MANUAL MICRO ING. BQ 6B 2020

Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
MANUAL DE PRÁCTICAS BASADO EN
COMPETENCIAS
MATERIA: MICROBIOLOGÍA
CARRERA: INGENIERÍA BIOQUÍMICA
CLAVE DE LA ASIGNATURA: BQO - 0525
SATCA: 3-4-10
SEMESTRE: Sexto
ELABORADO POR: M. C. Martha Elena Ortiz Romero
Revisión
Autorización
H. Academia de
Ingeniería Bioquímica
Jefe de División de
Ingeniería Bioquímica
Página | 1
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
ÍNDICE DE PRÁCTICAS
Nombre de la práctica
Página
REGLAMENTO DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
5
No. de
Práctica
No.1
Y QUÍMICA
No. 2
TÉCNICAS MICROBIANAS 1
7
No. 3
TÉCNICAS MICROBIANAS 2
9
No. 4
TINCIÓN DIFERENCIAL.
12
No. 5
MOHOS Y METABOLISMO DE LEVADURAS
15
No. 6
ESTERILIZACIÓN
20
No. 7
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS
24
No. 8
SIEMBRA
DE
MICROORGANISMOS
CARACTERÍSTICAS
MORFOLÓGICA
DE
COLONIAS MICROBIANAS
Y
LAS
26
Página | 2
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
PRESENTACIÓN
El presente manual tiene como finalidad que los estudiantes adquieran las
herramientas necesarias para la manipulación y control de los microorganismos en
procesos bioquímicos para el aprovechamiento racional de los recursos naturales.
Durante el desarrollo de la materia se realizaran una serie de prácticas que le
permitan al estudiante aplicar en el estudio un conocimiento integrado de la
estructura y mecanismos implicados en la microbiología, sus interrelaciones con el
ambiente, así como de los principios bioquímicos que les regulan y sus
aplicaciones e implicaciones socioeconómicas
Como parte del manual de prácticas se desarrollaran cada una de estas de la
siguiente forma: Se organiza agrupando los contenidos de la asignatura en 11 prácticas.
Página | 3
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Departamento:
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
COMPETENCIAS A DESARROLLAR.
Competencias específicas







Competencias genéricas
Analiza los hechos sobresalientes
que dieron origen a la Microbiología,
sus relaciones con otras ciencias, Competencias instrumentales
así como sus perspectivas actuales
 Capacidad de análisis y síntesis
y futuras.
Conoce, selecciona y aplicará las  Capacidad de organizar y planificar
metodologías empleadas en el  Habilidades básicas de manejo de la
computadora
estudio,
caracterización,
identificación y preservación de los  Habilidad para buscar y analizar
microorganismos.
información proveniente de fuentes
diversas
Identifica la estructura, fisiología,
clasificación de eubacterias y  Solución de problemas
archeobacterias y, analiza su  Toma de decisiones.
importancia en los diferentes
ámbitos.
Identifica la estructura, fisiología y Competencias interpersonales
criterios
de
clasificación
de
microorganismos
eucariotas
y
analiza su importancia en los
 Capacidad crítica y autocrítica.
diferentes ámbitos.
Conoce
las
características  Trabajo en equipo.
relevantes de los virus y partículas  Habilidades interpersonales.
subvirasicas
y
analizará
su
aplicación en el mejoramiento de
Competencias sistémicas
cepas.
Propaga cultivos microbianos;
cuantifica el crecimiento y evalúa el
efecto de los factores físicos y
 Capacidad de aplicar los conocimientos
químicos sobre éste.
en la práctica.
Comprende
los
mecanismos
genéticos y analiza la aplicación de  Habilidades de investigación
los microorganismos en Ingeniería  Capacidad de aprender.
 Capacidad de generar nuevas ideas
Genética.
(creatividad).
 Habilidad para trabajar en forma
autónoma.
 Búsqueda de la calidad constante.
Página | 4
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Práctica No. 1
Nombre de la práctica: REGLAMENTO DE LABORATORIO
1. Competencia específica a desarrollar.
Llevar a cabo actividades prácticas con seguridad y buen manejo que
promuevan el desarrollo de habilidades para la experimentación, tales
como: observación, identificación manejo y control de variables y datos
relevantes, planteamiento de hipótesis, de trabajo en equipo.
2. Introducción.
El Instituto Tecnológico Superior de Coatzacoalcos, fundado en el año de 1999,
cuenta actualmente con un moderno Laboratorio de Ingeniería Bioquímica y
Química el cual tiene como objetivo principal la atención al alumno en la
realización de las prácticas del docente, así mismo atender las solicitudes de
Proyectos Empresariales Estudiantiles y prestar servicios externos a las
dependencias que los soliciten.
Por lo anterior se hace necesario el trabajo en equipo, armonía y respeto en el
desarrollo de nuestras actividades dentro del Laboratorio, obteniendo así la
calidad y exactitud en los resultados y por ende la certificación de nuestro
Laboratorio.
El presente reglamento tiene como fin lograr los resultados antes mencionados. Es
por ello que se pide analizar y poner en práctica los lineamientos aquí indicados,
así como el estatuto escolar del Instituto Tecnológico Superior de Coatzacoalcos,
del estado de Veracruz.
3. Material, Equipos y Reactivos

Materiales
Reglamento impreso

Equipos
N.A.
Reactivos
.
N.A
4. Procedimiento.
Lectura del reglamento del laboratorio
Análisis del reglamento del laboratorio.
Hacer comentarios finales
Página | 5
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Departamento:
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
5. Cuestionario.
1. ¿Qué utensilios de limpieza debe traer el alumno?
2. ¿Cuáles son las normas de vestimenta en el laboratorio?
3. ¿Cuál es la sanción en caso de incumplir con la vestimenta indicada?
4. En cuanto al material y equipo ¿cuáles son las principales
recomendaciones?
5. En cuanto a la seguridad, ¿cuáles son las principales
recomendaciones?
6. Referencias bibliográficas.
A reglamento de laboratorio de ingenierías bioquímica y química y laboratorio de
ciencias básicas
Página | 6
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Práctica No. 2
Nombre de la práctica: TÉCNICAS MICROBIANAS I
1. Competencia específica a desarrollar.
Observar e identificar las características, semejanzas y diferencias entre las
bacterias y los protozoarios
2. Introducción.
El Reino Monera agrupa organismos muy abundantes en la naturaleza, como las
bacterias, que son células que carecen de núcleo definido; pueden presentar
diferentes formas, por lo que se clasifican en cocos, bacilos y espirilos. Para
realizar la observación microscópica de esto organismos es necesaria realizar
frotis y observar al microscopio en objetivo de inmersión.
El Reino Protista presenta organismos unicelulares y pluricelulares que dependen
principalmente de la difusión para vivir, sus células tienen núcleo bien definido y organelos
delimitados por membrana. Representantes de este grupo son los protozoarios y las
algas. Un método muy eficiente para la observación de estos microorganismos es el uso
de la gota suspendida ya que nos permite observar el movimiento típico flagelar y ciliar
que presentan.
3. Material, Equipos y Reactivos
Materiales
1 Microscopio
1
1 Portaobjetos excavado
2 Porta y cubreobjetos
1 Mechero
1 Gotero
1 Agitador
1 Pinzas
1 Cuchara sopera
Equipos
Microscopio óptico con
objetivos de 10X, 40X y
100X
1
Reactivos
Cucharada de
yogurt natural
agua destilada
Azul de metileno
Aceite de
inmersión
Alcohol
Agua estancada o
de florero
Página | 7
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Departamento:
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
4. Procedimiento.
Parte A: Observación de bacterias:
1. Vierte el yogurt natural en el vaso de precipitado. Agrega 50 ml. de agua
destilada, mezcla suavemente y obtén una solución homogénea.
2. Vierte dos gotas de la solución de yogurt en un extremo del porta objeto,
coloca el filo angosto de otro portaobjetos sobre las gotas formando un ángulo
con el primer portaobjetos, desliza suavemente para dejar una película muy
delgada y homogénea
3. Seca el frotis al aire libre y luego fija al calor de la flama, cuida que no se
queme.
4. Después cubre con alcohol el frotis para eliminar el exceso de grasa,
5. Coloca una gota de azul de metileno, espera 30 segundos escurre, enjuaga y
deja secar al aire perfectamente.
6. Coloca, sin que se formen burbujas, una gota de aceite de inmersión sobre el
frotis
7. Observa al microscopio en objetivo de inmersión (100X)
Parte B: Observación de protozoarios:
1. Coloca una gota de agua de florero y una de metil celulosa en el portaobjetos
excavado y cúbrelo
2. Localiza un organismo a bajo aumento y céntralo en el campo para observar a
mayor aumento. Observa por lo menos cinco minutos, mientras más paciente
seas más podrás ver. Describe su movimiento
3. Conforme se evapora el agua del portaobjetos, el organismo no podrá
moverse. Es el momento adecuado para usar el mayor aumento y observar
detenidamente su constitución
4. Identifica en los esquemas los organismos observados
5. Cuestionario.
¿Cuál es la importancia biológica de los organismos observados?
¿Cuál es la importancia económica de los organismos observados?
6. Referencias bibliográficas.
Audesirk, T. (1997) Biología: La vida en la tierra. Pearson educación. México.
Curtis. H., Biología, México, Panamericana.
Pelksar. (2000). Microbiología. México. Edit. Paidós.
Página | 8
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Práctica No. 3
Nombre de la práctica: TÉCNICAS MICROBIANAS II
1. Competencia específica a desarrollar.
Elaborar correctamente frotis para coloración microbiológica e identificar la
utilidad e importancia del manejo de estas técnicas
2. Introducción.
Existe un gran número de compuestos orgánicos colorantes (tintes), que se
emplean para la tinción de los microorganismos. Estos compuestos se
clasifican de acuerdo con su carácter químico: ácido, básico o neutro.
Los colorantes ácidos son
aquellos en
que la propiedad colorante
corresponde al ión con carga negativa, los básicos corresponden a dicha
propiedad con un ión con carga positiva y los neutros son sales complejas de
un colorante ácido y otro básico. Los ácidos tiñen en general los componentes
básicos de la célula y los básicos los componentes ácidos.
3. Material, Equipos y Reactivos
Materiales
4 Portaobjetos
1 Mechero
1 Pinza
1 Asa de siembra
1
tapa
de
metal
(mayonesa o mermelada)
1 Puente de tinción
3 Cotonetes
Equipos
Microscopio óptico con
objetivos de 10X, 40X y
100X
Reactivos
Azul de metileno
Aceite de
inmersión
Agua destilada
Fucsina
Suero sanguíneo
Verde malaquita
CuSO4
4. Procedimiento.
Página | 9
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Departamento:
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
Parte A: Preparación de un frotis para tinción:
1. Limpiar perfectamente una laminilla y flamearla ligeramente
2. Coloca una gota de agua destilada en la parte media de la laminilla
3. Con un asa estéril y fría transporta la cantidad deseada del cultivo a examinar y
hacer una suspensión en la gota de agua
4. Realiza una extensión de 1 cm2 aproximadamente con ayuda del asa.
5. Deja secar al aire (el frotis se torna opaco)
6. Fija el frotis pasándolo rápidamente sobre la flama del mechero (en la parte
más alta de la flama) por el lado en que no está la extensión de la muestra.
7. Deja enfriar y la extensión está lista para teñirse
8. Tiñe el frotis durante un minuto con azul de metileno
9. Lávalo con agua
10. Escurre y dejar secar al aire
11. Deposita una gota de aceite de inmersión sobre el frotis teñido y seco
12. Observa al microscopio con el objetivo de 100X (seco fuerte).
Nota: una buena extensión no debe tener una cantidad excesiva de bacterias, procure seguir
estas indicaciones con mucho cuidado, ya que de ello depende el éxito de su tinción y
observación.
Parte B: Coloración de esporas:
1. Prepara un frotis de la manera usual (pasos del 1 al 7 de la parte A)
2. Cúbrelo con una solución de verde malaquita
3. Déjalo actuar 40 a 60 segundos en frío y a continuación calienta a ignición de
vapores por 1 minuto
4. Lávalo con abundante agua y escurre
5. Cúbrelo con safranina durante 30 segundos
6. Lávalo, escurre y dejar secar al aire
7. Deposita una gota de aceite de inmersión sobre el frotis teñido y seco
8. Observa al microscopio con el objetivo de 100X (seco fuerte).
Nota: las esporas se observan de color verde y la zona central (celular) de color roja
Parte C: Coloración de cápsula (método de Hiss):
Use una gota de suero sanguíneo para elaborar el frotis
Sécalo al aire y fíjalo al calor
Cubre con fucsina y deja actuar 30 segundos
Calienta a emisión de vapores
5. Lava con una solución al 20% de CuSO 4
6. Deja secar
7. Deposita una gota de aceite de inmersión sobre el frotis teñido y seco
1.
2.
3.
4.
Página | 10
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Departamento:
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
8. Observa al microscopio con el objetivo de 100X (seco fuerte).
1.
2.
3.
4.
5.
5. Cuestionario.
¿Cuál es la constitución básica de las esporas (formas de resistencia
bacteriana)?
¿En qué consisten los procesos de tinción?
¿Cómo se llama la técnica de tinción de esporas?
¿Qué es la cápsula?
¿Cómo se comprueba la rigidez de la cápsula bacteriana?
6. Referencias bibliográficas.
Audesirk, T. (1997) Biología: La vida en la tierra. Pearson educación. México.
Curtis. H., Biología, México, Panamericana.
Pelksar. (2000). Microbiología. México. Edit. Paidós.
La biología de los microorganismos
Página | 11
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Práctica No. 4
Nombre de la práctica: TINCIÓN DIFERENCIAL.
1. Competencia específica a desarrollar.
Realizar la observación de microorganismos a través de técnicas de tinción
diferencial para llevar a cabo su identificación.
2. Introducción.
Los procedimientos de coloración que ponen de manifiesto diferencias entre las
células bacterianas, o entre partes de una misma célula, se denominan técnicas
de tinción diferencial o especial. Son algo más complicados que los de tinción
simple, por cuanto se expone la preparación a más de una solución colorante, o
se emplean ciertos reactivos complementarios para la tinción.
Existen distintos métodos: tinción de Gram., coloraciones ácido resistentes,
método de Giemsa, coloraciones para descubrir estructuras celulares y tinción
negativa.
3. Material, Equipos y Reactivos
Materiales
4 Portaobjetos
1 Mechero
1 Pinza
1 Asa de siembra
Equipos
Microscopio óptico con
objetivos de
10X, 40X y 100X.
Reactivos
Rojo Congo al 2%
Tinta china
Yodo
Cristal violeta
Safranina
Alcohol acetona
Carbol fucsina
Alcohol ácido
Azul de metileno
Aceite de
inmersión
Página | 12
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Departamento:
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
4. Procedimiento.
Parte A. Coloración negativa (Método de la tinta china):
1. Coloque una gota de tinta china en el extremo de un portaobjetos perfectamente
limpio.
2. Con el asa estéril y fría, tome una pequeña muestra del cultivo por examinar y
mézclelo cuidadosamente con el colorante.
3. Con otro cubreobjetos limpio extienda la suspensión.
4. Dejar secar al aire y observar al microscopio en objetivo de inmersión
Parte B. Tinción de Gram.
1. Limpiar perfectamente el portaobjetos
2. Colocar una gota de agua destilada en la parte media del portaobjetos.
3. Con un asa fría esterilizada transportar la cantidad deseada del cultivo y hacer una
suspensión en la gota de agua.
4. Deje secar al aire.
5. Fijar el frotis pasándolo sobre la flama y deje enfriar.
6. Teñir durante un minuto con la solución de cristal violeta, lavar con agua.
7. Escurra y cubra con lugol dejándolo actuar 1 minuto.
8. Escurra el lugol y lave con agua, cubra la preparación con alcohol acetona 1 minuto y
lave abundantemente con agua
9. Cubra la preparación con safranina por un minuto y lave con agua.
10. Escurrir y dejar secar al aire
11. Colocar una gota de aceite de inmersión sobre el frotis y observar en objetivo 100X
Parte C. Coloración de Zhiel Neelsen
1. Prepara un frotis del esputo, deje secar al aire y fíjelo al calor
2. Cubra la preparación con carbol fucsina y calienta a emisión de vapores
durante 5 minutos, cuidando que no hierva el colorante. Añadir colorante de
vez en cuando para evitar que el éste se seque.
3. Lave con agua y luego decolore con alcohol ácido
4. Lave con agua y cubra la preparación con azul de metileno durante 1 minuto
5. Lave con agua y deje secar al aire
6. Coloca una gota de aceite de inmersión sobre el frotis y observa en objetivo
100x
Página | 13
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Departamento:
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
5. Cuestionario.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
¿A qué se llama coloración negativa y cuál es su utilidad?
¿Por qué ciertas bacterias no se tiñen con los colorantes usuales?
¿A qué se le llama bacteria Gram positiva y cuáles se consideran Gram negativa?
¿De qué depende la retención de Gram por algunas bacterias?
¿Por qué se utiliza alcohol acetona como agente diferencial?
¿A qué se le llama mordiente y qué propiedades ofrece el lugol en el caso
particular de la tinción de Gram?
6. Referencias bibliográficas.
Audesirk, T. (1997) Biología: La vida en la tierra. Pearson educación. México.
Curtis. H., Biología, México, Panamericana.
Pelksar. (2000). Microbiología. México. Edit. Paidós.
La biología de los microorganismos
Página | 14
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Práctica No. 5
Nombre de la práctica: MOHOS Y LEVADURAS
1. Competencia específica a desarrollar.
Observar las características morfológicas macro y microscópicas de
ejemplares de diferentes clases de hongos e identificarlas.
2. Introducción.
El Reino Fungí está formado por hongos y levaduras, es un grupo muy
diversificado de organismos terrestres generalmente, no contienen clorofila por lo
que son heterótrofos, generalmente saprofitos o parásitos, son unicelulares o
compuestos por filamentos (hifas) que conforman el cuerpo del micelio u hongo.
Las hifas pueden crecer separadas unas de otras o en una masa compacta, que le
da la estructura bien definida a los hongos de seta. Su reproducción es sexual y
asexual por esporas (a excepción de los hongos imperfectos que solo presentan
reproducción asexual).
3. Material, Equipos y Reactivos
Materiales
3 Portaobjetos
3 Cubreobjetos
3 Cajas de petri
1 Aguja de disección
1 Gotero
1 navaja de afeitar o
bisturí
1 Lupa
Equipos
Microscopio óptico con
objetivos de 10X, 40X y
100X.
Reactivos
2 ml de
fermentado
(pulque, tepache)
1 tortilla enlamada
1 pan enlamado
Queso enlamado
Azul de metileno
4. Procedimiento.
Parte A: Comparación macroscópica:
Observa macroscópicamente la muestra de pulque, tortilla, pan y queso. Y
completa la siguiente tabla:
Página | 15
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Muestra
Color
Olor
Consistencia
Pulque
Tortilla
Pan
Queso
Parte B: Comparación microscópica:
1. Realiza un frotis de tinción simple (azul de metileno) común de levaduras y
observa al microscopio
2. Haz una preparación en fresco de pulque, obsérvalo al microscopio en
aumento de 10X y 40X
3. Lava perfectamente tu porta y cubre objetos
4. Haz una preparación en fresco del hongo del pan, tomando con la aguja de
disección un poco de lama sobre el portaobjetos y disuelve en una gota de
agua, cúbrelo y observa al microscopio en aumento de 10X y 40X
5. Repite el paso anterior con todas las muestras de hongo
5. Cuestionario.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
¿Qué importancia económica tienen los hongos para el hombre?
¿Qué importancia biológica tienen los hongos?
¿Menciona 5 hongos patógenos para el hombre?
¿A qué clase pertenecen los hongos de las muestras que observaste?
¿A qué clase pertenece el hongo Penicillium y cuál es su importancia?
¿Cuáles son las características distintivas de los Deuteromicetes?
6. Referencias bibliográficas.
Curtis. H., Biología, México, Panamericana.
Pelksar. (2000). Microbiología. México. Edit. Paidós.
Página | 16
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Nombre de la práctica: METABOLISMO DE LEVADURAS
1. Competencia específica a desarrollar.
Comprobar y describir el tipo de respiración celular y la reproducción típica
de estos microorganismos
2. Introducción.
3.
Los organismos como las levaduras son de gran importancia biológica y
económica, por lo que resultan de gran relevancia estudiar sus principales
procesos vitales, tales como la respiración y reproducción típica que presentan.
Las levaduras degradan glucosa y producen alcohol etílico como producto de su
respiración anaerobia (fermentación). Cuando las levaduras efectúan este
proceso, este proceso en presencia del azul de metileno, éste atrapa los iones
liberados, por lo que cambia su coloración. La reproducción es típicamente por
gemación en la cual la célula madre aumenta de tamaño, el núcleo se divide y
finalmente la célula se separa, ocasionalmente la célula madre e hija quedan
unidas temporalmente
4. Material, Equipos y Reactivos
Materiales
1 Gradilla
2 Tubos de ensaye
1 Pipeta de 5 ml
3 Vasos de precipitado de
100 ml
1 Equipo de calentamiento
4 Porta y cubreobjetos
1 Agitador
1 Pinzas
1 Gotero
Equipos
Microscopio óptico con
objetivos de
10X, 40X y 100X.
Reactivos
Azul de metileno
20 gr. de levadura
de pan
2 cápsulas de
levadura de
cerveza
10 ml de solución
de azúcar al 5%
50 ml de agua
20 gr. de azúcar
5. Procedimiento.
Parte A: Respiración:
Página | 17
Unidad:
Departamento:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
Acomoda los tubos de ensaye en la gradilla y etiquétalos con el número 1 y 2
Tubo #1
1. Coloca la solución de azúcar en el tubo 1 y sujétalo con las pinzas. Caliéntalo a
flama directa por 15 segundos
2. Vacía el contenido de una cápsula de levadura de cerveza en la solución de
azúcar. Agita suavemente hasta formar una solución homogénea
3. Toma con el gotero una pequeña cantidad de azul de metileno y añade una
gota del colorante en el tubo agita suavemente y repite la operación hasta
obtener un solución de color azul claro
4. Deposita 50 ml de agua tibia en el vaso de precipitado. Coloca el tubo de
ensayo dentro del vaso y déjalo reposar 15 minutos. Observa lo que sucede
cada 5 minutos.
Tubo #2
1. Vierte el contenido de la segunda cápsula en el tubo 2. Toma con la pipeta.
Toma con la pipeta 5 ml de solución de azúcar al 5% y viértela en el interior del
tubo
2. Sujeta el tubo con las pinzas y caliéntalo a flama directa por 5 minutos y
retíralo
3. Toma con el gotero un poco del colorante y agrégalo gota a gota hasta que la
coloración se torne azul claro
4. Coloca el tubo en la gradilla y déjalo reposar 15 minutos. Observa lo que
sucede cada 5 minutos.
5. Compara la coloración de ambos tubos después de transcurrido el tiempo
Parte B: Reproducción:
1. Deposita la levadura de pan en un vaso de precipitado con 50 ml de agua,
agita hasta obtener una mezcla homogénea
2. Coloca una gota de la solución de levadura en el portaobjetos y cúbrela
3. Observa al microscopio en seco débil (10X) y seco fuerte(40X)
4. Agrega una cucharada de azúcar a la solución de la levadura y caliéntala por
10 segundos, retírala del fuego y espera 4 minutos
5. Agita la solución y toma una gota de la solución de levadura en el portaobjetos
y cúbrela
6. Observa al microscopio en seco débil (10X) y seco fuerte(40X)
7. Repite la operación anterior agregando una gota de azul de metileno a la
solución de levadura
8. Observa al microscopio en seco débil (10X) y seco fuerte(40X)
Página | 18
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Departamento:
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
9. Observa e identifica estructuras antes y después de añadir el colorante
6. Cuestionario.
1.
2.
3.
¿Cuáles son los distintos tipos de reproducción de las levaduras? Explícalos.
¿Cómo es el ciclos biológicos de Saccharomyces cerevisiae?
¿Qué es la hibridación de levaduras?
7. Referencias bibliográficas.
Audesirk, T. (1997) Biología: La vida en la tierra. Pearson educación. México.
Curtis. H., Biología, México, Panamericana.
Pelksar. (2000). Microbiología. México. Edit. Paidós.
Página | 19
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Práctica No. 6
Nombre de la práctica: ESTERILIZACIÓN I
1. Competencia específica a desarrollar.
Esterilizar medios de cultivo líquidos en ambiente húmedo a través del uso
de la autoclave.
2. Introducción.
Los términos estéril, esterilizar y esterilización se refieren a la ausencia o
destrucción completa de los microorganismos y no se usa en términos relativos.
Los microorganismos son susceptibles a los cambios en las condiciones físicas el
medio, el vapor a presión es el agente esterilizante más práctico y seguro, ya que
la temperatura del vapor a presión es más elevada a la de ebullición normal,
además ofrece las ventajas de rapidez de calefacción, penetración y humedad
abundante, que favorecen la coagulación de las proteínas, lo cual es la principal
causa de destrucción de los microorganismos. Este método se emplea para
esterilizar medios de cultivo en cajas Petri, matraces o tubos de ensayo.
3. Material, Equipos y Reactivos
Materiales
4 Cajas de petri
2 Matraces Erlenmeyer
5 Tubos de ensayo
Algodón y gasa
Papel aluminio
1.
2.
3.
4.
Equipos
Autoclave
Balanza digital
Reactivos
Agua destilada
Agar simple
Caldo nutritivo
4. Procedimiento.
Lavar perfectamente el material
Prepara 500 ml del agar de acuerdo con las instrucciones del envase
Prepara 1L de caldo nutritivo (suspender en el agua y dejar remojar 15
minutos), hervir a Baño María hasta completar la disolución
Realizar un tapón con el algodón y la gasa para cubrir la boca del matraz y
tubos de ensayo, amarra con hilo
Página | 20
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Departamento:
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
5. Realiza un cucurucho de papel aluminio y colócalos sobre los tapones a
manera de protección
6. Coloca en el autoclave a 15 lb./pulgada de presión (aproximadamente 121°C)
durante 20 minutos
7. Deja bajar la presión del autoclave y una vez fría retira tus medios
5. Cuestionario.
1. Investiga las definiciones de: desinfectante, antiséptico, saneamiento,
germicida, bactericida, bacteriostasis
2. ¿Qué son los agentes antimicrobianos, cuál es su importancia?
3. Además del uso del autoclave ¿qué otros métodos de esterilización
corresponden al calor húmedo?
6. Referencias bibliográficas.
Audesirk, T. (1997) Biología: La vida en la tierra. Pearson educación. México.
Curtis. H., Biología, México, Panamericana.
Pelksar. (2000). Microbiología. México. Edit. Paidós.
La biología de los microorganismos
Página | 21
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Nombre de la práctica: ESTERILIZACIÓN II
1. Competencia específica a desarrollar.
Esterilizar material en ambiente seco por medio del uso y manejo del horno
de laboratorio.
2. Introducción.
La esterilización con calor seco, o aire caliente, se recomienda cuando no se
desea o quiere que el vapor a presión tenga contacto directo y completo con el
material a esterilizar, como artículos de vidrio de laboratorio, cajas de petri,
pipetas, aceites, polvos y sustancias similares. Las células vegetativas mueren a
temperaturas comprendidas entre los 50°C y 70°C (calor húmedo), para matar
esporas son necesarias temperaturas mucho más altas, superiores a los 100°C
(calor seco) que
deshidrata a las células y también destruye a los
microorganismos por oxidación de sus constituyentes intracelulares.
3. Material, Equipos y Reactivos
Materiales
4 Cajas de petri
3 Pipetas
5 Tubos de ensayo
1 Termómetro
Algodón
Gasa
Papel aluminio
Papel de estraza
Agitadores
de
madera
Equipos
Horno
Reactivos
N.A
4. Procedimiento.
1.
2.
3.
4.
Lavar perfectamente el material
Dejar secar al aire
Envolver con papel de estraza a las cajas petri y pipetas
Envolver con papel de estraza y realizar un tapón con el algodón y la gasa para
cubrir la boca de los tubos de ensayo, amarra con hilo
Página | 22
Unidad:
Departamento:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
5. Realiza un cucurucho de papel aluminio y colócalos sobre los tapones a
manera de protección
6. Coloca en el horno a 160°C durante 2 horas.
5. Cuestionario.
1.
2.
3.
4.
5.
¿En qué consiste la esterilización por incineración?
¿En qué consiste la esterilización por bajas temperaturas?
¿En qué consiste la esterilización por desecación?
¿En qué consiste la esterilización por presión osmótica?
¿Por qué no debe usarse este método de esterilización con soluciones líquidas
alcohólicas o acuosas?
6. Bibliografía.
Audesirk, T. (1997) Biología: La vida en la tierra. Pearson educación. México.
Curtis. H., Biología, México, Panamericana.
Pelksar. (2000). Microbiología. México. Edit. Paidós.
La biología de los microorganismos
Página | 23
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Práctica No. 7
Nombre de la práctica: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS
1. Competencia específica a desarrollar.
Elaborar diferentes medios de cultivo para diversos tipos de microorganismos
2. Introducción.
El material donde se desarrollan los microorganismos en el laboratorio
denominan medios de cultivo. Los medios de cultivo microbiológicos constan
varias sustancias nutritivas que sustentan el desarrollo de determinado tipo
microorganismos. Algunos medios contienen sales orgánicas en solución y
complementan con uno o más compuestos orgánicos, en cambio, otros
preparan con ingredientes complejos como extractos o productos digeridos
tejidos animales o vegetales.
se
de
de
se
se
de
3. Material, Equipos y Reactivos
Materiales
1 Termómetro estéril
10
Cajas
petri
desechables esterilizadas
1 Pinza para matraz
1 Probeta
2 Matraces de 250 ml.
1 Mechero
Cinta adhesiva
Algodón estéril
Papel aluminio
Jeringa estéril
Agitador de madera estéril
Guantes
Cubre bocas
Equipos
Balanza digital
Autoclave
Reactivos
Alcohol
Medios de cultivo
deshidratados
Agua destilada
Página | 24
Unidad:
Departamento:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
4. Procedimiento.
1. Pesa la cantidad exacta del medio sobre un papel de aluminio (la cantidad está
indicada en cada frasco y se determina por una regla de tres dependiendo la
cantidad a elaborar)
2. Se marca el matraz con la cinta adhesiva indicando el tipo de medio
3. En el matraz se mide la cantidad correcta de agua con una probeta, se agrega
el polvo hidratándolo y se utiliza un agitador de madera para disolverlo y
agitarlo
4. Se toma el matraz con unas pinzas y se coloca directamente sobre el mechero
y se calienta hasta su ebullición y retíralo
5. Se deja enfriar un poco y se le coloca un tapón de gasa y algodón amarrado
con un hilo y se le coloca el cucurucho de papel aluminio
6. El matraz se introduce en el autoclave hasta aproximadamente 15 lb. de
presión y 120 °C
7. Se baja la temperatura por 15 minutos y se apaga
8. Se destapa la autoclave hasta que tenga 0 lb. de presión y se saca el matraz
9. Sin destapar por un lado del tapón introduce el termómetro esterilizado y deja
enfriar hasta 45°C
10. Usa tus guantes y cubre bocas
11. Vacía el medio en las cajas petri frente al mechero encendido y flamea la boca
del matraz cada vez que vacíes en el líquido en la caja
12. Deja enfriar el medio en las cajas de petri hasta que cuaje
13. Una vez cuajados los medios se invierten las cajas de petri y se refrigeran en
esa posición
14. Si el medio es agar sangre antes de que cuaje el medio pero ya frío se vacía
la sangre (5 ml)
5. Cuestionario.
1. ¿Qué tipos de organismos se desarrollan en cada medio preparado en el laboratorio?
6. Bibliografía.
Audesirk, T. (1997) Biología: La vida en la tierra. Pearson educación. México.
Curtis. H., Biología, México, Panamericana.
Pelksar. (2000). Microbiología. México. Edit. Paidós.
La biología de los microorganismos
Página | 25
Unidad:
Departamento:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
Práctica No. 8
Nombre de la práctica: SIEMBRA DE MICROORGANISMOS
1. Competencia específica a desarrollar.
Sembrar diferentes microorganismos en los distintos medios de cultivo
elaborados.
2. Introducción.
El crecimiento de los microorganismos no se puede estudiar individualmente
debido a su tamaño tan pequeño, por lo que es necesario recurrir a medios
nutritivos artificiales, donde se puedan desarrollar rápidamente y producir
grandes poblaciones. En estas condiciones se pueden manipular y efectuar las
investigaciones deseadas.
Los materiales nutritivos donde se desarrollan y multiplican los microorganismos
contienen los nutrientes necesarios para su crecimiento, y se denominan medios de
cultivo, cuyos componentes son muy variados. La elección del medio se basa en el
propósito del estudio. En general, los medios son ricos en proteínas no específicas,
con el fin de estimular el crecimiento de los microorganismos que se desean aislar. La
mayor parte de los microorganismos requieren un medio enriquecido o suplementado
por substancias como sangre, suero, vitaminas, etc.
Cuando se inocula un medio solidificado adicionado de agar, contenido en una caja de
Petri, las bacterias pueden esparcirse en la superficie, mediante una técnica de rayado
(estriado) con el asa , en tal forma que las células queden separadas individualmente,
lejos unas de otras. Durante la incubación, cada célula bacteriana se reproduce tan
rápidamente, que en 18 a 24 horas. se producen masas bacterianas visibles a simple
vista, denominadas colonias.
Página | 26
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Fecha de Edición:
Edición
No. 3
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
3. Material, Equipos y Reactivos
Materiales
Mechero
Asa de siembra Guantes
Cubre bocas
Equipos
Campana de flujo laminar
Reactivos
Medios de cultivo
ya elaborados
Cultivos de varios
microorganismos
Agua destilada
4. Procedimiento.
1. De acuerdo con tu investigación elige el medio correspondiente a cada
microorganismo proporcionado.
2. Usa tus guantes y cubre bocas
3. Coloca un mechero encendido y trabaja siempre cerca de el
4. Abre el cultivo cerca de la flama toma tu muestra con el asa, cierra la caja y
déjala sobre la mesa; el asa de siembra con la muestra no debe ser alejada de
la flama, toma tu medio de cultivo y realiza la siembra.
5. Con el asa de siembra esterilizada pasa una porción de la muestra a la
superficie del medio de cultivo hecho a base de agar
6. Siembra en el medio por estrías
7. Siembra en el medio por difusión (varilla de cristal esterilizada esparciendo la
muestra sobre la superficie del agar)
8. Esteriliza el asa de siembra y/o varilla de vidrio antes de tomar una muestra
del microorganismo y realizar la siembra en el medio de cultivo y después
vuelve a esterilizar el asa de siembra o varilla de vidrio para evitar la
contaminación de las superficies de trabajo y otros medios
5. Cuestionario.
1. ¿Cuál es la importancia de las características coloniales bacterianas?
2. ¿Qué es el aislamiento bacteriano?
3. ¿Qué es un cultivo puro?
6. Bibliografía.
Audesirk, T. (1997) Biología: La vida en la tierra. Pearson educación. México.
Curtis. H., Biología, México, Panamericana.
Pelksar. (2000). Microbiología. México. Edit. Paidós.
Página | 27
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Nombre de la práctica: CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICA DE LAS
COLONIAS MICROBIANAS
1. Competencia específica a desarrollar.
Observar el aspecto de las colonias de bacterias en diferentes medios
2. Introducción.
Uno de los principales distintivos de las bacterias es el aspecto resultante del
crecimiento en diversos medios. Características tan triviales como el color
(cromo génesis), la abundancia del crecimiento y aun el color del medio de
cultivo, proporcionan información básica para la identificación del organismo
cultivado
3. Material, Equipos y Reactivos
Materiales
4 Portaobjetos
1 Mechero
1 Lupa
1 Pinza
1 Asa de siembra
1 Lámpara
Equipos
Microscopio óptico con
objetivos de
10X, 40X y 100X.
Reactivos
Cristal violeta
Safranina
Alcohol acetona
Carbol fucsina
Alcohol ácido
Azul de metileno
Aceite de
inmersión
4. Procedimiento.
Parte A. Observación del aspecto de las colonias
Elabora un cuadro comparativo con las observaciones que realices en cada medio
de acuerdo con las siguientes características:
Página | 28
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Departamento:
Materia:
Microbiología
Tamaño
Margen
Elevación
Cromo génesis
Óptica
Consistencia
Cambios en
el medio
<10mm
10mm <
Perfecto
Plana
Pigmentadas
Opacas
Mantecosa
Hemólisis
Irregular
Semiesférica
No pigmentadas
Transparentes
Viscosa
Decoloración
Hendido
Elevada
Matizadas
Opalescentes
Filamentosa
Coloración
Filiforme
Seca
Enraizado
húmeda
Parte B. Identificación de bacterias por medio de la Tinción
de Gram.
Completa tu cuadro anterior indicando si la colonia analizada es Gram positiva o negativa
y que forma tiene:
Tinción de Gram:
1. Limpiar perfectamente el portaobjetos
2. Colocar una gota de agua destilada en la parte media del portaobjetos .
3. Con un asa fría esterilizada transportar la cantidad deseada del cultivo y hacer una
suspensión en la gota de agua.
4. Deje secar al aire.
5. Fijar el frotis pasándolo sobre la flama y deje enfriar.
6. Teñir durante un minuto con la solución de cristal violeta, lavar con agua.
7. Escurra y cubra con lugol dejándolo actuar 1 minuto.
8. Escurra el lugol y lave con agua, cubra la preparación con alcohol acetona 1 minuto y
lave abundantemente con agua
9. Cubra la preparación con safranina por un minuto y lave con agua.
10. Escurrir y dejar secar al aire
11. Colocar una gota de aceite de inmersión sobre el frotis y observar en objetivo 100X
5. Cuestionario.
¿Cuáles son los principales materiales que enriquecen los medios?
Página | 29
Unidad:
Instituto Tecnológico Superior de
Coatzacoalcos.
Departamento:
Edición
No. 3
Fecha de Edición:
ENERO / 2020
Ingeniería Bioquímica.
Materia:
Microbiología
¿Cuáles son los llamados factores de crecimiento bacteriano?
¿A qué se les llama medios selectivos?
¿A qué se les llama medios diferenciales?
6. Bibliografía.
Audesirk, T. (1997) Biología: La vida en la tierra. Pearson educación. México.
Curtis. H., Biología, México, Panamericana.
Pelksar. (2000). Microbiología. México. Edit. Paidós.
La biología de los microorganismos
Página | 30