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XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
OBTENCIÓN DE PARÁMETROS CINÉTICOS DE LEVADURAS NO-CONVENCIALES
Anabel Herrera Rodríguez. Instituto Tecnológico de Morelia “José María Morelos y Pavón”.
[email protected]. Dr. en C. Juan Carlos González Hernández. Instituto Tecnológico de
Morelia “José María Morelos y Pavón”. [email protected].
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
En los últimos años, la producción biotecnológica de etanol y xilitol ha presentado gran
interés debido a su aprovechamiento en diversos productos, éstos pueden obtenerse
mediante procesos fermentativos utilizando levaduras no-convencionales como,
Clavispora lusitanie, Kluyveromyces marxianus y Zigosaccharomyces bailli que puedan
metabolizar glucosa y xilosa como fuente de sustrato, sin embargo las levaduras
convencionales, como Saccharomyces cerevisae no metabolizan xilosa, por lo que el
objetivo de esta investigación es determinar los parámetros cinéticos de las levaduras
no-convencionales utilizando xilosa como fuente de sustrato y que sirvan como base
para realizar estudios sobre identificación de genes responsables del tranporte de xilosa
en aquellas que presenten mayor afinidad por este sustrato.
METODOLOGÍA
Se utilizó medio YPD (xilosa 2% o glucosa 2%; extracto de levadura 1%; peptona 1%)
para estudiar el comportamiento cinético de levaduras no-convencionales propiedad del
Laboratorio de Bioquímica del Instituto Tecnológico de Morelia, las cuales fueron: Lev1
(Saccharomyces cerevisiae), Lev6 (Clavispora lusitanie), Lev8 (Klyveromyces
marxianus) y Lev11 (Zygosaccharomyces bailli). Se realizaron matrices de fenotipos en
agar YPD para ver el crecimiento de cada levadura con dos fuentes de carbono
diferentes a pH 4. Se realizaron cinéticas de crecimiento nivel matraz, para lo cual se
realizó un preinóculo a nivel matraz con 125mL de medio al agregar 5 asadas de
colonias de la cepa de estudio cultivada en agar YPD y se incubaron a 30ªC por 12h a
180rpm. Después se realizó la determinación del número de células para realizar las
cinéticas de cada cepa con concentraciones iniciales de 3*10 6 cel/mL y se incubaron en
matraces con 125mL de medio con las mismas condiciones del preinóculo por 36h. Las
variables de estudio fueron el tipo de levadura y la fuente de sustrato (glucosa y xilosa).
Las variables de respuesta evaluadas en cada ensayo fueron: el crecimiento celular
(cámara de Neubauer), la determinación de biomasa (peso seco), la producción de
etanol (técnica espectrofotométrica por dicromato de potasio), la cuantificación de
azúcares reductores (método DNS) y el pH (potenciómetro).
CONCLUSIONES GENERALES
Los resultados de los parámetros cinéticos obtenidos en esta investigación permitirán
contribuir a estudios posteriores sobre biología molecular para la identificación de genes
responsables de la asimilación de xilosa de las levaduras no-convencionales que
presentaron mayor afinidad por este sustrato y realizar modificaciones genéticas.
Se agradecen los donativos parciales otorgados por CONACYT 2012 (Proyecto
176199).
© Programa Interinstitucional para el Fortalecimiento de la Investigación y el Posgrado del Pacífico
Agosto 2014