Prevalence and Genomic Characterization of Brucella canis Strains Isolated from Kennels, Household, and Stray Dogs in Chile

PREVALENCE AND GENOMIC CHARACTERIZATION
OF BRUCELLA CANIS STRAINS ISOLATED FROM
KENNELS, HOUSEHOLD, AND STRAY DOGS IN CHILE
Prevalencia y caracterización genómica de Brucella canis Cepas aisladas de perreras,
perros domésticos y perros callejeros en Chile
2020
Consuelo Carrasco, Ignacia Cruciani, Daniela Espinoza, Martina Espinoza, Yanira Pavez
Enfermedades Bacterianas y Fungales
Docente: Dacil Rivera
31 de Agosto, 2021
RESUMEN
La Brucelosis canina es una enfermedad zoonótica causada por Brucella canis
El incremento en la infección en personas que trabajan con perros y sus
dueños
Los resultados arrojaron una amplia diseminación de la enfermedad en
las 3 poblaciones analizadas
INTRODUCCIÓN
Causada principalmente por B. canis
Existe otra especie dentro del género, como B. suis, la cual
también puede infectar a los perros y generar una enfermedad
similar.
Se considera que la enfermedad es la principal causa de fallas
reproductivas en perros.
La transmisión entre perros se produce principalmente por vía
venérea
Materiales y
Métodos
Colección de muestra
Las muestras de este estudio fueron sacadas de un total de 771 canes de la región Metropolitana.
143 muestras sanguíneas de perros domésticos, 179 de perros de diferentes criaderos y 450 de
perros de refugios en el periodo de 2018-2019.
Las muestras se recolectaron de animales mayores de 1 año, sin terapia antimicrobiana, no gestantes
ni lactantes.
Procesamiento de muestras serológicas
Las muestras de sangre, se centrifugaron para separar el
suero de la sangre coagulada.
Posteriormente, a través de la utilización de
contrainmunoelectroforesis, se determinó la existencia de
anticuerpos contra B.canis empleando LPS-R de B. ovis como
antígeno.
Procesamiento de muestras de sangre
Se incubaron 4 ml de sangre total en 40 ml de caldo de
soya tríptico de pH 7 además de citrato de sodio al 2%
v/v a una temperatura de 37°C por 30 días en total
Cada 7 días se sembraban 100 µL en placas de agar de
Brucella suplementadas.
Donde hubo crecimiento microbiano se realizó una
identificación preliminar con tinción de gram y sueros
monoespecíficos anti-A y anti- R.
Identificación molecular de Brucella canis
Todas las muestras fueron identificadas mediante PCR en
tiempo real
Luego de producir la lisis de las bacterias el ADN fue
purificado.
Como control positivo se usó la cepa SCL y para el control
negativo se usó el ADN sanguíneo de un perro no infectado.
Preparación y
bibliotecas de
secuenciación
Filtración, ensamble y
comparación de genomas
bacterianos
Las longitudes de la
secuenciación son determinadas
por electroforesis capilar, estas
fueron cuantificadas por el kit de
KAPA.
Los genomas de todas las cepas se
alinearon y compararon
simultáneamente con el genoma SCL.
Se buscaron variantes del operón
ureasa virB1-12 y genes omp25omp31.
Análisis estadístico
La prevalencia serológica y hemocultivo se consideró como un rasgo
binario analizado de forma logarítmica para estimar los riesgos según el
sexo y la procedencia de la muestra segun el hábitat del perro.
Resultados
De 771 muestras
De 10 positivos
Infección en 7% (54 animales).
Se aisló el patógeno en un 1,3% (10 animales).
Seropositividad 6,6% (51 animales).
6 hembras.
4 machos.
De los 51 seropositivos
3 con hemocultivos negativos
27 callejeros
16 con hogar
8 de perreras
Tabla 1. Características Epidemiológicas
de los perros infectados confirmados
bacteriológicamente y mediante qPCR
Tabla 2. Estadísticas de anotación y
ensamblaje de novo del genoma de
cepas secuenciadas de B. canis utilizando
a la cepa SCL de B. canis como referencia
Tabla 3. Análisis comparativo de
variantes de las cepas aisladas de
los perros y la cepa SCL
Discusión
Los estudios sobre B.canis en América Latina son escasos
abordando principalmente seroprevalencia y ninguno ha
abordado la genómica del patógeno.
Debido a diferentes resultados dependiendo del método
diagnóstico corrobora la complejidad de diagnóstico apoyando el
uso de más de 1 método diagnóstico en estos casos por animales
infectados sin bacteremia o considerando los diversos casos
dados alrededor del mundo.
La mayor seroprevalencia global de esta enfermedad se da en
perreras oscilando entre 15%-42,1%.
Conclusión
B.canis en Chile a nivel genómico es considerado un riesgo para la salud
pública y animal debido a que en la Región Metropolitana de Chile se
cuenta con un elevado número poblacional humana con estrecho
contacto con perros con y sin dueños.
Las cepas circulantes tienen baja diversidad genómica.
También se puede considerar una herramienta para mejorar el
diagnóstico de este patógeno y elaboración de vacunas previa adopción.
Bibliografía
Galarce, N., Escobar, B., Martínez, E., Alvarado, N., Peralta, G., Dettleff, P.,
Dorner, J., Martínez, V. and Borie, C., 2020. Prevalence and Genomic
Characterization of Brucella canis Strains Isolated from Kennels, Household,
and Stray Dogs in Chile. Animals, 10(11), p.2073.