ANTIBIOGRAMA

ERIKA ELLIES HOLLSTEIN
2015
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El antibiograma es la prueba microbiológica que se
realiza para determinar la susceptibilidad
(sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un
grupo de antibióticos.
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Las técnicas de antibiograma son las utilizadas en el
laboratorio de microbiología para estudiar la
actividad de los antimicrobianos frente a los
microorganismos responsables de las infecciones.
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Se considera como antimicrobiano cualquier
sustancia con capacidad de matar o al menos de
inhibir el crecimiento de los microorganismos y que
sea susceptible de utilización como tratamiento en
los pacientes
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Pueden ser naturales, sintéticos o semisintéticos
(modificación química de un compuesto natural)
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La historia moderna de los antibióticos comienza con
el descubrimiento de sustancias presentes en unos
microorganismos capaces de matar a otros
microorganismos.
La utilización de antibióticos supuso un avance
enorme en la esperanza de vida de las personas que
padecían procesos infecciosos, aunque también
supuso un aumento en los niveles de resistencia
antibiótica.
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El antibiograma tiene cuatro utilidades principales:
1.- La utilidad básica del antibiograma es la instauración de un
tratamiento antibiótico correcto al paciente.
Es necesario conocer si el microorganismo responsable de la
infección posee mecanismos que le confieran inmunidad
frente a algún antibiótico para no incluirlo como terapia.
2.- En cuanto al tratamiento, el antibiograma no sólo es
necesario en la instauración, también resulta útil en el
seguimiento e incluso en la confirmación de tratamientos
empíricos.
En ocasiones la enfermedad infecciosa resulta grave y se
comienza el tratamiento antes de conocer los datos de
sensibilidad de la cepa.
El antibiograma tiene que confirmar, o en su caso corregir el
tratamiento.
3.- Otra aplicación de las técnicas de estudio de resistencia es la
epidemiología.
Es necesario detectar el aumento de los niveles de resistencia
en los aislamientos clínicos para tomar medidas correctoras.
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Por otro lado también puede tener utilidad diagnóstica
porque el perfil de resistencia puede en algún caso orientar
en la identificación bacteriana.
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Existen multitud de antimicrobianos en el mercado y el
número sigue creciendo porque el desarrollo de más
mecanismos de resistencia por parte de los microorganismos
se traduce en un esfuerzo mayor por fabricar más y mejores
antibióticos.
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No es necesario contrastar la eficacia de todos los antibióticos
para cada aislamiento bacteriano.
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Los criterios que se siguen para seleccionar que
antimicrobianos se ensayan respondes a factores de diversa
índole:
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Factores microbiológicos: Tipo de agente infeccioso y
mecanismos de resistencia descritos previamente en su
especie.
Factores farmacológicos: Tipo de antimicrobiano y
parámetros de absorción, distribución y eliminación.
Factores del paciente: Tipo de infección. Factores de riesgo y
estado general de salud. Situación inmunológica e
hipersensibilidad.
Experiencia anterior referente a los patrones de resistencia
antibiótica más habituales para cada especie.
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El método Kirby-Bauer o método de difusión en agar
es empleado para determinar la sensibilidad de
un agente microbiano frente un antibiótico o
quimioterápico.
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Este método comprende lo que se denomina
un antibiograma o prueba de susceptibilidad
bacteriana frente a drogas específicas.
En el test de Kirby-Bauer, los filtros blancos que contienen antibiótico son colocados en
una placa con bacterias. Los halos blancos donde se observa un escaso crecimiento
bacteriano indica susceptibilidad al antibiótico testado.
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Sobre la superficie de una placa de agar Müller-Hinton (medio
de cultivo rico, diseñado especialmente para hacer ensayos
de sensibilidad) se inocula una cantidad estandarizada
de bacterias, sembrándolas de forma uniforme para obtener
después de la inoculación un "césped" bacteriano.
A continuación se colocan discos de papel de
filtro impregnados con concentraciones conocidas de los
diferentes antibióticos.
La elección de los antibióticos a probar dependen
del germen y del foco de infección
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El antibiótico difundirá desde el papel filtro al agar de forma
radial.
Se incuba la placa durante 18-24 horas a 37 °C. Se debe
respetar este parámetro, porque temperaturas menores
pueden disminuir la velocidad del crecimiento del germen y la
difusión del antibiótico, dando halos irregulares difíciles de
medir.
Luego se miden los halos de inhibición de desarrollo,
interpretándose de acuerdo a tablas confeccionadas
previamente.
Los resultados se expresan como: Sensible (S), Intermedio o
Moderadamente sensible (I) y Resistente (R).
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El tamaño del halo de inhibición de desarrollo variará en base
a los siguientes parámetros o variables:
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La concentración de la droga.
Sensibilidad bacteriana.
Coeficiente de difusión de la droga en el agar.
Tiempo y temperatura de incubación.
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5.- pH y composición del medio. Se usan preparados comerciales
que den resultados reproducibles, por ejemplo: agar MüllerHinton.
Son cultivos aceptados por el comité de la OMS para la
normalización de las pruebas de susceptibilidad.
6.- Profundidad del medio en las placas. Esto está estandarizado:
se emplean placas de 9 cm de diámetro, y se agrega siempre el
mismo volumen de medio de cultivo: 15 ml por placa.
De esta manera las placas poseen siempre la misma altura de
agar.
7.-Tamaño del inóculo. Debe estar estandarizado ya que si éste
es muy pequeño dará una sensibilidad mayor a la real, y si el
inóculo es muy denso pueden aparecer mutantes resistentes.
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En los métodos de difusión de mutantes resistentes aparecen
como colonias aisladas dentro del halo de inhibición, por lo
tanto esto indica que no se puede usar ese antibiótico y se
debe informar como resistente.
La forma rigurosa de estandarizar un inóculo es normalizando
la turbidez por un método fotométrico utilizando una
suspensión de sulfato de bario como estándar, según la escala
de Mac Farland.
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Dentro de las posibilidades que se cuentan están:
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densidad del inóculo mal estandarizada,
utilización de cultivos no puros,
humedad o sequedad excesiva del medio de cultivo que
puede conducir a un crecimiento demasiado confluente o
pobre, y
deterioro de los discos de aplicación.
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La Concentración mínima inhibitoria (MIC), en microbiología,
es la concentración más baja de un antimicrobiano que inhibe
el crecimiento de un microorganismo después de su
incubación.
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La concentración mínima inhibitoria es importante en
diagnósticos de laboratorio para confirmar la resistencia de
microorganismos a un agente antimicrobiano y además para
monitorizar la actividad de los nuevos agentes
antimicrobianos.
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En medicina, la concentración mínima inhibitoria no sólo se
usa para determinar la concentración de antimicrobiano que
recibirá el paciente sino también el tipo de antimicrobianos a
utilizar, lo que a su vez reduce la oportunidad de resistencia
microbiana a agentes antimicrobianos específicos.
Categorías de interpretaron:
Sensible: El microorganismo presenta un gran
área de inhibición causada por el fármaco. 95%
éxito
Intermedio: Se presenta un halo de
inhibición mas reducido.
Resistente: Presenta muy poco o casi nada
de halo.
Después de incubar las placas del
antibiograma se procederá a la
lectura de este.
Se usa una regla y se mide el radio
del halo de inhibición partiendo de
desde donde está el disco de
antibiótico hasta donde se inhibió el
crecimiento.
La longitud obtenida después se
compararán con estándares que nos
dirán si el medicamento será efectivo
o no en el tratamiento.
Antibiótico
Resistente
Intermedia
Susceptible
Ampicilina
≤ 13
14 - 16
≥ 17
Amikacina
≤ 14
15 – 16
≥ 17
Sulfisoxasol
≤ 12
13 - 16
≥ 17
Gentamicina
≤ 12
13 – 14
≥ 15
Cloranfenicol
≤ 12
13 - 17
≥ 18
Ceftriaxona
≤ 12
14 – 20
≥ 21
Ciprofloxacina
≤ 15
16 - 20
≥ 21
Tetraciclina
≤ 14
15 - 18
≥ 19
Acido
Nalidixico
≤ 13
14 – 18
≥ 19
Estrptomicina
≤ 11
12 – 14
≥ 15
anamicina
≤ 13
14 - 17
≥ 18
Trimetroprim/
Sulfametoxasol
≤ 10
11 – 15
≥ 16
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Dilución en Caldo: En el método de dilución en caldo, base de casi
todos los métodos utilizados en la actualidad, se colocan concentraciones
decrecientes del agente antimicrobiano, generalmente diluciones 1:2, en
tubos con un caldo de cultivo que sostendrá el desarrollo del
microorganismo
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Método de E-test:
Consiste en aplicar sobre un medio de
cultivo, donde se encuentra el
microorganismo a ensayar, tiras plásticas
que llevan incluidas un gradiente de
concentración de un determinado ATB.
Luego se incuba adecuadamente y se
observa la formación de una elipse de
inhibición de crecimiento.
Método Automatizado:
Este método se basa en
micro diluciones sobre
micro tubos. El crecimiento
bacteriano se va a observar
por la turbidez o
fluorescencia de los micro
tubos.
Es útil para examinar una
gran cantidad de muestras