of Limits of Detection and Limits of Quantitation. 12.4 Linealidad Se llevó a cabo un estudio siguiendo el documento CLSI Evaluation of theLinearity of QuantitativeMeasurementProcedures: A StatisticalApproach; ApprovedGuideline (EP6-A). La linealidad de este ensayo ha sido confirmada mediante diluciones seriadas de muestras de suero sobre el rango de 4,5 – 335,1 mg/L con desviaciones de linealidad de <10 %. 12.5 Sustancias interferentes Se realizó un estudio siguiendo las pautas CLSI EP7-A2: InterferenceTesting in ClinicalChemistry, ApprovedGuideline (CLSI Document EP7-A2). Se analizóuna muestra de suero con valores cercanos a los puntos de decisión médica y muestras de suero alteradas. No se observaron interferencias significativas en los ensayos con triglicéridos (500 mg/dL), intralípidos (250 mg/dL), bilirrubina (200 mg/L) o hemoglobina (5 g/L). 12.6 Exceso de antígeno No se observó exceso de antígeno hasta el nivel de 6,25 veces el punto más alto de la curva de calibración a la dilución de muestra estándar de 1+0.Esto equivale a 1874,5 mg/L. 13 1. 2. 3. 4. 5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Protein Reference Unit Handbook of Clinical Immunochemistry (1999) 6 thEdn. Ed A Milford Ward Publ. PRU Publications, Sheffield pp 109-111. Rosen, M.A. (1990). C-Reactive Protein: a marker of infection, inflammation, tissue damage and malignancy. Diagnostic&Clin. Testing 28, 18-22. Okamura, J.M. et al (1990). Potential clinical applications of C-reactive protein. J.ClinLab-Analysis 4, 231-235. Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO publication. WHO/DIL/LAB/99.1/Rev 2. Jan 2002. Dati F, Schumann G, Thomas L et al. Consensus of a group of professional societies and diagnostic companies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based on the standardization against the IFCC/BCR/CAP reference material (CRM 470). Insert Code: INSR044.OPT.E, Version: 5th September 2016, Page 2 of 2 ADVERTENCIA: Este producto contiene azida sódica y debe ser manipulado con precaución; se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. No trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas (especialmente si hay heridas). En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico. Con el plomo y el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. Este producto debe ser utilizado por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación. Se recomienda observar estrictamente el procedimiento indicado. No se garantizan resultados válidos obtenidos utilizando parámetros diferentes que los indicados. Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables. 6 Kit factor reumatoide Optilite® Sólo para uso diagnóstico in vitro Código de Producto: LK151.OPT Producto fabricado por: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, Reino Unido www.bindingsite.co.uk The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es 1 APLICACIÓN El kit factor reumatoide (FR) Optilite está diseñado para la cuantificación in vitro de la concentración en suero de factor reumatoide en el analizador Optilite de Binding Site. La medición del factor reumatoide puede ayudar en el diagnóstico de artritis reumatoide. Este test se debe usar junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 2 RESUMEN Y EXPLICACIÓN Los factores reumatoides son un grupo heterogéneo de autoanticuerpos de elevado peso molecular dirigidos contra las propias inmunoglobulinas del organismo. Los producen las células plasmáticas presentes en el tejido dañado. Se piensa que el antígeno iniciador es uno o más virus o antígenos virales que persisten en el tejido de las articulaciones. Hay estudios que han demostrado que factores genéticos y medioambientales pueden afectar a la producción de factores reumatoides con varias propiedades biológicas. También se han encontrado factores reumatoides en el suero de pacientes con lupus eritematoso, hepatitis, cirrosis hepática, sífilis y otras enfermedades, pero el título de FR es bastante más bajo que en artritis reumatoide (AR). Entre un 60 y 80% de pacientes con AR activa presentan esta proteína anormal en la sangre y fluido sinovial, de modo que su detección es valiosa para el diagnóstico y monitorización de la enfermedad. 3 PRINCIPIO 4.1 4.2 4.3 4.4 5 7 OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN Las muestras de sangre deben proceder de extracciones venosas, dejadas coagular naturalmente. Separar el suero lo más rápidamente posible para evitar la hemólisis. Los sueros pueden conservarse a 2-8°C hasta un máximo de tres días. Si el ensayo va a ejecutarse más tarde, se recomienda hacer alícuotas y conservar a –20°C o temperatura inferior durante un máximo de cuatro semanas. No congelar y descongelar los sueros más de una vez. Evitar el uso de sueros lipémicos, hemolizados o contaminados por microbios, o de muestras que contengan partículas Es responsabilidad cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio (Ref. 1). METODOLOGÍA 8.1 Material suministrado 8.1.1 8.1.2 8.1.3 8.1.4 1 x 100 Tests Optilite RF Reagent (reactivo RF Optilite) 1 x 2,2mL Optilite RF Calibrator (calibrador RF Optilite) 1 x 1,5mL Optilite RF High Control (control elevado RF Optilite) 1 x 1,5mL Optilite RF Low Control (control bajo RF Optilite) 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 Materiales necesarios para la preparación de las muestras, como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento Optilite, código INS700.OPT Diluyente 1 Optilite, código de producto IK709 8.3 Preparación de los reactivos 8.2.2 8.2.3 Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. 8.4 Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. 8.4.1 Los parámetros de la prueba para este ensayo se indican en el código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert151.OPT). Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodíodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente en referencia a una curva de calibración almacenada en el instrumento. 4 El kit no abierto debe conservarse a 2-8°C y se puede usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del kit. NO CONGELAR. El reactivo, el calibrador y los controles pueden conservarse refrigerados a 2-8°C durante tres meses como máximo tras la apertura, tomando precauciones para evitar la evaporación. El reactivo se puede conservar, sin proteger, hasta 30 días en el analizador Optilite, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 8 Optilite es una marca registrada de The Binding Site Group Limited (Birmingham, Reino Unido) en ciertos países. El resto de marcas y nombres de productos pueden ser marcas comerciales de sus respectivos propietarios. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD REACTIVOS Buffer de reacción: Contiene buffer de glicina pH 8,3, cloruro sódico, ácido etilendiaminotetraacético en forma de sal disódica dihidrato, albúmina de suero bovino y azida sódica 0,09 % p/v Reactivo látex: Contiene buffer de glicina pH 7,3, cloruro sódico, IgG humana adsorbida en partículas de látex y azida sódica 0,09 % p/v Controles FR: Suministrados en 2 niveles, bajo y elevado. Los rangos y valores diana se especifican en el certificado de control de calidad. Listos para usar. Calibrador FR: Se ha llevado a cabo la calibración y se han asignado los valores usando un método inmunoturbidimétrico estandarizado según la preparación internacional de referencia 64/2 de la OMS 64/2 (Ref. 2). Listo para usar. PRECAUCIONES Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg), de los anticuerpos del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH1 y VIH2) y del virus de la hepatitis C. Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (USA) o aprobadas para el diagnóstico in vitro en la UE (Directiva 98/79/EC, Anexo II); sin embargo dichos ensayos no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos, incluyendo el uso de guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. Los procedimientos deben ser accesibles sólo a personal con formación específica. Dilución del analizador Optilite 1+0 1+9 1+64 9 Rango aproximado (IU/ml) 7 - 100 70- 1000 455 –6500 CONTROL DE CALIDAD Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el manual de funcionamiento Optilite. El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. Las concentraciones de los controles suministrados están indicadas en el certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert151.OPT). Los resultados obtenidos sólo pueden aceptarse si los resultados de los controles entran dentro del ±20% de las concentraciones indicadas. En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el test. Si aún después de la nueva calibración estuviera fuera de rango, deberá verificarse el instrumento y los parámetros programados. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al soporte técnico de su proveedor. 10 10.1 10.2 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los tests turbidimétricos no son adecuados para la determinación de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos immunes circulantes (CICs) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. No debe realizarse el diagnóstico ni iniciarse un tratamiento basándose únicamente en la determinación de factor reumatoide. Deben tenerse en cuenta también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio. Insert Code: INS151.OPT.E, Version: 21st March 2016, Page 1 of 2 10.3 10.4 10.5 11 Un resultado negativo no excluye la presencia de artritis reumatoide. Aproximadamente un 25% de los pacientes con diagnóstico de artritis reumatoide puede presentar un resultado negativo para FR. Este ensayo ha sido diseñado para detectar FR en IgM. Por lo tanto, no se detectará el FR de otras clases de inmunoglobulinas. Puede observarse una protección de advertencia de comprobación de exceso de antígeno (avisos de "límite de antígeno bajo") respecto a los resultados de FR. VALORES ESPERADOS Se recomienda que cada laboratorio establezca un rango esperado para reflejar la localización geográfica y la edad, sexo y dieta de la población. El valor de corte que constituye el límite superior de normalidad es discutible. Sin embargo se consideran dentro del rango de normalidad los valores inferiores a 10 lU/mL. La Organización Mundial de la Salud sugiere un nivel de aproximadamente 12,5 UI/ml como límite superior de normalidad (Ref. 2). Los resultados de este ensayo siempre se deben evaluar junto con el historial y exámenes clínicos del paciente y otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 12 12.1 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO Precisión El estudio de precisión se realizó siguiendo las pautas CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods. El estudio se llevó a cabo durante 21 días laborables, con 2 series al día. Un usuario midió los resultados de 5 muestras diferentes usando 2 lote de reactivo en 3 analizadores. Resumen de Precisión Intra-ensayo Inter-ensayo Inter día Media SD CV % SD CV % SD CV % (IU/mL) Nivel 1 9,89 0,37 3,8 0,32 3,2 0,77 7,8 Nivel 2 16,59 0,34 2,1 0,23 1,4 0,86 5,2 Nivel 3 37,11 0,30 0,8 0,32 0,9 1,40 3,8 Nivel 4 76,50 1,28 1,7 0,63 0,8 2,27 3,0 Nivel 5* 144,45 2,93 2,0 3,04 2,1 9,19 6,4 * a la dilución de muestra 1+9 12.2 Total SD CV % 0,92 9,3 0,95 5,7 1,46 3,9 2,68 3,5 10,12 7,0 Estudio comparativo Se realizó un estudio comparativo analizando 292 muestras de suero (incluyendo 165 muestras con niveles de analito dentro del intervalo de referencia) con el kit factor reumatoide Optilite y otro ensayo alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión Passing & Bablok generó los siguientes resultados: 12.3 y = 0,94x + 0,63 (units) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,980 (calculado por regresión lineal) Límite de cuantificación El límite de cuantificación (LoQ) de este ensayo se define como el punto inferior del rango de medición, 7 IU/mL. El estudio de validación del LoQ se basó en el documento CLSI EP17-A Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation. 12.4 Linealidad Se llevó a cabo un estudio siguiendo el documento CLSI Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline (EP6A). La linealidad de este ensayo ha sido confirmada mediante diluciones seriadas de muestras de suero sobre el rango de 6,23 – 111,627 UI/mL con desviaciones de linealidad de <10 %. 12.5 Sustancias interferentes Se realizó un estudio siguiendo las pautas CLSI EP7-A2: Interference Testing in Clinical Chemistry, Approved Guideline (CLSI Document EP7-A2). Se analizaron una muestra de suero normal, una muestra de suero con valor cercano al punto de decisión médica y una muestra de suero anormal. No se observaron interferencias significativas en los ensayos con triglicéridos (500 mg/dl), intralípidos (250 mg/dL), bilirrubina (200 mg/L) o hemoglobina (2,5 g/L). No hay constancia de interferencia significativa con fármacos de uso habitual. Varias publicaciones ofrecen más información al respecto (Ref. 3). 12.6 Exceso de antígeno No se observó exceso de antígeno hasta el nivel de 59 veces el punto más alto de la curva de calibración a la dilución de muestra estándar de 1+ 0. Esto equivale a 5900 UI/mL. 13 1. 2. 3. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS CLSI GP44-A4, Vol. 30 No.10, 5.5.1.1.1, May 2010, “Procedures for the Handling and Processing of Blood Specimens for Common Laboratory Tests; Approved Guideline”. Anderson, S.G., Bentzon, M.W., Houba, V. and Krag, P. Bull. Wld. Hlth. Org. 42: 311-318 (1970). Young D. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5 th ed. AACC Press, 2000. Insert Code: INS151.OPT.E, Version: 21st March 2016, Page 2 of 2 (especialmente si hay heridas) o las mucosas. En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico urgentemente. En caso de contacto prolongado de la azida sódica con tuberías de plomo y cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo, enjuague con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida. Este producto debe ser utilizado únicamente por personal especializado para los fines indicados en el apartado Aplicación. Resulta esencial seguir estas instrucciones de forma estricta en todo momento. No se garantiza la validez de los resultados si se utilizan parámetros diferentes a los indicados en estas instrucciones. Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables. 6 Kit proteína C reactiva de alta sensibilidad Optilite® Solo para uso diagnóstico in vitro Código de producto: LK044.L.OPT Producto fabricado por: The Binding Site Group Ltd., 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, UK www.bindingsite.co.uk Telephone: +44 (0)121 456 9500 Fax: +44 (0)121 456 9749 E-mail: [email protected] The Binding Site Group Limited Sucursal en España Bruc 72 2ª planta, 08009 Barcelona, España Teléfono 902027750 Fax: 902027752 e-mail: [email protected] web: www.bindingsite.es 1 7 APLICACIÓN RESUMEN Y EXPLICACIÓN 3 Materiales suministrados 8.1.1 8.1.2 8.1.3 8.1.4 1 x 100 Tests Optilite hsCRP Reagent (Reactivo hsCRP Optilite) 1 x 2.4mL Optilite hsCRP Calibrator (calibrador hsCRP Optilite) 1 x 1.6mL Optilite hsCRP High Control (control alto hsCRP Optilite) 1 x 1.6mL Optilite hsCRP Low Control (control bajo hsCRP Optilite) 8.2 Materiales necesarios no suministrados con el kit 8.2.1 8.2.4 8.2.5 Materiales necesarios para la preparación de las muestras como tubos para la recolección de la sangre, centrífuga, etc. Analizador Optilite completamente equipado y operativo. Las instrucciones actuales de funcionamiento del analizador: Manual de funcionamiento de Optilite, código INS700.OPT Diluyente 2 Optilite, código de producto IK710 Lavado especial Optilite, código de producto IK707 8.3 Preparación de los reactivos Antes de cargar, mezclar por inversión evitando la formación de espuma o burbujas que podrían interferir en el momento de la aspiración del reactivo. 4.1 4.2 4.3 5 Procedimiento de la prueba El usuario deberá estar familiarizado con el funcionamiento del analizador Optilite antes de realizar la prueba. Preparar el equipo para su uso según las instrucciones del manual de funcionamiento Optilite. 8.4.1 Los parámetros para este ensayo se indican en el código de barras del certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert044.L.OPT). Escanee los códigos Barcode 1 y Barcode 2 para cargar los parámetros. 8.5 Rango de medición El rango de medición aproximado del ensayo se indica en la siguiente tabla: Dilución del analizador Optilite 1+0 PRINCIPIO La evaluación de la concentración de un antígeno soluble por turbidimetría supone la reacción con un antisuero específico para formar complejos insolubles. Al pasar la luz a través de la suspensión formada, se transmite y focaliza una porción de esta luz a un fotodiodo mediante un sistema de lentes ópticas. La cantidad de luz transmitida es indirectamente proporcional a la concentración de proteína específica en la muestra analizada. Las concentraciones se calculan automáticamente a partir de una curva de calibración almacenada en el instrumento. 4 METODOLOGÍA 8.1 8.4 La PCR es miembro de grupo de proteínas denominadas pentraxinas. Funciona como un componente clave de la respuesta inmune innata a inflamaciones e infecciones. La PCR se sintetiza en el hígado y las concentraciones normales en suero son muy bajas (menos de 10 mg/L). Puede unirse fácilmente a membranas celulares dañadas y polisacáridos microbianos, y está implicada en la aglutinación y precipitación de bacterias invasivas. También puede activar el complemento, resultando en inflamación, opsonización y fagocitosis de restos celulares y bacterias. Las concentraciones aumentan rápidamente tras la inflamación y pueden detectarse niveles de suero elevados en el plazo de seis horas. La medición de PCR también puede resultar útil en la evaluación de enfermedades asociadas con la inflamación en personas que, por lo demás, están sanas (refs. 1 y 2). OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PREPARACIÓN Las muestras deben proceder de extracciones venosas y, en caso de plasma, hay que separarlo lo más rápidamente posible. La sangre debe dejarse coagular naturalmente. Separar el suero lo más rápidamente posible para evitar la hemólisis. Las muestras pueden conservarse a 2-8 °C hasta un máximo de dos meses. Si el ensayo va a ejecutarse más tarde, se recomienda hacer alícuotas y conservar a -20 °C o temperatura inferior durante un máximo de tres años. No congelar y descongelar los sueros más de una vez. Evitar el uso de muestras lipémicas, hemolizadas o contaminadas por microbios, o de muestras que contengan partículas. Es responsabilidad de cada laboratorio el uso de todas las referencias disponibles y/o sus propios estudios para determinar los criterios de estabilidad específicos para su laboratorio (ref. 3). 8.2.2 8.2.3 El kit proteína C reactiva de alta sensibilidad Optilite está diseñado para la cuantificación in vitro de proteína C reactiva (PCR) en suero, heparina litio o plasma EDTA en el analizador Optilite de Binding Site. Este test se debe usar junto con otras determinaciones clínicas y de laboratorio. 2 Los kits no abiertos deben conservarse a 2-8 °C y se pueden usar hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta de la caja del kit. NO CONGELAR. El reactivo, el calibrador y los controles pueden conservarse refrigerados a 2-8 °C durante tres meses como máximo tras la apertura, tomando precauciones para evitar la evaporación. El reactivo puede almacenarse, sin proteger, en el analizador Optilite durante un máximo de 30 días, siempre y cuando se deje encendido el interruptor de alimentación. 8 Optilite® es una marca registrada de The Binding Site Group Limited (Birmingham, Reino Unido) en determinados países. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD REACTIVOS 9 Rango aproximado (mg/L) 0,5 – 10 CONTROL DE CALIDAD Se deben analizar al menos dos niveles de material de control adecuado una vez al día como mínimo. Además, se deben analizar controles tras la calibración, con cada nuevo lote de reactivo y tras el mantenimiento específico o los pasos de resolución de problemas descritos en el Manual de funcionamiento de Optilite. El análisis de control se debe realizar de acuerdo a los requerimientos reglamentarios y el procedimiento estándar de cada laboratorio. Reactivo látex: Se suministra en forma líquida estabilizada. Conservantes: 0,099 % de azida sódica, 0,1 % de ácido E-amino-n-caproico (EACA), 0,01 % de benzamidina y 0,05 % de ProClin™. Calibradores y controles: Preparados a partir de una mezcla de suero humano, se suministran en forma líquida estabilizada. Contienen 0,099 % de azida sódica, 0,1 % de ácido E-amino-n-caproico (EACA) y 0,01 % de benzamidina como conservantes. La concentración indicada en el certificado de control de calidad se ha obtenido por comparación con el material de referencia internacional DA474. Buffer de reacción: Contiene 0,099 % de azida sódica como conservante. PRECAUCIONES Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBsAg) y a la presencia de los anticuerpos del virus de inmunodeficiencia humana (HIV1 y HIV2) y del virus de la hepatitis C. Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (EE. UU.) o para el diagnóstico in vitro en la UE (directriz 98/79/CE, Anexo II). Sin embargo, estas pruebas no garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Deben establecerse métodos de manipulación y eliminación adecuados para todos los materiales potencialmente infecciosos, incluyendo el uso de guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. Los procedimientos deben ser accesibles únicamente a personal con formación específica. ADVERTENCIA: Este producto contiene azida sódica y ProClin™, por lo que debe ser manipulado con precaución. Se deben usar guantes y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. No trague ni permita el contacto con la piel Las concentraciones de los controles suministrados están indicadas en el certificado de control de calidad que acompaña al kit (QCcert044.L.OPT). Los resultados obtenidos sólo pueden aceptarse si los resultados de los controles entran dentro del ±15 % de la(s) concentración(es) indicada(s). En caso de que un control dé un resultado fuera del rango y se haya empleado una curva de calibración almacenada, se recomienda calibrar de nuevo el ensayo. Si al volver a calibrar los valores del control medidos con la nueva curva siguen fuera del rango, deberán comprobarse el instrumento y los parámetros del ensayo antes de repetir el ensayo. Si no se solucionara el problema, rogamos se dirijan al servicio de asistencia técnica de su proveedor. 10 10.1 10.2 10.3 LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO Los ensayos turbidimétricos no son adecuados para la medición de muestras altamente lipémicas o hemolíticas o muestras que contengan complejos inmunes circulantes (CIC) dado que estas muestras pueden producir una cantidad impredecible de luz dispersa no especificable. Los resultados no previstos deberán verificarse con un método alternativo. No puede darse un diagnóstico ni puede realizarse un tratamiento sobre la base de, únicamente, las cuantificaciones de PCR. Los aumentos en los valores de PCR son no-específicos y no deben interpretarse sin una evaluación clínica completa. Las variaciones de los niveles de PCR entre individuos van del 30 al 60 %. Pueden ser necesarias mediciones seriadas para estimar la media real de PCR dependiendo del uso que se pretenda hacer en individuos específicos. Insert Code: INS044.L.OPT.E, Version: 1st September 2017, Page 1 of 2 10.4 No puede descartarse por completo la aparición potencial de exceso de antígeno. En los casos en los que exista esta posibilidad o sospecha, se recomienda volver a analizar la muestra con el ensayo PCR Optilite (NK044.OPT, NC044.OPT, NQ044.OPT). 11 VALORES ESPERADOS Rango de referencia en suero adulto El rango de referencia para este kit se ha extraído de una referencia bibliográfica (ref. 4). Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia. Rango (mg/L) <5 PCR 12 12.1 CARACTERÍSTICAS DEL RENDIMIENTO Precisión El estudio de precisión se basó en CLSI EP5-A2 Evaluation of Precision Performance of Clinical Quantitative Measurement Methods. El estudio se llevó a cabo durante 21 días laborables con dos análisis al día. Un usuario evaluó cinco muestras diferentes, usando tres lotes de reactivos diferentes en tres analizadores. Valor medio (mg/L) Nivel 1 Nivel 2 Nivel 3 Nivel 4 Nivel 5 12.2 0,980 1,549 2,988 5,411 8,500 Resumen de precisión Intraensayo Interensayo Interdía Total Desviación Variación Desviación Variación Desviación Variación Desviació Variación estándar conc. % estándar conc. % estándar conc. % n estándar conc. % 0,029 0,024 0,047 0,115 0,168 2,9 1,5 1,6 2,1 2,0 0,000 0,021 0,069 0,081 0,000 0,0 1,4 2,3 1,5 0,0 0,047 0,070 0,104 0,191 0,199 4,8 4,5 3,5 3,5 2,3 0,055 0,077 0,134 0,238 0,261 5,6 5,0 4,5 4,4 3,1 Estudio comparativo Suero: Se realizó un estudio comparativo analizando 230 muestras (incluyendo 197 muestras con niveles de analito dentro del intervalo de referencia) con el kit hsCRP Optilite y otro ensayo alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión de PassingBablok generó los siguientes resultados: y = 1,01x + 0,12 (mg/L) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,990 (calculado mediante regresión lineal) Plasma EDTA: Se realizó un estudio comparativo analizando 51 muestras (incluyendo 46 muestras con niveles de analito dentro del intervalo de referencia) con el kit de hsCRP Optilite y otro ensayo alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión de Passing-Bablok generó los siguientes resultados: y = 0,97x -0,01 (mg/L) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,998 (calculado mediante regresión lineal) Plasma / heparina de litio: Se realizó un estudio comparativo analizando 52 muestras (incluyendo 47 muestras con niveles de analito dentro del intervalo de referencia) con el kit hsCRP Optilite y otro ensayo alternativo disponible en el mercado. El análisis de regresión de Passing-Bablok generó los siguientes resultados: y = 1,02x -0,01 (mg/L) (y = Optilite; x = analizador predicado) coeficiente de correlación r = 0,998 12.3 (calculado mediante regresión lineal) Límite de cuantificación El límite de cuantificación para este ensayo se define como el valor inferior del rango de medición, 0,5 mg/L. El estudio de la validación del límite de cuantificación se basó en CLSI EP17-A2 Evaluation of the Detection Capability for Clinical Laboratory Measurement Procedures; Approved Guideline - 2nd Edition 12.4 Linealidad Se llevó a cabo un estudio siguiendo el documento CLSI Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline (EP6A). La linealidad de este ensayo se ha confirmado mediante diluciones seriadas de muestras de suero sobre el rango de 0,443 - 12,160 mg/L con desviaciones de linealidad de <10 %. 12.5 Sustancias interferentes Se realizó un estudio siguiendo las pautas CLSI EP7-A2: Interference Testing in Clinical Chemistry, Approved Guideline (documento CLSI EP7-A2). Se analizaron muestras de suero a 0,98 mg/L, 1,60 mg/L, 3,04 mg/L y 5,5 mg/L. No se observaron interferencias significativas en los ensayos con intralípidos (2000 mg/dL), triglicéridos (1000 mg/dL), bilirrubina (200 mg/L) o hemoglobina (5 g/L). No hay constancia de interferencia significativa con fármacos de uso habitual. publicaciones ofrecen más información al respecto (ref. 5). 12.6 Varias Exceso de antígeno No se observó exceso de antígeno hasta el nivel de 100 veces el punto más alto de la curva de calibración a la dilución de muestra estándar de 1+0. Esto equivale a 1000 mg/L. En casos raros las muestras pueden presentar un exceso de antígeno por debajo de este nivel (ver la sección 10.4). 13 1. 2. 3. 4. 5. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Rosen, M.A. (1990). C-Reactive Protein: a marker of infection, inflammation, tissue damage and malignancy. Diagnostic & Clin. Testing 28, 18-22. McWilliam S, Riordan A. How to use: C-reactive protein. Arch Dis Child Educ Pract Ed 2010;95:55-8. Use of Anticoagulants in Diagnostic Laboratory Investigations. WHO publication. WHO/DIL/LAB/99.1/Rev 2. Jan 2002. Dati F, Schumann G, Thomas L et al. Consensus of a group of professional societies and diagnostic companies on guidelines for interim reference ranges for 14 proteins in serum based on the standardization against the IFCC/BCR/CAP reference material (CRM 470). Young D. Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, 5 th ed. AACC Press, 2000. Insert Code: INS044.L.OPT.E, Version: 1st September 2017, Page 2 of 2