CURSO: BIOQUÍMICA GENERAL ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MÉDICA GLUCEMIA • GLUCEMIA BASAL O EN AYUNAS: Cantidad de glucosa que esta presente en la sangre por la mañana en ayunas, después del descanso nocturno. (ayuno de 10-16 horas) • GLUCEMIA POSTPRANDIAL: Cantidad de glucosa que está presente en la sangre después de haber ingerido alimento Muestras para la determinación de glucosa • • • • Suero Plasma Líquido cefalorraquideo Orina (glucosuria) MÉTODOS PARA LA DETERMINACIÓN DE GLUCOSA a) Métodos basados en el poder reductor de los hidratos de carbono (reacción de Benedict, método de la o-toluidina) b) Métodos enzimáticos: son los más utilizados, utilizan enzimas como reactivos (ej. glucosa oxidasa, hexoquinasa) a fin de aumentar la especificidad. MÉTODOS PARA LA DETERMINACIÓN DE GLUCOSA b) Métodos enzimáticos: En la primera reacción (específica), catalizada por la enzima hexoquinasa, se fosforila la glucosa formándose glucosa 6-fosfato. La glucosa 6-fosfato, en una reacción posterior (reacción indicadora), se transforma en 6fosfogluconato produciéndose NADPH (1 mol por cada molécula de glucosa). La producción de NADPH origina un aumento de absorbancia a 340nm. PROCEDIMIENTO •Preparar los tubos de acuerdo a lo que se indica en la siguiente tabla: Reactivo R Agua destilada Estándar Muestra (1-4) BLANCO 1 ml 0.01 ml - ESTÁNDAR 1 ml 0.01 ml - PRUEBA (1-4) 1 ml 0.01 ml •Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C. •Encender el espectrofotómetro por lo menos 15 minutos antes y seleccionar la λ de 500 ηm •Ajustar el espectrofotómetro con el Blanco. •Realizar las lecturas de los tubos y anotar la absorbancia en la tabla 2. DETERMINACIÓN DE GLUCOSA POR PRUEBA ENZIMÁTICA CÁLCULO Factor de calibración (Fc) =Concentración Estándar/Abs. Estándar Glucosa (mg/dl) = Fc x Abs. Muestra Ejemplo: GLUCEMIA – valores normales • GLUCEMIA BASAL O EN AYUNAS: 70-110 mg/dL • GLUCEMIA POSTPRANDIAL: hasta 140 mg/dL GLUCEMIA – valores normales • Hiperglucemia: >110 mg/dL en ayunas • Hipoglucemia: <45-50 mg/dL DIAGNÓSTICO DE DIABETES PRUEBAS ADICIONALES • Curva de glucosa (Prueba de tolerancia a glucosa) • Test de O’Sullivan • Hemoglobina glicosilada
