INFORME: FISIOLOGÍA DEL ESTRÉS Y CRECIMIENTO ESTUDIANTE: Acuña Florencia -2022- Introducción Introducción En los procesos bioquímicos previos a la germinación de la semilla, durante el proceso de germinación y en el establecimiento de las plántulas, son considerados los períodos más críticos en el ciclo de vida de las plantas. Aquellas que se desarrollan en regiones áridas, tienen adaptaciones en estos estadios que determinan su distribución natural con respecto a otras más sensibles, a la concentración de sales en la solución del suelo. El estrés salino puede inhibir la germinación y el crecimiento de plántulas al impedir la absorción de agua, debido al bajo potencial hídrico de la solución del suelo o por efecto tóxico de los iones. En el presente trabajo de laboratorio mediremos índices que nos permitan saber el grado de inhibición en la germinación y crecimiento ante condiciones de estrés hídricas en semillas de dos especies leñosas. Objetivos Objetivos Relacionar distintos procesos fisiológicos con los factores ambientales tales como el estrés salino. Adquirir competencias en el desarrollo de metodologías, uso de instrumentos de laboratorio y medición, así como también en la interpretación de resultados. Práctico: Fisiología del Estrés y Crecimiento Acuña Florencia 1 MATERIALES Y métodos Materiales y Métodos Se prepararon 3 concentraciones de NaCl a: 0.15, 0.25 y 0.40 mol/litro. Para la solución del testigo solo se utilizara agua destilada. Se utilizaron semillas de Algarrobo blanco y Leucaena. Cada lote tuvo 25 semillas. En total hubo 3 repeticiones de testigo por especie y 2 repeticiones de cada especie por concentración. A cada lote de semillas se las dispuso entre toallas de papel y se las humedeció con 20ml de solución. Se las enrollaron y colocaron verticalmente en un recipiente, cubriéndolas con una bolsa de polietileno. Llevándolas a una cámara de crecimiento de 25°C y un fotoperiodo de 12hs. Observaciones y Observaciones y registro de Registro de datos datos Testigos Se pusieron a germinar 3 rollos para cada especie con 25 semillas cada uno, humedecidos con agua destilada. Se tomaron los datos de germinación el día 26/09/2022 Prosopis Rollo 1: 25 semillas germinadas, 23 viables Rollo 2: Rollo 3: Leucaena Rollo 1: 4 semillas germinadas Práctico: Fisiología del Estrés y Crecimiento Acuña Florencia 2 Rollo 2: 7 semillas germinadas Rollo 3: 11 semillas germinadas Concentración 0,15M NaCl Se pusieron a germinar 2 rollos para cada especie con 25 semillas cada uno, humedecidos con una solución salina de concentración 0,15M de NaCl (cloruro de sodio, sal de mesa). Se hizo un cambio de paños, nuevamente humedecidos con la solución salina. Por cada fecha observada. Prosopis ● 12/09/2022: Inicio de la experiencia. Siembra o 1: 25 semillas humedecidas con 20mL de solución o 2: 25 semillas humedecidas con 20mL de solución ● 14/09/2022: Primer cambio de paño o 1: No hay germinación, semillas muy hidratadas, al cambiar de paño se humedecen solo con 15 mL de solución o 2: No hay germinación, semillas muy hidratadas, al cambiar de paño se humedecen solo con 15 mL de solución ● 19/09/2022: Segundo cambio de paño o 1: Germinación de todas las semillas, 7 con hongos (se descartan) o 2: Germinación de todas las semillas, 2 con hongos (se descartan) ● 22/09/2022: Tercer cambio de paño o 1: Desechamos 3 por hongos o 2: Desechamos 2 por hongos ● 26/09/2022: Finalización de la experiencia y toma de datos finales o 1: Germinación total: 25 semillas; Semillas descartadas por hongos: 10 o 2: Germinación total: 25 semillas; Semillas descartadas por hongos: 4 Leucaena ● 12/09/2022: Inicio de la experiencia o 1: 25 semillas humedecidas con 20mL de solución o 2: 25 semillas humedecidas con 20mL de solución ● 14/09/2022: Primer cambio de paño o 1: No hay germinación, semillas muy hidratadas, al cambiar de paño se humedecen solo con 15 mL de solución o 2: No hay germinación, semillas muy hidratadas, al cambiar de paño se humedecen solo con 15 mL de solución ● 19/09/2022: Segundo cambio de paño o 1: Germinaron 4 semillas, 2 con hongos (se descartan) o 2: Germinaron 3 semillas, ninguna con hongos ● 22/09/2022: Tercer cambio de paño o 1: Germinaron 4 semillas más o 2: Germinaron 2 semillas más Práctico: Fisiología del Estrés y Crecimiento Acuña Florencia 3 ● 26/09/2022: Finalización de la experiencia y toma de datos finales o 1: Germinación total: 9 semillas; Semillas descartadas por hongos: 2 o 2: Germinación total: 8 semillas; Semillas descartadas por hongos: 0 Concentración 0,25M NaCl Se pusieron a germinar 2 rollos para cada especie con 25 semillas cada uno, humedecidos con una solución salina de concentración 0,25M de NaCl (cloruro de sodio, sal de mesa). Se hizo un cambio de paños, nuevamente humedecidos con la solución salina. Por cada fecha observada. Prosopis ● 12/09/2022: Inicio de la experiencia. Siembra o 1: 25 semillas humedecidas con 20mL de solución o 2: 25 semillas humedecidas con 20mL de solución ● 14/09/2022: Primer cambio de paño o 1: Se observa que las semillas están muy hinchadas. Primer cambio de servilletas. Se humedecen las semillas con 15ml de solución al 0,25M de NaCl. o 2: Se observa que las semillas están muy hinchadas. Primer cambio de servilletas. Se humedecen las semillas con 15ml de solución al 0,25M de NaCl. ● 19/09/2022: Segundo cambio de paño o 1: Germinación de 20 semillas, 3 no recibieron estimulación y no germinaron, y 2 se encontraron con hongos y se descartaron. o 2: Germinación de 16 semillas, y las otras 9 se encontraron con hongos por ende se descartaron. ● 22/09/2022: Tercer cambio de paño o 1: Se descartaron 4 de las 20 por hongos. Quedaron 16 o 2: Se descartaron 11 de las 16 por hongos. Quedaron 5 ● 26/09/2022: Finalización de la experiencia. o 1: Germinación exitosa de 16 semillas y en total se descartaron 9 por hongos. o 2: Germinación exitosa de 5 semillas, se descartaron 20 por hongos y algunas por no activación de la semillas. Leucaena ● 12/09/2022: Siembra. o 1: 25 semillas humedecidas con 20mL de solución. o 2: 25 semillas humedecidas con 20mL de solución. ● 14/09/2022: Primer cambio de paño. o 1: Se observa que las semillas están con mucha humedad. Primer cambio de servilletas. Se humedecen las semillas con 15ml de solución al 0,25M de NaCl. Práctico: Fisiología del Estrés y Crecimiento Acuña Florencia 4 o 2:Se observa que las semillas están con mucha humedad. Primer cambio de servilletas. Se humedecen las semillas con 15ml de solución al 0,25M de NaCl. ● 19/09/2022: Segundo cambio de paño. o 1: En esta muestra se observaron 2 semillas germinadas. o 2: No se observaron semillas germinadas. ● 22/09/2022: Tercer cambio de paño. o 1: Se pudo observar que germinaron nuevamente 2 semillas más, siendo el total de 4 semillas germinadas de dicha muestra. Las dos primeras semillas germinadas que observamos en la fecha del 19/09 se encontraban con presencia de hongo, la cual tuvimos que extraerlas de la muestra para evitar que contaminen al resto. Las demás semillas continuaban húmedas y algunas hinchadas. o 2: En esta muestra se pudo observar las primeras dos semillas germinadas. ● 26/09/2022: Finalización de la siembra y recolección de datos. o 1: De 25 semillas, germinaron 4, de las cuales 2 fueron extraídas por presencia de hongo y las dos restantes continuaban creciendo. Quedando un total de 21 semillas sin germinar. Ambas semillas fueron utilizadas para realizar las mediciones. o 2: Se pudo observar que germinó nuevamente una semilla más, siendo un total de 3 las germinadas. De esta muestra no pudimos utilizar ninguna para mediciones, ya que eran recientemente germinadas y aún no había desarrollado su órgano aéreo. Concentración 0,40 M NaCl Se pusieron a germinar 2 rollos para cada especie con 25 semillas cada uno, humedecidos con una solución salina de concentración 0,40 M de NaCl (cloruro de sodio, sal de mesa). Se hizo un cambio de paños, nuevamente humedecidos con la solución salina. Por cada fecha observada. Prosopis ● 12/09/2022: Inicio de la experiencia. Siembra o 1: Semillas humedecidas con 20 ml de solución al 0,4 M de Nacl o 2: Semillas humedecidas con 20 ml de solución al 0,4 M de Nacl ● 14/09/2022: Primer cambio de paño o 1: Se observa que las semillas están muy hinchadas. Se humedecen las semillas con 15 ml de solución al 0,4 M de NaCl. o 2: Se observa que las semillas están muy hinchadas. Se humedecen las semillas con 15 ml de solución al 0,4 M de NaCl. ● 19/09/2022: Segundo cambio de paño o 1: Las semillas aún no germinaron. Se humedecen con 20 ml de solución. Práctico: Fisiología del Estrés y Crecimiento Acuña Florencia 5 o 2: Las semillas aún no germinaron. Se humedecen con 20 ml de solución. ● 22/09/2022: Tercer cambio de paño o 1: Las semillas aún no germinaron. Se encuentran hongos en gran parte de las semillas. Se las lava con agua destilada y se las vuelve a ubicar en nuevas servilletas. o 2: Las semillas aún no germinaron. Se encuentran hongos en gran parte de las semillas. Se las lava con agua destilada y se las vuelve a ubicar en nuevas servilletas. ● 26/09/2022: Finalización de la siembra y recolección de datos. o 1: Germinación de 1 semilla. formación de Hongos en toda la muestra, se descarta toda la muestra. o 2: Germinación de 2 semillas. Se observa formación de Hongos en toda la muestra, se descarta Leucaena ● 12/09/2022: Inicio de la experiencia. Siembra o 1:Semillas humedecidas con 20 ml de solución al 0,4 M de NaCl o 2:Semillas humedecidas con 20 ml de solución al 0,4 M de NaCl ● 14/09/2022: primer cambio de paño o 1: Se observa que las semillas están con mucha presencia de humedad. Solo se humedecen las semillas con 15 ml de solución al 0,4 M de NaCl. o 2: Se observa que las semillas están con mucha presencia de humedad. Solo se humedecen las semillas con 15 ml de solución al 0,4 M de NaCl. ● 19/09/2022: Segundo cambio de paño o 1: Las semillas aún no germinaron. Se humedecen con 20 ml de solución. o 2: Las semillas aún no germinaron. Se humedecen con 20 ml de solución. ● 22/09/2022: Tercer cambio de paño o 1: Las semillas aún no germinaron. Se humedecen con 20 ml de solución o 2: Las semillas aún no germinaron. Se humedecen con 20 ml de solución. ● 26/09/2022: Finalización de la siembra y recolección de datos. o 1: Semillas muy hinchadas. No se observa germinación, ni formación de Hongos o 2: Semillas muy hinchadas. No se observa germinación, ni formación de Hongos. Práctico: Fisiología del Estrés y Crecimiento Acuña Florencia 6 Resultados Resultados Germinación Se considerarán germinadas aquellas semillas en las que emerjan los cotiledones. Tabla de mediciones, archivo Excel anexado. Hoja 1 Fechas Dias 12-sep 14-sep 19-sep 22-sep 26-sep Testigo 1 1 2 3 4 5 Total PG % 0 0 25 25 25 23 92 Tratamiento a Prosopis alba 0,15 M 0,25 M Rollo 1 Rollo 2 Rollo 1 Rollo 2 0 0 0 0 0 0 0 0 25 (-7) 25(-2) 20 16 18 (-3) 23 (-2) 16 5 15 21 16 5 15 21 16 5 60 84 64 20 0,4 M Rollo 1 Rollo 2 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2 0 0 0 0 Porcentaje Germinativo ( %). Prosopis alba 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Rollo 1 Testigo 1 Rollo 2 0,15 M Práctico: Fisiología del Estrés y Crecimiento Acuña Florencia Rollo 1 Rollo 2 0,25 M Rollo 1 Rollo 2 0,4 M 7 Fechas Días 12-sep 14-sep 19-sep 22-sep 26-sep Testigo 3 1 2 3 4 5 Total PG % 0 0 5 4 2 11 44 Tratamiento a Leucaena 0,15 M 0,25 M Rollo 1 Rollo 2 Rollo 1 Rollo 2 0 0 0 0 0 0 0 0 4 (-2) 3 2 0 4 2 2 2 1 3 0 1 7 8 2 3 28 32 8 12 0,4 M Rollo 1 Rollo 2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Porcentaje germinativo (%). Leucaena 50 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 Rollo 1 Testigo 3 Rollo 2 0,15 M Práctico: Fisiología del Estrés y Crecimiento Acuña Florencia Rollo 1 Rollo 2 0,25 M Rollo 1 Rollo 2 0,4 M 8 Crecimiento Solo se realizaron mediciones de 10 semillas de cada paño elegidos al azar. Las mediciones están en centímetros. (tabla de mediciones, archivo Excel anexado. Hoja 2). Variables de medición: LA (longitud aérea), LR (longitud de radícula) y DAC (diámetro altura cuello). Prosopis 13,28 14 Promedios 12 9,65 10 8 6 5,565 5,38 5,17 4 2,53 2 0,184 0,149 0,17 0 0 0 DAC LA LR DAC 0 LA LR DAC Testigo LA LR DAC Concentración 0,15M NaCl LA LR Concentración 0,25M NaCl Concentración 0,40M NaCl Leucaena 12 9,69 Promedios 10 8 6 6,64 5,19 3,97 4 1,65 2 0,185 0,171 0,22 DAC LA 0,05 0 0 0 DAC LA LR DAC 0 LA LR Testigo DAC LA LR Concentración 0,15M NaCl Práctico: Fisiología del Estrés y Crecimiento Acuña Florencia LR Concentración 0,25M NaCl Concentración 0,40M NaCl 9 Conclusiones Conclusiones Con los datos obtenidos podemos decir: Que el porcentaje germinativo es mayor en el Prosopis alba que en la Leucaena, debido a que la primera especie es autóctona de la región y la segunda es introducida. Por lo tanto el Prosopis está mejor adaptado a las exigencias ambientales. El cálculo del PG% es importante porque nos permite tener un estimativo por especie del cual será la máxima germinación posible que pueda esperarse en diversas condiciones. Por ej. si uno quiere recolectar para germinar o almacenar en un banco de semillas. Si la especie posee un alto porcentaje germinativo con un lote pequeño de semillas bastara. No obstante si el porcentaje germinativo es bajo, se deberá recolectar un número alto de semillas. Además realizar estudios de como diversas condiciones ambientales (salinidad, temperaturas altas o bajas, sequia) afectan a la germinación. El cálculo del TMG es importante porque permite conocer el tiempo en que las semillas tardan en germinar aproximadamente y comienzan con la próxima etapa, la del crecimiento. Esto permite gestionar recursos para las plántulas, ya que los requerimientos serán otros. El tratamiento que afecto más a la etapa de germinación y de crecimiento fue el de concentración 0,4M. La variable más comprometida de la especie prosopis durante el crecimiento fue la longitud de radícula. También se observa una disminución abrupta de la variable de longitud aérea entre las concentraciones 0,15 y 0,25M. La variable más comprometida de la especie leucaena durante el crecimiento fue la longitud aérea. Especialmente entre las concentraciones 0,15 y 0,25M. La relación entre LA/LR es que son variables proporcionales. Ambas se ven comprometidas frente a la salinidad y disminuyen. Ya que podría ser que mientras una variable disminuye la otra podría aumentar para contrarrestar la carencia de la variable perjudicada. Práctico: Fisiología del Estrés y Crecimiento Acuña Florencia 10
