Estudio de aislados de Escherichia coli en laboratorio en el

CASO CLÍNICO
Estudio de aislados
de Escherichia coli en
laboratorio en el periodo
2000 a 2014
Los procesos entéricos en lechones producidos por
Escherichia coli representan una de las patologías
más comunes en la producción porcina actual. La
gravedad de los casos clínicos es muy variable y
depende de múltiples factores. En cualquier caso,
como parte del método para diagnosticar y facilitar
un tratamiento se encuentra el cultivo microbiológico, aislamiento y posterior elaboración de un antibiograma (figura 1).
En el periodo comprendido entre los años 2000 y
2014 se recibieron en el laboratorio INZAR, S.L.
624 muestras procedentes de 541 casos clínicos de
patología digestiva compatible con colibacilosis entérica, procedentes de 116 granjas ubicadas en distintas provincias de España y Portugal. De las muestras recibidas se efectuaron 425 antibiogramas.
En este artículo exponemos las características de los
aislados en cuanto a tipo de muestra, tipo de bacterias aisladas, recuento de colonias, tipo de animal de
procedencia y susceptibilidad in vitro a antibióticos.
Sergio Diago¹, Ana
Cristina Letosa²,
Alicia Benito²,
Blanca Bríngola²,
Jesús Letosa³, Carlos
Fernández¹
¹Servicio técnico
porcino INZAR, S.L.
²Servicio técnico
laboratorio INZAR,
S.L.
³Servicio técnico
porcino y
departamento de
Nutrición, INZAR,
S.L. Zaragoza
Imágenes cedidas por
los autores
MATERIAL Y MÉTODOS
Tipo de muestra
Las muestras procedieron de casos clínicos de procesos digestivos compatibles con colibacilosis (figu-
ra 2). En el estudio diferenciamos tres fases de edad
según el animal afectado: lechón de maternidad (1
a 21 días de vida), destetado (de 21 a 60 días de
vida) y engorde (a partir de 60 días de vida).
Las muestras recibidas en laboratorio fueron de
tres tipos:
■ Tipo 1: hisopo rectal con medio de crecimiento.
■ Tipo 2: heces recogidas a partir del animal vivo.
■ Tipo 3: porción de tramo de intestino delgado,
obtenido en necropsia (figura 3).
Las muestras fueron cultivadas en un tiempo inferior a 24 horas después de su recolección en granja.
En todos los casos el material llegó refrigerado a
laboratorio.
Cultivo
La siembra se efectúa según metodología microbiológica clásica en los medios agar sangre de carnero
al 5 % (Columbia Sheep Blood), agar EMB – Levine, TSN, agar XLD y SS.
El antibiograma se realizó cuando los cultivos fueron significativos en cuanto a pureza y recuento.
En los casos en que fue necesario se procedió a la
identificación de las colonias mediante el sistema
estandarizado API.
Tabla 1. Porcentaje de muestras según tipo y recuento de Escherichia coli.
%
UFC log10 E. coli no
hemolítico
UFC log10
E. coli hemolítico
UFC log10
todos
Hisopo rectal
14,7
-
-
-
Heces
36,4
7,7
8,3
8,0
Intestino
48,9
8,1
8,8
8,6
-
**
**
**
Tipo de muestra
p (t-student)
Tabla 2. Porcentaje de muestras y recuento de E. coli según se detecte
exclusivamente E. coli u otros microorganismos en las muestras analizadas.
Todos
(%)
UFC log
E. coli
Destete
(%)
Sólo E. coli
68,9
8,5
76
65
46
E. coli y 1 microorganismo más
24,7
8,2
21
23
41
E. coli y 2 microorganismos más
5,9
7,8
4
12
11
Nº microorganismos detectados
14 n SUIS Nº 119 Julio/Agosto 2015
Maternidad Engorde
(%)
(%)
Figura 1. Para diagnosticar y facilitar un tratamiento utilizamos el cultivo
microbiológico, aislamiento y posterior elaboración de un antibiograma.
CASO CLÍNICO
Antibiograma
Con la finalidad de conocer la susceptibilidad a los
antibióticos de la cepa aislada se empleó el método de difusión a partir de discos cargados con antibiótico con concentraciones basadas en las guías
elaboradas por la NCCLS (National Committee on
Clinical Laboratory Standard) y se procedió según
el método CLSI Kirby-Bauer MC Farland 0.5. La
lectura de los halos de inhibición fue interpretada
según las categorías para puntos de corte clínicos
establecidas por el NCCLS: sensible (S), intermedia
(I) o resistente (R).
RESULTADOS
Figura 2. Lechón compatible con colibacilosis.
Tipo de muestra
En la tabla 1 se indica porcentualmente el tipo de
muestra y el recuento bacteriano observado en placa.
Tipo de animal
Al analizar el tipo de animal de procedencia, se obtuvo un mayor número de muestras de animales en
el periodo de destete (70 %). Fueron inferiores las
muestras procedentes de lechones lactantes (12 %)
y engorde (18 %).
En los cultivos realizados se apreció un mayor
recuento bacteriano para Escherichia coli en las
muestras de animales en el periodo de destete (8,5
UFC log10) que en maternidad y engorde, (8,0 UFC
log10) y, en general, mayor recuento para las cepas
hemolíticas sobre las que no produjeron hemólisis
en la placa de cultivo.
Figura 3. Se recibieron muestras en laboratorio de tramos de intestino
delgado obtenido en necropsia.
Gérmenes estudiados
En la tabla 2 hacemos referencia al número de
microorganismos detectados en las pruebas efectuadas. Se analiza la presencia de Escherichia coli,
Salmonella spp., Streptococcus spp., Espiroquetas,
Clostridium perfringens e Isospora suis.
En más de un 30 % de las muestras se detectó otro
germen distinto de Escherichia coli y se apreció una
disminución en el recuento de colonias de E. coli al
detectarse otros microorganismos (tabla 3).
Al analizar los aislados de Escherichia coli según
la propiedad de producir hemólisis en placa se observó en un 15 % de los aislados la convivencia
en la misma muestra de cepas hemolíticas y no
hemolíticas (figura 4). En un 55 % de las muestras se aislaron cepas de E. coli hemolítico y en un
58 % no hemolítico. Es interesante destacar que
en las cepas de maternidad se aislaron con mayor
frecuencia cepas no hemolíticas (85 %) que hemolíticas (24 %).
Al estudiar el tipo de gérmenes detectados en las
muestras enviadas, los más frecuentes resultaron
Salmonella spp. (14 % en muestras procedentes
de engorde) y Streptococcus spp. (20 % en cepas
procedentes de maternidad y 14 % en engorde).
También se detectaron espiroquetas por observación directa al microscopio en un 19 % de las
Figura 4. Se evaluaron las diferencias según se trate de cepas con
hemólisis o no en placa.
Figura 5. Se registraron las resistencias y se midió el diámetro del halo de
inhibición observado in vitro de las cepas de E. coli aisladas en el estudio.
SUIS Nº 119 Julio/Agosto 2015 n 15
CASO CLÍNICO
muestras procedentes de engorde e Isospora suis
en un 4 % de las muestras procedentes de maternidad.
Se apreciaron algunas interacciones entre el tipo
de muestra y el agente aislado, como es el caso de
un mayor porcentaje de detectados para Isospora
suis en el caso de heces procedentes de maternidad
(9 %) o para Salmonella (19 %) y espiroquetas
(27 %) en heces de engorde. En estos casos la frecuencia de aislamiento es superior en heces que en
tramos de intestino delgado.
Se aislaron cepas de E. coli hemolítico con mayor
frecuencia cuando la muestra era un tramo de intestino delgado que en el caso de heces obtenidas
del lechón vivo.
Resultado de los antibiogramas
En las tablas 4 y 5 registramos las resistencias y diámetro del halo de inhibición (figura 5) observado
in vitro de las cepas de E. coli aisladas en el estudio
y evaluamos diferencias según se trate de cepas con
hemólisis o no en placa.
BIBLIOGRAFÍA
EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing), Breakpoint tables for interpretation of MICs and zone diameters
Version 3.1.
Fairbrother JM and Gyles CL, (2006). E. coli infections. In Diseases
of swine.
Straw BE, Zimmerman JJ, D. Allaire S, Taylor DJ, eds. Iowa State University Press. Ames, Iowa, USA. 9th edition. Chapter 38, pp 639-674.
Tabla 3. Porcentaje de microorganismos detectados sobre el total de muestras
analizadas, según tipo de muestra y animal.
E. coli no
hemolíticas
E. coli
hemolíticas
Salmonella spp.
Streptococcus
spp.
D
M
E
D
M
E
D
M
E
D
M
E
Hisopo
69
86
-
47
18
-
2
0
-
5
39
-
Heces
55
85
66
53
21
45
5
0
19
21
9
19
Intestino
49
83
44
69
42
61
3
0
5
1
8
5
Todos
54
85
58
62
24
51
3
0
14
7
20
14
Clostridium
perfringens
Espiroquetas
Conclusiones
Isospora suis
D
M
E
D
M
E
D
M
E
Hisopo
-
-
-
11
21
-
-
-
-
Heces
9
3
27
18
18
21
2
9
0
Intestino
8
0
5
6
33
27
0
0
0
Todos
7
1
19
10
22
23
0,5
4
0
A la hora de evaluar los resultados de laboratorio resulta de interés disponer de datos como
el recuento bacteriano, la presencia de otros
gérmenes en el cultivo o la determinación de
factores de virulencia como la hemólisis de las
cepas. Además, el resultado del antibiograma
asociado al cultivo supone una herramienta
técnica útil para racionalizar el empleo de los
antibióticos en la práctica clínica.
D (destete), M (maternidad), E (engorde)
Tabla 4. Porcentaje de cepas de E. coli resistentes a antibióticos, porcentaje con ausencia de inhibición
y diámetro de halo de inhibición obtenido según la técnica de difusión a partir de disco (método Kirby Bauer).
AMP
APR
CFT
COL
ENR
ESTR
F
GTM
MB
NEO
NFL
S + TMT
n
272
351
412
423
413
412
398
417
376
406
394
415
% cepas resistentes
97,1
64,7
11,4
3,1
32,3
70,9
9,5
33,1
23,1
38,2
18,8
80,7
% cepas ausencia
Inhibición
96,0
56,0
5,4
3,1
20,3
64,2
8,4
16,0
8,0
19,4
9,8
79,5
mm halo inhibición
0,6
9,2
23,7
15,4
17,6
4,5
22,8
13,4
20,1
12,0
18,7
4,9
E.S.
3,9
10,8
8,3
3,7
10,4
6,0
9,2
7,4
9,1
6,5
9,2
8,5
AMP (ampicilina10 µg ), APR (apramicina 15 µg), CFT (ceftiofur 30 µg), ENR (enrofloxacina10 µg), F (florfenicol 30 µg), GTM (gentamicina
10 µg), MB (marbofloxacina 5 µg), NEO (neomicina 30 UI), NFL (norfloxacina 5 UI), S + TMT (sulfamida + trimetroprim 1,25 µg + 23,75 µg)
Tabla 5. Porcentaje de cepas de E. coli según presenten o no hemólisis resistentes a antibióticos (método Kirby Bauer).
AMP
APR
CFT
COL
ENR
ESTR
F
GTM
MB
NEO
NFL
S + TMT
% de cepas resistentes
E. coli no hemolítico
98,5
57,6
15,5
3,7
33,6
76,2
11,0
34,3
23,9
33,5
19,9
87,2
E. coli hemolítico
95,7
71,2
7,0
2,4
29,9
63,9
7,7
31,4
22,1
42,0
17,0
74,0
p χ²
n.s.
**
**
n.s.
n.s.
**
n.s.
n.s.
n.s.
n.s.
n.s.
**
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