UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO TÉCNICAS DE INVESTIGACIÓN EN BIOQUÍMICA: CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL *Francisco Abanto Zamora INTRODUCCIÓN Desde hace ya algunos años el perfeccionamiento de varias técnicas ha facilitado un conocimiento mejor sobre el origen, la estructura y la función de un gran número de organoides presentes en el citoplasma de la mayoría de las células, así como de sus constituyentes. Dentro de estos avances técnicos se mencionan los siguientes: 1. Métodos para preparar células y tejidos que permiten observar la ultraestructura, con el microscopio electrónico, a nivel de unidades angstrom (A°) (diezmilésima parte de una micra). El poder de resolución de un microscopio electrónico moderno alcanza hasta 2.5 A° 2. Una mejoría en las técnicas Figure 1 CENTRIFUGA de aislamiento y preparación de varios componentes subcelulares, que facilita el estudio posterior in vitro (por ejemplo, centrifugación diferencial en sacarosa). Figure 2 EL HOMOGENEIZADO SECENTRIFUGA PARA OBTENER EL SEDIMENTO 3. Un desarrollo en las técnicas con el empleo de isótopos radiactivos para localizar diversos compuestos químicos y establecer su función e interrelación en el interior de la célula. 4. Se dispone, además, de un buen número de técnicas fisiológicas y bioquímicas (cromatográficas, espectrofotométricas, centrifugacionales, electroforéticas, etc.) que permiten el estudio detallado de los variados biopolímeros (como proteínas, lipoproteínas, ácidos nucleicos y polisacáridos) y moléculas pequeñas (como aminoácidos, azúcares, ácidos grasos, etc.). Como son muchos los métodos que se emplean a la fecha y que sirven para abordar el estudio de la célula, consideraremos solamente y de una manera muy somera algunas de las técnicas más usuales. (ONDARZA, 2010) PARA DISGREGAR CÉLULAS Y AISLAR MOLÉCULAS INTRACELULARES Y ORGANELOS SUBCELULARES SE USAN TÉCNICAS FÍSICAS Para estudiar con profundidad la función de cualquier organelo, es necesario primero aislarlo en forma relativamente pura, sin contaminación importante de otros organelos. El proceso habitual para conseguirlo se llama fraccionamiento subcelular y, por lo general, comprende tres procedimientos: extracción, homogeneización y centrifugación. Gran parte de los trabajos iniciales en esta área utilizaron hígado de rata. (Murray, 1997) Ver Anexo 1 UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ANEXO 01 MAPA CONCEPTUAL LA CELULA: ORGANELO, BIOMOLECULA MARCADOR, FUNCION ORGANELO BIOMOLECULA MARCADOR FUNCION NUCLEO ADN UBICACION DE CROMOSOMAS MITOCONDRIA GLUTAMICO DH CICLO DEL ACIDO CITRICO APARATO DE GOLGI GALACTOSIL TRANSFERASA GLUCOSILACION Y SULFATACION RETICULO ENDOPLASMICO GLUCOSA 6 FOSFATASA SINTESIS DE LIPIDOS Y PROTEINAS (R.E.R.) LISOSOMA FOSFATASA ACIDA ENZIMAS DEGRADATIVAS Docente del Departamento de Bioquímica Universidad Nacional de Trujillo (PERU). Mayo, 2020.
