UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS CARRERA DE INGENIERÍA BIOQUÍMICA LABORATORIO DE BIOLOGÍA Profesor: Ing. Ximena Mariño Ayudante: Egda. Rosita Pazmiño Semestre: Primero “U” Práctica: # 2 Tema: “GENERALIDADES ACERCA DEL MICROSCOPIO OPTICO” 1. Introducción: El microscopio es un instrumento óptico que amplifica la imagen de un objeto pequeño, siendo el instrumento más utilizado en los laboratorios donde se estudian microorganismos (Mateos1). Desde su invención, el microscopio ha sido una herramienta valiosa en el desarrollo de la teoría científica (Heidcamp, 1995). En general, un microscopio está compuesto de dos elementos, los cuales constituyen un sistema similar a un telescopio: a) lentes primarias amplificadoras y b) lentes secundarias. Estos sistemas se denominan objetivos y oculares, respectivamente, y están montados en los extremos opuestos de un tubo cerrado, de forma que el primero se encuentra en el punto focal del segundo. Entonces, la luz que pasa por un objeto es focalizada por ambos sistemas de lentes (Heidcamp, 1995), de manera que cuando se mira a través del ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas: El sistema mecánico El sistema óptico El sistema de iluminación La observación de muestras en el microscopio óptico es posible gracias a una serie de propiedades que tiene el mismo las cuales están basadas en principios o leyes físicas. Dichas propiedades son: Poder de resolución.- Se lo conoce también como poder separador y se define como la capacidad del microscopio y particularmente de las lentes del mismo, para separar nítidamente las imágenes de dos puntos próximos que el ojo humano confundiría como uno solo. Resulta interesante mencionar que el ojo normal no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una décima de milímetro, mientras que en el microscopio óptico, el poder separador máximo conseguido es de 0,2 d 0.6 x AN d = Poder de resolución. (nm) = Longitud de onda de luz utilizada (normalmente 450 nm) AN = Apertura numérica = N sen N = Índice de refracción del medio (N = 1, si es un objetivo seco; N = 1.52 si es un objetivo que utiliza aceite de inmersión). = mitad del ángulo del lente objetivo Poder de magnificación.- Se define como la relación entre el diámetro aparente de la imagen y el diámetro o longitud del objeto. Por ejemplo, si el microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen que estamos viendo es 100 veces mayor que el tamaño real del objeto. Para calcular el aumento de un microscopio, basta multiplicar el aumento del ocular por el aumento del objetivo. Por ejemplo, si estamos utilizando un ocular de 10X y un objetivo de 45X, el aumento a que estamos viendo la preparación será: 1OX x 45X = 450X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 450 veces. 2. Objetivos: 2.1.- Identificar las partes del microscopio 3. Materiales: Microscopio 4. Procedimiento: PARTE MECÀNICA Sostiene la parte óptica y de iluminación, además permite los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto. Comprende: Brazo.- Sirve de soporte a los otros elementos del microscopio. Está articulado con el pie para poder inclinarlo y hacer así más cómoda la observación Revólver porta objetivos.- Permite colocar en posición de trabajo a los distintos objetivos con que cuenta el microscopio. Presenta unas ranuras que facilitan la fijación del objetivo en la posición correcta. Tornillo de enfoque (macrométrico).- Acerca o aleja rápidamente el objetivo a la preparación para hacer un enfoque aproximado. Se usa sólo con los objetivos de menor aumento. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio, deslizándose en sentido vertical para enfocar la muestra. Tornillo micrométrico.- Permite enfocar con precisión, moviendo muy lentamente el objetivo. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido1 de la preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos Platina.- Es la superficie sobre la cual se colocan las preparaciones. Tiene un orificio en su centro para permitir el paso de la luz. En algunos microscopios está dotada de un sistema con dos tornillos que permiten el desplazamiento preciso de la preparación PARTE ÒPTICA Encargado de reproducir y aumentar las imágenes mediante el conjunto de lentes que lo componen. Está formado por los oculares y los objetivos. Ocular.- Es el otro grupo de lentes del microscopio. Aumenta la imagen formada por el objetivo. En su parte superior lleva una inscripción que indica el aumento que produce. Constituidos generalmente por dos lentes, dispuestas sobre un tubo corto. Los más utilizados son los de: 8X, 1OX, 12.5X, 15X. La X se utiliza para expresar en forma abreviada los aumentos. Objetivos.- Son los grupos de lentes principales, es decir, los que determinan realmente el aumento máximo y el poder de resolución del microscopio. Cada objetivo lleva una inscripción formada por dos números separados por una barra. El primero, más grande, indica el número de aumentos del objetivo. El segundo se denomina apertura numérica y es una medida de la luminosidad del objetivo. Cuanto menor es la apertura numérica de un objetivo, mayor es la cantidad de luz que atraviesa el objetivo. Los objetivos de mayor aumento (40x y 100x habitualmente) tienen el extremo retráctil para protegerlos es caso de choque contra la preparación, ya que para enfocarlos hay que acercarlos mucho a la misma.. Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparación. Los aumentos de los objetivos frecuentemente utilizados son: 4X, 6X, 1OX, 20X, 45X y 60X. Los objetivos de gran aumento sólo pueden ser utilizados si se interpone entre el objetivo y la preparación una gota de un líquido que tenga el mismo índice de refracción que el vidrio (generalmente aceite de cedro) por lo que se denominan objetivos de inmersión, está compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a través de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite entre el objetivo y la preparación, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 100X. SISTEMA DE ILUMINACIÓN Todo el sistema de iluminación para el funcionamiento del microscopio. Espejo.- Sirve como fuente de luz al reflejar la de un foco externo. Tiene dos caras, una plana y otra cóncava para concentrar más la luz. En algunos microscopios es sustituido por una lámpara que se conecta a la red. Diafragma.- Está formado por un conjunto de laminillas que dejan un orificio en su centro. El diámetro del orificio puede ser variado mediante una palanca, con lo que se regula la cantidad de luz que llega a la preparación. Condensador.- Es un sistema de lentes situado debajo de la platina que concentra la luz sobre la preparación, consiguiéndose así una iluminación más intensa. 5. Resultados: Identifique en un gráfico las partes principales de un microscopio óptico 6. Cuestionario: Describa brevemente los diferentes tipos de microscopios que existen Calcular el poder de magnificación y el poder de resolución de los microscopios que se utilizaran durante las prácticas Enuncie las reglas para el cuidado del microscopio en la observación y después de la misma ¿Qué se entiende por distancia focal de una lente? En los microscopios ópticos, el aumento total más idóneo debe estar comprendido entre 500 y 1000 veces la apertura numérica. Imaginemos que disponemos de un objetivo de aumento x40 y de una apertura numérica (A.N) de 0,65. ¿Qué aumentos deberán tener los oculares para comprender el rango arriba comentado? 7. Discusión: 8. Conclusiones: 9. Bibliografía :