RECONSTITUCIÓN DE PRIMERS Y SONDA

RECONSTITUCIÓN DE PRIMERS
Se plantean dos métodos para reconstituir los primers a una concentración inicial
de 100M, todo depende de los datos proporcionados en el certificado de análisis.
Es importante estandarizar la concentración de primers según cada estudio en
particular, sin embargo este puede ser un procedimiento general de
reconstitución.
Se requieren los datos de peso molecular en g/mole (por ejemplo 6400.2
g/mole) y los microgramos g´s (por ejemplo: 187.22). la fórmula a aplicar es:
Vol = (masa en gramos/PM) 10-4
Con el ejemplo, tendríamos: Vol = (187.22/6400.2)/ 10-4 = 292.512 microlitros
Esto significa que se necesitan agregar 293 microlitros de agua libre de RNAsas y
DNAsas para tener una concentración 100 micromolar.
ELABORACIÓN DE SOLUCIÓN DE PRIMERS DE TRABAJO PARA A PARTIR DE
LA SOLUCIÓN 100 MICROMOLAR
Ejemplo: Requiero un volumen final de 100 L con una concentración 10M a
partir de una concentración de 100M preparada anteriormente.
Fórmula: C1V1 = C2V2
Sustitución: 100L (V1)= (10M)(100L)
Resultado: 10L
Interpretación: Se necesitan agregar 10L de los primers reconstituidos en 90 L
de agua libre de RNAsas y DNAsas para tener una concentración 10M.