Artículo de investigación Rev Sanid Milit Mex 2015;69:330-335. Estudio comparativo de tres métodos coproparasitoscópicos en el diagnóstico de parasitosis intestinales Tte. Q.B. David Villalobos-García Subtte. A.A.S. Miguel Ángel López-Islas Tte. Cor. Snd. Jose Luis Frutos-Nava Unidad de Especialidades Médicas. Estado de México RESUMEN Antecedentes: las infecciones parasitarias, producidas por protozoos y helmintos intestinales, afectan a más de dos mil millones de personas en todo el mundo y constituyen un problema de salud pública, especialmente en países en desarrollo. Los estudios coproparasitoscópicos son los métodos utilizados para la detección e identificación de parásitos en materia fecal y tejidos del tubo digestivo. La utilidad de cada método es variable y depende de diferentes factores (examen directo y técnicas de concentración como: Faust, Richie y sedimentación), además de su sensibilidad, especificidad y ventajas. Objetivo: evaluar la técnica de formalina versus los métodos de Faust y sedimentación. Material y métodos: estudio comparativo y descriptivo en el que se analizaron 100 muestras de materia fecal recientes y frescas, sin conservadores ni aditivos, y que los pacientes no hubieran consumido antibióticos, laxantes o algún desparasitante mínimo 30 días antes de su obtención. Cada muestra se dividió en tres porciones iguales, de 2 a 3 g y se analizaron con técnicas de formalina, sedimentación y Faust. Resultados: la técnica de formalina identificó mayor número de parásitos: formalina (30%) vs sedimentación (17%) y flotación (7%). Los parásitos identificados fueron Blastocystis hominis, Endolimax nana, Entamoeba coli, Giardia lamblia y Entamoeba histolytica. Esa técnica fue el procedimiento con mejores resultados en cuanto a tiempo de proceso, sensibilidad y especificidad para la búsqueda de parásitos intestinales. Palabras clave: parásitos, parasitosis, método coproparasitoscópico. Comparative study of three coproparasitoscopic methods in the diagnosis of intestinal parasitism Recibido: 4 de mayo 2015 Aceptado: 6 de junio 2015 Correspondencia: Tte. Q.B. David Villalobos García davidvillalobos­[email protected] ABSTRACT Background: Parasitic infections caused by intestinal protozoa and helminths affect more than two billion of the world population and is a public health problem. The coproparasitoscopic studies are defined as methods for the detection and identification of parasites in stool and/or 330 Este artículo debe citarse como Villalobos-García D, López-Islas MA, JL Frutos-Nava. Estudio comparativo de tres métodos coproparasitoscópicos en el diagnóstico de parasitosis intestinales. Rev Sanid Milit Mex 2015;69:330-335. Villalobos-García D y col. Parasitosis intestinales tissues of the digestive tract. The value of each is variable and depends on many factors: direct examination, and Faust, Richie and sedimentation technique; therefore it is important to know its sensitivity, advantages, disadvantages and costs of each of them. Objective: To evaluate and compare the Fromalin method with sedimentation and flotation techniques to establish criteria on the methodology and identification of intestinal parasites. Material and methods: A total of 100 stool samples, without preservatives or additional additives. Patients elegible for the study were those who: not having taken for a minimum of 30 days antibiotics, laxatives or any dewormer. Each individual sample from the same patient was divided into three equal portions 2-3/g, and the samples were analyzed with three different techniques (Formalin, Sedimentation and Faust). Results: The formalin technique identified the greatest number of parasites: Formalin (30%), sedimentation (17%) and flotation (7%). The identified parasites were Blastocystis hominis, Endolimax nana, Entamoeba coli, Entamoeba histolytica and Giardia lamblia. This technique proved to be the procedure with better results in terms of sensitivity and specificity for the search for intestinal parasites. Key words: parasites, coproparasitoscopic methods. Antecedentes Las infecciones parasitarias afectan a más de dos mil millones de personas en todo el mundo y constituyen un problema de salud pública, especialmente en países en desarrollo con inadecuadas condiciones sanitarias.1,2 La parasitosis intestinal ocurre cuando una especie vive dentro del tubo intestinal del huésped. El parásito compite por el consumo de sustancias alimentarias o se nutre de la sangre del huésped y se adhiere a la pared intestinal, como sucede en el caso del anquilostoma.3 Los estudios coproparasitoscópicos son los métodos utilizados para la detección e identificación de parásitos en materia fecal y en tejidos del tubo digestivo; la utilidad de cada uno es variable y depende de muchos factores. El examen directo es el procedimiento técnicamente más sencillo, rápido y económico; sin embargo, existen técnicas de concentración como: Faust, Richie y de sedimentación de los que es importante conocer su sensibilidad, ventajas, desventajas y costos.1 En 2009 Guevara realizó un estudio de enteropatías en poblaciones indígenas y mestizas de la sierra de Nayarit, México. Utilizó la técnica de CPS formalina al 10% y demostró elevada incidencia de protozoarios comensales y helmintiasis. La técnica de formalina permite un rápido diagnóstico de parasitosis, pues el método no implica procedimientos de tiempo de centrifugación y sedimentación, y la solución también es útil como medio de transporte de materia 331 Revista de Sanidad Militar fecal para el examen coproparasitoscópico (neutraliza los olores de la muestra). La técnica de formalina se utiliza en el control de calidad externo de parasitología, por ser de bajo costo, práctico, sencillo y confiable. No sólo impide que los huevos operculados eclosionen para detectarse en eluidos por flotación, sino también impide la distorsión de las diferentes formas parasitarias causadas por las soluciones de alta densidad. El objetivo de este estudio es evaluar y comparar la técnica de formalina versus los métodos Faust y sedimentación, utilizados frecuentemente en los laboratorios de parasitología para establecer criterios en la metodología e identificación de las parásitosis intestinales. 2. Técnica de Faust a. Homogeneizar 2 a 5 g de materia fecal con 2 mL de agua destilada. b. Tamizar a través de una malla de alambre hacia un tubo de vidrio de 13 x 100 mm. c. Centrifugar a 2,000 rpm durante un minuto. d. Decantar el sobrenadante y resuspender el sedimento con agua destilada. e. Agregar 2 a 3 mL de sulfato de zinc con densidad de 1.180° Baume y resuspender el sedimento; llenar hasta 0.3 mm antes del borde del tubo con sulfato de zinc y centrifugar a 2,000 rpm durante un minuto. f. Agregar cuidadosamente, por las paredes del tubo, más sulfato de zinc hasta formar el menisco. Material y método g. Recoger la película del menisco con un cubreobjetos. Estudio comparativo y descriptivo efectuado del 1 al 29 de enero de 2015 en las instalaciones de la Unidad de Especialidades Médicas, Sección de Laboratorio Clínico, Subsección de Bacteriología y Parasitología. Se analizaron 100 muestras de materia fecal recientes, frescas, sin conservadores ni aditivos, y que los pacientes no hubieran consumido antibióticos, laxantes o algún desparasitante, mínimo 30 días antes de su obtención. La muestra de cada paciente se dividió en tres porciones iguales, de 2 a 3 g, para analizarlas con tres técnicas: h. Colocar una gota de lugol parasitológico en el portaobjetos y depositar sobre el cubreobjetos con la muestra. Observar al microscopio con los objetivos 10x y 40x. 1. Técnica de formalina a. La muestra se homogeiniza con formol al 5% hasta tener una consistencia homogénea. b. Se colocan 1 o 2 gotas de la mezcla homogeneizada con ayuda de la cucharilla en un portaobjetos, se añade una gota de lugol parasitológico y se observa al microscopio con los objetivos de 10X y 40X en busca de formas parasitarias.4 332 Volumen 69, Núm. 4, julio-agosto 2015 3. Técnica de sedimentación espontánea (solución salina isotónica) a. Colectar 2 a 5 g de materia fecal con 10 mL de solución salina isotónica al 0.9%, hasta lograr una suspensión adecuada. b. Verter la mezcla en un tubo colector, filtrar a través de una gasa y completar el volumen final del tubo con solución salina. c. Agitar enérgicamente durante 30 segundos y dejar reposar durante 45 minutos. d. Eliminar el sobrenadante y tomar con la pipeta una porción del fondo del tubo. e. Colocar 3 a 4 gotas en dos portaobjetos diferentes y agregar a una de ellas 2 a 3 gotas de lugol parasitológico. Observar al microscopio a 10x y 40x en busca de formas parasitarias. Villalobos-García D y col. Parasitosis intestinales RESULTADOS Las figuras del Cuadro 1 muestran el total de las muestras fecales examinadas mediante los tres métodos parasitológicos. Con la técnica de formalina se detectó mayor número de parásitos. Si definimos la especificidad como la capacidad para medir únicamente los componentes que pretenda estimarse, el método con mayor detección de parásitos en las muestras fecales fue la técnica de formalina (30%), seguida de la sedimentación (17%) y flotación (7%). Los parásitos identificados con la técnica de formalina fueron Blastocystis hominis, Endolimax nana, Entamoeba coli, Giardia lamblia y Entamoeba histolytica. La técnica de formalina es la de menor tiempo de proceso, hasta obtener los resultados y la más rápida para el diagnóstico de parásitos intestinales. Si definimos la sensibilidad analítica como la capacidad de un método para detectar cantidades pequeñas de la sustancia que se analiza, en este estudio se consideró cantidad pequeña al número de parásitos observados por campo (1 a 5). La técnica de formalina demostró mayor sensibilidad para la detección de diferentes formas parasitarias encontradas en concentraciones menores (1-5 por campo), incluso detectó un caso de Entamoeba histolytica-dispar con el método de formalina, a diferencia de los otros métodos. El Cuadro 1 muestra las imágenes microscópicas y morfología detectadas con las diferentes técnicas. En el Cuadro 2 se observa la comparación de las técnicas utilizadas en este estudio. Discusión Los parásitos identificados con la técnica de formalina fueron Blastocystis hominis, Endolimax nana, Entamoeba coli, Giardia lamblia y Entamoeba histolytica. Esto coincide con el trabajo de Guevara (2009) donde la técnica demostró elevada incidencia de protozoarios comensales y helmintiasis. La técnica de formalina demostró ser el método con mayor especificidad. Una de las desventajas con la técnica de Faust es que los métodos de concentración son inadecuados para establecer el diagnóstico de Blastocystis hominis, causan distorsión de la forma vacuolar por la concentración de sulfato de zinc y los procesos de centrifugación, y provocan la lisis de algunos parásitos. Los huevos operculados de tremátodos y céstodos pueden no detectarse por la alta concentración del sulfato de zinc (provoca que el opérculo se abra, se llene de líquido y se hunda hasta el fondo). Sánchez-Vega (2000) estudió la incidencia de parasitosis intestinal en asentamientos humanos irregulares con el método de Faust y sus resultados revelan ausencia de Blastocystis hominis. La concentración de parásitos intestinales mediante la técnica de sedimentación, con gravedad o centrifugación, permite una buena recuperación de protozoos, huevos y larvas; si bien, pueden ser más difíciles de detectar en montajes microscópicos y en frotis teñidos (debido a la cantidad comparativamente grande de restos de fondo), evitan diferenciar las formas parasitarias en las tinciones. Un estudio realizado en la Unidad de Especialidades Médicas, para estimar la prevalencia de parasitosis en el año 2005, demostró un índice de 2% de giardiasis mediante la técnica de Faust, y no se encontró ningún caso de Blastocystis hominis. En el 2008 se realizó el mismo estudio, pero la técnica utilizada fue formalina al 10%, y reportó una prevalencia de Blastocystis hominis de 76%, Endolimax nana de 19%, Entamoeba coli de 9% y Giardia lamblia de 2% en 4,495 pacientes. 333 Revista de Sanidad Militar Volumen 69, Núm. 4, julio-agosto 2015 Cuadro 1. Microscopia y morfología identificada con las diferentes técnicas Técnica Microscopia de las muestras Morfología de las formas parasitarias Técnica de sedimentación Observaciones Microscopia de la muestra: se observan abundantes macrosedimentos de diferentes restos alimenticios y dificulta la visualización definida de los parásitos. Mala Morfología parasitaria: se observan bien definidas las membranas y estructuras celulares Buena Técnica de Faust Microscopia de la muestra: se observa menor cantidad de macrosedimentos de diferentes restos alimenticios lo que permite mejor visualización definida de los parásitos. Buena Morfología parasitaria: se observa malformación de membranas celulares y no permite la absorción de lugol para teñir las estructuras y los organelos. Mala Técnica de formalina Microscopia de la muestra: se observa menor cantidad de macrosedimentos de diferentes restos alimenticios, lo que permite mejor visualización definida de los parásitos. Buena Morfología parasitaria: se observan bien definida las membranas y estructuras celulares y se visualiza mejor conservación con el formol al 5%. Buena Cuadro 2. Comparación de las técnicas para la identificación de parásitos en heces Características del método Técnica de Faust Técnica de sedimentación Técnica de formalina Especificidad-positividad Sensibilidad (número de muestras con detección de formas parasitarias en concentraciones minimas: 0 a 5/campo) 7% 2 17% 10 30% 25 Microscopia de las muestras Tiempo de procesamiento (minutos) Cantidad de puebas relizadas en 1L de rectivo específico de cada técnica Morfología de las diferentes formas parasitarias Buena 20 100 Mala 50 20 Buena 10 260 Mala Buena Buena CONCLUSIONES La técnica de formalina es el mejor método para la identificación de parásitos en heces, además 334 de tener mayor sensibilidad y especificidad. La solución de formalina es útil como medio de transporte de materia fecal para el examen coproparasitoscópico (excelente fijador de las Villalobos-García D y col. Parasitosis intestinales estructuras parasitarias, no provoca malformación celular). Esta técnica impide la distorsión de las diferentes formas parasitarias causadas por las soluciones de alta densidad. La técnica de formalina impide que los huevos operculados se abran (eclosionen) para detectarse en el análisis microscópico de las muestras. Es un buen método para establecer el diagnóstico de Blastocystis hominis. Referencias 1. Giono CS, Escobar A, Valdespino JL. Diagnóstico de laboratorio de las infecciones gastrointestinales. Instituto Nacional de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos (INDRE). México: Secretaría de Salud, 1994;pp:325. 2. Aties N. Parasitología clínica. 3ª ed. Santiago de Chile: Ediciones Mediterráneo, 1994;pp:451. 3. Tay-Lara ZJ. Parasitología médica. 3ª ed. México: Méndez editores, 1996;pp:483. 4. Ramírez GA, Bernal ME. Manual de laboratorio de parasitología II. pp 121 335