PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVOS PRACTICA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE INGENERIA PESQUERA
FACULTAD DE INGENIERÍA PESQUERA
MICROBIOLOGÍA DE ALIMENTOS
Practica de laboratorio Nº4
Preparación de Medios de cultivo
DOCENTE:
GRUPO: 03
INTEGRANTES:
1. Vilela Chuica Sandro Yomar (1;2;3)
2. Valladolid Chunga Elmer (4;5;6)
3. Villegas Mendoza Jamir Junior (7;8;9)
4. Jiménez Salazar Junior (Responsable) (10;11)
5. Fernandez Nuñez Lorena Marily (12;13;14)
6. Pasapera Patiño Gian Carlos (15;16;17)
1.¿Cuál es el proceso básico de la esterilización a vapor en autoclaves, de
desplazamiento por gravedad o gravitacionales? Explique (Vilela Chuica Sandro Yomar)
Los pasos son; calentamiento del agua y eliminación del aire, el agua se
calienta hasta su temperatura de ebullición (es decir 100ºC) durante esta fase de
calentamiento, el aire está siendo desplazado de la cámara, para mejorar la
eliminación del aire se deja que el agua hierva durante algún tiempo después
que haya alcanzado los 100º C; aumento de la presión la temperatura aumenta
hasta la temperatura de esterilización indicada, cerrando la válvula se cierra el
recipiente, permitiendo que la temperatura y la presión aumenten hasta el nivel
requerido; tiempo de esterilización (fase de esterilización o mantenimiento)
durante este tiempo, se mantienen la temperatura y la presión al nivel necesario
para la esterilización. Por esto se conoce a esta fase como el tiempo de
mantenimiento; reducción de la presión a la presión atmosférica se abre la
válvula reguladora de presión permitiendo que el vapor escape y baje la presión
en espera que el ciclo termine; enfriamiento de la carga se abre la válvula que
permite la entrada de aire del exterior a través de filtros hacia la cámara, esta
apertura permite el enfriamiento y el secado del material.
2. ¿Qué son agentes esterilizantes, desinfectantes y antisépticos?
(Vilela Chuica Sandro Yomar)
Agentes esterilizantes son aquellos que producen la inactivación
total de todas las formas de vida microbiana (o sea, su "muerte" o
pérdida irreversible de su viabilidad) ejemplo óxido de etileno;
agentes
desinfectantes
(o
germicidas)
son
agentes
antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patógenos
(infecciosos) de un material, pueden (y en muchos casos suelen)
presentar efectos tóxicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen
emplear sólo sobre materiales inertes, ejemplo hipoclorito;
agentes antisépticos son sustancias químicas antimicrobianas
que se oponen a la sepsis o putrefacción de materiales vivos, se
trata de desinfectantes con baja actividad tóxica hacia los tejidos
vivos donde se aplican ejemplo etanol, tintura de Iodo.
3. ¿Un medio de cultivo se fraccionó en partes iguales en dos frascos 1 y 2, el
frasco 1 se esterilizó en autoclave a una atmósfera conteniendo 100% de
vapor de agua, el frasco 2 se esterilizó en autoclave pero a una atmósfera que
contenía 60% de vapor de agua, durante el mismo tiempo, a) ¿Cuál de los dos
procedimientos asegura la eliminación total de esporas b) ¿Cómo se
comporta el vapor como agente esterilizante? Fundamente su respuesta
(Vilela Chuica Sandro Yomar).
a) El primer procedimiento, porque en su interior del autoclave el vapor de
agua es un factor muy importante para la destrucción de las esporas, si el
vapor de agua está al 100% nos va a asegurar la eliminación total de las
esporas, la autoclave permite elevar la presión una o dos atmósferas sobre
la presión atmosférica, elevándose con ello la temperatura de ebullición del
agua que se encuentra en su interior, es por esta razón que durante el
funcionamiento de la autoclave el agua en su interior se encuentra a una
temperatura superior a los 100°C.
b) el vapor como agente esterilizante;
aporta la humedad necesaria para la
destrucción de los microorganismos; como
también aporta la temperatura necesaria
para que esta destrucción se realice más
rápido; por todas estas razones, la calidad
del vapor generado es un factor decisivo a
tener en cuenta para el éxito de este
proceso.
4. ¿Qué son los sistemas amortiguadores en los medios de cultivo; para
qué se adicionan agentes reductores y selectivos? Explique (Valladolid
Chunga Elmer Jesús)
Los sistemas amortiguadores son sales que son añadidas a un
medio de cultivo para mantener el pH dentro del rango óptimo del
crecimiento bacteriano, siendo los más usados fosfatos y
acetatos ;los agentes reductores (cisteína, tioglicolato de sodio)
son agregados con el fin de crear atmósferas óptimas para el
crecimiento de gérmenes microaerófilos, anaerobios facultativos
y estrictos; la adición de agentes selectivos (adición de cristal
violeta, sales biliares, azida sódica, telurito potásico, antibióticos,
etc) a una concentración adecuada tiene función de frenar a
determinados microorganismos.
5. ¿Cuál es el criterio válido para saber que un
microorganismo está "muerto" como se suele comprobar?
Explique (Valladolid Chunga Elmer Jesús)
El criterio válido con el que se puede saber que
un microorganismo está muerto es la perdida
irreversible de la capacidad de división celular,
es decir la pérdida de viabilidad; y esto se
puede comprobar mediante unas técnicas de
crecimiento en placas de Petri (confirmando
que no crecen en medios adecuados).
6. Usted decide esterilizar mediante el uso de la autoclave y realizar un
control biológico del proceso, en el laboratorio cuenta con los MOs, cuyo
punto térmico mortal se detalla a continuación: Escherichia coli = 55º C;
Mycobacterium
tuberculosis
=
60ºC;
Endosporas
de
Bacillus
steanothermophilus, = 120º C ¿Cuál de los tres elegiría para efectuar el
control? fundamente su respuesta en base a los datos dados. (Valladolid
Chunga Elmer Jesús)
Se está realizando un control biológico
que utiliza indicadores
biológicos como controladores del proceso de esterilización que son
preparaciones estandarizadas de microorganismos relativamente
resistentes (esporas) al método de esterilización que se emplea; el
microorganismo
que
elegiría,
Endosporas
de
Bacillus
steanothermophilus ya que tiene un punto térmico mortal 120 °C
(temperatura mínima que mata todas las bacterias en un determinado
tiempo), además que es un organismo muy resistente asegurando de
esta manera eliminar toda forma de vida microbiana.
7. Elabore un cuadro resumen del proceso de la esterilización por
vapor considerando: Proceso físico de reducción microbiana,
condiciones de esterilización, duración del ciclo aplicaciones,
ventajas, inconvenientes. (Villegas Mendoza Jamir Junior)
Actividad del
proceso
Proceso físico
de reducción
microbiana
Teoría
Consiste en un aparato (autoclave) que cierra herméticamente y que en su
interior desarrolla vapor bajo presión, el cual se presuriza y eleva la
temperatura, proporcionando que el calor húmedo destruya los
microorganismos.
Una esterilización segura con calor húmedo requiere temperaturas mayores
Condiciones de a las del punto de ebullición del agua. Estas temperaturas son comúnmente
alcanzadas por el vapor bajo presiones elevadas en una autoclave. Cuando la
esterilización presión de un gas aumenta, la temperatura del gas aumenta
proporcionalmente.
Duración del
ciclo
Aplicaciones
Riesgos
A una temperatura de 121ºC y una humedad de 90%, el tiempo para el
llenado de la cámara hasta alcanzar la temperatura adecuada es de 5´, para
exposición del vapor 20´, para la penetración de vapor a los paquetes,
expulsión de vapor 5´ finalmente el secado y enfriamiento de los paquetes
15´, total de tiempo 45´
Esterilización de soluciones parenterales o soluciones acuosas simples (como
el agua), productos biomédicos en general, instrumental quirúrgico,
materiales para medio de cultivo para laboratorio de microbiología, para uso
alimenticio.
Si el agua utilizada en el autoclave es de mala calidad puede provocar oxidación en el
material provocando también el efecto de piel de serpiente en estos, así mismo la mala
manipulación puede traer consecuencias graves para el que lo utiliza.
El material debe ser menor a la capacidad de la autoclave es decir que los
Inconvenientes materiales se rigen al volumen del autoclave.
Elimina los MO por desnaturalización de las proteínas, el método de
esterilización (vapor) más efectivo en la actualidad debido a que es rápido,
Ventajas
eficiente, seguro, certificable, no toxico y bajo costo, es considerado la
primera opción en métodos de esterilización.
8. ¿Cuáles son los componentes de una autoclave básica? (Villegas
Mendoza Jamir Junior)
Básicamente una autoclave consiste en una cámara hermética
construida en acero inoxidable, de forma cuadrangular o cilíndrica,
dispuesta horizontal o verticalmente, la cámara puede estar
equipada con sólo una puerta para la carga y descarga de
materiales o bien dos puertas ubicadas en las áreas de carga y
descarga de los materiales, tiene que tener una cámara donde se
pone el material, un burlete que le dará hermeticidad a la
autoclave puede ser de silicona, un carro transportador o rejillas
que pueden ser fijas o móviles es aquí donde ubicaremos el
material, tiene que tener separadores internos, un calderin que
generará el vapor, una bomba de vacío, una válvula de seguridad
y un nanómetro.
9. ¿Qué factores afectan la esterilización por autoclave? Fundamente
su respuesta (Villegas Mendoza Jamir Junior)
Número de microorganismos es un factor fundamental ya que es uno de los dos
factores que miden la efectividad de los diferentes procesos de esterilización se
utiliza en función de la evaluación de los diferentes métodos de esterilización;
materia orgánica, dificulta la eliminación de los microorganismos pero es uno de los
factores fácilmente modificables esto justifica la importancia de la limpieza antes de
la esterilización; tiempo, medio por el cual se evalúa la función de los métodos de
esterilización es el tiempo necesario para que una suspensión a temperatura de
121ºC elimine todas las esporas bacterianas; temperatura, al aumentar la
temperatura en un proceso específico de esterilización, su efectividad aumenta pues
cuando ésta es superior a la temperatura óptima de crecimiento de un
microorganismo generalmente provoca la muerte del mismo; estandarización de la
carga, los paquetes deben tener las medidas (28 x 28 x 47 cm.) y los envoltorios
normados internacionalmente, la carga a esterilizarsees variable y puede cambiar,
respecto al número de instrumentos, volumen de carga, tamaño de los instrumentos
y contenido de los paquetes.
10. ¿Cómo se ajusta el pH en un medio de cultivo? Explique (Jimenez
Salazar Junior)
El pH de los medios de cultivo se ajusta durante su
fabricación a los valores descritos en cada uno de ellos;
para este ajuste se toma una muestra del medio de cultivo
preparado y estéril, se mide el Ph (por medio de un
potenciómetro o con un papel pH 4.0-7.0) y luego se ajusta
con volúmenes de soluciones acidas (HCl) o básicas
(NaOH) 1N o 0.1N que sea requerido para el total del
medio; si el medio es liquido la medición y el eventual
ajuste se hace a temperatura ambiente (25°C).
11. El técnico en microbiología de un laboratorio de microbiología
cometió los siguientes errores en el transcurso de su carrera
profesional, explique por qué son errores y cuáles son las
consecuencias de los mismos, a) puso a esterilizar material y la
autoclave no tenía agua en el interior, b) puso a esterilizar medios
de cultivos líquidos en una autoclave con las tapas de los frascos
cerradas en forma hermética, c) abrió la puerta del autoclave una
vez terminados los 15 min a 121°C, pero la tº aún estaba a 110°C y
la presión por encima de la presión atmosférica, d) ¿cuál fue la
situación si el autoclave tenia soluciones? de recomendaciones
para cada caso ( 2 puntos) .(Jimenez Salazar Junior)
a) es un error porque lo que se debe de hacer , es comprobar el nivel de agua en el
interior de la autoclave y en caso de estar bajo, rellenar con agua destilada hasta el nivel
óptimo (cubriendo la parrilla de la parte inferior); la consecuencia, es que no se
generaría vapor para llevar a cabo la esterilización, e incluso puede provocar averías en
la autoclave; lo recomendable es verificar diariamente que la autoclave se encuentre con
los niveles necesarios de agua destilada para su funcionamiento. b) es un error porque
las tapas de los frascos no deben de quedar cerrados de forma hermética, para que el
vapor pueda entrar y salir; la consecuencia, es que no se producirá un intercambio de
vapor, por ende, no se llevara a cabo la esterilización requerida; lo recomendable es
dejar las tapas a rosca flojas, y deben cubrirse con papel. c) es un error porque no se
debe de abrir la puerta de la autoclave sin asegurarse que la temperatura baje y que la
presión sea igual a la presión atmosférica; las consecuencias serán quemaduras debido
a que los materiales están todavía muy calientes; lo recomendable es que, transcurridos
los 15 minutos a 1 atmósfera de presión, apagar la fuente de calor y dejar que la
autoclave se enfríe sólo (no abrir la válvula de salida de vapor), hasta que la presión haya
bajado a 0. d) la situación es que al tener la temperatura y presión elevadas origina que
parte de la solución pueda llegar al punto de ebullición y evaporarse, o incluso los frascos
pueden estallar debido a esta ebullición, por eso es recomendable abrir la autoclave a una
presión y temperatura ambiente.
12. ¿Qué se debe hacer si se derrama algún cultivo líquido o
se rompe un tubo inoculado? (Fernandez Nuñez Lorena
Marily)
Se debe cubrir el área con papel toalla y
desinfectante por lo menos por 15 min; luego
deberá remover y descartar éste según las
instrucciones del instructor; si se vierte algún
cultivo en la mesa, piso o encima de su ropa,
se tiene que notificar inmediatamente al
instructor, profesor o técnico de laboratorio
13. ¿Qué son medios selectivos diferenciales? Fundamente y
explique con dos medios de cultivo. (Fernandez Nuñez Lorena Marily)
Los medios selectivos diferenciales es la combinación en un mismo
medio las características de ser selectivo y diferencial; por ejemplo
el agar Mac Conkey, contiene sales biliares y cristal violeta, que
inhiben el crecimiento de las bacterias gram positivas; pero también
contiene lactosa y un indicador de pH permite distinguir entre las
bacterias fermentadoras de lactosa y las que no lo son; y el agar
EMB o eosina azul de metileno, utilizado para el crecimiento de
bacilos gram negativos de la familia Enterobacteriaceae, la eosina y
el azul de metileno inhiben el crecimiento de bacterias gram
positivas y permiten diferenciar los microorganismos capaces de
hidrolizar la lactosa y/o sacarosa de aquellos que no lo son.
14. ¿Qué microorganismo crece en cada uno de los medios de cultivo: agar
cistina - telurito, agar BHI con antibióticos, agar verde brillante? Fundamente
sobre su crecimiento. (Fernandez Nuñez Lorena Marily)
Agar cistina-telurito: crecen microrganismos del genero Corynebacterium, medio
utilizado para el aislamiento de Corynebacterium diphtheriae; la reducción del
telurito de potasio por C. diphtheriae produce colonias negras; agar BHI con
antibióticos: crece Helicobacter pylori; el agar BHI adicionado de cloranfenicol y
cicloheximida se utiliza para el aislamiento selectivo de hongos patógenos; la
cicloheximida inhibe el crecimiento de hongos saprófitos mientras que el
cloranfenicol actúa como agente antibacteriano tanto de bacterias Gram positivas
como Gram negativas; la incorporación de ambos antimicrobianos proporciona una
mayor selectividad frente a hongos saprófitos y bacterias; agar verde brillante:
crecen microorganismos del genero Salmonella, es un medio altamente selectivo
para el aislamiento de especies de Salmonella excepto S. typhi y S. paratyphi; no se
recomienda para el aislamiento de Shigella; incluye lactosa, sacarosa y rojo fenol;
siendo el agente inhidor el verde brillante; las colonias de Salmonella se ven de
color rosa o blanco, o transparentes, sobre un fondo rojo.
15. Cuáles son los agentes inhibidores y selectivos de los siguientes medios
de cultivo: BHI, TCB, agar Salino Manitol, agar de Mac Conkey, Kligler?
Explique los posibles resultados obtenidos. (Pasapera Patiño Gian Carlos)
El BHI (Brain Heart Infusión), medio rico que permite el crecimiento de una gran
mayoría de los microorganismos, menos los muy exigentes, se puede usar como
base para Agar sangre, sus agentes inhibidores son la infusión de tejidos
animales, peptonas, glucosa ; TCB es altamente selectivo, cumple con los requisitos
nutritivos de las especies de Vibrio y permite que los vibrios compitan con la flora
intestinal; el Agar salino manitol su agente inhibidor son; cloruro sódico al 7,5, es un
medio selectivo utilizado en el aislamiento de Staphylococcus ; Agar de MacConkey,
medio primario selectivo y diferencial que se emplea más a menudo para el
aislamiento y diferenciación de bacilos entéricos fermentadores y no fermentadores
de lactosa; las sales biliares y el cristal violeta actúan como inhibidores de gram
positivos; las bacterias que fermentan lactosa producen colonias color rojo y las no
fermentadoras dan colonias incoloras más o menos transparente; agar Kliger medio
rico y diferencial, permite ver 4 características de las enterobacterias; fermentación de
la glucosa, fermentación de la lactosa, producción de sulfuro y formación de gases.
16. Elabore un mapa conceptual sobre los tipos de esterilizadores a vapor y sus características (2 puntos).
(Pasapera Patiño Gian Carlos)
TIPOS DE ESTERILIZADORES A VAPOR Y
SUS CARACTERISTICAS
ESTERERILIZADORES DE
PRE-VACIO
AUTOCLAVES DE DESPLAZMIENTO DE
GRAVEDAD O GRAVITACIONAL
En estos equipos el aire es
removido por gravedad, ya que el
aire frío es más denso y tiende a
salir por un conducto colocado en la
parte inferior de la cámara cuando
el vapor es admitido.
CARACTERISTICAS
Estos equipos tienen una bomba de
vacío, o sistema de Venturi, para
retirar el aire de la cámara
rápidamente en forma de pulsos, de
modo que el vapor ingrese a la
cámara a mayor velocidad, mejorando
la eficiencia de la autoclave al eliminar
las bolsas de aire e incrementar la
velocidad del proceso
AUTOCLAVES INSTANTANEAS
(FLASH)
Son esterilizadores especiales de alta
velocidad que generalmente los
ubican entre las salas de operaciones
para procesar los instrumentos
desempaquetados y para usos de
urgencia extrema.
CARACTERISTICAS
CARACTERISTICAS


Este tipo de equipo es obsoleto.
Facilita la operación y aumentan el
nivel de seguridad por medio de
controles automáticos, bombas de
vacío y microprocesadores.



Operan en forma similar a los de
desplazamiento por gravedad.
Su equipamiento es más seguro
en relación con la remoción del
aire de la cámara y de la carga
antes de que penetre el vapor.
Estos esterilizadores operan a
134°C durante 3 ó 4 minutos
17. Elabore un mapa mental sobre los tipos de esterilizadores a vapor y sus características (2 puntos) (Pasapera
Patiño Gian Carlos)