PRUEBAS ESPECIALES INTEGRANTES: • AGUILAR HERNANDEZ DEYANIRA • REYES BLANCO ELI • XANAT RAMOS FLORA 02 DE OCTUBRE DEL 2019 La glándula tiroides tiene forma de mariposa y normalmente se localiza en la parte de adelante del cuello, su trabajo es formar las hormonas tiroideas, volcarlas al torrente sanguíneo y entregarla a todos los tejidos del cuerpo. Las hormonas tiroideas ayudan al cuerpo a utilizar energía, mantener la temperatura corporal y a que el cerebro, el corazón, los músculos y otros órganos funcionen normalmente. https://www.thyroid.org/wp-content/uploads/patients/brochures/espanol/pruebas_funcion_tiroidea.pdf 2 Compuesta por gran número de folículos cerrados, rellenos de una sustancia secretora denominada coloide y revestidos por células epiteliales. AGREGAR UN PIE DE PÁGINA 3 • Pesa entre 20-25 grs. y es responsable de producir las hormonas tiroideas T3 y T4. • Compuesto por dos lóbulos laterales unidos por un estrecho istmo ubicado por delante de la tráquea. • A menudo se extiende un lóbulo piramidal encima del istmo. 4 La función de la glándula tiroides consiste en la elaboración y posterior paso a la sangre de las hormonas tiroideas, tiroxina (T4) y triyodotironina (T3). • 93% Tiroxina (T4) (tetrayodotironina) • 7% Triyodotironina (T3) 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 ¿Cómo funciona la glándula tiroides? 23 ¿Por qué y cuando se realiza? EL PERFIL TIROIDEO ES FUNDAMENTAL PARA DESCARTAR O CONFIRMAR PADECIMIENTOS DE LA TIROIDES, ADEMAS DE LA EVALUACION DE SU FUNCIONAMIENTO 24 https://hospitalgalenia.com/para-que-sirve-el-perfil-tiroideo/ 25 http://evaluacion.ssm.gob.mx/pdf/gpc/grr/IMSS-265-10.pdf Los exámenes o pruebas de la función tiroidea se utilizan para revisar si la tiroides está funcionando normalmente. LAS PRUEBAS MÁS COMUNES SON: OTROS EXÁMENES DE LA TIROIDES SON: • T4 total (la hormona libre y la hormona vinculada a las proteínas portadoras) • T4 libre (la principal hormona tiroidea en la sangre, un precursor para T3) • TSH (la hormona de la hipófisis que estimula la tiroides para que produzca T4) • T3 (la forma activa de la hormona, T4 se convierte en T3) • Captación de resina T3 (un examen más antiguo que casi nunca se usa hoy día) • Globulina fijadora de la tiroides • Tiroglobulina • Yodo proteico. 26 https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003444.htm T-UPTAKE • LA MEDICIÓN DE LA CANTIDAD TOTAL DE SITIOS AGLUTINANTES DISPONIBLES PARA LA HORMONA TIROIDEA EN EL SUERO O EN EL PLASMA HUMANO POR UNA MICROPLACA DE ELISA. T3 LIBRE Y TOTAL • SU FUNCIÓN ES ESTIMULAR EL METABOLISMO DE LOS HIDRATOS DE CARBONO Y GRASAS, ACTIVANDO EL CONSUMO DE OXÍGENO, ASÍ COMO LA DEGRADACIÓN DE PROTEÍNAS DENTRO DE LA CÉLULA T4 LIBRE Y TOTAL • ES LA PRINCIPAL HORMONA SECRETADA POR LAS CÉLULAS FOLICULARES DE LA GLÁNDULA TIROIDEA. TIROGLOBULI NA TIROTROPINA • ES LA MOLÉCULA PRECURSORA DE LAS HORMONAS TIROIDEAS • SU DETERMINACIÓN SOLO ES ÚTIL EN UN TIPO ESPECIFICO DE TUMOR QUE SE LLAMA CARCINOMA DIFERENCIADO DE TIROIDES • EL AUMENTO DE LA ACTIVIDAD DE LA BOMBA DE YODO; EL AUMENTO DE LA ACTIVIDAD SECRETORA Y DEL TAMAÑO DE LAS CÉLULAS TIROIDEAS, Y EL AUMENTO DE LA YODACIÓN DEL AMINOÁCIDO TIROSINA, ENTRE OTROS. Una de las técnicas mas sensibles para detectar antígeno o anticuerpo. Desarrollada en 1960 por dos endocrinos, Berson y Rosalyn Yalow, para determinar las concentraciones de complejos diabéticos. Despues se demostros que tenia valor para medir hormonas, proteínas séricas, fármacos y vitaminas a concentraciones de microgramos por mililitros o menos. FUNDAMENTO Se basa en la reacción ANTIGENO – ANTICUERPO, en la que el antígeno se una a su anticuerpo especifico sin establecer enlaces químicos, sino que se unen por fuerzas débiles tales como atracciones electroestáticas, fuerzas hidrofóbicas, etc. Esta catalogado como un método inmunológico muy sensible y especifico ya que permite la cuantificación exacta de ocmpuestos biológicos presentes en el organismo a concentraciones muy bajas. 28 https://prezi.com/mphli4mxn3_n/radioinmunoensayo-ria/ 29 https://prezi.com/mphli4mxn3_n/radioinmunoensayo-ria/ 30 • es un ensayo inmunoradiométrico de fase sólida basado en anticuerpos monoclonales y policlonales anti-TSH: un anticuerpo policlonal anti-TSH marcado con I125 en fase líquida y un anticuerpo monoclonal anti-TSH inmovilizado contra la pared del tubo de poliestireno. En el procedimiento: La TSH, es capturada entre el anticuerpo monoclonal anti-TSH inmovilizado en la superficie interior del tubo de poliestireno y el trazador anti-TSH policlonal marcado con I125. El anticuerpo anti-TSH no unido marcado con I125, es retirado por decantación de la mezcla de la reacción y lavando el tubo; esto reduce la unión no específica a un nivel muy bajo y asegura una excelente precisión a niveles de concentración bajos. 31 32 AGREGAR UN PIE DE PÁGINA 33 AGREGAR UN PIE DE PÁGINA 34 PRINCIPIO DEL MÉTODO • Una cantidad fija de T3 marcada con I125 compite con el T3 a medir, presente en la muestra o en el calibrador, para una cantidad fija de sitios de anticuerpo antiT3, que se unen a los anticuerpos de cabra anti- ratón, inmovilizado en las paredes de un tubo de poliestireno. Después de 1 hora de incubación a temperatura ambiente, una aspiración termina con la reacción de competición. Los tubos se lavan con 2 ml de Solución de lavado y se aspiran otra vez. Se dibuja la curva de calibración y las concentraciones de T3 de las muestras se determinan por interpolación de la dosis en la curva de calibración. MATERIAL NO SUMINISTRADO • El material mencionado a continuación es necesario y no esta incluido en el kit 1. • Agua destilada • Pipetas de 50 μl, 100 µl, 200 µl, 500 μl y 2 ml (Se recomienda el uso de pipetas precisas con puntas desechables de plástico) • Vortex • Agitador magnético • Agitador de tubos (700 rpm) • Jeringa automática 5 ml (tipo Cornwall) para el lavado • Sistema de aspiración (opcional) • Contador de radiaciones gamma para medir I125 ( mínima eficiencia 70%) https://www.ibl-international.com/media/catalog/product/M/G/MG13081_IFU_EU_es_T3_RIA_CT_2017-02_sym4.pdf 35 36 https://www.ibl-international.com/media/catalog/product/M/G/MG13081_IFU_EU_es_T3_RIA_CT_2017-02_sym4.pdf A. Calibradores: Reconstituir los calibradores con 0,5 ml de agua destilada. B. Controles: Reconstituir los controles con 0,5 ml de agua destilada. C. Anti-T3: Reconstituir el anti-T3 con 11 ml de agua destilada. D. Solución de lavado de trabajo: Preparar el volumen necesario de Solución de lavado de trabajo mezclando 69 partes de agua destilada por 1 parte de Solución de lavado (70x). Utilizar un agitador magnético para homogeneizar. Desechar la solución de lavado de trabajo no utilizada al final del día. AGREGAR UN PIE DE PÁGINA • Las muestras de suero deben ser guardadas a 2-8 ºC. • Si el ensayo no se realiza en 24 hrs., almacenar las muestras a –20º. • Evitar congelar y descongelar sucesivamente. 37 • 1. Calcular la media de los duplicados. • 2. Calcular la radiactividad enlazada como un porcentaje de la unión con respecto al calibrador cero (0) de acuerdo con la siguiente formula: • 3. Utilizando papel 3 ciclo semilogarítmico o logit-log, representar los valores de (B/B0%) de cada calibrador frente a las contracciones del T3 de cada calibrador, rechazando los extremos claros. • 4. Métodos computarizados de computación de resultados pueden ser utilizados para la construcción de la curva de calibración. Si se utiliza un sistema automático de cálculo de resultados, se recomienda usar la representación gráfica “ 4 parámetros”. • 5. Por interpolación de los valores (B/B%) de las muestras, se determinan los valores de las concentraciones del T3 de las mismas desde la curva de calibración. • 6. El porcentaje total de enlace del trazador en ausencia de T3 no marcado (B0/T) debe ser calculado en cada ensayo. AGREGAR UN PIE DE PÁGINA 38 El Límite del Blanco (LoB), el Límite de Detección (LoD) y el Límite de Cuantificación (LoQ) se determinaron según la directriz EP17-A del CLSI. El LoB se calculó midiendo el blanco varias veces y calculando el percentil 95 de la distribución de los valores de la prueba. El cálculo determino que el LoB fue 0.15 nmol/l. El LoD se calculó como se describe en la directriz. El cálculo determinó que el LoD fue 0.22 nmol/l. El LoQ se calculó analizando cinco muestras de baja concentración 14 veces en pruebas diferentes. El cálculo determino que el LoQ fue 0.22 nmol/l con un CV de 20%. AGREGAR UN PIE DE PÁGINA Estos valores solamente sirven de pauta; cada laboratorio tiene que establecer sus propios valores normales. Las concentraciones de T3 en sujetos eutiroideos sin tratar oscilan entre 1,7 a 2,9 nmol/l (n=80). 39 PRINCIPIO DEL MÉTODO • Este ensayo está basado en una reacción competitiva entre la T4 no marcada, presente en las muestras y calibradores, con una cantidad fija de T4 marcada con 125I por un número limitado de sitios de unión al anticuerpo antiT4. La cantidad de T4 marcada con 125I que se une al anticuerpo es inversamente proporcional a la concentración de T4 no marcada presente en las muestras. El inmunocomplejo se inmobiliza en la superficie reactiva de los tubos de ensayo durante un período de incubación de 2 horas bajo agitación constante. Después de la incubación se decantan los tubos y se mide la radiactividad enlazada en un contador gamma. MATERIAL NO SUMINISTRADO • El material mencionado a continuación es necesario y no esta incluido en el kit 1. • Agua destilada • Pipetas de 50 μl, 100 µl, 200 µl, 500 μl y 2 ml (Se recomienda el uso de pipetas precisas con puntas desechables de plástico) • Vortex • Agitador magnético • Agitador de tubos (700 rpm) • Jeringa automática 5 ml (tipo Cornwall) para el lavado • Sistema de aspiración (opcional) • Contador de radiaciones gamma para medir I125 ( mínima eficiencia 70%) https://www.ibl-international.com/media/catalog/product/M/G/MG13081_IFU_EU_es_T3_RIA_CT_2017-02_sym4.pdf 40 1. TRAZADOR: 1 frasco con 11 mL, listo para usar, contiene < 260 kBq de T4 marcada con 125I en solución tampón con 0,1 % NaN3 y colorante rojo. 2. ANTISUERO: 1 frasco con 105 mL listo para usar, contiene anti-T4 IgG en solución tampón con colorante azul y 0,1 % Kathon-CG. 3. CALIBRADORES (S1-S6): 6 frascos listos para usar con 0,5 mL de suero humano y 0,1% NaN3. Los calibradores contienen: 0; 30; 60; 120; 200; 320 nmol/L de T4, respectivamente. 4. SUERO CONTROL: 1 frasco, contiene 0,5 mL de suero humano liofilizado con 0,1% NaN3. La concentración del suero control está especificada en el certificado de calidad incluido. 5. TUBOS RECUBIERTOS: 2x50 tubos de 12x75 mm, empaquetados en cajas plásticas, listos para usar. 41 https://www.ibl-international.com/media/catalog/product/M/G/MG13081_IFU_EU_es_T3_RIA_CT_2017-02_sym4.pdf • Las muestras de suero deben ser guardadas a 2-8 ºC. • Si el ensayo no se realiza en 24 hrs., almacenar las muestras a –20º. • Evitar congelación y descongelación repetida de las muestras. AGREGAR UN PIE DE PÁGINA 42 43 • Los reactivos provistos en este juego están optimizados para la medición de T4 en suero. • Las muestras hemolizadas, turbias o lipémicas pueden dar resultados falsos, evite su uso. • Los resultados solo deben ser interpretados dentro del contexto clínico apropiado y nunca como prueba única e infalible de anomalía o enfermedad. AGREGAR UN PIE DE PÁGINA Estos valores solamente sirven de pauta; cada laboratorio tiene que establecer sus propios valores normales. 4,5 - 12,5 ug/dl 0.351 - 0.975 nmol/L 44 • • 𝑌𝑂𝐷𝑂 = 𝑇4 𝑇 ×.654 INDICE TIROXINA = (𝑇4𝑇 𝑇−𝑈𝑃𝑇𝐴𝐾𝐸 ) 100 45 • TRIYODOTIRONINA (T3) EDAD Todas las Edades ng/ mL. nmol/L. 0.70 – 2.29 1.08 – 3.5 ⮚ TRIYODOTIRONINA (T3 libre). EDAD Todas las Edades pg / mL. pmol / L. 1.40 – 4.40 2.16 – 6.78 • TIROXINA (T4) EDAD ug/ mL. nmol/L. Hasta 1 mes. 8.00 – 19.00 102.96 – 244.53 De 2 – 4 meses. 7.50 – 16.50 96.53 – 212.36 De 5 a 1 año. 5.50 – 14.50 70.79 – 186.62 De 1 a 6 años 5.50 – 13.50 70.79 – 173.75 De 6 a 10 años 4.95 – 12.55 63.71 – 161.52 Desde 10 años 4.69 – 12.41 60.36 – 159.72 EDAD TIROXINA (T4 libre). Todas las Edades. ng / dL. pmol / L. 0.80 – 2-50 10.30 – 32.18 • TIROXINA GLOBULINA FIJADORA (TBG) EDAD ug/ mL. mg/L. Recién Nacidos. 10.0 – 95.0 10.0 – 95.0 De 1 a 12 meses. 20.0 – 76.0 20.0 – 76.0 De 1 a 15 años 20.0 – 55.0 20.0 – 55.0 De 6 a 10 años 20.0 – 50.0 20.0 – 50.0 De 11 a 15 años 15.0 – 40.0 15.0 – 40.0 Desde 15 años 10.0 – 30.0 10.0 – 30.0 • HORMONA ESTIMULANTE DE LA TIROIDES (TSH) EDAD uU / mL. Hasta 5 Dias. 1.00 – 39.0 De 6 a 30 Dias. 1.70 – 9.1 De 1 a 12 meses. 0.08 – 8.2 De 1 a 15 años 0.70 – 5.7 A partir de 16 años. 0.49 – 4.7 YODO PROTEICO EDAD Todas las Edades. ug / dL. 2.90 – 8.10 Eutiroidismo Hormona estimulant e de la tiroides TSH Tiroxin a libre FT4 Tiroxina total T4 Triyodotironin Captacion a total T3 de Tironina T4U T3Libre N N N N N N N N Hipotiroidismo hipertiroidismo tiroiditis (HIPO O HIPER TRANSITORIO) N Hipotiroidismo subclinico N N N N N Hipertiroidism o subclinico N N N N N Enfermedad no tiroidea N N N N N N Enfermedad psiquiatrica aguda N N N N N N
