ENSAYO Nombre: Lesly Guadalupe Moreno Garcia Matrícula: 3210335 Nombre del curso (asignatura) Nombre del profesor: Histología Luz Maria Becerra Sandoval. Tema: Actividad: "Métodos empleados para el estudio Ensayo de la histología” Fecha: 01/03/22 1 ENSAYO "Métodos empleados para el estudio de la histología” 1. Introducción La técnica histológica se ocupa de los métodos utilizados para elaborar preparaciones permanentes de células y de tejidos con la finalidad de analizarlos utilizando diversos tipos de microscopios. Pasos de la técnica histológica Punción y aspiración con aguja fina (PAAF). Tejidos líquidos como la sangre se obtienen por este método. Punción y aspiración con aguja gruesa (PAAG). La médula ósea roja, al ser un tejido más viscoso que la sangre, se obtiene con una aguja de mayor calibre. Citología exfoliativa. 2. Desarrollo UNIDAD II MÉTODOS EMPLEADOS PARA EL ESTUDIO DE LA HISTOLOGÍA 1. Preparación de cortes. Los cortes histológicos se realizan con micrótomo de congelamiento y de parafina, siendo realizados en forma horizontal, vertical o transversal a la superficie de la piel. 2 ENSAYO El procesado histológico convencional se basa en la fijación química del tejido para preservar las estructuras microscópicas, en la inclusión del tejido en parafina y posterior corte en el micrótomo. 1.1. Técnica de Inclusión en parafina Para poder examinar la muestra hay que infiltrarla con un medio de inclusión que permita realizar cortes muy delgados, típicamente de 5 a 15 μm.Luego de la fijación la muestra se lava y se deshidrata en una serie de soluciones alcohólicas de concentración creciente hasta alcanzar alcohol al 100%. En el paso siguiente, el aclarado, se utilizan solventes orgánicos como xileno o tolueno, que son miscibles tanto en alcohol como en parafina, para extraer el alcohol al 100% antes de la infiltración de la muestra con parafina fundida. 1.1.1. Obtención del tejido El proceso histológico comienza con la obtención del tejido objeto de estudio. En el caso de los tejidos vegetales directamente se toman muestras de los distintos órganos que componen el cuerpo de la planta, mientras que para los tejidos animales podemos optar por dos opciones: coger una porción del tejido u órgano y procesarla o procesar primero el animal completo y luego extraer la muestra que nos interese. 1.1.2. Fijación Tras tras la fijación es habitual incluir el tejido para posteriormente obtener secciones. Cuanto más delgada queramos que sea nuestra sección más tenemos que endurecer nuestra muestra. Esto se consigue embebiendo el tejido con sustancias líquidas que posteriormente polimerizarán (resinas) o se volverán consistentes (ceras). 3 ENSAYO 1.1.3. Procesamiento de la microscopía fotónica automatizada) muestra para (manual o Esta técnica de microscopía fotónica se basa en iluminar y adquirir una imagen de un plano focal de una muestra, eliminando la luz reflejada o fluorescente de los planos fuera de foco; de este modo se obtienen imágenes de mayor nitidez y contraste. Se aplica principalmente en estudios morfológicos y estructurales, 2D o 3D, de células y tejidos biológicos, fijados o “in vivo”, teñidos con marcadores fluorescentes. También se utiliza en estudios de dinámica molecular en célula viva y estudios de la microtopografía superficial en muestras opacas (biológicas o de materiales). 1.1.4. Inclusión en parafina Las parafinas son mezclas de hidrocarburos saturados de cadena que oscilan entre 22 y 28 átomos de carbono. El punto de fusión depende del número de átomos de carbono y se encuentra entre 46 y 60 ºC. Las mezclas de parafinas comerciales tienen un punto de fusión entre 54 y 56ºC. La parafina para castración se presenta como pequeñas lentejas de unos 5 mm de diámetro. El tamaño y la textura facilitan su manejo 1.1.5. Corte (microtomo) Los microtomos para cortar material incluido en parafina son probablemente los más usados en los laboratorios de histología. Todos poseen varias partes comunes: una cuchilla, un portamuestras y un sistema mecánico que permite acercar el bloque de parafina, con la muestra dentro, a la cuchilla, a una distancia que se corresponde con el grosor de la sección que pretendemos obtener, y realizar el corte. 4 ENSAYO 1.1.6. Tinción de rutina Método de tinción de rutina en histología y citología. Es una tinción basada en dos etapas, la primera una tinción nuclear por un colorante básico (hematoxilina) y la segunda, una tinción citoplasmática por un colorante xantenico ácido (eosina). La hematoxilina en combinación con sales de aluminio, hierro o cromo, forma un colorante activo, la hemateina, formada por oxidación de la hematoxilina. 1.1.7. Montaje El medio de montaje recubre las preparaciones permanentes de muestras biológicas y llena el espacio existente entre el porta y el cubreobjetos en su totalidad. Esto aísla la muestra del exterior y permite una mejor observación de la preparación al microscopio ya que tiene propiedades de refracción similares a las del vidrio. Además, al secar endurece, aportando rigidez y durabilidad a la preparación. 1.2. Técnica de inclusión en resina para microscopía electrónica Sin embargo, lo más frecuente es incluir el tejido en un material de alta dureza como son las resinas de tipo epoxy, o en menor medida las resinas acrílicas como el metacrilato.Ambas se infiltran en el tejido en forma líquida y posteriormente polimerizan sin afectar a la ultraestructura celular. 1.2.1. Fijación en glutaraldehido Produce endurecimiento de los tejidos. El glutaraldehido es un excelente fijador para preservar estructuras delicadas de la célula cuando se usan resinas plásticas, pero también es un buen fijador estructural para la infiltración en parafina. 5 ENSAYO 1.2.2. Procesamiento de la muestra Procesamiento: consiste en la preparación de las muestras, la realización de tinciones y la inoculación en los medios de cultivo para su posterior incubación. 1.2.3. Inclusión en resina Lo más frecuente es incluir el tejido en un material de alta dureza como son las resinas de tipo epoxy, o en menor medida las resinas acrílicas como el metacrilato. Ambas se infiltran en el tejido en forma líquida y posteriormente polimerizan sin afectar a la ultraestructura celular. 1.2.4. Corte (ultra micrótomo) Se utilizan para estudiar secciones de tejidos potencialmente patológicos de los que se pretende obtener un diagnóstico. Los micrótomos utilizan cuchillas de acero, vidrio o diamante, dependiendo del tipo de muestra que se esté cortado en lonjas y del grosor deseado de las secciones del corte. 1.3. Técnica de congelamiento para biopsia transoperatoria (criostato) La biopsia por congelación es un método que se emplea en la consulta intraoperatoria ya que los resultados se obtienen rápidamente, permite la diferenciación entre una lesión benigna o maligna, y el estudio de los márgenes quirúrgicos con una exactitud diagnóstica superior al 90% en la mayoría de los casos; sin embargo, la biopsia por congelación presenta algunas limitantes, entre ellas, la alteración de la citología y la arquitectura, los artefactos y su bajo desempeño en algunos procesos neoplásicos, por lo cual es un instrumento para el manejo de los pacientes sin reemplazar la biopsia convencional. El objetivo de este módulo es revisar la utilidad clínica y las limitaciones de la biopsia por congelación en muestras de aparato genital femenino, riñón, vejiga, tracto gastrointestinal, peritoneo, hígado, vesícula biliar, páncreas y piel. 6 ENSAYO 1.3.1. Procedimiento En términos generales, el procedimiento de la biopsia por congelación consiste en la congela- ción inmediata del tejido con una solución criostática fijadora o directamente en el criostato, la inclusión en un medio, el corte de las secciones tisulares en un microtomo, la transferencia a una laminilla y la coloración 1.3.2. Montaje En promedio de 3 días, sin embargo existe la posibilidad de realizar un estudio por congelación que emite un resultado en 20 minutos con una posibilidad de certeza del 95%. 3. Conclusión La histología se refiere al estudio de células, tejidos y órganos, abarcando la función y su estructura. Por ello, el estudio de la histología complementa el estudio de la anatomía macroscópica y proporciona una base estructural para el estudio de la fisiología. 4. Referencias Bibliográficas https://www.google.com/search?q=conclusion+de+metodos+empleados+en+la+ histologia https://www.google.com/search?q=+congelamiento+para+biopsia+montaje&rlz https://www.google.com/search?q=procedimiento+del+congelamiento+para+bio psia& 7 ENSAYO INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN: Rúbrica Producto a evaluar: ensayo Forma Variable Datos generales Descripción Puntos Calif. Nombre, matrícula, nombre del profesor, nombre del curso, tema, actividad, fecha, equipo (en caso de ser un trabajo 5 grupal), título del reporte. Contenido Variable Descripción Título Es el tema o idea principal del mapa. Puntos 5 Contextualizar los conceptos clave que se presentan en el mapa, describiendo el alcance del documento y dando una Introducción breve explicación del mismo. Además de explicar algunos 10 antecedentes que son importantes para el posterior desarrollo del tema central. La idea central fue desarrollada ampliamente, además están Desarrollo bien desarrolladas y organizadas. Expresa secuencia, claridad y precisión, sustentando sus argumentos y opiniones en 40 fuentes bibliográficas confiables. Conclusión Se presenta una reflexión personal sobre la actividad de aprendizaje que se realizó. 20 Inclusión apropiada de datos bibliográficos. Consultar con el profesor y/o tutor los lineamientos a seguir para reportar libros Bibliografía u otros materiales escritos, así como otras fuentes de 10 información que hayan sido utilizadas para elaborar el documento. Reportar todas las fuentes correctamente. Ortografía y redacción Ortografía: Sin errores. Redacción: Ideas claras, lógicas y secuenciadas en todos los 10 párrafos. 8
