TOLUCA MEXICO NOVIEMBRE 2016 ACTUALIDADES EN EL MANEJO DE LOS LIQUIDOS CORPORALES M en C Carmen Melchor Díaz GENERALIDADES • Todos estamos familiarizados con el uso de sangre y orina como muestras clínicas que permiten hacer diagnóstico de enfermedades. • Los líquidos corporales nos pueden decir mucho mas acerca de un paciente, sobre la presencia o ausencia de enfermedad, su severidad o su pronóstico. • Analysis of body fluids in Clinical Chemistry : Approved Guideline. CLSI. C49-A . April 2007 GENERALIDADES • Todos ellos son ultrafiltrados del plasma y que se distribuyen a través del cuerpo por transporte activo. • Estos líquidos pueden contener biomarcadores que no se encuentran en sangre o que se encuentran en diferentes concentraciones. • Estos líquidos se presentan en la población sana y se elevan en estado de enfermedad. Analysis of body fluids in Clinical Chemistry : Approved Guideline. CLSI. C49-A . April 2007 ESTUDIO INTEGRAL DE LOS LIQUIDOS CORPORALES • • • • • • • FISIOLOGIA DE LOS LIQUIDOS ASPECTOS FISICOS ASPECTOS MICROBIOLOGICOS ASPECTOS BIOQUIMICOS ASPECTOS CITOLOGICOS HALLAZGOS EN LOS LIQUIDOS VERIFICACION Y REPORTE DE RESULTADOS ESTUDIO INTEGRAL DE UN LIQUIDO CORPORAL MUESTRA ESTERIL MICROBIOLOGIA CARACTERISTICAS FISICAS HEMATOLOGIA INACTIVACION CUENTA CELULAR COAGLUTINACION (L.C.R.) SIEMBRA DIRECTA CENTRIFUGACION CENTRIFUGACION SEDIMENTO SOBRENADANTE SOBRENADANTE SIEMBRA PRUEBAS QUIMICAS PRUEBAS INMUNOLOGICAS •GELOSA SANGRE •GELOSA CHOCOLATE •E.M.B. •Mc CONKEY •CALDO TIOGLICOLATO •TINTA CHINA •GRAM •BAAR SEDIMENTO CUENTA DIFERENCIAL OBSERVAR CRITERIOS DE MALIGNIDAD BUSQUEDA DE BLASTOS BUSQUEDA DE AMIBAS OBJETIVOS DEL LABORATORIO • Conocer el origen de los líquidos • Volumen (Espacio virtual, cantidad) • Aspecto • Componentes bioquímicos y celulares • Conocer las condicionantes de sus patologías • Relaciones anatómicas • Comunicación vascular con otras estructuras • Biología celular • Definir los criterios de oportunidad y adecuación de la muestra • Sitios y tiempos de obtención • Volúmenes posibles de obtención • Viabilidad de la muestra. Deisenhammer F, Bartos A, Egg R, Gilhus NE, Giovannoni G, Rauer S, Sellebjerg F, EFNS Task Force. Guidelines on routine cerebrospinal fluid analysis. Report from an EFNS task force. Eur J Neurol 2006 Sep;13(9):913-22. El agua corporal se mantiene constante La variación intersexual e interindividual es función inversa de la cantidad de tejido graso LÍQUIDO EXTRACELULAR COMPARTIMIENTOS DE LOS LÍQUIDOS CORPORALES LÍQUIDO INTRACELULAR REPRESENTA DEL 30 AL 40% DEL PESO CORPORAL Con una gran variedad en la composición y volumen entre las diferentes células. Algunas moléculas pueden servir de marcadores COMPARTIMIENTOS DE LOS LÍQUIDOS CORPORALES LÍQUIDO EXTRACELULAR TRANSCELULAR INTERSTICIAL PLASMA: 4.5% DEL PESO CORPORAL LINFA: 2% DEL PESO CORPORAL INTERSTICIAL: 16% DEL PESO CORPORAL LÍQUIDO TRANSCELULAR Matriz sunendotelial-submesotelial (Intersticio) endotelio mesotelio • En este compartimento la separación con el plasma se da por el endotelio y un tejido epitelial (mesotelio) MEMBRANAS EPITELIO • Consisten de un epitelio de cobertura con tejido conectivo laxo que une a tejidos subyacentes • Por ejemplo: membrana cutánea, membranas mucosas, MEMBRANA SINOVIAL y MEMBRANAS SEROSAS TEJIDO CONECTIVO MEMBRANA Superficie apical Filamentos intermedios Cemento intercelular Membrana basal MEMBRANAS SEROSAS • Recubren las cavidades ventrales del cuerpo. • Una capa VISCERAL envuelve a los órganos dentro de la cavidad. • La capa parietal tapiza las paredes de la cavidad • Secretan en pequeña cantidad un líquido seroso lubricante MESOTELIO • La capa única de células planas o cuboideas que forma la membrana serosa se conoce como MESOTELIO • Estas células tienen un núcleo oval o redondo de cromatina homogéneamente dispersa Objetivo de un análisis de laboratorio Clínico para el Estudio de los líquidos o Evaluar el estado fisiopatológico de un paciente a fin de contribuir con el diagnóstico o controlar el tratamiento. o Para que un análisis tenga valor en la toma de decisiones clínicas el resultado debe tener un error total lo suficientemente pequeño para poder reflejar el estado clínico que se evalúa. W.G. Miller, capitulo 10, Henry’s Diagnosis and Manegement of Laboratory Methods, 22ª Edición Pasos del proceso de análisis Preanalítico: (Selección del análisis correcto,, identificación correcta del paciente, recolección de las muestras apropiadas, rotulación, transporte, manipulación de las muestras, procesamiento) Analítico (Preparación de muestras, Instrumento y método de análisis y consentimientos teóricos y prácticos especialización del personal, solución de problemas, resultados de los análisis e informes) Post-analítico (Formato de presentación de informes, respuestas a resultados y medidas tomadas, resultados que incluyen al usuario final indicado, estadísticas, valores críticos) Médico emite un diagnóstico El médico evalúa al paciente y solicita la prueba de laboratorio Toma de muestra Transporte de la muestra Médico interpreta el resultado El lab recibe la orden Reporta el resultado Procesa la muestra Se analiza la muestra Los resultados de calidad, requieren de una serie de «correcciones» a través del ciclo entero de trabajo, y empieza con la solicitud de la prueba PROCESO MEDICO PACIENTE IDENTIFICACION * PUNCION OBTENCION DE MUESTRA *TRANSPORTE DE MUESTRA ENTREGA DE MUESTRA AL LABORATORIO M en C Carmen Melchor Díaz VALORACION FACTORES QUE INFLUYEN EN LA CALIDAD OBTENCIÓN DE LA MUESTRA PREPARACIÓN DEL PACIENTE MANEJO SOLICITUDES PACIENTE MÉDICO (Er r or es 45-71%) FACTORES PRE-ANALITICOS TRANSPORTE RECEPCIÓN DE LA MUESTRA (Er r or es 13-18%) FACTORES ANALITICOS INTERPRETACIÓN PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA FACTORES POST-ANALITICOS (Er r or es 11– 45%) RESULTADOS REPORTES Mario Plebani. Errors in clinical laboratories or errors in laboratory medicine? Clin Chem Lab Med 2006;44(6):750–759 VARIABLES PREANALITICAS (pre examen) Ordenes de examen equivocadas. Recolección de la muestra. Falta de ordenes de laboratorio especificas para líquidos corporales. Muestras para estudios microbiológicos contaminadas. Muestra hemolizadas y coaguladas. Recipientes adecuados Tubos o jeringas de plástico causan adherencia celular Tubos de propileno son los recomendables FORMATOS O SOLICITUDES INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL SUBDIRECCION GENERAL MÉDICA FECHA DE ESTA SOLICITUD HACER EXAMENES EL DIA FECHA DE PROXIMA PACIENTE CONSULTA EXTERNO PRESENTARSE EN MEDICO TRATANTE EL LABORATORIO A LAS HRS DIAGNOSTICO DE PRESUNCION O DATOS CLINICOS CAMA N° NOBRE DEL PACIENTE NSS NOMBRE Y FIRMA DEL MEDICO ESTUDIO INTEGRAL DE LIQUIDO________________________________________________________ COLOR ___________________________ ASPECTO _________________________ COAGULABILIDAD__________________ SEDIMENTO_______________________ SOBRENADANTE____________________ Ph_______________________________ GLUCOSA _________________________ PROTEINAS______________________ LDH___________________________ AMILASA_________________________ COLESTEROL _____________________ ACIDO URICO______________________ CRISTALES________________________ SUERO:___________________________ GLUCOSA________________________ PROTEINAS________________________ LDH______________________________ COLESTEROL_______________________ REL. PROT LIQ/PROT SUERO REL PROT LDH/PROT SUERO CELULAS _____________mm3 ERITROCITOS__________ mm3 CRENOCITOS__________% CUENTA DIFERENCIAL GRAM TINTA CHINA COAGLUTINACION BAAR CULTIVO: BACTERIAS HONGOS MICOBACTERIAS OTRAS: ANORMALIDADES CELULARES SECCION DE URGENCIAS “LIQUIDOS CORPORALES “ QUIMICO RESPONSABLE _____________ DATOS QUE DEBE LLEVAR LA REQUISICIÓN Y ETIQUETA DEL ESPÉCIMEN • Nombre del paciente • Edad y sexo del paciente • Número de afiliación que tiene en el hospital, lugar donde localizarlo o dirección • Nombre del médico solicitante • Lugar de donde fue tomada la muestra • Fecha y hora de recolección de la muestra • y procedimiento requerido Un resultado de «calidad» requiere de: • • • • Solicitud correcta Paciente correcto Tiempo Correcto para la toma de la muestra Muestreo correcto y procesamiento correcto • Resultado correcto • Resultado correctamente reportado • Correcta interpretación clínica • Permite una correcta respuesta al paciente • Cuando «lo incorrecto» reemplaza «lo correcto» • La Calidad esta comprometida Pre-Analítico Analítico Post-analítico TOMA DE MUESTRAS ARTROCENTESIS AMNIOCENTESIS PUNCION LUMBAR TORACOCENTESIS PARACENTESIS PERICARDIOCENTESIS RECOLECCION DE MUESTRAS DE LOS LIQUIDOS CORPORALES Los procedimientos para la toma de muestras de los Líquidos Corporales puede afectar al reporte de Resultados . Es por esto que se recomienda que los procedimientos Se estandaricen para que los errores se disminuyan o se eliminen durante la recolección Analysis of body fluids in Clinical Chemistry : Approved Guideline. CLSI. C49-A . April 2007 CONTENEDORES ADECUADOS El tipo de contenedores tubos o frascos que se utilizan para recolectar los líquidos pueden afectar de manera directa los resultados. El material de plástico puede causar adherencia celular dando como resultado: cuentas celulares así como diferenciales erróneas. Por lo que es recomendable utilizar tubos de poliestiereno polipropileno. En el caso de la muestras donde Se soliciten estudios microbiológicos Los recipientes deberán ser estériles. VARIABLES PREANALITICAS Tipo de anticoagulante: Usar anticoagulante (que no se requiere para el LCR) puede afectar la cuenta tanto de células blancas como de eritrocitos Usar Anticoagulante (líquidos serosos) no adecuado, como en el líquido sinovial puede llegar a introduce artefactos y confundir con elementos celulares. EDTA puede utilizarse para llevar a cabo la cuenta celular HEPARINA: para determinación de proteínas, LDH, glucosa. SPS: (polianetol-Sulfanato de Sodio) o cualquier otro anticoagulante que no tenga efecto bactericida o bacteriostático) Para estudios bacteriológicos. VARIABLES PREANALITICAS Transporte y manejo de la muestra: Los líquidos corporales deben ser transportados al laboratorio a temperatura ambiente inmediatamente después de recolectados. Para estudios microbiológicos NO DEBE REFRIGERARSE. La mayoría de los microorganismos son sensibles a los cambios de temperatura. Temperatura y tiempo de transporte que mantenga la integridad de la muestra.(la degeneración celular empieza en la primera hora después de tomadas las muestras). la degradación significativa de neutrófilos ocurre en las dos primeras horas (25 %) LOCALIZACION ANATOMICA DE LOS SITIOS DE DONDE SON TOMADAS LAS MUESTRAS DE LOS LIQUIDOS CORPORALES CAVIDAD PLEURAL CAVIDAD PERICARDICA CAVIDAD VENTRICULAR CAVIDAD PERITONEAL CAVIDAD ARTICULAR Analysis of body fluids in Clinical Chemistry : Approved Guideline. CLSI. C49-A . April 2007 Objetivos del Control de Calidad El producto del laboratorio clínico es un resultado numérico Los médicos utilizan este resultado para diagnosticar, evaluar y/o Monitorear el estado del paciente El objetivo del laboratorio es generar un resultado confiable de alta Precisión y exactitud Objetivos del Control de Calidad Requisito de las Normas Oficiales (Guías Internacionales) Generar RESULTADOS CONFIABLES Exactos y precisos Detectar y corregir errores/problemas Evitar informes de resultados erróneos GUÍA PARA EL ANÁLISIS RUTINARIO DEL LCR PRINCIPALES RECOMENDACIONES: Debe ser analizado en la primera hora después de su recolección Un volumen de 12 mL debe ser alicuotado en tres o cuatro tubos estériles, antes de que se sedimente la muestra. En ciertos casos, como la búsqueda de M. tuberculosis, hongos y parásitos se requieren 10 a 15 mL de muestra Permite almacenamiento breve a 4-8°C o en otro caso a 20°C La muestra almacenada sólo se usará para examen de componentes proteicos o de RNA Deisenhammer F, Bartos A, Egg R, Gilhus NE, Giovannoni G, Rauer S, Sellebjerg F, EFNS Task Force. Guidelines on routine cerebrospinal fluid analysis. Report from an EFNS task force. Eur J Neurol 2006 Sep;13(9):913-22. GUÍA PARA EL ANÁLISIS RUTINARIO DEL LCR PRINCIPALES RECOMENDACIONES: •Para la Esclerosis múltiple lo recomendable es detectar bandas oligoclonales de IgG •En otras enfermedades con componente inflamatorio se determinará la síntesis de IgA e IgM con fórmulas no lineares Deisenhammer F, Bartos A, Egg R, Gilhus NE, Giovannoni G, Rauer S, Sellebjerg F, EFNS Task Force. Guidelines on routine cerebrospinal fluid analysis. Report from an EFNS task force. Eur J Neurol 2006 Sep;13(9):913-22. GUÍAS PARA EL ANÁLISIS BIOQUÍMICO DE LÍQUIDOS CORPORALES • Valores de referencia y uso razones (radios o cocientes) • Matriz para el ensayo • Control de calidad • Validación • Metodologías para medir masa absoluta Deisenhammer F, Bartos A, Egg R, Gilhus NE, Giovannoni G, Rauer S, Sellebjerg F, EFNS Task Force. Guidelines on routine cerebrospinal fluid analysis. Report from an EFNS task force. Eur J Neurol 2006 Sep;13(9):913-22. Analysis of body fluids in Clinical Chemistry : Approved Guideline. CLSI. C49-A . April 2007 ENSAYOS BIOQUÍMICOS EN LCR • PROTEÍNA • GLUCOSA • ESPECIALES: • • • • • • • Índice de IgG Lactato Análisis de Xantocromía Bandas oligoclonales Proteína básica de mielina Péptido amiloide b 42 y Proteína Tau Otros neurotransmisores • ACBI Biochemistry of the body fluids Alan Balfe,Stan Barry 2009 CAUSAS DE LOS DERRAMES EN COMPARTIMENTOS 1. Alteraciones de Presión hidrostática (falla cardiovascular) Trasudado 2. Alteraciones de Presión coloidosmótica Trasudado 3. Alteraciones por daño de membrana endotelial Exudado EXUDADO Exceso de líquido (> 0,2-0,3 mL/Kg) formado por la difusión de plasma a través de endotelio y mesotelio dañados (inflamación) CARACTERÍSTICAS: Proteína pleural/proteína sérica > 0,5 DHL pleural/DHL sérica >0,6 DHL > 2/3 (60%) del límite superior de DHL sérica Proteína líquido pleural >2.9 g/dL Colesterol pleural > 45 mg/dL Analysis of body fluids in Clinical Chemistry : Approved Guideline. CLSI. C49-A . April 2007 . CRITERIOS DE LIGHT Exudado Cociente de proteína > 0.5 Cociente de DHL > 0.6 DHL del líquido > en 2/3 que el límite superior de referencia En casos de Insuficiencia cardiaca, puede ser necesario medir colesterol para definir un exudado (1.6 mmol/L) Analysis of body fluids in Clinical Chemistry : Approved Guideline. CLSI. C49-A . April 2007 . MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Examen químico Validar método ( MR, TRAZABILIDAD DE PATRONES) Identificar especificaciones de calidad para cada examen Evaluar estadísticamente el desempeño de cada examen en el laboratorio Especificaciones de calidad (incertidumbre en la magnitud medida) Utilidad clínica específica Utilidad clínica general Utilidad por consenso Analysis of body fluids in Clinical Chemistry : Approved Guideline. CLSI. C49-A . April 2007 . VALORACION CUANTITATIVA Contar por microscopia de luz usando el colorante Azul de Unna . (colorante supra vital que mejora el Reconocimiento de las células). Para realizar la cuenta celular se utilizan: Cámara de Neubauer Cámara de Fush Rosenthal CLSI. Body Fluid Analysis for Cellular Composition; Proposed Guideline. H56-P. August 2005 CUENTA CELULAR Cámara de Neubauer Cámara de Fush-Rosenthal CLSI. Body Fluid Analysis for Cellular Composition; Proposed Guideline. H56-P. August 2005 Cuenta celular Usando el objetivo de baja resolución (10X) ajustar para ver distribución celular. Ajustar a objetivo de 40X y llevar a cabo La cuenta celular.. Si hay un estimado de 200 células presentes en los 9 cuadros, contar todos los cuadros. Si hay mas de 200 células en los 9 cuadros contar los 4 cuadros de las esquinas. Si hay mas de 200 células en uno de los cuadros contar los 5 cuadros del centro. CLSI. Body Fluid Analysis for Cellular Composition; Proposed Guideline. H56-P. August 2005 CUENTA CELULAR Nº de células/mm3 = Nº cel contadas X inverso de la dilución Nº cuadros contados X vol. del cuadro REPORTE DE CUENTA CELULAR Numero de células x mm3 Numero de eritrocitos x mm3 % de crenocitos CUENTA CELULAR LIMITES DE CUENTA Liquido cefalorraquídeo > 10 células Líquidos serosos > 100 células Liquido de diálisis > 100 células Liquido sinovial > 200 células Si se superan los limites de cuenta Se realiza Cuenta diferencial CLSI. Body Fluid Analysis for Cellular Composition; Proposed Guideline. H56-P. August 2005 INFECCION POR BACTERIAS HONGOS VIRUS MICOBACTERIAS PARASITOS TOXOPLASMA AVL RECHAZO A DERIVACIONES INFILTRACION DE LEUCEMIAS CELULAS RA (AR) CELULAS LUPUS ERITEMATOSO IRRITACION PLEURAS IRRITACION DE VELLOSIDADES ARACNOIDEAS CANCER LOCALIZADO METASTASIS MANUAL DE PROCEDIMIENTOS EXAMEN CITOLÓGICO Control de tinciones Revisión por un experto de las laminillas informadas Discusión intralaboratorio de las laminillas examinadas Capacitación. Pruebas de aptitud Análisis de imagen MANEJO BACTERIOLOGICO DE FLUIDOS CORPORALES La identificación del agente causal de la infección. Lograr un tratamiento rápido y preciso que lleve al manejo adecuado del paciente LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO Frasco o tubo estéril Prueba de coaglutinaciòn Inactivaciòn Centrifugar muestra (2.500 rev x 10 min) Sedimento TINCION DE GRAM Presencia de bacterias CULTIVO AEROBICO Agar chocolate* Agar sangre Caldo de Tioglicolato 36°C Informe inmediato 18 – 24 h Pruebas bioquímicas Positivo Antibiograma Reincubar Agar C. Negativo 36°C Pruebas bioquímicas 48 h Positivo Negativo** Clinical Microbiology proceddures handbook, ASM, Washington D.C. 2010 Antibiograma PROCESAMIENTO DE LOS LIQUIDOS CORPORALES ESTERILES Recolección de la muestra Concentración Hacer Frotis para Tinción De Gram Condiciones Aerobias 35 ◦C, CO2 60-80% humedad Sembrar en medios de cultivo primarios (Sol. y Líq.) Incubación Condiciones Anaerobias 35 ◦C, 48 hrs Examinar placas Examinar placas Crecimiento No Crecimiento No crecimiento Crecimiento Checar aerobiosis Reincubar Aerobios Anaerobios Reincubar Anaerobicamente 35C, 24 hrs Crec. No Crec Tinción Gram Beta Lactamasas Reexaminación de Placas Diariamente durante 4 días Identificación y PSA Reporte Final Identificación Re-examinar Caldos durante 4 días REPORTE FINAL Clinical Microbiology proceddures handbook, ASM, Washington D.C. 2010 ETAPA PRE-EXAMEN Quién recolecta la muestra: El médico. 1-5 mL es adecuado (un mayor volumen puede dar mejores resultados) Tiempo de procesamiento: Los líquidos deben ser tratados como las muestras de LCR “deben procesarse inmediatamente después de su llegada al laboratorio. Almacenamiento: Mantener la muestra a Temperatura ambiente (NO REFRIGERAR) M en C Carmen Melchor Díaz Volumen de la muestra: ETAPA DE EXAMEN Todos los líquidos se deben procesar para hacer una examinación microscópica directa (Tinción de Gram). En general si un microorganismo es capaz de observarse en objetivo de inmersión. Esto quiere decir que al menos hay 10 5 organismos por mL. Si se sospecha de la presencia de hongos todas la muestras deben observarse preparando una observación directa en fresco con KOH al 10%. Para la búsqueda de M. tuberculosis una tinción de Alcohol Acido. M en C Carmen Melchor Díaz El liquido debe ser concentrado por centrifugación, y el sedimento se debe sembrar en medios enriquecidos como son: Agar sangre, Agar chocolate, Agar de Maconkey y caldo de tioglicolato. Factores que interfieren en los resultados: - Pacientes con terapia antimicrobiana - Recepción inapropiada de las muestras Reporte de resultado: - Resultados urgentes: - Tinción de Gram, observación con KOH y Tinción BAAR. - Resultados Finales: - Reporte del patógeno aislado con sus pruebas de susceptibilidad - Antimicrobiana. Tiempos de Respuesta: - Tinción de Gram y observación en fresco deben estar disponibles - 1 hora después de llegada la muestra al laboratorio. - El aislamiento del posible patógeno de 2-4 días. - Cultivos negativos deben reportarse 2-3 días después de recibida - La muestra M en C Carmen Melchor Díaz ETAPA POST EXAMEN MANUAL DE PROCEDIMIENTOS EXAMEN BACTERIOLÓGICO ◦ Control de tinción Gram y otras ◦ Cultivo y análisis bioquímicos de cepas bacterianas tipo ATCC ◦ Experimentos de control de esterilidad para materiales y reactivos ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD EN EL EXAMEN DE LÍQUIDOS Formato de informe • Identificación de paciente, muestra y médico o servicio • Descripción de muestra procesada • Informes preliminares • Lenguaje científico sin ambigüedades • Exámenes efectuados • Rangos de referencia • Metodologías • Profesional ejecutante y responsable • Notas de referencia comentarios educativa o PEEC PARA LIQUIDOS CORPORALES Este programa surge de la necesidad de mejora constante y ascendente de la ejecución analítica en el laboratorio clínico. Desde hace aproximadamente 20 años el grupo de expertos dio inicio con una serie de cursos sobre el manejo de líquidos corporales en el laboratorio clínico. Durante este tiempo se identificaron, gracias a la participación de los alumnos, aquellos enfoques necesarios para examinar líquidos corporales en la práctica clínica De esta manera es cómo surge la inquietud, de iniciar un pequeño programa de comparación inter laboratorios, donde se invitó a participar a 5 laboratorios, dentro de los cuales se incluyen desde grandes Centros Médicos hasta Unidades de 2° Nivel. HOJA DE ENVIO DE MUESTRAS DEL PROGRAMA COMPARACION INTERLABORATORIOS PARA LIQUIDOS CORPORALES A continuación estamos enviando a Ud.(s) el formato de registro para la captura de datos del PROGAMA DE COMPARACION INTERLABORATORIOS DE LA CUENTA CELULAR DE LOS LIQUIDOS CORPORALES. Así como el algoritmo de trabajo y la formula general para el conteo de células. (SI NO CUENTA CON COLORANTE AZUL DE UNNA, UTILIZAR EL QUE SE ANEXA JUNTO CON LA MUESTRA, MEZCLAR MUY BIEN ANTES DE UTILIZARLO) Estamos incluyendo junto con el primer envió la calendarización de envió de las muestras, así como la fecha límite de reportes y la entrega de resultados que se podrán enviar vía correo electrónico a la siguiente dirección: [email protected] ALGORITMO DE TRABAJO PARA LLEVAR A CABO LA CUENTA CELULAR Se envía una suspensión de células y se deben realizar entre 30 y 40 inversiones del frasco para resuspender adecuadamente Colocar 10µl de colorante Azul de UNNA en un tubo, de 12X75 más 100µl de la suspensión de células (dilución 10:11) llenar adecuadamente la cámara de Neu Bauer (ó Fush Rosenthal) de la muestra con el colorante de UNNA, (dejar reposar 1 minuto aprox.) Leer a 40X Calcular el número de células/ mmᴈ, aplicando la formula general: No .cel 𝑚𝑚 3 = 𝑛o.cel contadas X inverso de la dilucion 𝑛𝑜 .𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜𝑠 𝑐𝑜𝑛𝑡𝑎𝑑𝑜𝑠 𝑋 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑢𝑎𝑑𝑟𝑜 * ver ejemplo Reportar Células/𝑚𝑚3 *ejemplo: No .cel 𝑚𝑚 3 = 15 X 11 10 9 𝑋 0.1 𝑚𝑚 3 = (15 )(1.1) = 18 cel./𝑚𝑚3 0.9 Lab Central # de envío 2 CLAVE DE LABORATORIO EAHDK7 Programa LÍQUIDOS CORPORALES Tipo de suscripción RESULTADO RESULTADOS ESTADÍSTICOS DEL GRUPO PAR Criterio de evaluación: COMPARACIÓN CON GRUPO EXPERTO 218 n Mediana Desv std IDE 6 263.5 14.8 -3.1 Prom Ponderado de expertos 264 Coef de Variación %: Fecha de envío 26/02/2015 5.6 GRUPO DE EXPERTOS: QFB ISAIAS SANCHEZ GONZALEZ QBP MIGUEL ANGEL GONZALEZ OLVERA DR RAFAEL E. PAREDES GARCIA M en C CARMEN MELCHOR DÍAZ Cuauhtémoc 40, Col Sn Javier, Centro Histórico de Tlalnepantla de Baz, México. Código postal 54030.Teléfono 5378-5196 Error absoluto -46 Error relativo 82.6
