EVALUACIÓN DEL VERDE DE MALAQUITA CON AZUL DE METILENO Y EXTRACTOS DE AJO Y TABACO, PARA EL CONTROL Y ERRADICACIÓN DEL ICK EN EL PEZ ORNAMENTAL TIGRITO (Pimelodus pictus) HUGO GERARDO BARRIGA GONZALEZ DAVID ANDRÉS CLAVIJO ROJAS UNIVERSIDAD DE LA SALLE FACULTAD DE ZOOTÉCNIA BOGOTA, D. C. 2008 EVALUACIÓN DEL VERDE DE MALAQUITA CON AZUL DE METILENO Y EXTRACTOS DE AJO Y TABACO, PARA EL CONTROL Y ERRADICACIÓN DEL ICK EN EL PEZ ORNAMENTAL TIGRITO (Pimelodus pictus) HUGO GERARDO BARRIGA GONZALEZ DAVID ANDRÉS CLAVIJO ROJAS TRABAJO DE GRADO PRESENTADO COMO REQUISITO PARCIAL PARA OPTAR AL TÍ T ULO DE ZOOTECNISTA Director JULIO ALBERTO GONZÁLEZ Docente Facultad de Zootecnia UNIVERSIDAD DE LA SALLE FACULTAD DE ZOOTÉCNIA BOGOTA, D. C. 2008 CUADRO DIRECTIVO UNIVERSIDAD DE LA SALLE Rector Hermano CARLOS GABRIEL GOMEZ RESTREPO F.S.C. Vicerrector Académico Hermano FABIO CORONADO PADILLA F.S.C. Vicerrector de Promoción y Desarrollo Humano Hermano CARLOS ALBERTO PABON MENESES F.S.C. Vicerrector de investigación y transferencia Hermano MANUEL CANCELADO JIMENEZ F.S.C Secretario General Doctora PATRICIA INES ORTIS VELENCIA Vicerrector Administrativo Doctor MAURICIO FERNÁNDEZ FERNÁNDEZ. Decano Doctor RAFAEL IGNACIO PAREJA MEJÍA Secretario Académico Doctor JOS JUAN CARLOS LECONTE iii Nota de aceptación ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ ______________________________ Dr. Rafael Ignacio Pareja Mej ía Decano ______________________________ Dr. JOS Juan Carlos Leconte Secretario Académico ______________________________ Dr. Julio Alberto González Director Trabajo de Grado ______________________________ Dr. ______________________________ Dr. Bogotá, D.C. ______________ iv A mis padres por el apoyo recibido durante mi formación profesional, porque gracias a su apoyo y consejo he llegado a realizar la más grande de mis metas, la cual constituye la herencia más valiosa que pudiera recibir; y en reconocimiento a todo el apoyo brindado a través de mis estudios y con la promesa de seguir siempre adelante; sabiendo que jamás existirá una forma de agradecer una vida de lucha, sacrificio y esfuerzo constantes, sólo deseo que entiendas que el logro m ío, es el logro tuyo, y que mi esfuerzo es inspirado en ti. Con admiración y respeto. Hugo Barriga v A mi madre porque eres de esa clase de personas que todo lo comprenden y dan lo mejor de sí mismos sin esperar nada a cambio… porque sabes escuchar y brindar ayuda cuando es necesario… porque te has ganado el cari ño, admiración y respeto de todo el que te conoce sinceramente. Porque gracias a tu cari ño, guía y apoyo he llegado a realizar uno de los anhelos más grandes de mi vida, fruto del inmenso apoyo, amor y confianza que en m í se depositó y con los cuales he logrado terminar mis estudios profesionales que constituyen el legado más grande que pudiera recibir y por lo cual les viviré eternamente agradecido. Con cari ñ o y respeto. David Clavijo vi AGRADECIMIENTOS Los autores expresan sus agradecimientos a: La Universidad de los Llanos, especí ficamente al IALL, y en particular a Alfredo Arias, investigador y profesor de Acuicultura, como a todos los funcionarios del IALL que colaboraron en este proyecto. Las instituciones que colaboraron en la elaboración y discusión del informe como el Centro de Investigaciones Acuícolas La Terraza y a nuestra Universidad de la Salle, la que nos prestó el apoyo inicial para desarrollar nuestro proyecto de grado. El profesor Julio Alberto González, nuestro Director de Tesis, quien nos prestó gran ayuda con sus conocimientos en la labor de investigación y desarrollo del proyecto; así como su apoyo, aliento y estímulo que posibilitaron la conquista de esta meta: nuestra formación profesional. vii CONTENIDO Pág. RESUMEN INTRODUCCION OBJETIVOS 1. MARCO TEORICO 1.1 TIGRITO 1.1.1 Descripción morfológica 1.1.2 Clasificación taxonómica 1.2 ENFERMEDAD 1.2.1 Descripción del ciclo biológico del parásito 1.2.2 Anatom ía y fisiología patológicas 1.2.3 Diagnóstico de la enfermedad 1.2.4 Formas de contagio 1.3 VERDE DE MALAQUITA 1.3.1 Caracter ísticas físico químicas 1.3.2 Medicación 1.4 AZUL DE METILENO 1.4.1 Caracter ísticas generales 1.4.2 Definición 1.4.3 Caracter ísticas físico químicas 1.4.4 Medicación 1.5 AJO 1.5.1 Caracter ísticas físico químicas 1.6 TABACO 1.6.1 Historia 1.6.2 Caracter ísticas físico químicas 1.6.3 Medicación 1.6.4 Advertencias 1.6.5 Componentes 2. MATERIALES Y METODOS 2.1 MATERIALES 2.2 METODOS 3. RESULTADOS 4. DISCUSION CONCLUSIONES RECOMENDACIONES BIBLIOGRAFIA ANEXOS viii 12 14 17 18 18 18 18 20 20 20 21 21 22 22 23 24 24 24 25 25 25 25 26 26 27 28 29 29 30 30 30 35 39 42 43 44 46 LISTA DE TABLAS Pág. Tabla 1. Métodos tradicionales para el control y desinfección de estanques para evitar la proliferación de protozoos externos 28 Tabla 2. Dosificación 32 Tabla 3. Mediciones de temperatura, ph y amoniaco 33 Tabla 4. Contrastes ortogonales para comparar tratamientos 34 Tabla 5. Significancia de los contrastes para la variable severidad 36 ix LISTA DE FIGURAS Pág. Figura 1. Pez tigrito 18 Figura 2. Contenedores de vidrio, peceras 31 Figura 3. Acuario preparado listo para los tratamientos 31 Figura 4. Marcación de tratamientos 33 Figura 5. Número de peces muertos por tratamientos 35 Figura 6. Coloración del agua con el tratamiento químico 37 Figura 7. Coloración del agua con el tratamiento tabaco 37 Figura 8. Coloración del agua con el tratamiento ajo 38 x LISTA DE ANEXOS Pág. Anexo A. Registro de mediciones 47 Anexo B. Medidas y pesos de los peces utilizados 52 Anexo C. Pez Tigrito sano 54 Anexo D. Pez Tigrito con ICK 55 Anexo E. Parásito (ICK) adulto 56 Anexo F. Parásito (ICK) ciliado 57 Anexo G. Microfotograf ía del quiste 58 Anexo H. Medición de los peces 59 Anexo I. Ciclo del parásito 60 Anexo J. Tablas ANOVA –Análisis Estadístico 61 xi RESUMEN El Ichthyophthirius multifiliis protozoo ciliado, es un parásito externo causante de la enfermedad conocida como ICK que, ataca severamente a los peces conocidos comercialmente como tigrito (Pimelodus pictus) en el confinamiento y en estado avanzado provoca la muerte del pez. Tratamientos con productos químicos con formol, sulfato de cobre y verde de malaquita se han probado de manera empírica para combatir las infecciones del ICK en confinamiento, sin embargo, no existe un tratamiento efectivo científicamente evaluado que controle el 100% de la enfermedad. La producción acuícola moderna esta virando a tratamientos de origen natural los cuales ofrezcan inocuidad y seguridad tanto para las personas que trabajan con los peces como para los ejemplares de acuarios. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de tres compuestos (uno químico: verde malaquita + azul de metileno, y dos naturales: extracto de ajo y extracto de tabaco) para el control y erradicación del ICK en el pez tigrito, mantenido en condiciones de cautiverio. El tratamiento de verde malaquita + azul de metileno a dosis de 7 gotas por acuario mantuvo el comportamiento normal de los peces y evita que se mueran, siendo este tratamiento -el quí micoel que mejor comportamiento tiene. Dentro de los tratamientos naturales, el ajo a dosis de 3 y 5 gramos por estanque, mantuvo el comportamiento normal de los peces presentando una muerte por estanque, de manera que se comporta como el mejor tratamiento natural. El análisis de varianza mostró diferencias significativas (P<0.0001), de manera que es importante realizar algún tipo de tratamiento para el control del protozoario. La prueba de medias presento cuatro grupos diferentes, de manera que los tratamientos tienen diversos niveles de control. Palabras claves: ick, extractos, Pimelodus pictus, control natural. 12 ABSTRACT The ichthyophirius multifiliis is a ciliate protozoon, an external parasite which causes a sickness known as ICK; it attacks severely the small ornamental catfish or tigritos (Pimelodus pictus) in confinement and in an advanced condition, causes the death of the fish. Treatments with chemical products such as formol, copper sulphate and malachite green have been empirically tested to fight the ick in confinement; however there is not yet an effective treatment scientifically evaluated that will successfully control this sickness in 100% of the cases The modern aquatic production is turning to treatments of a natural source that are harmless and safe both for people working with edible and aquarium fish. The propose of this study was the evaluation of the effect of three compounds ( one of malachite green with methylene blue and two, of natural sources of garlic and tobacco extracts) for the control and eradication of ICK in the tigrito fish while kept in captivity. The green malachite with methylene blue treatments with a dose of 7 drops per aquarium unit, kept the normal behaviour of fish and avoids their death, being this chemical treatment the one with best performance. Among the natural treatments the garlic extract, in a dose of 3 and 5 grams per aquarium, kept a normal behaviour of fish showing a minimum death rate; in conclusion, the garlic extract behaves as the best natural treatment. The variation analysis showed meaningful differences (P<0.0001) in such a way that it is important to perform some kind of treatment for the control of the protozoon. The tukey average test shows two different groups in such a way that treatments have various control levels. Key word: ick, extracts, Pimelodus pictus, natural control 13 INTRODUCCIÓN Los peces ornamentales son uno de los más importantes recursos renovables de la región de los Llanos Orientales, Amazonia y Orinoquia tanto por su valor biológico y participación en la dinámica de los ecosistemas acuáticos, como por el sustento que brindan a pescadores artesanales y las divisas que genera su exportación. Los peces ornamentales se capturan en quebradas, manantiales y cochas de los r íos amazónicos y tributarios. Algunas especies sólo se capturan en determinados lugares como, por ejemplo, la arawana pleateada, Osteoglossum bicirrhosum que se pesca en el r ío Tapiche (afluente del Ucayali), el disco, Symphysodon discus que se encuentra en los r íos Putumayo y Nanay y el Pimelodus pictus, Pimelodella cristata y Pimelodus maculatus que son pescados en la parte baja del r ío Putumayo. Seg ún estudios de Virgüez: Se calcula que la oferta de Colombia en el mercado internacional es 150 especies de peces ornamentales autóctonos (veinte millones de ejemplares anualmente), 98% de ellos capturados artesanalmente en los diferentes cuerpos de agua de la Orinoquí a y Amazonía, pero tan sólo el 2% producidos en cultivos. 1 La Secretar ía Ejecutiva para Asuntos Económicos, nos presenta la siguiente estadística: “La mayor ía de los peces ornamentales se capturan en la época de vaciante llegando a presentar una mortandad de hasta el 30% por malos manejos y enfermedades como el ICK, más com únmente conocido como punto blanco” 2. Por otra parte, el mercado internacional de especies acuar í sticas cada día exige cantidad y calidad de los peces importados, lo cual se logra utilizando técnicas apropiadas para dicho fin. El P. pictus al ser capturado por los pescadores de la región es comercializado y posteriormente almacenado en acuarios donde 1 Comentario personal Virgüez, Corporación para el Desarrollo Sostenible del Área de Manejo Especial de La Macarena, CORMACARENA, Villavicencio, 10 de febrero 2006. 2 SECRETARÍA EJECUTIVA PARA ASUNTOS ECONÓMICOS Y SOCIALES DEPARTAMENTO DE DESARROLLO REGIONAL GOBIERNO DEL PERÚ. Desarrollo integrado de un área en los trópicos húmedos – Selva central del Perú. Washintong, D.C. : OEA, 1987. p.12-17. 14 permanecen hasta por 60 dí as en altas densidades; al poco tiempo de almacenamiento presentan alteraciones cutáneas con la presencia de puntos blancos en todo el cuerpo y una alta mortalidad, estos puntos blancos pueden instalarse en la piel, agallas, boca, aletas e incluso los ojos pueden ser atacados. Entre las enfermedades más comunes en peces de acuario se encuentran las producidas por parásitos. El Ichthyophthirius multifiliis es un protozoo ciliado, que mide hasta 1 mm, es un parásito externo y en estado avanzado provoca la muerte del pez; es conocido com únmente como ICK y ataca severamente a los peces del tigrito (P. pictus) en el confinamiento. Como dice Arboleda 3, esta enfermedad se manifiesta con puntos blancos que aparecen sobre la piel del pez, que son la reacción de la piel al parásito, en la cual es protegido por la capa mucosa que posee el hospedero de manera que las drogas que se aplican en los tratamientos convencionales no surten efectos satisfactorios. Es una enfermedad caracter ística de los cambios bruscos de temperatura, son más propensos los peces que estén débiles debido a stress o cualquier otra causa. Razón por la cual se sugiere subir la temperatura y airear fuertemente. La terapéutica para ICK (Ichthyophthiriasis) presenta varios problemas. “El parásito se ubica profundamente en el epitelio y no es afectado por la mayoría de los productos químicos utilizados para eliminar parásitos en peces” 4. Poupard, C.J. 5 recomienda un método muy efectivo, que consiste en “la inmersión en 0,1 ppm de verde malaquita por menos de 24 horas; se debe repetir el tratamiento 2 o 3 veces luego de tres días.” Sin embargo, el verde malaquita que se comercializa contiene varias sales con distinta toxicidad y se intenta encontrar una propuesta con medicinas alternativas que no presenten residualidad, y por lo tanto 3 ARBOLEDA OBREGÓN, Duván Andrés. El Ichthyophthirius multifiliis y la dosificación para combatirlo. 3 ed. Neiva : Centro de Investigaciones y Educación Ambiental La Tribuna, 2005. p.25 4 BACTERIOSIS ENFERMEDADES DE LOS PECES DE ACUARIO. www.riie.com.ar/. 16 de diciembre 2007. 5 POUPARD, C.J. Recomendaciones para la prevención y control de enfermedades en piscicultura. Manual de métodos parasitológicos e histopatológicos en piscicultura. Montevideo : s.n., 1982. p.32 15 no sea tóxica en dosis terapéuticas, especialmente al comienzo de una epizootia. De acuerdo a Arias 6, “10 gotas de solución por acuario de 40 L, durante 2 a 3 dí as de una solución madre de 3.7 g de verde de malaquita más 3.7 g de azul de metileno en 1L de agua, ha sido probada como efectiva en el control y erradicación del parásito ICK, en tigritos confinados en el Instituto de Acuicultura de Los Llanos (IALL) en Villavicencio, Meta.” Bartelme, precisa: “El ajo Allium sativum posee algunas propiedades antivirales, antibacterianas, antifungales y antiparasitarias 7 tratamientos han comprobadas” . Se incluye aquí por que los mostrado resultados promisorios suficientes para garantizar su evaluación científica. El tabaco es el nombre com ún de dos plantas de la familia de las Solanáceas cultivadas por sus hojas la planta denominada Nicotina tabacum. La N. tabacum crece en diferentes partes del mundo, y contiene la droga estimulante llamada nicotina (su principal alcaloide). Es tóxica y puede producir alteraciones en el aparato circulatorio y los pulmones del ser humano. En ocasiones, se ha utilizado como insecticida y antiparásito. Aunque existen algunos trabajos que se han ocupado en los aspectos de la pesquería de las especies, dichos estudios han sido puntuales y no han conducido a la experimentación y generación de paquetes tecnológicos sostenibles. Este trabajo evaluó la respuesta del tigrito infectado con ICK, a diferentes estrategias profilácticas, la solución de verde de malaquita con azul de metileno y los compuestos naturales tabaco y ajo para el control y erradicación del parásito en condiciones de confinamiento. 6 Comentario personal Arias, J. Alfredo, Instituto de Agricultura de los Llanos, 18 de marzo 2006. 7 BARTELME, A. y CORTES, J. ICK (Ichthyophthiriasis): Una discusión de este parásito y las opciones de tratamiento disponibles. s.l. : s.n., 2003. p.32. 16 OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Evaluar el efecto de tres compuestos (uno químico y dos naturales) para el control y erradicación del ick en el pez tigrito (P. pictus), mantenido en condiciones de cautiverio. OBJETIVOS ESPECÍFICOS • Determinar si existe diferencia en el control del Ick entre los tratamientos químicos y los tratamientos naturales. • Determinar la sobrevivencia de los peces tratados con las soluciones verde de malaquita con azul de metileno y los extractos de ajo y tabaco, en ba ños profilácticos segú n la dosis usada. • Proponer un tratamiento eficaz contra el ick para tigritos en condiciones de cautiverio. 17 1. MARCO TEÓRICO 1.1 TIGRITO 1.1.1 Descripción morfológica. La forma que tiene el cuerpo del pez es fusiforme con disposición ventral. Presenta 3 pares de barbillones en la boca. Ojos de gran tamañ o. Presenta espina de refuerzo en todas las aletas; excepto en la adiposa y caudal” 8. Presentando en tama ño las siguientes dimensiones: longitud total promedio de 12 cm y peso promedio de 18 gramos. (Ver figura 1) Figura 1. Pez tigrito 1.1.2 Clasificación taxonómica. Orden: Siluriformes Familia: Pimelodidae Género: Pimelodus Especie: Pimelodus pictus La piel del pez presenta una coloración siguiendo el siguiente 8 ARIAS, J. Alfredo. Ensayos de reproducción de metynnis y semaprochilodus laticeps c.f. Villavicencio, 1994. p.42. Memorias II curso de acuicultura. Unillanos. IALL. 18 patrón: • Variedad Peruana: Fondo plateado azulado muy brillante con motas negras muy ordenadas y estilizadas (un cí rculo bien definido); con un ordenamiento en todo su cuerpo, se le denomina variedad Dálmata. • Variedad Colombiana: Fondo plateado azulado muy brillante con motas negras discontinuas y sin formas estilizadas (ondeada, muchas veces semejando la imagen de una bandera ondeante). Dentro de las condiciones de confinamiento en cautiverio se tienen: temperatura del agua con promedios entre 22 a 27 °C, el pH debe estar entre 6.0 a 8.0, GH entre 4°d a 15°d, dureza entre 0° a 15° con clasificación blanda a semidura. Dentro de los parámetros del acuario se tiene longitud m í nima 80 cm, con una ubicación dentro del acuario en el fondo. Entre los parámetros de alimentación este pez es omnívoro, se alimenta desde vegetales escaldados, tiras de pescado, moluscos, crustáceos, hasta todo alimento comercial de calidad. Se trata de una especie nocturna que gusta de medios sombr íos para descansar. No debe ser mezclada con especies de menor tama ñ o que él pues podría suponer una comida fácil para este sil úrido, puesto que hace uso de sus hábiles barbillones, como todo depredador nocturno, para encontrar presas. “Su compatibilidad es preferentemente con c íclidos amazónicos de tallas media a grande. Esta especie necesita amplio espacio para nadar pues es muy hiperactiva, además de evitar cantos cortantes dentro del acuario ya que puede verse lacerado su cuerpo” 9. Su manipulación requiere un cuidado extremo ya que la pinchadura con alguna de sus espinas suele ser muy dolorosa, por tanto las redes para esta especie deben quedar excluidas, para utilizar en su lugar un buen pedazo de tela hú medo, pues las fuertes espinas cerradas se localizan en el dorso y aletas pectorales. Se desconoce mucho de su biología reproductiva. 9 ARIAS, J. Alfredo. Ampliación del conocimiento de los peces de los llanos. Los peces ornamentales de la Orinoquía colombiana. Villavicencio. Unillanos, 1999. p.78. 19 Seg ún estudios de Arias 10: Dimorfismo sexual: Poco aparentes, pero se cree con mayor tama ño la hembra, contando con caracteres tales como: robusta y forma redondeada. El macho más esbelto y de menor tama ño. Se necesitan más estudios al respecto. 1.2 ENFERMEDAD La enfermedad más frecuente en los tigritos es el punto blanco, o ICK, está causada por un protozoario ciliado llamado I. multifiliis 1.2.1 Descripción del ciclo biológico del parásito. El I. multifiliis tiene un ciclo biológico característico, bien definido y documentado. Cumple con una fase "libre", en la cuál se reproduce, y una fase "infectante", en la que se alimenta del huésped afectado. En la fase "infectante" el parásito se fija al huésped por medio de sus cilios y comienza a penetrar a través de las capas más externas de la piel del pez; en ésta fase tiene un tama ño entre 20 y 70 micras y se alimenta del líquido intercelular. El organismo del pez reacciona para aislar la infección "enquistándola" con una proliferación celular, esto se denomina "hiperplasia epitelial" y es lo que vemos como "punto blanco". El estado de trofonte o adulto se da después de dos a tres semanas, seg ún la temperatura; entonces salen del pez atravesando la epidermis y descienden al fondo para iniciar su multiplicación por división celular mitótica. En la fase "libre" el parásito se enquista en el sustrato recubriéndose de una membrana donde se divide para producir hasta 2.000 tomites ovales ciliadas más. La fase de multiplicación toma de 10 a 20 horas. Es importante destacar que es en ésta fase en la que act úan los medicamentos. Los tomitos en su estado libre deben encontrar un pez en las primeras 36 horas antes de que sus reservas se agoten y muera. El parásito tarda unas 5 semanas en completar su ciclo vital a 10 º C, pero sólo 3 o 4 dí as a 21 ºC. Por eso es importante aumentar la temperatura cuándo realizamos tratamientos. 1.2.2 Anatomía y fisiología patológicas. El I. multifiliis no tiene predilección por ning ún tejido en particular, puede afectar la piel, las 10 Ibid., p. 82. 20 branquias, los ojos y las aletas. A su paso produce lesiones microcirculatorias no detectables a simple vista, pero ponen en contacto al protozoario con el sistema inmune del pez. Este sistema inmune es el encargado de "frenar" la infección, e intenta aislar al parásito "enquistándolo" con una capa de células epiteliales. Esta reacción, llamada "hiperplasia epitelial", produce los "puntos blancos" de 0,5 mm de diámetro caracter ísticos de la infección. En los quistes se observan diferentes grados de evolución y tama ño (del parásito) que son caracterizados por una delgada membrana adherida firmemente y rodeada por escasas células mononucleares. Internamente se observan células inflamatorias y epiteliales en fase de degeneración y necrosis y eritrocitos macroscópicamente los quistes presentan forma oval y en la parte central se aprecia una estructura oval de contorno regular con aspecto granular fino e hipercromático con tendencia basófila. En las branquias se produce congestión moderada difusa, hiperplasia moderada a severa multifocal de células caliciformes, fragmentación de laminillas branquiales secundarias y coalescencia de laminillas con infiltración mononuclear moderada. 1.2.3 Diagnóstico de la enfermedad. En la primera fase de la enfermedad, cuándo todav ía no aparecen los puntos blancos, observamos un cambio en el comportamiento del pez, que "se rasca" contra el sustrato y los objetos de decoración, esto es porque el parásito ha llegado al pez y atravesó la membrana mucosa protectora que recubre su piel. Luego aparecen los "puntos blancos" de medio milímetro de diámetro en todo el cuerpo, que pueden confluir para formar lesiones más grandes. Los peces con severa afección branquial suelen tener dificultades respiratorias, signo que puede manifestarse porque nadan en la superficie o porque respiran por una sola agalla, aunque esto ú ltimo es muy infrecuente de observar porque, generalmente, la muerte sobreviene mucho antes. Otro signo que puede ser tenido en cuenta es la "exoftalmia", es decir, la protrusión del globo ocular por fuera de la órbita. Esto parece ser debido a la afección de los tejidos periorbitarios y de la musculatura ocular. 1.2.4 Formas de contagio. Por introducción al acuario de peces enfermos o "portadores asintomático". Estos ú ltimos son peces que portan al parásito en una cantidad muy baja como para desarrollar infección, pero que si encuentran un acuario con pobres condiciones de mantenimiento o individuos con sus defensas bajas 21 (inmunodeprimidos) pueden iniciar la infección de todo el acuario. Otra forma de contagio puede presentarse si introducimos a los peces en un acuario que haya tenido peces afectados antes de 8 dí as de haberles sacado, que es el tiempo que puede vivir el parásito libre en el agua sin prenderse a un pez a unos 20 ºC. Existe, no en la teor ía pero si en la práctica, la creencia de que el punto blanco puede ser introducido en el acuario al ingresar troncos o plantas u objetos decorativos que provengan de un tanque contaminado. Esto no está documentado cient íficamente, pero en la práctica podemos prevenir el contagio por medio de este tipo de materiales con las medidas que habitualmente deberí amos utilizar antes de introducir nada en nuestro acuario. Lavar prudentemente objetos decorativos (rocas), si es posible con unas gotas de cloro diluídas en agua, y dejar al sol un día. Hervir troncos y raíces, por más que estén sumergidos, por al menos 20 minutos. Lavar a conciencia cualquier planta que compremos y dejarlas un dí a en un balde con agua del grifo y, si la planta lo tolera, podemos agregar sal. 11 1.3 VERDE DE MALAQUITA 1.3.1 Características físico químicas. • Identificación de la sustancia o del preparado Denominación: Verde de Malaquita Oxalato. • Uso de la sustancia o preparado: Para usos de laboratorio, análisis, investigación y quí mica fina. • Composición/Información de los componentes Denominación: Verde de Malaquita Oxalato Fórmula: C52H54N4O12 M.=927,02 • Identificación de los peligros Nocivo en contacto con la piel y por ingestión. 11 TEISERSKIS, Federico R. ICK o enfermedad del punto blanco. s.l. : s.n., 1997. p.24-26. 22 • Riesgos especiales: Combustible. • Manipulación: Sin indicaciones particulares. • Almacenamiento: Recipientes bien cerrados. Alejado de fuentes de ignición y calor. • Controles de la exposición del medio ambiente: Cumplir con la legislación local vigente sobre protección del medio ambiente. • Propiedades físicas y químicas Aspecto: Sólido verde Olor: Característico. PH 2,4(10 g/l) Punto de fusión: ~159°C Solubilidad: 110 g/l en agua a 25°C Estabilidad y reactividad • Condiciones que deben evitarse: Temperaturas elevadas. • Información toxicológica Toxicidad aguda • Información Ecológica Eco toxicidad: Riesgo para el medio acuático Riesgo para el medio terrestre • Datos ecotóxicos no disponibles. 1.3.2 Medicación. Este colorante verde es activo frente a una gran variedad de parásitos externos y agentes patógenos como hongos, 23 bacterias, etc. Su principal aplicación es para el tratamiento contra parásitos protozoos de agua dulce. Se debe utilizar verde de malaquita sin zinc. Los peces gatos y algunos carácidos no toleran bien este producto. Es inactivo en acuarios con mucha concentración de materia orgánica. Evitar el contacto de este polvo colorante con la piel, los ojos y la boca. Es una tintura fuerte que puede tener efectos secundarios. Para aquellos que utilizan el colorante puro, existen básicamente dos posibilidades de tratamiento con verde de malaquita. Una de ellas es utilizar 1 mg del colorante cada 10-15 litros de agua por día, durante 10 dí as. La otra opción es utilizar la misma dosis (1mg de verde de malaquita/10 litros de agua) cada 48 horas con cambios parciales del 25% antes de cada nueva dosis. 12 De acuerdo a Arias 13, “10 gotas por acuario de 40 L, durante 2 a 3 días de una solución madre de 3.7 g de verde de malaquita más 3.7 g de azul de metileno en 1L de agua, ha sido probada como efectiva en el control y erradicación del parásito ICK”. 1.4 AZUL DE METILENO Se usa para prevenir infecciones en solución acuosa, 2 gotas por cada 10 litros. Es base de algunos medicamentos comerciales para el tratamiento del punto blanco. Con su aplicación el agua se ti ñ e de azul, se colorean piedras y arena. Las plantas lo toleran muy mal. 1.4.1 Características generales. Cristales o polvo cristalino de color verde oscuro, con brillo bronceado. Inodoro o prácticamente inodoro. Estable al aire. Sus soluciones en agua o en alcohol son de color azul profundo. Soluble en agua y en cloroformo; moderadamente soluble en alcohol. 1.4.2 Definición. El Azul de Metileno contiene no menos de 98,0 por ciento y no más de 103,0 por ciento de C16H18CLN3S, calculado sobre la sustancia seca. 12 Ibid., p.60. 13 Comentario personal. ARIAS, J. Alfredo, Instituto de Agricultura de los Llanos, 18 de marzo 2006. 24 1.4.3 Características físico químicas. • Envase y almacenamiento Conservar en envases bien cerrados. • Sustancia de referencia Azul de Metileno SR-FNA. • Identificación Absorción infrarroja (340). En fase sólida. • Pérdida por secado (560) Secar a 75 °C y a una presión que no exceda 5 mm de mercurio durante 4 horas: pierde entre 8,0 % y 18,0 % de su peso. • Residuo de ignición (210) No más de 1,2 %. 1.4.4 Medicación. La literatura cita para medicar el agua del acuario con Azul de Metileno pur ísimo a razón de 1 gramo cada 100 litros de agua, acompa ñando este tratamiento con inmersiones (ba ños) de 15 minutos en una solución de 15 gramos de sal gruesa por litro de agua. 14 1.5 AJO Clasificación cientí fica Familia: de las Liliáceas (Liliaceae) Especie: Allium sativum. 1.5.1 Características físico químicas. Ajo, nombre comú n de varias herbáceas intensamente olorosas de la familia de las Liliáceas y de los bulbos de estas plantas. El ajo, al igual que la cebolla, con la que está emparentado, tiene flores peque ñ as, blancuzcas, de seis piezas, dispuestas en umbelas. El fruto es una cápsula que encierra 14 Sede de investigaciones. Facultad de Ciencias Veterinarias. Cátedra de Acuicultura e Ictiopatología. 25 unas semillas negras arriñ onadas. El ajo com ún se cultiva desde la antigüedad. El bulbo, de olor y sabor intensos caracter ísticos, está cubierto por una envoltura papirácea y consta de varias piezas fáciles de separar llamadas dientes; contiene una sustancia denominada aliína, que por acción de un fermento contenido en ellos se transforma en disulfuro de alilo, que presenta el olor caracter ístico de los ajos. Esta comprobado científicamente que el ajo ayuda a combatir bacterias, hongos, virus y parásitos. En el siglo XIX Louis Pasteur demostró sus propiedades antibióticas; estos beneficios se obtienen con un compuesto que no está presente en el ajo llamado alicina pero que se genera cuando la aliina y la alinasa se combinan, estas dos sustancias forman parte del ajo, combinación de ellas se logra de una manera sencilla: cuando cortamos el ajo, cuando lo licuamos, cuando lo presionamos o machacamos. Cabe se ñalar que el ajo crudo posee propiedades distintas a un ajo cocido, en el ajo crudo se presenta la alicina, si el ajo es sometido a cocimiento se destruye la alicina y se generan otros compuestos como la adenosina y el ajoeno, que sirven como anticoagulantes y ayudan contra el colesterol. Este método fue desarrollado y probado por Kelly Jedlicki, se ha obtenido un 80% de mejor ías en peces enfermos de ICK. Consiste en remojar por aproximadamente una hora el alimento: hojuelas, krill, comida congelada, o alimento vivo. Se debe dar el alimento enriquecido con ajo diariamente y, una vez que el pez este curado, una vez por semana como método preventivo. O bien, se puede utilizar el jugo de ajos frescos o productos para la cocina como aceite de ajo. Se ha identificado la "alicina" como el principal ingrediente farmacéutico en el ajo, este compuesto act ú a contra bacterias Gram Positivo y Gram Negativo, contra algunos virus y contra protozoarios patógenos. Aunque a ún no se establece claramente como es que act úa la alicina y otros compuestos del ajo en el organismo de los peces, se cree que parte de su eficacia contra ectoparásitos es que los compuestos del ajo son permeables a la piel, donde bloquean la actividad de los compuestos (enzimas que degradan el tejido hospedero) que producen los parásitos protozoarios. 1.6 TABACO 1.6.1 Historia. El tabaco es una planta originaria del continente americano. Según observó Cristóbal Colón, los indígenas del Caribe fumaban el tabaco valiéndose de una ca ña en forma de pipa llamada tobago, de donde deriva el nombre de la planta. Al parecer le atribuían propiedades medicinales y lo usaban en sus ceremonias. 26 La tradición de emplear el tabaco como planta medicinal ha estado muy extendida en América desde tiempos remotos. Los aztecas mezclaban la hoja con cal, abrían los tumores en forma de cruz y aplicaban esa mezcla a las "postemas y nacidos". También lo usaban como antí doto del veneno de serpiente: luego de chupar en el lugar de la mordida, aplicaban calor y tabaco molido. Los Mayas de Guatemala utilizaban las hojas de tabaco para cicatrizar sus heridas. Esta costumbre de curar con hojas de tabaco fue luego adoptada por los europeos. 1.6.2 Características físico químicas. El Tabaco es el nombre com ún de dos plantas de la familia de las Solanáceas cultivadas por sus hojas que, una vez curadas, se fuman, se mascan o se aspiran en forma de rapé. La especie más cultivada alcanza entre 1 y 3 m de altura y produce de 10 a 20 hojas anchas alternas que brotan de un tallo central. Contiene un alcaloide, la nicotina. Es tóxica y puede producir alteraciones en el aparato circulatorio y los pulmones del ser humano. En ocasiones, se ha utilizado como insecticida y antiparasitario. El tabaco resulta del secado de las hojas de la planta denominada Nicotina tabacum. La N. tabacum crece en diferentes partes del mundo, y contiene la droga estimulante llamada NICOTINA (su principal alcaloide). Existen más de 50 variedades de esta planta, las cuales difieren en su contenido de nicotina. En estudios recientes en CORPOICA (2007), cita: Para la obtención del extracto de tabaco se utilizó 5 gramos de tabaco seco (ripio) por 100 ml de agua destilada. EL tabaco previamente humedecido se iba moliendo poco a poco en molino eléctrico; este proceso se realizó cuatro veces hasta obtener una tinta negra que era la solución concentrada de tabaquina al 5%. En diferencia con los tratamientos convencionales. 15 (Ver Tabla 1) La tabaquina contiene la nicotina que es un alcaloide hidrosoluble responsable de que el agua cambie su ph de neutro a alcalino. Este cambio de ph permite que los ectoparásitos se desprendan del pez y mueran. EL ph del agua al cabo de unos cinco días vuelve a las condiciones normales demostrándose que la nicotina es fácilmente biodegradable. 15 CORPOICA. Evaluación del extracto de tabaco para controlar Gyrodactylus, ichthyopthirius y Trichodina en peces de agua dulce. Bogotá : Corpoica, 2007. 27 Tabla 1. Métodos tradicionales para el control y desinfección de estanques para evitar la proliferación de protozoos externos. PROTOZOOS EXTERNOS: Ichthyopthirius, Vorticella, microsporidia, etc DOSIS METODO TIEMPO 1 h /d ía en ag ua F ormo l Ba ño 2 50p pm m en os de 1 0` c F ormo l Ba ño 2 00p pm 1 h d ía / 10- 15`c F ormo l Ba ño 1 66p pm 1 h d ía /Te mp 15`c 1 5-2 5pp bue na F ormo l Ba ño D ía por med io a ir eac ión F ormo l Ba ño 2 00p pm 1 h ora I n t er va los d e 3- 4 V er de d e Ba ño 0 .1-1 .5pp m d í as malaquita V er de d e B a ño 2 pp m 3 0 m in u tos malaquita Formal + Verde In de fin ido 1 5pp m+0 .1p pm d e malaqu ita Formal + Verde In de fin ido 5 0pp m+0 .15 pp m In de fin ido d e malaqu ita 1 pp mc on du r ez a 50 Su lfa to de co bre Ba ño p pm 1 -2p pm 5 0-2 00p pm Su lfa to de co bre Ba ño d e du r ez a 2 -3p pm con dur eza Su lfa to de co bre y Ba ño d e 20 0 ppm ac id o p íc r ico Re pe tir d ías V er de d e a l te rnos por 2 0 .05- 1 .0p pm In de fin ido Malaquita vec es F ormo l Ba ño 2 00p pm 1 hor a F ormo l Ba ño 1 67p pm 1 hor a F ura nace Ba ño cor to 1 -2p pm 5 -10 minu tos F ura nace Ba ño larg o 0 .05- 0 .4p pm 3 -5 D ías Incr emen tar a 3 . 5Di as T emper a tur a 3 2` c Sa l ( c lor uro de P r e v en t i vo o 1 000 -20 00p pm In de fin ido so dio) terapia Su lfa to de co bre Usa r con cu id ado 5 00p pm 1 minu to F ue n te . COR PO IC A. Eva lu ac ión de l e xtr ac to de tabac o p ara c on tr o lar Gyr od acty lus , ich thyop thirius y Tr ich od ina en peces de a gua du lce . 1.6.3 Medicación. Se observa cambio significativos en el pH demostrando el carácter alcalino de la nicotina, además el efecto de la tabaquina sobre los ectoparásitos de los alevinos de agua dulce, siendo la concentración de mejor resultado 300ml/500litros, ba ño durante 24 horas y 200ml/500litros, ba ñ o durante 48 horas (evaluación del extracto de tabaco para controlar Gyrodactylus, Ichthyopthirius y Trichodina en peces de agua dulce). Formas farmacéuticas descritas 28 Medicamento vegetal. Vía de administración: Tópica. Otras propiedades atribuidas (Aún no aprobadas) Las hojas aplicadas sobre la frente para aliviar dolores de cabeza. Decocción de la raíz como febrífugo, se le atribuyen además las propiedades de vermífugo y antidismenorreico. Antirreumático, antiebriético, antialopécico y antialmorránico. 1.6.4 Advertencias. La nicotina, presente en las hojas entre 2-10 %, es un alcaloide altamente tóxico. La dosis letal para el hombre es de 0,04-0,06 g. Se absorbe rápidamente por vía transdermal. 1.6.5 Componentes. Hojas ricas en alcaloides, resultando la nicotina el mayoritario; contienen además ácidos orgánicos (málico y c ítrico), ácidos fenoles (clorofénico, quínico, nicotínico), flavonoides, bases volátiles, trazas de cumarinas, aceite esencial y numerosas enzimas. 29 2. MATERIALES Y MÉTODOS 2.1 MATERIALES Los implementos que se utilizaron en el desarrollo del proyecto son los siguientes: • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • • 200 ejemplares de tigrito Estereoscopio Marca Niko Ictiómetro Cámara digital Jeringas grandes 5 ml Balanza de precisión METTLER – AJ 150 Balanza electrónica: Í tem No SC 4010, Capacidad: 400* 0.1 g Termómetro de máxima y m í nima Termómetro de precisión Marca Taylor Calentador automático para acuarios: 300 W PH meter HORIBA Modelo D – 21, MFG No 306019 Aireador OTTO S.A. – 3500 de dos salidas Difusores de aire Baldes plásticos Divisiones con anjeo plástico rectangulares Acuarios de Vidrio con capacidad de 40 litros netos (60 cm. largo x 30 cm. ancho x 30 alto) Tubos de pvc de 15 cm con tapa Sustrato de grava Plástico negro Extracto de ajo Extracto de cebolla Verde de malaquita y azul de metileno 2.2 MÉTODOS Se usaron peces tigritos, P. pictus. Los contenedores son en vidrio de 4mm de grosor, con medidas de 60 largo x 30 ancho x 30 alto, para una capacidad de 54 litros a un llenado total de 40L. (ver figura 2). pH constante de 6.5 a 7.0, para el mantenimiento de pH se realizó un recambio de ¼ del contenedor cada tercer día lo cual nos permitió mantener el pH constante con una temperatura de 28 º C como m ínimo (ver figura 3). La alimentación se llevó acabo con concentrado comercial con un 30 % de proteína. 30 Figura 2. Contenedores de vidrio, peceras Figura 3. Acuario preparado listo para los tratamientos. La totalidad de los peces adquiridos fueron contados y clasificados por tamañ o/contenedor; medidos y pesados; se usaron 10 peces por contenedor, equivalente a 0.25 individuos por litro, en 20 contenedores; los peces se infectaron mediante la baja de temperatura (24 o C), durante 72 horas muestreando cada dos horas, 31 hasta observar la aparición del parásito I. multisfili. Luego de la confirmación de la aparición del parásito se aplicaron los tratamientos descritos a continuación, con una temperatura normal para los peces, en este caso 27 o C. Tabla 2. Dosificación. TR ATA MI ENT O 0 : c on tr o l 1: Ver de m a laq ui t a +az ul me tileno 2: Ver de m a laq ui t a +az ul me tileno 3: Ver de m a laq ui t a +az ul me tileno 4 : E x t r ac to a jo de DOSIS 0 7 gotas por acuario de 40 L de de D E SCR I PCI ON T r a ta m ien to c o n tr o l , s i n ad ic ión d e d r og a a lg una . D u r an t e 5 d í as de u na s ol uc i ón m adr e de 3 . 7 g d e ver de d e malaquita más 3 .7 g d e azu l de me tileno en 1L d e agu a . 5 gotas por acuario de 40 L D u r an t e 5 d í as de u na s ol uc i ón m adr e de 3 . 7 g d e ver de d e malaquita más 3 .7 g d e azu l de me tileno en 1L d e agu a . 3 gotas por acuario de 40 L D u r an t e 5 d í as de u na s ol uc i ón m adr e de 3 . 7 g d e ver de d e malaquita más 3 .7 g d e azu l de me tileno en 1L d e agu a . de 7 gramos por acuario de 40 L 5 : E x t r ac to d e a jo 5 gramos por acuario de 40 L 6 : E x t r ac to d e a jo 3 gramos por acuario de 40 L 7 : e x t r ac to d e ta baco 7 gotas por acuario de 40 L 8 : e x t r ac to d e ta baco 5 gotas por acuario de 40 L 9 : e x t r ac to d e ta baco 3 gotas por acuario de 40 L Du ran te 5 d ías de una s olución madr e de 1 k i lo e xtr ac to de a jo mach acad o fr esco a l 100% ( en u na b ols a d e gas a a l i n te r i or de ac uar io) Du ran te 5 d ías de una s olución madr e de 1 k i lo e xtr ac to de a jo mach acad o fr esco a l 100% ( en u na b ols a d e gas a a l i n te r i or de ac uar io) Du ran te 5 d ías de una s olución madr e de 1 k i lo e xtr ac to de a jo mach acad o fr esco a l 100% ( en u na b ols a d e gas a a l i n te r i or de ac uar io) Du ran te 5 d ías de un a so luc ion : (5 gr amos de t a baco s ec o e n 1 00 m l de a gua d es ti la da) . E L ta baco pr evia men te hu me dec ido s e mo lió p oco a poc o en u n mo lino e l éc tric o ; es te pr oceso se r ea liz o 4 vec es has ta o b ten er u na tin ta n egr a fu e la s oluc ión co nce n tra da de ta baq uina al 5%. Du ran te 5 d ías de un a so luc ion : (5 gr amos de t a baco s ec o e n 1 00 m l de a gua d es ti la da) . E L ta baco pr evia men te hu me dec ido s e mo lió p oco a poc o en u n mo lino e l éc tric o ; es te pr oceso se r ea liz o 4 vec es has ta o b ten er u na tin ta n egr a fu e la s oluc ión co nce n tra da de ta baq uina al 5%. Du ran te 5 d ías de un a so luc ion : (5 gr amos de t a baco s ec o e n 1 00 m l de a gua d es ti la da) . E L ta baco pr evia men te hu me dec ido s e mo lió p oco a poc o en u n mo lino e l éc tric o ; es te pr oceso se r ea liz o 4 vec es has ta o b ten er u na tin ta n egr a fu e la s oluc ión co nce n tra da de ta baq uina al 5%. e l e xper ime n to . de de de F ue n te : Tra tamie n tos us ados en 32 Se utilizaron 10 tratamientos con 2 repeticiones cada uno seg ún la tabla 2; la variable usada para los tratamientos fue el n úmero de peces muertos al final de los 5 días después de la aplicación de los tratamientos (ver figura 4). Figura 4. Marcación de tratamientos. Se realizo un monitoreo constante de la temperatura y el pH del acuario, el cual se verifico por la ma ñana, tarde y noche para mantener las condiciones optimas de estos (28º C y pH entre 6 a 7). Tabla 3. Mediciones de temperatura, ph y amoniaco. CONTENEDOR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 PH 6.8 6.5 6.9 6.6 6.9 7.0 6.9 6.8 6.6 6.7 6.9 6.9 6.8 6.7 7.0 6.8 6.6 6.8 7.0 6.5 TEMPETATUR A 28.2 28.0 28.5 28.4 29.0 28.6 28.7 28.6 28.2 28.6 28.4 28.0 28.2 28.5 28.4 28.3 28.4 28.2 28.3 28.0 33 %AM ONI ACO LIBRE 0.5 0.3 0.2 0.4 0.5 0.8 0.6 0.5 0.4 0.6 0.4 0.5 0.4 0.5 0.3 0.2 0.2 0.4 0.2 0.5 %ION AM ONIO 99 98 97 98 99 98 97 100 97 98 99 100 98 97 98 99 98 97 95 99 Para la infestación de ICK se bajo la temperatura a 24C º en la cual el ICK se empieza manifestar, sin embargo, la enfermedad no se presentó con el cambio de temperatura, razón por la cual se tomó un pez infectado el cual se dejo durante 5 minutos en cada acuario con el posterior incremento de la temperatura hasta los 28 ºC luego de sacar el pez. Se usó un dise ño experimental simple al azar con dos repeticiones, se realizó el análisis de varianza ANOVA seguida de la comparación de medias por medio del método de Duncan y posteriormente se llevo a cabo la corrida de los contrastes programados, para ello se uso el paquete estadístico SAS system versión 8.0 Tabla 4. Contrastes ortogonales para comparar tratamientos 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Testigo vs resto Tratamiento químico vs tratamiento natural Ajo vs resto Tabaco vs resto Azul de metileno + verde malaquita dosis alta vs dosis baja Ajo dosis alta vs dosis baja Tabaco dosis alta vs dosis baja Azul de metileno + verde malaquita 7 vs resto Ajo 3 y 6 vs resto 34 3. RESULTADOS El análisis de varianza mostró diferencias significativas entre los tratamientos evaluados para la variable n úmero de peces muertos (P<0.0001), sin embargo, no presento diferencias significativas para las repeticiones (P=0.5086) lo que se concluye que la variación fue debida solamente a los tratamientos y que el diseñ o experimental usado fue el correcto. En la Figura 5 se observan las diferencias entre los tratamientos para la prueba de Duncan en la variable peces muertos, se observa que los tratamientos ajo 8 y testigo presentaron el mayor número de peces muertos al tener 10 muertes de los 10 peces que hay en la pecera; lo sigue el tratamiento tabaco 7 el cual presenta 8 muertes en promedio para las dos repeticiones; posteriormente los tratamientos azul de metileno + verde malaquita 3, tabaco 5, azul de metileno + verde malaquita 5 y tabaco 3 se concentran en un grupo con un promedio de peces muertos entre 2 y 2.5; ajo 6 y ajo 3 están seguidos con 1.5 peces muertos en promedio y, finalmente, el tratamiento con efectividad del 100% es azul de metileno + verde malaquita 7 que presenta 0 peces muertos. PM 12 Numero de peces muertos 10 a a b 8 6 PM 4 c c c c 2 cd cd Ajo6 Ajo3 d 0 Testigo AzulVerde7 AzulVerde5 AzulVerde3 Ajo8 Tabaco7 Tabaco5 Tabaco3 Tratamientos Figura 5. N úmero de peces muertos por tratamientos. * Tra t am ien t os c on la m is ma le tra no p r esen t an d i fe r enc ias s ig nifi c a t i vas ( P=0 .05) pa ra la co mp arac ió n de me dias po r la pru eba de Du ncan 35 El contraste testigo vs resto (Tabla 5), muestra que existe diferencia significativa entre la aplicación de tratamientos para el control del ICK y la no aplicación (P=0.0003), por el contrario no existe diferencia significativa entre aplicar tratamientos químicos o naturales (P=0.1062) para los tratamientos evaluados, sin embargo, esta no diferencia es empujada por la dosificación que existe entre los tratamientos (Figura 5), puesto que dentro de los tratamientos con el mismo ingrediente existe diferencias significativas en los contrastes, tal es el caso del azul de metileno con verde malaquita en la dosis mas altas vs las otras dosis (P=0.0002) y ajo en la dosis mas altas vs las otras dosis (P=0.0001). Tabla 5. Significancia de los contrastes para la variable severidad Nombre del contraste Testigo vs resto. Tratamiento químico vs tratamiento natural ajo vs resto Tabaco vs resto Azul de metileno + verde malaquita dosis alta vs dosis baja Ajo dosis alta vs dosis baja Tabaco dosis alta vs dosis baja Azul de metileno + verde malaquita 7 vs resto Ajo 3 y 6 vs resto Variable severidad P> F* 0.0003 0.1062 <.0001 <.0001 0.0002 0.0001 0.5987 <.020 <.0042 * Sig nifica nc ias : a l 9 5% = < 0 . 05; a l 9 9% = < 0 . 01 ; a l 9 9 .9 % = < 0 .001 Los contrastes de los tratamientos azul de metileno + verde malaquita 7 (ver figura 6) vs resto presenta diferencia significativas, corroborando la figura 5 puesto que este tratamiento presentó el n úmero de peces muertos mas bajo “0” (P=0.020). Para los tratamientos ajo dosis 3 y dosis 6 (ver figura 8) presenta diferencia significativa (P=0.0042) ya que tienen en promedio 1.5 peces muertos, siendo los segundos más bajos. 36 Figura 6. Coloración del agua con el tratamiento químico. Figura 7. Coloración del agua con el tratamiento tabaco. 37 Figura 8. Coloración del agua con el tratamiento ajo. 38 4. DISCUSIÓN Para la terapia de las enfermedades de los seres humanos, las plantas son una materia prima para la producción de biotecnolog ía de medicamentos sin embargo en medicina veterinaria y en especial en acuicultura los objetivos del uso de las plantas son utilizadas en forma natural primordialmente para evadir costos. Se puede jugar un papel relevante en la parte médica si la biomedicina se aboca al desarrollo del potencial terapéutico de la flora de la siguiente forma: a) Adecuando la metodología de la investigación a la naturaleza de los remedios herbarios tal como son utilizados empíricamente por la población. b) Proporcionando una regulación de medicamentos que incorporen a los requerimientos de seguridad y eficacia, y el de accesibilidad económica y cultural de los mismos. Otro factor que se debe tener en cuenta para la utilización de las plantas medicinales en su forma natural es que las dosificaciones dependerán de la concentración de las sustancias activas de la variedad utilizada, de la edad de la planta, del tipo de suelo, entre otras caracter ísticas, así, las dosis usadas para el ajo (Allium Sativum), se deberán comprobar mediante bioensayos piloto. Sin embargo, y a pesar de estas limitantes las plantas medicinales constituyen un recurso importante para la profilaxis y terapia de las enfermedades de los organismos acuáticos porque no hay contaminación del agua con productos sintéticos que pueden ser no biodegradables y los costos siempre serán menores. Como ha sido mostrado en este trabajo el uso de plantas medicinales en animales acuáticos ya va en buen camino de desarrollo y no son pocos los países y especialistas que han incursionado en el tema. Mas aun ya existen empresas comercializadoras de productos basados en una mezcla de los componentes activos de un grupo significativo de ellas. No obstante, no existe un programa coherente para la universalización y estandarización de esta forma de terapia, aspecto que deberí a ser concientizado por investigadores y clínicos. El tratamiento quí mico que contiene verde malaquita en combinación de azul de metileno independiente de la dosis mantiene los niveles de 39 mortalidad de peces más bajos que los otros tratamientos evaluados concordando con lo indicado por Arboleda 16 quien propone como tratamiento efectivo contra el ick 4 gramos de verde malaquita en un litro de agua, al igual que lo citado por Teiserskis 17 quien propone que tratamientos con azul de metileno es buen controlador de infecciones de ICK en acuarios con peces gato. Sin embargo la dosificación de los autores discurre con la del presente trabajo ya que la mejor dosis para el control optimo del protozoo l. multifiliis fue de 7 gotas de azul de metileno + verde malaquita, dicha dosis no fue toxica puesto que el comportamiento del pez fue normal y la presencia de la enfermedad se detuvo al cabo de tres días. Las dosis menores de azul de metileno + verde malaquita mantienen el comportamiento normal de los peces sin evidenciar problemas filológicos, sin embargo dentro de la población establecida hay perdida de ejemplares lo cual indica que se debe buscar la dosis correcta; Villalobos 18 propone una dosis de 1mg/litro de azul de metileno + verde malaquita el cual es equivalente con el tratamiento de 3 gotas difiriendo esta dosis con la de 7 gotas que es donde hay control del 100% efectivo. Bartelme & Cortes 19 consideran el ajo como buen agente de control del ICK sin embargo no cita dosis ni tampoco porcentajes de control, dicha apreciación concuerda con los resultados obtenidos en el presente trabajo ya que con dosis bajas de pasta de ajo 3 y 6 se obtiene un control moderado de la enfermedad al impedir la muerte total de los peces pero se presenta turbidez en el agua de la pecera. Por esta razón consideramos que se debe investigar en este tipo de tratamiento la dosis exacta a la cual el control sea óptimo sin desmeritar las demás variables como son las que tienen que ver con el comportamiento fisiológico del pez. 16 ARBOLEDA OBREGÓN, Duván Andrés. El Ichthyophthirius multifiliis y la dosificación para combatirlo. ed. 3. Neiva : Centro de Investigaciones y Educación Ambiental La Tribuna, 2005. 17 TEISERSKIS, Federico R. ICK o enfermedades del punto blanco. s.l. : s.n., 1997. p. 24. 18 VILLALOBOS, Onel. Tratamiento con cloranfenicol; www.drpez.net/panel/showthread.php?t=78799; 9 Mar 2008. 19 BARTELME, A. y CORTES, Jorge. ICK (Ichthyophthiriasis) : Una discusión de este parásito y las opciones de tratamiento disponibles. s.l. : s.n., 2003. p. 32. 40 Prieto 20 afirma que el tratamiento con extracto natural de tabaco es un control eficiente del ick sin embargo no muestra dosis que sustenten dicha afirmación; en el presente trabajo dicho tratamiento a las dosis usadas fue toxico para los peces ya que su respuesta fisiológica presenta movimientos erráticos como el nadado al revés y adicionalmente el color del agua de la pecera se torna turbia. Una apreciación adicional es que entre la dosis del tratamiento es más baja mejor es el control lo que indica al igual que con el tratamiento natural del ajo que la investigación en este tipo de tratamientos naturales debe ir encaminado a la dosificación exacta donde exista control del blanco biológico y seguridad del organismo a proteger. 20 PRIETO MOJICA, Camilo Alberto; CvLac. RIAÑOJIMENEZ, Fallón Yamile; CvLac. Catálogo de las principales especies de Peces Ornamentales de Colombia. 2005. p.35. 41 CONCLUSIONES Se observó que el extracto del tabaco (tabaquina) no presentó efecto negativo para el comportamiento de los animales en concentraciones medias bajas, en el cual el mejor resultado se obtiene con 3 gotas ya que no se pone turbia el agua y así evitamos más costos en la limpieza de los acuarios y recambios de agua. Para el control del ICK en peces infectados de la variedad tigrito se recomienda el uso del extracto de ajo como extracto natural en dosis de 3 a 6 gramos, pues este tratamiento controla eficiente mente el protozoario y es inocuo para la salud humana, a diferencia del tratamiento químico con azul de metileno + verde de malaquita que es cancerí geno. Se determino que para un control total de la enfermedad ICK producida por el protozoario se use verde de malaquita + azul de metileno en dosis de 7 gotas por contenedor, puesto que su control es total al impedir que los peces mueran y con ello se elimina el protozoario en los 5 días de tratamiento. La dosificación del tratamiento a usar para el control del parásito debe ser precisa ya que se pueden presentar efectos colaterales como intoxicación a costa de los peces; razón por la cual se deben realizar ensayos con rango de dosis mas precisas para determinar la dosis exacta para tener el control mas acertado. El tabaco no es efectivo para el control del protozoario que produce el ICK, de manera que no se recomienda seguir analizando este material para control. 42 RECOMENDACIONES La principal recomendación que hacemos al terminar este estudio es que se debe profundizar en el tema de los medicamentos naturales como es el caso del ajo y el tabaco, ya que al evaluar sus resultados encontramos un potencial enorme en la utilización de estos compuestos en el medio acuícola. Recomendar ía en el caso de los naturistas y de especialistas que consideren otras alternativas tales como los tratamientos hechos con el ajo y el tabaco para el control de enfermedades, ya que Por ejemplo el ajo presento unos buenos resultados en el control del parasito tan solo presentado turbidez y presencia de hongos que fácilmente se pueden controlar con los recambios de agua , además pensar íamos en un medicamento compuesto de ajo concentrado y liofilizado el cual ayudaría a evitar la aparición de hongos. La principal dosis a utilizar ser ía la de 5 gr de ajo por 40 litros de agua Durante 5 dí as de una solución madre de 1 kilo extracto de ajo machacado fresco al 100% (en una bolsa de gasa al interior de acuario). En el caso del tabaco pensaríamos en no recomendar su utilización ya que sus compuestos naturales afectan el comportamiento fisiológico del pez causando intoxicación y muertes s úbitas en los peces haciendo un poco dif í cil su manejo. Para personas y especialistas que sean más escépticos a los cambios recomendar íamos el uso de la combinación de azul de metileno y verde de malaquita el cual en una dosis de 7 gotas en 40 litros funciona con una efectividad del 100% A demás se recomienda hacer un estudio más exhaustivo del modo de contagio del parasito Ichthyophthirius multifiliis, ya que en el momento del contagio con la baja de la temperatura no basto para que se presentara la enfermedad, podría ser que por la buena profilaxis manejada en los contenedores el parasito no tuvo el medio necesario para desarrollarse, rompiendo as í la creencia de que el ICK se manifiesta con la baja de la temperatura. 43 BIBLIOGRAFÍA AJIACO, R.E.; BARRETO, M.C. & H. RAMIREZ, Las explotaciones de peces ornamentales. Bogotá : Inpa, 2001. ARBOLEDA OBREGON, D. A. El Ichthyophthirius multifiliis y la dosificación para combatirlo. 3 ed. Neiva : Centro de Investigaciones y Educación Ambiental La Tribuna, 2005. ARIAS, J. Alfredo. 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HANEK. www.oas.org/dsd/publications/united/oea27s/ch15.htm, 16 de diciembre 2007. KELLY, Jedlicki. Ich / Ichthyophthirius multifiliis - Una discusión de este parásito y las opciones de tratamiento disponibles, Parte II “Las enfermedades de los peces y su curación. www.acuarium.net, 27 de noviembre 2007. LAS ENFERMEDADES DE LOS PECES www.aquarium.net, 12 de noviembre 2007. Y SU CURACION. POUPARD, C.J. Recomendaciones para la prevención y control de enfermedades en piscicultura. Manual de métodos parasitológicos e histopatológicos en piscicultura. Montevideo: s.n., 1982. SECRETAR Í A EJECUTIVA PARA ASUNTOS ECONÓMICOS Y SOCIALES DEPARTAMENTO DE DESARROLLO REGIONAL GOBIERNO DEL PERÚ. Desarrollo integrado de un área en los trópicos h úmedos – Selva central del Per ú. Washintong, D.C. : OEA, 1987. TEISERSKIS, Federico R. ICK o enfermedad del punto blanco. s.l. : s.n., 1997. 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Registro de mediciones DIA 1 CONTENEDOR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 PH 6.8 6.5 6.9 6.6 6.9 7.0 6.9 6.8 6.6 6.7 6.9 6.9 6.8 6.7 7.0 6.8 7.0 6.9 6.5 6.8 TEMPERATURA 28.2 28.0 28.5 28.4 29.0 28.6 28.7 28.6 28.2 28.6 28.4 28.0 28.2 28.5 28.4 28.3 28.5 28.9 28.6 28.7 AMONIACO 0.50 0.31 0.22 0.41 0.50 0.81 0.62 0.53 0.44 0.60 0.44 0.52 0.45 0.53 0.32 0.23 0.30 0.25 0.28 0.31 PH 6.8 6.5 6.9 6.6 6.9 7.0 6.9 6.8 6.6 6.7 6.9 6.9 6.8 6.7 7.0 6.8 7.0 6.9 6.5 6.8 TEMPERATURA 28.2 28.0 27.9 26.9 27.8 28.5 28.3 27.9 28.1 27.9 28.5 29.2 28.2 26.9 27.9 28.3 28.5 28.9 28.6 28.7 AMONIACO 0.50 0.31 0.22 0.41 0.50 0.81 0.62 0.53 0.44 0.60 0.44 0.52 0.45 0.53 0.32 0.23 0.30 0.25 0.28 0.31 DIA 2 CONTENEDOR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 47 DIA 3 CONTENEDOR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 PH 6.8 6.5 6.9 6.6 6.9 7.0 6.9 6.8 6.6 6.7 6.9 6.9 6.8 6.7 7.0 6.8 7.0 6.9 6.5 6.8 TEMPERATURA 28.2 28.0 28.5 28.4 29.0 28.6 28.7 28.6 28.2 28.6 28.4 28.0 28.2 28.5 28.4 28.3 28.5 28.9 28.6 28.7 AMONIACO 0.50 0.31 0.22 0.41 0.50 0.81 0.62 0.53 0.44 0.60 0.44 0.52 0.45 0.53 0.32 0.23 0.30 0.25 0.28 0.31 PH 6.8 6.5 6.9 6.6 6.9 7.0 6.9 6.8 6.6 6.7 6.9 6.9 6.8 6.7 7.0 6.8 7.0 6.9 6.5 6.8 TEMPERATURA 28.2 28.0 28.5 28.4 29.0 28.6 28.7 28.6 28.2 28.6 28.4 28.0 28.2 28.5 28.4 28.3 28.5 28.9 28.6 28.7 AMONIACO 0.50 0.31 0.22 0.41 0.50 0.81 0.62 0.53 0.44 0.60 0.44 0.52 0.45 0.53 0.32 0.23 0.30 0.25 0.28 0.31 DIA 4 CONTENEDOR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 48 DIA 5 CONTENEDOR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 PH 6.8 6.5 6.9 6.6 6.9 7.0 6.9 6.8 6.6 6.7 6.9 6.9 6.8 6.7 7.0 6.8 7.0 6.9 6.5 6.8 TEMPERATURA 28.2 28.0 28.5 28.4 29.0 28.6 28.7 28.6 28.2 28.6 28.4 28.0 28.2 28.5 28.4 28.3 28.5 28.9 28.6 28.7 AMONIACO 0.50 0.31 0.22 0.41 0.50 0.81 0.62 0.53 0.44 0.60 0.44 0.52 0.45 0.53 0.32 0.23 0.30 0.25 0.28 0.31 DIA 6 CONTENEDOR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 PH 6.8 6.5 6.9 6.6 6.9 7.0 6.9 6.8 6.6 6.7 6.9 6.9 6.8 6.7 7.0 6.8 7.0 6.9 6.5 6.8 TEMPERATURA 28.2 28.0 28.5 28.4 29.0 28.6 28.7 28.6 28.2 28.6 28.4 28.0 28.2 28.5 28.4 28.3 28.5 28.9 28.6 28.7 49 AMONIACO 0.50 0.31 0.22 0.41 0.50 0.81 0.62 0.53 0.44 0.60 0.44 0.52 0.45 0.53 0.32 0.23 0.30 0.25 0.28 0.31 DIA 7 CONTENEDOR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 PH 6.8 6.5 6.9 6.6 6.9 7.0 6.9 6.8 6.6 6.7 6.9 6.9 6.8 6.7 7.0 6.8 7.0 6.9 6.5 6.8 TEMPERATURA 28.2 28.0 28.5 28.4 29.0 28.6 28.7 28.6 28.2 28.6 28.4 28.0 28.2 28.5 28.4 28.3 28.5 28.9 28.6 28.7 AMONIACO 0.50 0.31 0.22 0.41 0.50 0.81 0.62 0.53 0.44 0.60 0.44 0.52 0.45 0.53 0.32 0.23 0.30 0.25 0.28 0.31 PH 6.8 6.5 6.9 6.6 6.9 7.0 6.9 6.8 6.6 6.7 6.9 6.9 6.8 6.7 7.0 6.8 7.0 6.9 6.5 6.8 TEMPERATURA 28.2 28.0 28.5 28.4 29.0 28.6 28.7 28.6 28.2 28.6 28.4 28.0 28.2 28.5 28.4 28.3 28.5 28.9 28.6 28.7 AMONIACO 0.50 0.31 0.22 0.41 0.50 0.81 0.62 0.53 0.44 0.60 0.44 0.52 0.45 0.53 0.32 0.23 0.30 0.25 0.28 0.31 DIA 8 CONTENEDOR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 50 DIA 9 CONTENEDOR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 PH 6.8 6.5 6.9 6.6 6.9 7.0 6.9 6.8 6.6 6.7 6.9 6.9 6.8 6.7 7.0 6.8 7.0 6.9 6.5 6.8 TEMPERATURA 28.2 28.0 28.5 28.4 29.0 28.6 28.7 28.6 28.2 28.6 28.4 28.0 28.2 28.5 28.4 28.3 28.5 28.9 28.6 28.7 AMONIACO 0.50 0.31 0.22 0.41 0.50 0.81 0.62 0.53 0.44 0.60 0.44 0.52 0.45 0.53 0.32 0.23 0.30 0.25 0.28 0.31 PH 6.8 6.5 6.9 6.6 6.9 7.0 6.9 6.8 6.6 6.7 6.9 6.9 6.8 6.7 7.0 6.8 7.0 6.9 6.5 6.8 TEMPERATURA 28.2 28.0 28.5 28.4 29.0 28.6 28.7 28.6 28.2 28.6 28.4 28.0 28.2 28.5 28.4 28.3 28.5 28.9 28.6 28.7 AMONIACO 0.50 0.31 0.22 0.41 0.50 0.81 0.62 0.53 0.44 0.60 0.44 0.52 0.45 0.53 0.32 0.23 0.30 0.25 0.28 0.31 DIA 10 CONTENEDOR 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 51 Anexo B. Medidas y pesos de los peces utilizados Nº DE PESCADOS 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 PESO 22,2 21,8 19,1 20,3 18,2 21,2 19,9 20,8 23,1 17,3 19,1 16,7 13,5 21,5 21,4 17,3 20,9 22,4 20,5 17,2 15,5 14,4 21,5 14,4 18,5 14 19,8 16,7 17 14,5 18 14,5 10,9 18,3 17,3 19 21,2 10,4 18,7 16,8 18,5 24,6 16,5 17,4 14,5 16 14,8 19,3 23,9 52 TALLA EN mm 100,5 100,9 100,6 89,3 90,3 100,4 80,6 89,7 90,3 91,5 97,9 98,5 99,4 98,4 89,9 97,6 97,8 98,6 99,2 100,2 100,1 98,3 97,6 90,2 91,3 92,5 93,6 97,3 89,5 92,6 93,4 95,2 91,2 91,1 97,2 96,5 94,5 94,2 97,3 98,1 96,5 91,2 93,4 96,3 94,2 91,2 93,5 97,2 100,1 Nº DE PESCADOS 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 PESO 16,5 18,5 14,4 22,4 13,5 21,3 19,3 21,2 14,5 19,2 16,4 22,6 19,8 20,9 15,5 21,6 18,3 22,6 19,2 17,2 13,2 19,1 17,3 17,2 113 17,4 12 20,8 16,8 22,5 16,7 18,5 14 21,2 20,1 21,7 16,5 18,2 14,8 20,9 18,5 21,8 16,1 23,5 16,7 21,5 18,7 18,3 19 14,5 17,2 53 TALLA EN mm 97,3 94,5 91,8 89,9 88,3 94,2 96,4 95,6 92,1 93,6 92,2 97,4 95,1 97,4 96,4 97,2 98,6 94,1 96,5 95,1 95,9 97,6 96,4 97,2 95,1 98,9 94,2 96,5 96,3 97,1 95,1 98,5 95,2 94,1 96,4 97,2 92,1 91,3 93,5 91,9 92,6 91,3 92,4 91,6 92,7 92,9 91,7 93,2 91,9 92,5 94,3 Anexo C. Pez Tigrito sano 54 Anexo D. Pez Tigrito con ICK 55 Anexo E. Parásito (ICK) adulto 56 Anexo F. Parásito (ICK) ciliado 57 Anexo G. Microfotografía del quiste 58 Anexo H. Medición de los peces 59 Anexo I. Ciclo del parásito 60 Anexo J. Tablas ANOVA –Análisis Estadístico Source DF Model Error Total 9 1 10 R- Square 0.459386 BY TRAT Sum of Squares Mean Squares F Value 623.2583 735.2874 12.4962 30.6369 13.93 0.0020 Pr›F C.V. 17.6895 Pr›F Root MSE 5.535068 Testigo Source DF Sum of Squares Mean Squares F Value Model Error Total 5 4 9 2.701184 2.257638 2.7011 0.1505 17.95 61 0.0007 Azul Verde 7 Source DF Model Error Total 5 4 9 Sum of Squares Mean Squares F Value 3.26541 2.36591 0.12548 0.52368 14.26 Pr›F 0.05263 Azul Verde 5 Source DF Sum of Squares Mean Squares F Value Model Error Total 5 4 9 8.2326 7.2365 1.2365 1.0256 3.263 Pr›F 0.02558 Azul verde 3 Source DF Sum of Squares Mean Squares Model Error Total 5 4 9 4.52641 7.63256 2.3564 1.00025 62 F Value 3.24 Pr›F 0.258 Ajo 8 Source DF Model Error Total 5 4 9 Sum of Squares Mean Squares 5.021586 4.027512 3.021548 3.3366 F Value 25.36 Pr›F 0.01524 Ajo 6 Source DF Sum of Squares Mean Squares F Value Pr›F Model Error Total 5 4 9 12.0254 6.03258 4.02211 3.3366 15.236 0.1253 Ajo 3 Source DF Sum of Squares Mean Squares Model Error Total 45.263 40.236 8.259 7.235 5 4 9 63 F Value Pr›F 11.025 0.0001 Tabaco 7 Source DF Sum of Squares Mean Squares Model 5 Error 4 Total 9 23.021 20.125 2.0312 1.03254 F Value 0.23 Pr›F ‹0.0001 Tabaco 5 Source DF Sum of Squares Mean Squares Model Error Total 5 4 9 12.02548 4.263 0.125 0.001 F Value 1.23 Pr›F ‹0.0001 Tabaco 3 Source DF Sum of Squares Mean Squares F Value Pr›F Model Error Total 5 4 9 45.8569 19.962 9.326 6.23 7.263 ‹0.0005 64