CENTRIFUGACIÓN

CENTRIFUGACIÓN
CENTRIFUGACIÓN
 Es el proceso por el cual se separan
partículas diluidas por medio de una fuerza
llamada centrifuga la cual hace que los
objetos de sometan a grandes velocidades
y de esta forma se puedan separar dichas
soluciones
Como se efectúa la centrifugación
 Para llevar a cabo el proceso de centrifugación se
debe tener una centrífuga que las hay de tres
tipos
 de baja velocidad, de sobremesa o clinica
 Centrifugas de alta velocidad
 Ultra centrifugas
Y estos tipos de centrifugas pueden tener dos tipos
de rotores:
 Rotores flotantes
 De Angulo fijo
 de rotores verticales.
Tipos de centrifugación
 Hay dos tipos de centrifugación para
separar partículas:
Centrifugación analítica
Centrifugación preparativa
Centrifugación analítica
Con la centrifugación analítica lo que se pretende es estimar
propiedades físicas de alguna partícula en concreto: sus
propiedades hidrodinámicas.
Para poder aplicar la tecnología de la centrifugación
analítica deben cumplirse una serie de requisitos:
·
Que se aplique a sustancias lo más puras posible, no a
grandes mezclas.
·
Que presenten una mayor capacidad de giro, en torno a
las 100.000 r.p.m.
·
En cuanto al tipo de rotores, se necesita que las paredes
del tubo se encuentren alineadas con las líneas de fuerza y
estén provistos de sistemas ópticos capaces de detectar la
sedimentación de la partícula en cada momento.
El objetivo de la centrifugación preparativa es
aislar partículas específicas.
Existen dos métodos de separación en
centrifugación preparativa:
A.- Centrifugación diferencial.
B.- Centrifugación en gradiente de densidad.
Centrifugación diferencial
 Es el método más común de separación, En este
método, el tubo de centrífuga se llena con una
mezcla uniforme. Tras la centrifugación se
obtienen dos fracciones: un pellet que contiene el
material sedimentado y un sobrenadante con el
material no sedimentado. El método es bastante
inespecífico, y a priori no se puede saber si la
partícula buscada quedará en el sobrenadante, en
el pellet o repartido entre ambos; sin embargo es
una técnica muy útil, sobre todo para aislamiento
de células y orgánulos subcelulares.
Centrifugación en gradiente de
densidad
Este método es algo más complicado que la centrifugación
diferencial, sin embargo presenta ventajas que compensan el
trabajo añadido. La técnica no solo permite la separación de
varios, si no todos, los componentes de la muestra, sino que
también permite realizar medidas analíticas.
El método de gradiente de densidad implica la utilización
de un soporte fluido, cuya densidad aumenta desde la zona
superior a la inferior. El gradiente se consigue con un soluto
preferiblemente de baja masa molecular en un solvente en el
que la muestra a analizar pueda ser suspendida. La muestra
se sitúa en la parte superior del gradiente como una fina
banda. La separación de los componentes de la muestra se
presenta como diferentes bandas o zonas.
Tipos de centrifugas
Pequeño tamaño.
Sin refrigeración.
Máxima velocidad: 5000 rpm.
Útil para partículas grandes (células,
precipitados de sales insolubles…)
Velocidad entre 18000 y 25000 rpm.
Refrigeradas, algunas con sistema de vacío.
Útiles en la separación de fracciones celulares.
Insuficientes para la separación de ribosomas, virus o
macromoléculas.
Velocidad: a partir de 50000 rpm.
Presentan sistemas auxiliares: sistemas de refrigeración,
sistemas de alto vacío.
2 tipos:
- Analíticas: obtención de datos precisos de propiedades de
sedimentación (s, PM).
-Preparativas: aislamiento de partículas de bajo S
(microsomas, virus, macromoléculas).