UNIVERSIDAD ALEXANDER VON HUMBOLDT INFORME DE LABORATORIO EXTRACCIÓN DEL ADN MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA PRIMER SEMESTRE VERÓNICA PEDROZO SALAZAR MÓNICA GRAJALES LAURA GOMEZ DOCENTE: LUIS RAMIRO VARGAS ALZATE BIOLOGÍA MOLECULAR APLICADO EN NORMA APA Noviembre, 2022 Introducción En la práctica enfocada en la extracción de ADN, por el laboratorio de la universidad Alexander Von Humboldt realizada el día 19 de octubre del presente año, prevista para aislar y purificar el ADN de origen vegetal y así realizar un buen trabajo de comparación entre la estructura del ADN origen animal y origen vegetal, para lograr la ampliación de calidad. La práctica que hoy en día nos permite la visualización de la estructura es gracias a la biotecnología que nos permite la diversidad de protocolos en el aislamiento del ADN. (Rojas Herrera, 2011, Protocolo para la extracción de ADN metagenómico). Herramientas: ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● ● 2 láminas de papel filtro 1 embudo Etanol Mortero Cloruro de sodio Detergente líquido 1 colador de tela 2 bolsas ziploc Tomate Banano Beaker Tubo de ensayo Asa bacteriológica individualmente para proceder administrarle jabón líquido y comenzar a mezclar para realizar una muestra homogénea, a diferencia de otras mezclas tomadas por los diferentes grupos, podemos observar que la del banano nos deja sacar un poco mas de ADN a diferencia de la fresa, mandarina y tomate. (Rocío Esteban Gallego, 2019, Extracción de ADN con material cotidiano). Lo anterior dicho se debe romper la pared celular y membrana para poder acceder al núcleo, donde se está presente el material genético y así liberarlo y aislarlo por medio del alcohol y así permitirnos observar su estructura. (José Luis Coronado, 2021, Comparación de dos metodos de extración de DNA). El docente nos explica que las celdas de cuarzo se utilizan por su resistencia a la luz ultravioleta ,El cuarzo es un material que nos ayuda por su traslúcida y así tener una mayor lectura. El equipo usado en la práctica se denomina espectroscopio,este nos ayuda a identificar qué porcentaje de ADN tenía cada muestra que depositamos, y así determinar el contenido de la muestra. Resultados Discusión En la realización de la actividad se logra obtener el conocimiento adquirido para poder diferenciarlas ya que ahora es mucho más fácil la obtención y la identificación del ADN por nuestra manipulación de manera sencilla. Se planteó la solución de poder buscar información que nos permitiera identificar y comparar el material genético para poder tener un mejor conocimiento y poder identificar bien lo observado. (Rojas Herrera, 2011, Protocolo para la extracción de ADN metagenómico). En este laboratorio podemos extraer muestras de ADN de algunas frutas y vegetales como lo fueron de el banano y el tomate, pero antes de esto se debía realizar un proceso para extraer dicho ADN , comenzamos a reducir el tomate y el banano Fig 1. Materiales para la realización de las muestras. con nuestros conocimientos previos de placas vistas anteriormente. También en esta práctica con el método usado para la liberación del ADN se logró comprender el paso a paso de la liberación de este pudiendo evidenciar muy claramente el procedimiento entendiendo muy bien que sucedía en cada uno, agregando nuevos conocimientos. como el uso del detergente en este experimento que es el que permite desenvolver grasas y lípidos para que la membrana plasmática y la membrana nuclear de la célula se puedan romper y así permitir que el ADN pueda salir. (José Luis Coronado, 2021, Comparación de dos metodos de extración de DNA). Fig. 2 Imágen A; Beaker con la mezcla homogénea de la fruta macerada, detergente y sal. Imágen B; Tubo de ensayo con la fruta (banano), integrado con alcohol, detergente y sal, para liberar la expresión del ADN. Imágen C; D Extracción de partículas de ADN. ADN Humano procedimiento: Se deposita por medio de un beaker los buches anteriormente realizados para la exposición del ADN. Posteriormente se inicia la mezcla del detergente con los buches. Se procede a llenar el beaker hasta los 250 ml con el etanol y esperamos de 25 - 30 minutos para la extracción del ADN. CONCLUSIÓN El objetivo de la práctica es conocer la diferencia del ADN animal y vegetal enfocada en su estructura. Poder realizar este procedimiento nos permite dimensionar las diferentes perspectivas al protocolo usado, para así entender y comprender en qué momento la membrana celular se rompe y así liberar el material genético. (Luis Felipe Guzmán, 2020, Comparación de protocolos de aislamiento de DNA ). Como conclusión se logró diferenciar los tipos de ADN mediante la extracción y liberación del material genético de las frutas comparando esto Fig. 3 Imagen A; Muestra de saliva. CUESTIONARIO: 1. ¿Cuál es propósito de utilizar tampón salino en el procedimiento? 2. ¿Qué finalidad tiene el exponer las células a un detergente fuerte? 3. ¿Qué acción tiene el alcohol isopropílico sobre la molécula de DNA? 4. Su ADN es 98.4% similar al de un chimpancé y 50% similar al de un plátano. ¿Cómo puede su genoma ser similar a los de ellos? ¿Qué tienen en común sus células con las del plátano? ¿Qué hay de similar con el ADN? ¿Qué indica esto sobre su relación con otras especies? 5. Cada célula en su cuerpo, salvo los hematíes, contiene una copia de su ADN. Cuando se le concibió, estaba hecho de una sola célula. Explique cuán importantes son los pasos de la replicación en el crecimiento y mantenimiento de su cuerpo. 6. Hable sobre por qué el emparejamiento de bases específicas es fundamental en el proceso de la replicación. 7. Hable sobre la importancia del paso final de la replicación donde la enzima, verifica si hay errores. DESARROLLO. 1. El tampón fosfato salino es una solución tampón en la investigación biológica. Es una solución acuosa y salina que contiene cloruro sódico, fosfato sódico, cloruro de potasio y fosfato de potasio. Mientras que los grupos fosfato mantienen el pH estable, la osmolaridad coincide con la del cuerpo humano (isotónico) 2. El detergente disuelve las grasas o lípidos, que es el componente principal de la membrana plasmática y nuclear de las células (es el mismo principio por el que el gel limpia la grasa de nuestra piel). Al romperse las membranas celulares se permite la salida del ADN al exterior. 3. Líquido transparente, volátil e incoloro empleado en el laboratorio químico para extraer y disolver lípidos y en histología se usa como solubilizante de los colorantes de grasas y como agente deshidratante. El isopropanol precipita el DNA porque compite con este por el agua, deshidratando y llevándolo al fondo del tubo. 4. Sencillamente hay genes que son igual de funcionales en las plantas que en los animales y eso hace que haya una identificación en la secuencia de ADN. Esto no significa que seamos mitad hombres y mitad plátanos, simplemente que compartimos la mitad de los genes con la banana. Una de las características más notables del ADN es su capacidad de replicarse; dicho de otra manera, tiene la capacidad de formar copias de sí mismo. La replicación se lleva a cabo en la fase de síntesis (S) del ciclo celular. Esta etapa es un paso obligado para realizar la división celular. Por ello, se determina que la información genética se transfiere de una célula a otra mediante el proceso de replicación del ADN. 5. 6. El apareamiento de bases se refiere a la interacción entre bases nitrogenadas que da origen a las formas híbridas o plegadas de los ácidos nucleicos, tanto el ADN como el ARN. Las interacciones entre las bases se dan a través de puentes de hidrógeno entre regiones específicas. El primer patrón de apareamiento modelado por Watson y Crick describe la interacción G-C(guanina-citosina), A-T(adenina-timina) y como consecuencia la estructura de doble hélice del ADN. El carácter complementario de este apareamiento proporciona también un mecanismo de replicación y transcripción: procesos esenciales en la transferencia y el procesamiento de la información genética. 7. La división celular es clave para la renovación de las células a nuestros tejidos y órganos. Hay dos procesos en los que la división celulares es especialmente importante: el desarrollo embrionario y la formación de tumores. Un error en el proceso que copia el ADN durante la división celular, puede causar cambios genéticos en las células hijas. Así pues, la replicación del ADN defectuoso es una característica distintiva del cáncer e impulsora de inestabilidad genómica. Bibliografía: 1. 2. González-de la Cruz, J. Ulises, Delfín-González, H., Cruz-Leyva, Ma. C. de la, Rojas-Herrera, R. A, & Zamudio-Maya, M.. (2011). Protocolo para la extracción de ADN metagenómico bacteriano del langostino Macrobrachium carcinus L. Tropical and subtropical agroecosystems, 14(3), 875-883. Recuperado en 02 de noviembre de 2022, de http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1870-04622011000300015&lng=es&tlng=es .. Guzmán Rodríguez, Luis Felipe, Cortés Cruz, Moisés Alberto, Pichardo González, Juan Manuel, & Arteaga Garibay, Ramón Ignacio. (2018). Comparación de protocolos de aislamiento de DNA a partir de semilla de soya. Revista mexicana de ciencias agrícolas, 9(8), 1691-1701. Epub 06 de octubre de 2020.https://doi.org/10.29312/remexca.v9i8.872 3. Pardo-Pérez, E., Coronado-González, J. L., & Begambre-Hernández, M. (2021). Comparación de dos métodos de extracción de ADN a partir de hojas secas de guayaba (Psidium guajava L.) para estudios moleculares. Revista U.D.C.A Actualidad & Divulgación Científica, 24(1). https://doi.org/10.31910/rudca.v24.n1.2021.1504 4. Marcos-Merino,, José María, Gallego, Rocío Esteban, & Ochoa de Alda, Jesús Gómez. (2019). Extracción de ADN con material cotidiano: desarrollo de una estrategia interdisciplinar a partir de sus fundamentos científicos. Educación química, 30(1), 58-69. Epub 14 de octubre de 2019.https://doi.org/10.22201/fq.18708404e.2019.1.65732
