Influencia de Biomoléculas en el Crecimiento Microbiano Ruminal Silvia F. Campos Hernández, Naomy A. Sánchez Núñez, Martin Millán Ardila Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad del Tolima 0101: Medicina Veterinaria y Zootecnia Dr. Giann Carlos Peñaloza Atuesta 24 de marzo de 2022 2 Índice 1. Introducción .............................................................................................................. 3 2. El Rumen Y Su Ecosistema Microbiano ................................................................... 4 2.1. Bacterias ............................................................................................................ 4 2.2. Protozoos ........................................................................................................... 5 2.3. Hongos ............................................................................................................... 5 2.4. Arqueas .............................................................................................................. 5 3. Las Biomoléculas: Carbohidratos, Lípidos y Proteínas............................................. 6 3.1. Carbohidratos..................................................................................................... 6 3.2. Lípidos ............................................................................................................... 7 3.3. Proteínas ............................................................................................................ 8 4. Conclusiones ............................................................................................................ 9 5. Referencias ............................................................................................................ 10 3 1. Introducción La proteína microbiana representa la principal fuente de suministro de proteína metabolizable (Danielsson R., et. al., 2017). Esta proteína, es absorbida por la dinámica ruminal para el mantenimiento, crecimiento, reproducción y lactancia en el organismo ruminal (Castillo L., E. & Domínguez O., M. G., 2019). Es de vital importancia mantener un equilibrio de la población microbiana ruminal compuesto por, hongos, bacterias, arqueas y protozoarios, esto con el objetivo de mejorar la taza de fermentación, degradación y postulo absorción de los nutrientes de los alimentos. Existen factores que afectan en gran medida el desarrollo óptimo del tracto digestivo de los animales poligástricos, manifestando eficiencia en la absorción de nutrientes como carbohidratos, proteínas, lípidos y minerales, si y solo si se tiene un balance en la concentración de la micro flora ruminal. Los estudios han comparado el uso de marcadores microbianos convencionales, o factores que afectan el crecimiento microbiano ruminal (Castillo L., E. & Domínguez O., M. G., 2019). Además, informes recientes han evaluado las ecuaciones para predecir el flujo post-ruminal de proteína microbiana. Sin embargo, hasta donde saben los autores, no existen estudios que integren los avances recientes y los hallazgos derivados del uso de técnicas moleculares en la microbiología ruminal, ni que mejoren la comprensión de los factores que afectan la síntesis de proteína microbiana y su aportación a la proteína metabolizable, o de los procedimientos adecuados para cuantificarla ruminal (Castillo L., E. & Domínguez O., M. G., 2019). El objetivo de esta investigación, es el de identificar cómo los compuestos de los alimentos (biomoléculas) pueden afectar esta micro fauna ruminal. 4 2. El Rumen Y Su Ecosistema Microbiano El sistema digestivo de los poligástricos se caracteriza por la cantidad de cavidades gástricas, en donde se realiza todo un proceso metabólico que pasa por diferentes fases. Uno de los grupos de animales que son objeto de estudio, son los rumiantes, en donde encontramos las vacas u ovejas, quienes destacan por su capacidad de alimentarse de gramíneas (pastos y forrajes), esto puesto que cuentan con la posibilidad de degradar carbohidratos estructurales (CE) como lo son los que componen las células vegetales (celulosa, hemicelulosa y pectina), que por el contrario los monogástricos no pueden degradar ya que su digestión es desarrollada por una sola cavidad de tipo enzimática, sin las enzimas necesarias para este proceso. Por otra parte, los rumiantes además de contar con una cavidad enzimática, primeramente, deben digerir los alimentos por acción fermentativa (Relling, A. E. & Mattioli, G. A., 2003). Figura 1. Nota. Adaptado de “Principios básicos de la fisiología digestiva en rumiantes” (p.102), por Segura Canizales, F., 1989. Servicio Nacional de Aprendizaje [SENA]. Como se puede observar en la figura (1), el sistema digestivo de los rumiantes se compone de rumen-retículo, en donde ocurre el proceso de fermentación; omaso y abomaso. El rumen es la primera cavidad, un ambiente anaerobio en donde encontramos un gran ecosistema microbiano con los actores principales de la fermentación como lo son protozoos, hongos, archeas y bacterias. 2.1. Bacterias Estas representan el mayor porcentaje de biomasa en el rumen, con una densidad de entre 107 – 1010 células/ml de líquido ruminal (Castillo L., E. & Domínguez O., M. G., 5 2019). Se estima que en el rumen hay una variedad de unas 7.000 especies, pero sólo se tienen registros del 30% de estas (Alvarado V., D., 2020). Dentro de las bacterias encontramos las celulolíticas, hemicelulolíticas, aminolíticas, bacterias que usan azúcares, bacterias que utilizan ácidos, bacterias proteolíticas, bacterias productoras de amonio, bacterias que producen metano, bacterias lipolíticas y bacterias sintetizadoras de vitaminas. Dentro de estas encontramos que su fuente de energía se basa en diferentes compuestos orgánicos, como lo son la celulosa, glucosa, xilosa, almidón, lactato, glicerol y formiato, en donde algunos de estos compuestos son fermentados por acción enzimática de las mismas, liberando AGV, gracias a las deshidrogenización (DH) (Grudsky P. R. & Arias B., J., L. 1983). 2.2. Protozoos En el rumen se puede encontrar según Del Rosario Blanco, M.- s.f., entre “104 a 106 células/ml de contenido ruminal” (p. 3). Todos los protozoos son anaerobios estrictos. En su mayoría se encuentran especies ciliadas y flageladas. Una característica de los protozoos es que no sintetizan proteínas a partir de nitrógeno (N) no proteico y tampoco degradan celulosa. Sin embargo, estos microorganismos tienen la capacidad de almacenar hidratos de carbono en forma de polisacáridos somáticos (Del Rosario Blanco, M.- s.f.). 2.3. Hongos Son organismos pequeños flagelados, asociados a las fracciones más lentamente digeridas de las plantas, ejerciendo como colonizadores iniciales de la lignocelulosa y su favoreciendo en el incremento de la velocidad en que las bacterias pueden digerir la fibra. (Castillo L., E. & Dominguez O., M. G., 2019) Se han diferenciado 55 géneros de hongos en donde los que más predominan según Castillo L., E. & Domínguez O., M. G., (2019), son “Ascomycota (27%)”, “Basidiomycota (3 %)” y “Neocallimastigomycota (1 %)”. 2.4. Arqueas Castillo L., E. & Domínguez O., M. G. (2019) afirma que 6 “La población de arquea incluye microorganismos que se creía eran bacterias. Sin embargo, el análisis molecular de su ADN ha revelado que pertenecen a un dominio diferente. La densidad de las arqueas en el rumen no ha sido determinada con precisión. Estos microorganismos desempeñan un papel especial en la eficiencia alimenticia porque participan en la formación de metano, la cual utiliza dióxido de carbono e hidrógeno” (párr. 11). 3. Las Biomoléculas: Carbohidratos, Lípidos y Proteínas Habiendo entendido el rumen y cada uno de los microorganismos, se puede proceder a identificar las alteraciones que pueden provocar diferentes biomoléculas a este ambiente microbiano ruminal. 3.1. Carbohidratos También conocidos como hidratos (agua) de carbono, se componen de átomos de carbono, hidrógeno y oxígeno, en una proporción (CH2O) n. Los carbohidratos se dividen en monosacáridos, disacáridos y polisacáridos (Solomon et al., 2013, Parte 3). A nivel ruminal este compuesto representa para la microbiota una fuente de energía, se encuentra en la alimentación como carbohidratos estructurales (CE) y no estructurales (CNE). Para el caso de los CE, como lo son la celulosa y hemicelulosa, se les considera de difícil degradación, por lo que se requiere de los microorganismos del rumen para este proceso junto a un proceso de fermentación. Como se muestra en la siguiente figura (2), debido a la naturaleza de enlace beta 1-4 en la celulosa este compuesto sólo puede ser degradado a uno más simple con la ayuda de la acción enzimática de determinados m.o. El objetivo de la degradación es convertir estos compuestos a unos más simples, como lo son los ácidos grasos volátiles (AGV). Durante este proceso por acción de la fermentación se genera un medio ácido en el rumen, que no sólo va a afectar los microorganismos intraruminales, sino que también puede afectar a el animal. Este cambio a nivel ruminal, se origina cuando la cantidad de materia orgánica en proceso de fermentación es alta y mayor a la microbiota ruminal, por otra 7 parte, se observa que puede desarrollarse un aumento de los AGV que afectan directamente en el pH. (Van Lier, E., & Regueiro, M., 2008). Figura 2. Nota Adaptado de “DIGESTIÓN EN RETICULO-RUMEN” (p.7), por Van Lier, E., & Regueiro, M. (2008). Facultad de Agronomía, Universidad de la República 3.2. Lípidos Aunque los lípidos también contienen carbono, difieren con los carbohidratos ya que su estructura es heterogénea, y se caracterizan por ser solubles en solventes no polares. Esta propiedad se debe a que en su estructura cuenta con pocos grupos funcionales que contengan oxígeno, y ya que los grupos funcionales con presencia de oxígeno se consideran hidrofílicos, en este caso al contar con menos oxígeno se le confiere su calidad hidrofóbica. Entre los grupos de lípidos biológicamente importantes están las grasas, los fosfolípidos, los carotenoides (pigmentos vegetales amarillo y naranja), esteroides y ceras (Solomon et al., 2013, Parte 3). Los lípidos hacen parte la dieta de los rumiantes, aunque en menor proporción, estos se encuentran como ácidos grasos insaturados (AGIS) en las plantas. Para la metabolización de los lípidos entran los m.o. como las bacterias lipolíticas, un ejemplo es la A. Lypolítica realizando la lipolisis de triglicéridos y usando ribosa, fructosa, glicerol y lactato como fuente de carbono y energía (Alvarado V., D., 2020). Alvarado V., D. (2020) afirma que “la lipólisis da como resultado la liberación de ácido grasos libres (AGL) de los ésteres para permitir la BH, que es la reducción del número de dobles enlaces en la cadena de carbono de los AG. Dado que la hidrogenación posterior solo puede 8 ocurrir si el resto carboxilo está libre, conociendo que la lipolisis es un paso necesario dentro de la BH” (p. 12). Sin embargo, aunque la inclusión de lípidos en la dieta para los rumiantes sea de ayuda en la proliferación de bacterias lipolíticas y la posibilidad de generar AGL para que otras bacterias puedan metabolizar, se observa que el exceso de lípidos mayormente los AGIS pueden, según Alvarado V., D. (2020) “reducir la adhesión y multiplicación de la población bacteriana celulolíticas, las cuales son responsables de la fermentación de la fibra y al mismo tiempo afecta la permeabilidad de la membrana microbiana”(p. 4), de este modo se inhibe la actividad ruminal de bacterias Gram-positivas y también de los protozoos (Alvarado V., D., 2020). 3.3. Proteínas Las proteínas son moléculas compuestas por aminoácidos, los cuales son su unidad estructural. Comprenden funciones estructurales, de señalización, enzimáticas, metabólicas y muchas más; lo que las involucra en la gran mayoría de procesos físicos y químicos de los organismos. En las proteínas se encuentran normalmente unos 20 aminoácidos, cada uno de ellos se identifica por una cadena lateral variable (grupo R) unida a un carbono alfa, este carbono se caracteriza por ser un carbono asimétrico unido a un grupo carboxilo (-COOH) y un grupo amino (-NH2) (Solomon et al., 2013, Parte 3). La proteína digerible en el rumen se obtiene de los alimentos, los efectos que puede presentar esta proteína en el crecimiento microbiano tiene dos variables, una positiva y la otra negativa. Esto depende estrictamente de los balances nutricionales, especialmente entre la fuente proteica y la de carbohidratos, pues si estos se encuentran en equilibrio, se produce el máximo crecimiento microbiano, observándose mejoras en la producción de ácidos grasos volátiles (AGV), gases (CH4 y CO2) y NH3. Por el contrario, si hay un mayor aporte proteico se limita el crecimiento de microorganismos porque al haber un déficit de energía, se verán obligados a degradar el excedente proteico para obtenerla. De este modo se presentan altas concentraciones de NH3 en sustrato ruminal, dando paso a una gran cantidad de urea en el hígado que posteriormente será eliminada en la orina, lo que resulta en un proceso ineficiente (Fernández T., G., 2016). 9 4. Conclusiones Los microrganismos que podemos encontrar en el rumen portan un rol muy importante en la nutrición de rumiantes, en este aspecto podemos ver que las bacterias y protozoarios aportan mayor cantidad de proteína en el rumen, no obstante, los hongos no deben de pasar desapercibidos ya que ejercen una tarea de colonizadores favoreciendo la velocidad con que las bacterias digieren la fibra. La relación simbiótica-mutualista que se genera entre el animal rumiante y los microrganismos se podría decir que es la base de toda la actividad metabólica planteada en el texto. Sin embargo, toda esta acción simbiótica puede verse afectada si se presenta un mal balance nutricional, por lo que conocer la microbiota ruminal es el pilar fundamental para reconocer el tipo de alimentación ideal para estos animales poligástricos. Teniendo todo esto en cuenta es posible identificar cómo las biomoléculas, que hacen parte de la alimentación del animal, pueden afectar estos microorganismos. 10 5. Referencias Alvarado Vesga, D. (2020). Evaluación de los cambios en la fermentación y la población microbiana ruminal en machos castrados Nelore alimentados con una dieta alta en contenido lipídico [Tesis para título de Médico Veterinario, Universidad de Santander]. Repositorio Institucional – Universidad de Santander. Castillo López, E. & Domínguez Ordóñez, M. G., (2019). Factores que afectan la composición microbiana ruminal y métodos para determinar el rendimiento de la proteína microbiana. Revisión. Revista mexicana de ciencias pecuarias, 10(1), 120-148. https://doi.org/10.22319/rmcp.v10i1.4547 Danielsson R, Dicksved J, Sun L, Gonda H, Müller B, Schnürer A and Bertilsson J (2017) Methane Production in Dairy Cows Correlates with Rumen Methanogenic and Bacterial Community Structure. Front. Microbiol. 8:226. doi: 10.3389/fmicb.2017.00226 Del Rosario Blanco, M. (s.f.). Bacterias ruminales [Tesina]. Sitio Argentino de Producción Animal, Repositorio Digital de Acceso Abierto. [PDF] Fernández Turren, G. (2016). Evaluación de un método in vitro para estimar la degradabilidad ruminal de los compuestos nitrogenados. [Tesis de Maestría en Nutrición de Rumiantes, Universidad de La República]. Repositorio Institucional – Universidad de La República Uruguay. Grudsky P. R., Arias B., J., L. (1983) Aspectos generales de la microbiología del rumen. Monografías de Medicina Veterinaria, Vol.5(2). - https://web.uchile.cl/vignette/monografiasveterinaria/monografiasveterinaria.uchil e.cl/CDA/mon_vet_completa/0,1421,SCID%253D7627%2526ISID%253D410,00. html Solomon, E., Berg, L., & Martin, D. (2013). Biología (9.a ed.). Cengage Learning. Relling, A. E., & Mattioli, G. A. (2003). Fisiología digestiva y metabólica de los rumiantes. Argentina: UNLP Editorial Edulp, 23-55. Van Lier, E., & Regueiro, M. (2008). DIGESTIÓN EN RETÍCULO-RUMEN. Facultad de Agronomía, Universidad de la República. http://prodanimal.fagro.edu.uy/cursos/AFA/TEORICOS/Repartido-Digestion-enReticulo-Rumen.pdf