TÉCNICAS GENERALES DE LA MICROBIOLOGÍA

TÉCNICAS
GENERALES DE LA
MICROBIOLOGÍA
MICROSCOPÍA
MICROSCOPIO
Según el principio en qué se basa la
amplificación,los microscopios pueden ser :
Microscopio de luz (ópticos)
Microscopios electrónicos
Pueden ser : Simples
Microscopio de luz
Compuestos
Los microscopios compuestos son:
de campo luminoso
de campo oscuro
de contraste de fase
de luz ultravioleta
de fluorescencia
Microscopio de luz de
campo luminoso
El campo microscópico aparece
intensamente iluminado y los objetos
aparece más oscuros .
Una propiedad importante de los
microscopios es el poder de
resolución ,que es la capacidad de
distinguir dos puntos adyacentes
como distintos y separados .
PR
λ de luz
AN objet. ᵻ AN condensa
Microscopio de luz de campo
luminoso
AN: abertura numérica es la medida de la
capacidad de captación de la luz por la
lente.
Se puede observar a 1000 X.
Aumento total: aumento del ocular x aumento del objetivo
(de 10 a 15X ) por ( de 5 a 100X)
El límite de resolución del microscopio
óptico o microscopio de luz es 0.2
micrómetros
Efecto del aceite de cedro
Microscopio de campo
oscuro
Se observa el fondo negro y los
objetos brillantes.
Utiliza un condensador especial
El aceite de cedro se coloca entre
condensador
y
la
lámina
portaobjeto y entre la lámina
portaobjeto y el objetivo.
La luz incide sobre la muestra
desde los lados
Microscopio de campo oscuro
Trayectoria de la luz en un microscopio de
campo oscuroUn tope de campo oscuro evita que la luz
entre directamente en la muestra; solo los
rayos de luz dispersos por la muestra
alcanzan la lente del objetivo y puede ser
vista.
Resulta imagen de alto contraste: una
muestra muy iluminada contra un fondo
oscuro mejora la resolución.
Microscopio de contraste
de fases
Aumenta la diferencia de contraste
entre la célula y el medio que la
rodea
Utiliza :
Un condensador de fase
Un objetivo de fase
Un ocular auxiliar
Comparación de
imágenes
Principios de la
microscopía de
fase
Microscopio de
luz ultravioleta
Uiliza la luz ultravioleta de longitud
de onda 180 a 400nm.
Las imágenes se hacen visibles
sobre pantallas de televisión o a
través de fotografías
Microscopio de
fluorescencia
Algunas
sustancias
químicas
absorben la energía de la luz
ultravioleta y la emiten como ondas
visibles de mayor longitud .
Un material aparece de un color
con la luz ordinaria y con otro color
con la luz ultravioleta.
Entre las sustancias fluorescentes
tenemos el naranja de acridina
,aurominaO y la clorofila .
Los microscopios de fluorescencia
se usa en diagnóstico y en
Ecología
Inmunofluorescen
cia
Microscopio
electrónico
Los electrones que viajan como ondas
tienen longitudes de onda entre 0.01 nm
y 0,001 nm. El poder resolutivo del
microscopios electrónicos es mucho
mayor que la de los microscopios de
luz.
Generalmente,
los
microscopios
electrónicos amplían objetos 10 000X a
100 000 X
Microscopio electrónico de
transmisión
Los
microscopios
electrónicos
proporcionan información detallada de las
bacterias más pequeñas, virus, estructuras
celulares internas e incluso moléculas y
átomos grandes.
Estructuras celulares que solamente se
pueden
ver
mediante
microscopía
electrónica se refieren como ultraestructura
de una célula
Hay dos tipos generales de microscopios
electrónicos: microscopios electrónicos de
transmisión y microscopios electrónicos de
barrido..
Microscopios electrónicos
de transmisión
Se utilizan para estudiar las estructuras
internas de las células
Se puede observar estructuras moleculares
como proteínas y ácidos nucleicos .
Una célula es demasiado gruesa para su
observación y debe ser sometida a cortes
ultrafinos.
Para los cortes ultrafinos las células
bacterianas se incluyen en plástico y se
emplea el ultramicrótomo.
Colorantes especiales como el uranio y
lantano acentúan el contraste.
La tinción negativa usa ácido fosfotungstico
No puede usarse MET para estudiar células
vivas
Microscopios electrónicos
de barrido
Para estudiar estructuras
externas .la muestra se
recubre con una fina capa
de metal pesado como oro o
platino.La profundidad de
campo es extraordinaria y
se obtiene amplio rango de
magnificaciones que van
desde 15x hasta 10,000x
Microscopios electrónicos
de barrido
Microscopios de sonda de
barrido
Permiten ver características de la
superficie al mover una sonda fina
sobre la superficie de un objeto.
Ejemplos de estos microscopios
son:
El microscopio de túnel de barrido
El microscopio de fuerza atómica
Microscopio de túnel de
barrido
Un microscopio de efecto túnel mide
el flujo de electrones hacia y desde la
sonda y la superficie del espécimen.
La
cantidad
de
flujo
de
electrones,llamada corriente de túnel,
es directamente proporcional a la
distancia de la sonda a la superficie
de la muestra.
Microscopio de túnel de
barrido
Un microscopio de efecto túnel
puede
medir
distancias
tan
pequeñas como 0.01 nm y revelan
detalles en la superficie de un
espécimen a nivel atómico
Un
requerimiento
para
la
microscopía de túnel de barrido es
que la muestra sea conductora de
electricidad.
Aumentos hasta 100 000 000
Microscopio de fuerza
atómica
Se emplean para estudiar superficies
que no conducen bien la electricidad
Se usa para hacer mapas genéticos de
plásmidos localizando unión de enzima
de restricción
Microscopio de fuerza
atómica
Microscopio confocal de
barrido con laser
Acopla fuente de luz láser a la microscopía
óptica .
Da imágenes digitales tridimensionales de
los microorganismos .
Las células se tiñen con colorantes
fluorescentes para hacerlas más fácilmente
visibles .Se pueden crear faIsos coIores
Se obtienen imágenes de las diferentes
capas que se pueden almacenar y luego
superponer digitalmente para dar imágenes
tridimensionales de la muestra completa
Resolución de 0.1 micrómetro
Microscopio confocal de
barrido con laser
Microscopio confocal
de barrido con laser