Presentación de PowerPoint

1º FORO DE COLABORACIÓN PÚBLICO-PRIVADA EN SANIDAD ANIMAL
Sector Porcino
SGIT-INIA
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
13 de Noviembre de 2012
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Grupos de investigación (porcino):
• Inmunología porcina:
F. Alonso, J. Domínguez, A. Ezquerra, G. del Real, C. Revilla
• Biotecnología y Biología Molecular y Celular
R. Blasco, J.C. Saiz
• Biotecnología de virus animales
C. Alonso, J. M. Escribano
Spin off
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Modelos víricos (porcino):
 Virus de la estomatitis vesicular
 Virus de la fiebre aftosa
 Virus de la peste porcina africana
 Virus de la peste porcina clásica
 Virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino
 Virus de la gripe
 Enterovirus porcinos
 Virus de la hepatitis E
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
 Desarrollo de:
 Vectores virales
 Adyuvantes
 Biofactorias
 Vacunas
 Sistemas de detección (serológica y genómica)
 Ac Monoclonales
 Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador)
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
 Vectores virales:
Mejora de sistemas de expresión
Baculovirus
• Hasta 8 veces más producción
• Mejor expressión y secrección
Vaccinia
HindIII
EcoRI
YFG
My HIS
c
pRB21-Myc-His
Amp
199k
Da
116
kDa
97
kDa
54
kDa
37
kDa
Coomassie
Suero porcino
(IgG)
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
 Biofactorias
• IBES® = Improved Baculovirus Expression System
1,000 mg/L  IBES® + Top-Bac®
400 mg/L
100 mg/L
 Top-Bac®
 Conventional Bac
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
 Adyuvantes
 Direccionamiento
Uso de ligandos específicos como adyuvantes para el
direccionamiento de antígenos a células de SI
Nanopartículas de transporte dirigido para vacunas
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
 Adyuvantes
 Direccionamiento
Análisis de la capacidad inmunomoduladora
de citoquinas y quimioquinas
100 pfu
100
S
IRES
S
IRES
poly I:C
nAb
Pk
VPg
PBS
Cn
(1.335)
Survival (%)
5´NCR
75
Análisis de la capacidad
inmunomoduladora de regiones
genómicas no codificantes de
virus RNA
50
25
5´NCR
S
(470)
(403)
IRES
0
0
5
10
dpi
15
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
 Sistemas de detección (genómica y serológica)
Polimorfismos del gen Mx1 en cerdo Ibérico
Susceptibilidad a la infección por virus de Influenza porcina y PRRS
a
b
g
aa
ab
ag
bb
gg
N (%)
N (%)
N (%)
N (%)
N (%)
TORBISCAL
134 (87,6%)
_
19 (12,4%)
_
GUADYERBAS
27 (71,1%)
_
8 (21,1%)
_
3 (7,9%)
OTROS
139 (97,9%)
3 (2,1%)
_
0 (0%)
_
JABALÍ
55 (88,7%)
5 (8,1%)
_
2 (3,2%)
_
DUROC
32 (82,1%)
7 (17,9%)
_
0 (0%)
_
LANDRACE
13 (65,0%)
6 (31,6%)
_
1 (5%)
_
LARGE WHITE
21 (100%)
0 (0%)
_
0 (0%)
_
MEISHAN
16 (100%)
0 (0%)
_
0 (0%)
_
ZUMU
80 (100%)
0 (0%)
_
0 (0%)
_
450 (a,wt)
aa
IBÉRICO
422 450
ag
422 (g, D28)
gg
0 (0%)
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
 Sistemas de detección (serológica y genómica)
86 KDa
ELISA “casero”
(P/N)
8
6
4
50 KDa
2
37 KDa
0
0
1.2
1
1.0
3
4
5
6
7
8
Golden Standard (Ratio)
0.8
A495
2
0.6
0.4
SENSIBILIDAD
ESPECIFICIDAD
0.2
80
40
20
10
Antigen (ng/well)
5
2.5
Humano
Porcino
“Casero”
Humano
Porcino
96.4 %
100 %
100 %
96.9 %
comercial
96,4 %
88.2 %
75 %
83,3 %
Desarrollo, optimización y validación de inmunoensayos:
Especificidad y Sensibilidad
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
 Ac Monoclonales
Desarrollo y caracterización de anticuerpos
monoclonales para:
 el análisis del SI porcino, con énfasis en APC
2F8
BAC-ORF2
BAC-CONTROL
SIN INFECTAR
 Inmunoensayos y caracterizacion de
interacciones célula-virus
BAC-OR 2
4G11
BAC-Δ (1-111)
ORF2
BAC-Δ (1-111) ORF2
BAC-CONTROL
SIN INFECTAR
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
 Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador)
VPA
7 VIRAL FAMILIES (ENVELOPED & NON-ENVELOPED)
O
Vero
Log virus yield (PFU/ml)
OH
120
Cell viability (%)
100
80
BHK-21 8 h
60
BHK-21 25 h
Preinfection treatment
*
*
*
*
*
*
*
EMCVERAV SFV SINV VSV LCMV ASFV WNV USUV
Non-enveloped
Vero 8 h
40
12
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
Enveloped
Control
VPA
Post-infection treatment
*
*
*
*
*
*
*
EMCV ERAV SFV SINV VSV LCMV ASFV WNV USUV
Non-enveloped
Enveloped
Vero 25 h
20
0
0
0.1
1
10
VPA (mM)
100
1000
Inhibición de la multiplicación de virus con envuelta en
cultivo celular
DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA
Líneas de investigación (porcino):
 Antivirales (Interacción patógeno-célula hospedador)
•
Antivirales:
 Péptidos antivirales inhibidores: impiden el transporte de virus
• Estatinas: Inhiben el colesterol
• Antivirales de fuentes naturales:
• resveratrol y oxyresveratrol (complemento piensos)
(trans-2,3,4,5-tetrahydroxystilbenes)
Oxyresveratrol
Resveratrol