86498/86428 MonoclRH.Kphenotype - Bio-Rad

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ScanGel™
COOMBS Anti-IgG,-C3d
86431
48 Tarjetas
86432
1080 Tarjetas
GELES FORMULADOS CON UNA ANTIGLOBULINA
POLIESPECÍFICA
(FRACCIONES POLICLONAL Y MONOCLONAL
MÚRIDO)
Screening de Ac irregulares, pruebas cruzadas, test
directo con antiglobulina, fenotipos
IVD
Todos los productos fabricados y comercializados por la sociedad Bio-Rad
se hallan bajo un sistema de garantía de calidad desde la recepción de las
materias primas hasta la comercialización de los productos finales. Cada lote
de producto final se somete a un control de calidad y sólo se comercializa si está
en conformidad con los criterios de aceptación. El fabricante conserva la
documentación referente a la producción y al control de cada lote.
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I - UTILIZACIÓN Y PRINCIPIO DE LA PRUEBA
Esta tarjeta está estrictamente reservada para uso profesional e in vitro.
Designada para el estudio (detección e identificación) de los anticuerpos
irregulares antieritrocitarios, pruebas cruzadas, para la prueba directa de
antiglobulina (Coombs directa) y para el fenotipaje eritrocitario, el test
combina los principios de aglutinación y filtración en gel.
La reacción se obtiene y se lee tras la centrifugación de unos microtubos
especialmente diseñados, rellenos de gel impregnados del reactivo antiglobulina.
La suspensión de glóbulos rojos y, si es necesario, el suero o el plasma se
depositan en el pocillo de los microtubos que se centrifugan
inmediatamente o después (según la prueba) de un periodo de incubación.
Los glóbulos rojos no aglutinados se depositan en el fondo del microtubo,
mientras que los aglutinados se retienen por todo el gel en función de su
tamaño. Su posición en el gel determina la intensidad de la reacción.
-
+
++
+++
++++
La capacidad del gel para separar los glóbulos rojos del suero o del plasma
elimina la fase de lavado obligatoria en las técnicas convencionales.
II - CARACTERÍSTICAS DE LOS REACTIVOS
Los microtubos de la tarjeta ScanGel COOMBS Anti-IgG,-C3d contienen un
gel impregnado con un reactivo antiglobulina poliespecífica (AHG). La
fracción anti-IgG se prepara con sueros de cabras hiperinmunizadas. La
fracción anticomplemento se prepara con una mezcla de sueros de cabras
hiperinmunizadas y un anticuerpo monoclonal murino de especificidad
anti-C3d producido a partir del clon 053A714.
Este reactivo contiene azida sódica (< 0,1 %) como conservante.
El código del producto y el número de paneles por caja se indican en la
etiqueta de la caja.
III - CADUCIDAD Y CONSERVACIÓN
La fecha de caducidad y las condiciones de almacenamiento se indican en
la caja.
Los tarjetas deben conservarse a temperatura ambiente, de +15°C a +25°C.
Las tarjetas deben almacenarse verticalmente, protegidas de las fuentes de
calor, en un local con escasas variaciones de temperatura y humedad.
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IV - PRECAUCIONES
La calidad de los resultados depende del respeto de las buenas prácticas
de laboratorio siguientes :
• No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta.
• No utilizar tarjetas que muestren signos de desecación o burbujas, o si la
lengüeta de sellado muestra signos de deterioro o está parcialente retirada.
• Es indispensable tomar las precauciones necesarias para no
provocar contaminaciones inter-microtubos, especialmente en las
etapas de distribución.
• Utilizar una punta de pipeta para cada muestra, cada reactivo y cada vial de celulas.
• Comprobar la precisión y el correcto funcionamiento de las pipetas y de
los otros equipos.
• Llevar guantes y gafas de protección durante la manipulación de los
reactivos y de las muestras.
• No pipetear directamente con la boca.
• Evitar las salpicaduras. En caso de salpicaduras, limpiar las superficies
manchadas con lejía de 12ºCl diluida al 10% y secar con papel
absorbente. El material utilizado para la limpieza deberá ser desechado en
un contenedor especial para residuos contaminados.
• Producto y fungible que hayan estado en contacto con muestras o
reactivos que contenga material de origen humano deben ser descartados
una vez descontaminados.
• Las fichas de seguridad están disponibles bajo petición.
V - RECOGIDA Y TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS
La sangre debe obtenerse en condiciones de asepsia en un tubo sin o con
anticoagulante (EDTA, CPD). Para la prueba directa de antiglobulina (Coombs directa),
se recomienda el uso de un anticoagulante (EDTA) en la obtención de la muestra.
Tras la obtención, la prueba debe realizarse lo antes posible. Las muestras
que no puedan analizarse rápidamente deberán conservarse entre +2 °C y +8
°C para ser sometidas a prueba en las 48 horas siguientes. Esta conservación
en nevera no se aplicará a las muestras obtenidas en tubos secos en las que
vaya a realizarse la prueba directa de antiglobulina (Coombs directa).
En ningún caso debe observarse hemólisis.
No calentar las muestras.
VI - TÉCNICAS
Material suministrado
• Tarjetas ScanGel COOMBS Anti-IgG,C3d
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Material necesario pero no suministrado
• ScanLiss : medio de suspensión de los glóbulos rojos
86441 ScanLiss 100 ml
86442 ScanLiss 500 ml
• IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos
86745 IH QC 4 x 6 ml
• Centrífuga : ScanGel Centrifuge
• Incubador : ScanGel Incubator
• Pipetas automáticas o semiautomáticas
• Puntas de pipetas
• Tubos de un solo uso
• Contenedor especial para residuos con riesgo biológico
• Lejía
• Guantes de látex
• Papel absorbente
• Gafas de protección
1. Detección e identificación de los anticuerpos irregulares
antieritrocitarios
Controles
• Se recomienda efectuar en paralelo un autocontrol para cada prueba
(suero o plasma y glóbulos rojos del paciente).
• Controles positivo (suero conocido que contenga al menos un anticuerpo
que se detecte con prueba indirecta de antiglobulina) y negativo (suero
conocido que no contenga ningún anticuerpo), IH QC : Control de
serología de grupos sanguíneos.
Reactivos necesarios pero no suministrados
• EryScan, ScanCell, ScanPanel : glóbulos rojos listos para usar, para la
detección y la identificación de los anticuerpos irregulares
antieritrocitarios (prueba indirecta de antiglobulina)
86597 EryScan 2 x 10 ml
86595 ScanCell 3 x 10 ml
86593 ScanPanel 10 x 3 ml
Procedimiento
Seguir estrictamente el protocolo propuesto.
Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente.
Por centrifugación, separar el suero o el plasma de los glóbulos rojos de la
muestra a probar.
Cuando la obtención se sangre se realiza en tubo seco, el suero se debe
volver a centrifugar a 1500 g durante 10 minutos.
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a) Preparación de una suspensión de glóbulos rojos cuando éstos no
están listos para usar
Autocontrol :
• Poner 1 ml de ScanLiss en un tubo de un solo uso identificado.
• Añadir 10 µl de glóbulos rojos de la muestra (autocontrol).
• Mezclar.
b) Técnica
1. Identificar cada tarjeta o la parte de la tarjeta (según el número de
glóbulos rojos test utilizados para la muestra) con el nombre o el número
de muestra correspondiente; en cada microtubo, identificar las celulas
que se distribuirá.
Retirar completamente la lengüeta de aluminio de las tarjetas.
Resuspender los hematíes anted de usar.
2. Distribuir 50 µl de cada suspensión de celulas listos para usar ScanCell o
ScanPanel o de la suspensión de glóbulos rojos preparada en 1- a) en el
pocillo de los microtubos apropiados.
3. Añadir inmediatamente 25 µl de suero o de plasma en el pocillo de los
microtubos correspondiente a la muestra ensayada. En ningún caso el
periodo de tiempo entre la distribución de los glóbulos rojos y la del
plasma o suero debe exceder los 10 minutos.
4. Incubar 15 minutos a +37°C en el ScanGel Incubator.
5. Centrifugar 10 minutos en ScanGel Centriguge.
6. Leer las reacciones.
2. Pruebas cruzadas
Controles
• Control positivo (suero conocido que contenga al menos un anticuerpo
que se detecte con prueba indirecta de antiglobulina) y negativo (suero
conocido que no contenga ningún anticuerpo), IH QC : Control de
serología de grupos sanguíneos.
Procedimiento
Seguir estrictamente el protocolo propuesto.
Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente.
Por centrifugación, separar el suero o el plasma de los glóbulos rojos de la
muestra a probar.
Cuando la obtención se sangre se realiza en tubo seco, el suero se debe
volver a centrifugar a 1500 g durante 10 minutos.
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a) Preparación de la (de las) suspensión(ones) de glóbulos rojos
(donante(s))
Para cada donante :
• Poner 1 ml de ScanLiss en un tubo de un solo uso identificado.
• Añadir 10 µl del precipitado globular (glóbulos rojos del donante).
• Mezclar.
• La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso.
b) Técnica
1. Identificar cada tarjeta o la parte de la tarjeta con el nombre o el número
del receptor y el número del o de los donantes correspondientes.
Retirar completamente la lengüeta de aluminio.
Resuspender los hematíes anted de usar.
2. Distribuir 50 µl de cada suspensión de glóbulos rojos en el pocillo de los
microtubos adecuados.
3. Añadir inmediatamente 25 µl de suero o de plasma del receptor en el
pocillo de los microtubos correspondientes. En ningún caso el periodo de
tiempo entre la distribución de la suspensión de glóbulos rojos y la del
suero o plasma debe exceder los 10 minutos.
4. Incubar 15 minutos a +37°C en el ScanGel Incubator.
5. Centrifugar 10 minutos en ScanGel Centrifuge.
6. Leer las reacciones.
3. Prueba directa de antiglobulina (Coombs directa)
Controles
• Controles positivo (glóbulos rojos sensibilizados por un anticuerpo de
naturaleza IgG conocida y/o por la fracción C 3d del complemento) y
negativo (glóbulos rojos no sensibilizados).
Procedimiento
Seguir estrictamente el protocolo propuesto.
Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente.
Por centrifugación, separar el suero o el plasma de los glóbulos rojos de la
muestra a probar.
a) Preparación de una suspensión de glóbulos rojos
Para cada muestra :
• Poner 1 ml de ScanLiss en un tubo de un solo uso identificado.
• Añadir 10 µl del precipitado globular de la muestra.
• Mezclar.
• La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso.
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b) Técnica
1. Identificar el panel con el nombre o el número de muestra correspondiente.
Retirar completamente la lengüeta de aluminio.
Resuspender los hematíes anted de usar.
2. Distribuir 50 µl de cada suspensión de glóbulos rojos en el pocillo de los
microtubos adecuados.
3. Centrifugar inmediatamente 10 minutos en ScanGel Centrifuge. El
retraso entre el final de la distribución y el principio de la centrifugación
no debe exceder los 10 minutos.
4. Leer las reacciones.
4. Fenotipaje eritrocitario
Controles
• Controles positivo y negativo : glóbulos rojos conocidos positivos y
negativos para el antígeno, ensayados simultáneamente con los glóbulos
rojos de la muestra, IH QC : Control de serología de grupos sanguíneos.
• Control de la muestra (únicamente glóbulos rojos de la muestra).
Reactivos necesario pero no suministrado
• Reactivos Bio-Rad correspondiente al antígeno estudiado.
Procedimiento
Seguir estrictamente el protocolo propuesto.
Antes de su utilización, llevar todos los reactivos a temperatura ambiente.
Por centrifugación, separar el plasma de los glóbulos rojos de la muestra a
probar.
a) Preparación de una suspensión de glóbulos rojos
Para cada muestra :
• Poner 1 ml de ScanLiss en un tubo de un solo uso identificado.
• Añadir 10 µl del precipitado globular de la muestra.
• Mezclar.
• La suspensión de glóbulos rojos está lista para su uso.
b) Técnica
1. Para cada muestra, identificar un microtubo con el nombre o el número
de muestra correspondiente e identificando el suero-test utilizado y un
microtubo con el nombre o el número de muestra (control muestra).
Retirar completamente la lengüeta de aluminio.
Resuspender los hematíes anted de usar.
2. Distribuir 50 µl de cada suspensión de glóbulos rojos en el pocillo de los
microtubos adecuados.
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3. Añadir inmediatamente 25 µl de suero-test en el pocillo de los
microtubos correspondientes (excepto en los microtubos que sirven de
control de la muestra). En ningún caso el periodo de tiempo entre la
distribución de los glóbulos rojos y la del suero-test debe exceder los 10
minutos.
4. Incubar 15 minutos a +37°C en el ScanGel Incubator.
5. Centrifugar 10 minutos en ScanGel Centrifuge.
6. Leer las reacciones.
VII - INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
• La presencia de aglutinados (en la superficie o dispersos en el gel) o de
hemólisis en un microtubo corresponde a un resultado positivo.
• Un sedimento de glóbulos rojos y la ausencia de hemólisis en el fondo del
microtubo corresponde a un resultado negativo.
• Los resultados sólo son válidos si los controles positivo y
negativo dan los resultados esperados.
1. Detección e identificación de los anticuerpos irregulares
antieritrocitarios
Un resultado negativo (ausencia de aglutinación y de hemólisis) en todos los
microtubos utilizados significa que el suero o el plasma ensayado no
contiene anticuerpos, correspondientes a los antígenos presentes en los
glóbulos rojos test, que se detecten con la técnica utilizada.
Un resultado positivo (aglutinación o hemólisis) en uno de los microtubos
utilizados prueba, por el contrario, la presencia de uno o varios anticuerpos
en el suero o en el plasma. Entonces se debe realizar la identificación de
ese o esos anticuerpos.
Un resultado positivo en el microtubo autocontrol puede indicar la
presencia de auto-anticuerpos. Si además del autocontrol, al menos uno de
los glóbulos rojos test está aglutinado, debe sospecharse de una mezcla
auto-anticuerpos/alo-anticuerpos.
Sólo pueden detectarse los anticuerpos correspondientes a los antígenos
presentes en los glóbulos rojos test.
En el marco de una identificación, el análisis comparado entre las
reacciones positivas y las reacciones negativas observadas con cada uno
de los glóbulos rojos test del panel utilizado permite caracterizar, con la
ficha de análisis adjunta al panel, la o las especificidad(es) de los
anticuerpos presentes en el suero (o plasma) ensayado.
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2. Pruebas cruzadas
Un resultado positivo (aglutinación o hemólisis) muestra la existencia de una
incompatibilidad entre el suero o el plasma del receptor y los glóbulos rojos
del donante.
3. Prueba directa de antiglobulina (Coombs directa)
Un resultado negativo indica la ausencia de IgG y de complemento en los
glóbulos rojos ensayados.
Un resultado positivo indica la presencia de IgG, de complemento o de los
dos en los glóbulos rojos ensayados.
4. Fenotipaje eritrocitario
Ver el prospecto del suero-test utilizado.
Los resultados únicamente son válidos si el control de la muestra
es negativo.
VIII - COMPORTAMIENTO
1. Detección e identificación de los anticuerpos irregulares
antieritrocitarios
La evaluación de las especificaciones realizada con 2516 muestras (1782
pacientes et 734 donantes) ha demostrado una reacción equilibrada entre
sensibilidad y especificidad.
Cada resultado ha sido comparado con el obtenido en técnica de
inmunoadherencia o filtración de gel.
La aplicación hace posible la detección de anti-RH1(D) humano en una
concentración igual a 20ng/ml.
La especificidad sobre un muestreo de pacientes sin seleccionar es del 99,8%.
Se ha ensayado la reproducibilidad de la aplicación y ha demostrado unas
buenas especificaciones tanto intra como interensayo.
2. Pruebas cruzadas
La evaluación de las especificaciones ha dado resultados concordantes con
el reactivo utilizado como referencia.
Cada resultado ha sido comparado con el obtenido en técnica de filtración
de gel.
Se ha ensayado la reproducibilidad de la aplicación y ha demostrado unas
buenas especificaciones tanto intra como interensayo.
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3. Prueba directa de antiglobulina (Coombs directa)
La evaluación de las especificaciones se ha realizado con 147 muestras
(recién nacidos y muestras procedentes de pacientes hospitalizados con
sospecha de anemia hemolítica auto-inmune).
Cada resultado ha sido comparado con el obtenido en técnica de tubo o
filtración de gel.
Los resultados obtenidos no muestran ninguna discordancia con la técnica
gel utilizada en paralelo.
Se ha ensayado la reproducibilidad de la aplicación y ha demostrado unas
buenas especificaciones tanto intra como interensayo.
4. Fenotipaje eritrocitario
Ver el prospecto del suero-test utilizado.
LÍMITES
Los resultados anormales pueden ser consecuencia de :
• una contaminación bacteriana o química del suero, del plasma, de los
glóbulos rojos o del material.
• una medicación o un estado patológico del paciente que provoque una
reacción cruzada.
• el uso de un medio de suspensión para los glóbulos rojos diferente al
recomendado.
• una preparación de los glóbulos rojos diferente a la recomendada.
• una resuspensión incompleta de los glóbulos rojos.
• una hemólisis de las muestras o de los glóbulos rojos problema.
• la presencia de fibrina (imagen de un sedimento celular compacto en el
fondo de un microtubo acompañado de una fina banda rosada en la zona
superior del gel correspondiente a los glóbulos rojos retenidos por los
residuos de fibrina).
• contaminación entre microtubos.
• uso de otro procedimeinto del descrito anteriormente.
“Con la licencia de DiaMed, S.A., 1785 Cressier-sur-Morat, Suiza.”
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IX - LITERATURE
1.
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Bio-Rad
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