Diferenciación microscópica de la morfología de células procariotas (bacterias) y eucariotas (epiteliales) Abad Arce Myriam Estefanía Chalco Loya César David Universidad de las Fuerzas Armadas- ESPE Departamento de Ciencias de la Vida Ingeniería en Biotecnología [email protected] [email protected] 1. HIPOTESIS Se puede observar presencia de células eucariotas y procariotas en las mucosas mediante la tinción con azul de metileno. 2. OBJETIVOS • Aplicar la fijación por calor para poder observar las estructuras de las células procariotas y eucariotas. • Identificar y diferenciar mediante observación microscópica forma, tamaño y estructuras (membrana celular, núcleo, citoplasma) de las células epiteliales (eucariotes) y bacterias (procariotes). • Discutir sobre la función de la tinción simple con azul de metileno • Determinar la presencia de bacterias (diplococos y estreptococos) en la mucosa bucal 3. INTRODUCCIÓN Los organismos vivos están compuestos de células animales y plantas son pluricelulares; células que forman tejidos y estos a su vez órganos cada celula es dependiente una con otra. Existen también células que pueden vivir independientemente llamados microorganismos (Madigan, Markinto, Parker 2004) Al ser descubiertas organismos microscópicos unicelulares con características animales y de plantas, se tuvo que tomar una nueva clasificación aparte de los dos reinos principales animales y plantas, pero esta no se dio hasta 1970 (Tortora, 2013) Una célula procariota es aquella célula que carece de núcleo definido y el resto de organelos también. (Madigan, Markinto, Parker 2004) 4. METODOLOGÍA 1. Se limpió una placa porta objetos con papel toalla y alcohol antiséptico, si lo fue necesario. 2. Se sacó un palillo o hisopo de madera estéril, abriendo el recipiente que los contenía y se cerró nuevamente. 3. Con el palillo o hisopo estéril se frotó suavemente la parte interna de la mejilla, obteniendo una muestra. 4. Se extendió la muestra, frotando con el palillo o hisopo de madera sobre la placa portaobjetos. 5. Se fijó la muestra al calor con la llama de un mechero de alcohol, pasando la placa varias veces en la llama y procurando no sobrecalentar. Si se sobrecalentó la placa, esperar que se enfríe para volver a pasarla por la llama. 6. Se colocó la placa sobre la bandeja para depósito de colorantes y se procedió a teñir la muestra, cubriéndola con 1 o 2 gotas de azul de metileno, durante 1minuto. 7. Se enjuagó con agua (piceta), depositando el exceso de colorante dentro de la bandeja para este fin. 8. Se secó la placa para eliminar el agua: al aire libre o pasándola en la llama del mechero o si fue necesario absorber delicadamente el agua con papel toalla. 9. Se colocó la placa en el microscopio óptico de campo claro y primeramente enfocar con el lente objetivo 4x. 10. Se cambió a los lentes objetivos 10 y 40x, manipulando micrométrico o macrométrico lentamente. 11. Después de enfocar en 40x, se girò el revólver dejandolo en posición media los lentes objetivos 40 y 100x para permitir colocar una gota de aceite de inmersión en la placa, se colocó el lente 100x y se ajustó la observación con el tornillo micrométrico. 12. Se observó e identificó estructuras y forma de las células eucariotes (epiteliales) y procariotes (bacterias). 13. Para terminar la observación, no se olvidó bajar la luz y platina, se colocó el lente objetivo de menor aumento (4x), apagó, desconectó y anotó los datos requeridos en la bitácora. 14. Se limpió con papel especial o algodón y solución de alcohol, los lentes objetivos del microscopio empezando desde el 4x hasta el 40x y por último, el lente con aceite de inmersión (100x). 15. Se limpió los demás lentes y partes del microscopio dejándolo libre de aceite de inmersión y colorantes. 5. RESULTADOS Tabla N° 1: “MUESTRAS DE OBSERVACIÓN” 4x Se notan pequeñas manchas azules separadas e irregulares. 10 x Las células se notan más grandes y tienen un punto mucho más oscuro en su interior. 40 x Las células tienen forma irregular y se notan manchas mas pequeñas oscuras Estreptococos Diplococos 100 x Núcleo Membrana Se visualizan diplococos y estreptococos se nota un nucleo y membrana definida 6. DISCUSIÓN DE RESULTADOS El material genético está dentro una membrana nuclear definida. (Prescott 2008). En las células eucariotas epiteliales de la boca se pudo observar dentro de las mismas un núcleo definido y es ahí donde se halla el material genético. Una célula procariota es aquella célula que carece de núcleo definido (M. Madigan, J. Markinto, J. Parker 2004)( Robertis, E., Hib, J. 2004). No se pudo observar un núcleo definido membrana u organelos en los diplococos, ni estreptococos pero en las células epiteliales sí. El tamaño de las bacterias varía entre 1 y 5 micrómetros mientras las células eucariotas superan por mucho este tamaño. El grupo bacteriano también varía en tamaño tanto como en forma. (M. Madigan, J. Markinto, J. Parker 2004). Las células epiteliales observadas eran de mucho mes grandes que las procariotas (diplococos y estreptococos). El grupo bacteriano también varía en tamaño tanto como en forma. El azul de metileno es un colorante catiónico la superficie celular están cargadas negativamente estas se combinan y por eso es un gran colorante (M. Madigan, J. Markinto, J. Parker 2004). Se tiñó correctamente la muestra y claramente se pudo lograr el objetivo de la práctica mediante la tinción simple con azul de metileno. Cuando las proteínas se exponen a extremos de temperatura afectan a sus propiedades de plegamiento se desnaturalizan (M. Madigan, J. Markinto, J. Parker 2004). Para la preparación de la placa se fijó la muestra con ayuda de calor en el mechero. 7. • CONCLUSIONES Se comprobó que la fijación por calor permite fijar la muestra para poder ser teñida. • Identificar y diferenciar mediante observación microscópica forma, tamaño y estructuras (membrana celular, núcleo, citoplasma) de las células epiteliales (eucariotes) y bacterias (procariotes). • Se comprobó la presencia de bacterias (diplococos y estreptococos) en la mucosa bucal. • Se identificó mediante la tinción con azul de metileno las diferencias entre la estructura de células procariotas y eucariotas. Se comprobó que las células eucariotas (epiteliales) son de mayor tamaño que las procariotas (cocos y estreptococos). • 8. RECOMENDACIONES - Manipular con mucho cuidado el microscopio y la muestra a utilizarse para la observación. Tener cuidado para no quemar las células epiteliales al momento de realizarse el frotis. Usar guantes de protección al momento de teñir con el azul de metileno para no mancharse directamente las manos. Para poder observar en el lente de 100x recordar usar el aceite requerido en la muestra. - 9. BIBLIOGRAFÍA - Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walter, P. 2008. Molecular Biology of The cell. Garland Science. Fifth edition. U. S. A. - González, M., Caballero, M., Olivares, E., Santisteban, A., Serrano, Ma. P. 2003. Prácticas de laboratorio y de aula: biología, ecología, genética, geología. Narcea ediciones. España. (http://books.google.com.ec/books) - Lodish, H., Berk, A., Matsudaira, P., Kaiser, C., Krieger, M., Scott, M., Zipursky, S. L., Darnell, J. 2005. Biología celular y molecular. Editorial médica Panamericana. Quinta edición. U. S. A. - Fundamentos de Biologia Celular y Molecular – De Robertis. 2004 - Microbiology – An Introduction. Tortora 11th - Prescott L..; Harley J.; Klein D, Mcgraw-hill 2004 Microbiologia (5ª ed.) Interamericana, España.
