INDICE DE PRÁCTICAS Recomendaciones Generales ……………………………………………………………………………………………….. 2 1. Reconociendo tu laboratorio de Biología ………………………………….…………………………………………….. 4 2. Construcción de un Microscopio Simple ………………………………………………………………………………… 11 3. Investigador Biológico…………………………………………………………………………………………………….... 19 4. Procarionta o Eucarionta …………………………………………………………………………….……………………. 25 5. Estructuras Celulares …………………………………………………………………………….……………………….… 30 6. Tonificando la Célula ………………………………………………………………………………………………………… 35 7. Propiedades de Glúcidos (Monosacáridos) …………………………………………………………………………..…. 40 8. ¿Todas las Plantas tienen Glucosa? …………………………………………………………………………………..…. 44 9. Desnaturalización de Proteínas ….......................................................................................................................... 48 10.Extracción de ADN ……………………………………………………………………………………………………….... 52 11.Huellas Dactilares …………………………………………………………………………………………………..……… 56 12.¿Y tú que especie eres? …………………………………………………………………………………………………. 60 1 RECOMENDACIONES GENERALES El laboratorio es el lugar de trabajo para la experimentación y por lo tanto, se requieren condiciones fundamentales como: disciplina, orden y limpieza; ya que con frecuencia se trabaja con microorganismos o productos que los contienen y que son capaces de producir enfermedades. En otras ocasiones, se utilizan reactivos corrosivos que pueden causar daño a la piel o a su ropa, por tales motivos la disciplina, el orden y la limpieza ofrecen mayores posibilidades de éxito en la experimentación. Por lo que es necesario cumplir con ciertos requisitos particulares: 1. Leer cuidadosamente el procedimiento a seguir y analizar cada uno de los pasos, antes de iniciar la práctica. 1. Usar bata de laboratorio durante el desarrollo de la práctica. 3. Poseer el manual de prácticas. 4. Llevar una franela por equipo para secar inmediatamente cualquier salpicadura de sustancias que se derramen. 5. Cerciorarse de tener el material completo para la experimentación. 6. Antes de usar los materiales y aparatos, deben limpiarse y secarse con cuidado y entregar material limpio. 2 7. Llevar individualmente una bitácora de hojas blancas para las anotaciones y una caja de colores para iluminar las observaciones. 8. Abstenerse de ingerir alimentos, bebidas y fumar dentro del laboratorio; chuparse los dedos o morderse las uñas. 9. No jugar con el instrumental y aparatos del laboratorio, ya que no están esterilizados y son materiales delicados y de precisión. 10.No conversar en voz alta, porque cualquier distracción ocasionará accidentes. 11.Si no sabes utilizar algún aparato o instrumento, consulta con el laboratorista o tu profesor. 12. Si te salpicas accidentalmente, lava la zona afectada con agua abundante. Si salpicas la mesa, límpiala con agua y sécala después con un paño. 13 .Fíjate en los signos de peligrosidad que aparecen en los frascos de los productos químicos. 3 PRÁCTICA N° 1 CONOCIENDO TU LABORATORIO DE BIOLOGÍA Propósito a) Identifica los riesgos a los que está expuesto durante su aprendizaje en el laboratorio de Biología; a su vez analiza los posibles inconvenientes y accidentes; b) Genera una actitud mental lógica y de control ante cualquier accidente y por sobre todas las cosas, Prevenir en lo posible todos los accidentes. Presentación El manejo sin riesgos de un laboratorio es responsabilidad directa de su maestro y laboratorista. Esta responsabilidad puede delegarse, reasignarse, abandonarse o ignorarse, pero cuando se produce un accidente vuelve siempre sin excepción a recaer en el encargado del laboratorio. Este último debe desarrollar y aplicar un programa de seguridad operativa que minimice con eficacia los riesgos francos inherentes al laboratorio para todos los que están expuestos directa o indirectamente a ellos. Los riesgos potenciales del laboratorio pueden referirse a materiales infecciosos, químicos o radioactivos y a las instalaciones físicas de la institución. En este resumen nos ocuparemos de los riesgos biológicos relacionados con la microbiología. Un buen programa de seguridad para un laboratorio debe abarcar consideraciones de almacenamiento, uso y eliminación de materiales riesgosos químicos, biológicos y radiactivos, operación y mantenimiento de las instalaciones, capacitación del personal y vigilancia médica. 4 Materiales y Recursos Computadora Cañón Manual de laboratorio Bitácora o cuaderno DESARROLLO Actividad A. 1. Mediante la proyección de diapositivas el maestro te mostrará el material que se encuentra dentro del laboratorio de Biología, para que nuevamente junto con tus compañeros y maestros logres identificar cada uno de los materiales y su función dentro de un laboratorio de biología. Desecador. Recipiente de vidrio que se utiliza para evitar que los solutos tomen humedad ambiental. En (2), donde hay una placa, se coloca el soluto y en (1) un deshidratante. Vasos de precipitado. Pueden ser de dos formas: altos o bajos. Sin graduar o graduados y nos dan un volumen aproximado (los vasos al tener mucha anchura nunca dan volúmenes precisos). Se pueden calentar (pero no directamente a la llama) con ayuda de una rejilla. Embudo de vidrio. Se emplea para trasvasar líquidos o disoluciones de un recipiente a otro y también para filtrar, en este caso se coloca un filtro de papel cónico o plegado. Buchner y Kitasato. El Buchner es un embudo de porcelana, tiene una placa filtrante de agujeros grandes por lo que se necesita colocar un papel de filtro circular, que acople perfectamente, para su uso. Se emplea para filtrar a presión reducida. 5 Cristalizador. Puede ser de forma baja o alta. Es un recipiente de vidrio donde al añadir una disolución se intenta que, en la mejores condiciones, el soluto cristalice. Filtro plegado. Se elabora con papel de filtro, sirve para filtrar, se coloca sobre el embudo de vidrio y el líquido atraviesa el papel por acción de la gravedad; el de pliegues presenta mayor superficie de contacto con la suspensión. Tubos de ensayo. Recipiente de vidrio, de volumen variable, normalmente pequeño. Sirven para hacer pequeños ensayos en el laboratorio. Se pueden calentar, con cuidado, directamente a la llama. Pipetas. Recipientes de vidrio para medir volúmenes, son de gran precisiónEn cuanto a la forma de medir el volumen, podemos distinguir entre: graduadas: sirven para poder medir cualquier volumen inferior al de su máxima capacidad. Vidio de reloj. Lámina de vidrio cóncavoconvexa que se emplea para pesar los sólidos y como recipiente para recoger un precipitado sólido de cualquier experiencia que se introducirá en un desecador o bien en una estufa. Embudos de decantación. Son de vidrio. Pueden ser cónicos o cilíndricos. Con llave de vidrio o de teflón. Se utilizan para separar líquidos, inmiscibles, de diferente densidad. Probeta. Recipiente de vidrio para medir volúmenes, su precisión es bastante aceptable, aunque por debajo de la pipeta. Las hay de capacidades muy diferentes: 10, 25, 50 y 100 ml. Buretas. Material de vidrio para medir volúmenes con toda precisión. Se emplea, especialmente, para valoraciones. Pueden ser: a) rectas. b) con depósito. c) de sobremesa con enrase automático. 6 Matraz Aforado. Material de vidrio para medir volúmenes con gran precisión. Existen de capacidades muy variadas: 5, 10, 25, 50, 100, 250, 500, 1.000 mI. Sólo mide el volumen que se indica en el matraz. No se puede calentar ni echar líquidos calientes. Frasco cuentagotas, con tetina. Normalmente se utilizan para contener disoluciones recién preparadas, se acompañan de cuentagotas para poder facilitar las reacciones de tipo cualitativo. Gradilla. Material de madera o metal (aluminio), con taladros en los cuales se introducen los tubos de ensayo. Erlenmeyer. Matraz de vidrio donde se pueden agitar disoluciones, calentarlas (usando rejillas), etc. Las graduaciones sirven para tener un volumen aproximado. En una valoración es el recipiente sobre el cual se vacía la bureta. Frascos lavadores. Recipientes en general de plástico (también pueden ser de vidrio), con tapón y un tubo fino y doblado, que se emplea para contener agua destilada o desionizada. Mortero con mano o mazo. Pueden ser de vidrio, ágata o porcelana. Se utilizan para triturar sólidos hasta volverlos polvo, también para triturar vegetales, añadir un disolvente adecuado y posteriormente extraer los pigmentos, etc. Escobilla y escobillón. Material fabricado con mechón de pelo natural, según el diámetro se utilizan para lavar: tubos de ensayo, buretas, vasos de precipitado, erlenmeyer, etc. Matraz. Instrumento de laboratorio que se utiliza, sobre todo, para contener y medir líquidos. Es un recipiente de vidrio de forma esférica o troncocónica con un cuello cilíndrico. 7 Crucigrama sobre material de laboratorio Instrucciones: completa el crucigrama anotando el material correspondiente a las funciones que se describen en la tabla de la siguiente página. 1 2 3 4 5 6 7 8 8 2. 4. Es un recipiente de vidrio donde al añadir una disolución se intenta que, en la mejores condiciones, el soluto cristalice. Instrumento de laboratorio que se utiliza, sobre todo, para contener y medir líquidos. Es un recipiente de vidrio de forma esférica o troncocónica con un cuello cilíndrico. 5. Se emplea para trasvasar líquidos o disoluciones de un recipiente a otro y también para filtrar, en este caso se coloca un filtro de papel cónico o plegado. 7. Material de madera o metal (aluminio), con taladros en los cuales se introducen los tubos de ensayo. 8. Material de vidrio para medir volúmenes con toda precisión. Se emplea, especialmente, para valoraciones. La llave sirve para regular el líquido de salida. 1. Matraz de vidrio donde se pueden agitar disoluciones, calentarlas (usando rejillas), etc. 3. Recipiente de vidrio para medir volúmenes, su precisión es bastante aceptable, aunque por debajo de la pipeta. Las hay de capacidades muy diferentes: 10, 25, 50 y 100 ml. 6. Recipientes de vidrio para medir volúmenes, son de gran precisión. Actividad B 1. Revisa en equipo la siguiente información, ya que es de gran importancia para la bioseguridad tuya y de tus compañeros. 2. Una vez realizada la lectura elabora un representador gráfico La generación de residuos o desechos, está determinada por la complejidad y la frecuencia de las actividades que se realizan durante el desarrollo de las prácticas en cada uno de los laboratorios, la eficiencia que alcancen en sus tareas los responsables (docentes) de realizar todas las acciones y de la metodología aplicada. Estos factores son útiles para evaluar la generación de residuos en cada práctica, además, son el punto de partida para el dimensionamiento del sistema de manejo. DESECHO BIOLÓGICO Son aquellos desechos o residuos generados en el diagnóstico, tratamiento, inmunización, producción o pruebas de productos biológicos, que alteran el proceso salud – enfermedad debido a que contienen microorganismos patógenos o que sus características físico – químicas pueden ser tóxicas para las personas que tengan contacto con ellos o alteren al Medio Ambiente. 9 Los desechos del laboratorio de Biología son depositados en recipientes debidamente marcados y/o bolsas con los códigos de colores respectivos de acuerdo con el tipo de residuo que se vaya a desechar. BOLSA ROJA •Desechos Anatomopatológicos BOLSA NEGRA: •Desechos ordinarios, comunes, no reciclables Color acorde a la clasificación Impermeables, material plástico. Livianas: facilitan transporte y manejo. Herméticas: con tapa. BOLSA BLANCA •Material recicable. _________________________________ Firma del estudiante FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ Tamaño adecuado, superficie interna lisa. ____________________________ Firma del profesor titular _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ 10 PRACTICA N° 2 CONSTRUCCIÓN DE UN MICROSCOPIO SIMPLE Propósito a) Construye un microscopio simple reproduciendo el modelo de Leeuwenhoek, estableciendo las relaciones que fueron observadas por este científico en el siglo XVII y las obtenidas en esta práctica. . b) Describe las partes del microscopio compuesto y su función en el estudio de la Biología Presentación El microscopio es un instrumento que te permite visitar las cosas muy pequeñas, aquellas que incluso no puedes ver a simple vista y cuya existencia se ignoraba hasta la invención de éste. Te invitamos a construir un sencillo microscopio que te permitirá investigar en el mundo del microcosmos. El microscopio que vamos a construir se puede dividir en cuatro partes: 1. La parte óptica 2. El aparato de enfoque 3. La estructura de soporte o portaplatina 4. El sistema de iluminación Nuestro microscopio se basa en uno muy antiguo inventado por un científico aficionado del siglo XVII llamado Anton van Leeuwenhoek. Como su antecesor, nuestro microscopio está basado en un sólo pero poderoso lente. ¿SABIAS QUE? Anton Van Leeuwenhoek era un simple vendedor de telas que utilizaba pequeñas perlas de cristal para examinarlas detalladamente. 11 RECURSOS Y CONTEXTO 1 Capilar con un diámetro 3-5 mm 1 Lamina de plástico flexible o de papel cascarón Mechero de alcohol Alfileres Cinta adhesiva Muestra de epidermis de cebolla Microscopio compuesto Portaobjetos y cubreobjetos DESARROLLO El desarrollo de esta práctica se realizará en dos sesiones dentro del laboratorio de biología, en la primera se llevará a cabo el diseño de un microscopio con esfera de vidrio, el cual se almacenará adecuadamente para ser utilizado en la siguiente sesión. Durante la segunda sesión se observaran muestras de epidermis de cebolla en el microscopio diseñado en el equipo y en el microscopio compuesto proporcionado por tu maestro de laboratorio, para la diferenciación tecnológica de ambos microscopios. PRIMERA SESIÓN Diseño experimental Fabricación del lente: 1. En un mechero de alcohol calienta la parte central de la varilla de vidrio, mientras la haces girar entre los dedos. Cuando el vidrio esté lo suficientemente caliente y blando, quitamos de la llama y estiramos con firmeza con ambas manos hasta obtener una varilla de unos 0.3 mm. 2. Rompe la varilla por el medio y acerca a la llama la varilla delgada. Observa que se produce una esferita. Déjala en la llama hasta que tenga un tamaño de 1.5 mm a 2 mm y retírala de la flama y espera a que se enfríe. Posteriormente rompe la varilla a unos 10mm de donde está la esfera y límpiala con alcohol y un papel suave que no deje residuos. ¡Ya tenemos la lente! 12 Construcción del microscopio: 1. Recortamos dos rectángulos de plástico flexible y hacemos un agujero en ellos con un alfiler. 2. Introducimos la lente en el orificio, entre los dos plásticos y los pegamos uno al otro con cinta adhesiva. 3. Sobre un portaobjetos realizamos una preparación de tejido vegetal y la visualizamos a través de nuestro microscopio acercando mucho la preparación y el ojo al microscopio. 13 ¿Cómo funciona? Desde el punto de vista de la óptica geométrica explicita el principio básico del funcionamiento del microscopio que construiste: _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _________________________________ Firma del estudiante FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ ____________________________ Firma del profesor titular _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ 14 SESIÓN 2 1. Saca con cuidado el microscopio que diseñaste la sesión pasada y al mismo tiempo pide al profesor un microscopio compuesto que tienen en el laboratorio. 2. Deposita un fragmento de membrana interna en un portaobjetos con unas gotas de agua y coloca el portaobjetos sobre la cubeta de tinción para que caiga en ella el agua y los colorantes. 3. Escurrir el agua, añadir una gotas de verde de metilo acético (o azul de metileno) sobre la membrana y dejar actuar durante 5 minutos aproximadamente. ¡No debe secarse la epidermis por falta de colorante o por evaporación del mismo!, bañar la epidermis con agua abundante hasta que no suelte colorante. 4. Observa la preparación a distintos aumentos, empezando por el más bajo. RESULTADOS 1. Dibuja y colorea las tres observaciones que realizaste. Edítalas indicando los nombres de lo que visualizaste (organelos) . 15 Observación en microscopio de esfera de vidrio. Observación microscopio compuesto 20X. Observación en microscopio compuesto 10X. Diferencias encontradas en las observaciones MICROSCOPIO ESFERA DE VIDRIO MICROSCOPIO COMPUESTO 16 DISCUSIÓN 1. ¿A qué se deben las diferencias encontradas en las observaciones de la muestra de la epidermis de cebolla? _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 2. ¿El funcionamiento de ambos microscopios es regido bajo el mismo principio? , Explica. _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ CONCLUSIONES: _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 17 FUENTES DE CONSULTA: Curtis, H. 2000. Biología, 6ta. Edición. Editorial Medica Panamericana. Karp, G. 1998. Biología celular y molecular. Primera edición en español. Editorial McGraw-Hill Interamericana. Lodish, H; Berk, A; Zipursky, S; Matsudira, P; Baltimore, D; Darnell, J. 2000. Biología cellular y molecular. Editorial Médica Panamericana. _________________________________ Firma del estudiante FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ ____________________________ Firma del profesor titular _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ 18 PRACTICA N° 3 Investigador Biológico PROPÓSITO: Formula los pasos del método científico a partir de la desintegración de un cascarón de huevo. PRINCIPIO En este experimento donde utilizas huevo en vinagre procederemos a explicitar e identificar los fenómenos físicos y químicos que suceden en dicha experiencia a través del método científico que consiste en la realización de una serie de procesos específicos que utiliza la Ciencia para adquirir conocimientos. Estos procesos son una serie de pasos o reglas bien definidos que permiten que al final de su realización se obtengan resultados confiables, dichos pasos son los siguientes: Observación y elección del problema a investigar: Se debe determinar concretamente qué es lo que se quiere conseguir para seguir los pasos adecuados. Formulación de hipótesis: Una hipótesis es una opinión o una suposición que da respuesta a una pregunta que se ha formulado. Pueden ser todas las hipótesis que uno quiera, y posteriormente deben ser confirmadas o rechazas. Experimentación: Para confirmar o rechazar las hipótesis se debe realizar numerosas pruebas o experimentos de cada una de ellas. Experimentar consiste en realizar o provocar un fenómeno con el fin de observarlo, medir variables, obtener datos, en condiciones controladas. Análisis de resultados: Una vez obtenidos todos los datos (en algunos casos se analizan realizando tablas, gráficos, etc) se comprueba si las hipótesis emitidas eran o no ciertas. Si haciendo varios experimentos similares se obtiene siempre la misma conclusión, se puede generalizar los resultados y emitir una teoría Un modelo es una representación simplificada de algún fenómeno, para poder entenderlo y explicarlo. 19 ¿Sabías que? Los huevos de las aves se encuentran protegidos por un cascarón que contiene un 94% de carbonato de calcio. En la parte interna está constituido de proteínas como por ejemplo la albúmina que se encuentra en la clara o parte blanca del huevo, además de lípidos de fácil digestión. MATERIAL Y REACTIVOS Huevo crudo de gallina Vinagre de caña o ácido acético. Vaso de precipitado de 250mL Vidrio de reloj DESARROLLO. Esta práctica se realizará en el laboratorio utilizando materiales de cocina, la cual se deberá dejar reaccionar por espacio de 2 a 3 días, período en el que los estudiantes tendrán que registrar sus datos. Además deberá resolver un problema donde de manera práctica aplicando el método científico. DISEÑO EXPERIMENTAL 1. En un vaso de precipitado agrega 150 mL de vinagre de caña, de tal forma que logre cubrir perfectamente bien el huevo de gallina. 2. Registra a través de esquemas o fotografías cómo se encuentra el huevo de gallina antes de sumergirlo al vinagre. 3. Toma el huevo de gallina y con mucho cuidado de no romperse sumérgelo al vaso de precipitado que contiene vinagre. 20 Déjalo ahí por espacio de dos a tres días. 4. Tapa el vaso de precipitado con un vidrio de reloj para evitar que el olor poco desagradable tanto del ácido acético que forma el vinagre como el acetato de calcio producido por la reacción salga al exterior. 5. Cada día tendrás que revisar y anotar tus observaciones. Puedes tomar fotografías o dibujarlas. NOTA: Si deseas llevar tu experimento a casa, tendrás que utilizar un frasco de vidrio con tapadera y monitorearlo cada día anotando tus registros. Anota tu hipótesis: Responde a la pregunta ¿Qué esperas que suceda? _____________________________________________________ _____________________________________________________ _____________________________________________________ _____________________________________________________ _____________________________________________________ _____________________________________________________ RESULTADOS Esquematiza tus resultados 21 DISCUSIÓN. Sustenta cada uno de los pasos del método científico a tu experimento. _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ CONCLUSIONES. _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 22 APLICACIÓN DEL MÉTODO CIENTÍFICO Robert Koch, en 1980, investigando las causas del carbunco, enfermedad en que la sangre se pone negra y mata al ganado, observó que en la sangre de los animales enfermos estaban siempre presentes unas bacterias en forma de bastón corto, a estas las aisló en medios de cultivo y posteriormente las inoculó a un grupo de ratas; a otro grupo similar solamente les inyectó solución salina; ambos grupos los mantuvo en las mismas condiciones de alimentación, agua, luz, temperatura y tiempo. Razona 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. ¿Cuál es el problema a resolver? ¿Qué variables o factores se relacionarían como causa – efecto? ¿Qué hipótesis plantearías para este problema? ¿Cuál grupo de ratas es el lote testigo? ¿Cuál es la variable independiente o factor diferente entre los grupos de ratas? Si el grupo de ratas inoculadas con bacterias se enfermara de carbunco ¿cuál sería tu conclusión? Si los dos grupos de ratas se enfermaran de carbunco ¿qué explicación darías a este hecho? Si los dos grupos de ratas se enfermaran ¿qué deducirías? _________________________________ Firma del estudiante FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ ____________________________ Firma del profesor titular _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ 23 FUENTES DE CONSULTA: Vargas Palomeque, Miguel; Gonzales Mendoza, Rossemary; Suplemento Técnico Científico, editado por El Diario, La Paz, Bolivia, 1993. Bolívar S, Rubén Darío; Gómez R., Miguel A., Biología Integrada, Editorial Voluntad S.A., Bogotá, Colombia, 1989. 24 PRACTICA N° 4 Procarionta o Eucarionta PROPÓSITO: Identifica y clasifica los tipos celulares a partir de muestras biológicas animales y vegetales. PRINCIPIO Las células se encuentran presentes en todos los seres vivos, este hecho para todos aceptado fue descubierto por Roberto Hooke en 1665, cuando observó delgadas láminas de corcho con un microscopio primitivo. Las células están envueltas por una membrana y presentan un fluido en su interior, conocido como citoplasma, fue Matthias Scheilden quién, en 1838, concluyó que los vegetales tenían como unidad funcional a las células; su contemporáneo Theodor Schwann llegó a la misma conclusión para los animales en 1858. Los organismos procariontes y eucariontes tienen diferencias significativas en su estructura celular. Por ejemplo, las bacterias no tienen organelos membranosos como los eucariontes, sin embargo sus funciones son prácticamente las mismas. La forma y el tamaño varía de acuerdo a los organismos y la función que desempeña el tejido celular. Por ejemplo: los óvulos son células que miden un milímetro, las bacterias miden 5 micras, las células vegetales pueden medir hasta 100 micras. ¿Por qué todas las células son microscópicas? Existe una relación de área – volumen en las células, cuando las células crecen también aumenta el tamaño del área de la superficie al igual que su volumen, pero la superficie tan rápido como su volumen y la célula tiende a dividirse. MATERIAL Y REACTIVOS Microscopio compuesto Porta objetos y cubre objetos. Bisturí Frasco gotero con agua hervida Caja de Petri Reactivo de Mezler Aceite de inmersión Lombriz de tierra Moho de tortilla Leche agria Queso fermentado Agua de estanque Cebolla, jitomate y cilantro Azul lactofenol Rojo congo Verde de malaquita 25 DISEÑO EXPERIMENTAL 1. Preparar cortes delgados de la epidermis de la lombriz de tierra y colocarlos sobre tres portaobjetos, al primer porta objetos agregue una gota de azul lacto fenol, al segundo rojo de congo y al tercero verde malaquita. 2. Hacer el mismo proceso con el moho (filamentos) en tres porta objetos, agregue una gota de reactivo de mezler y déjelo reaccionar por 10 min. y observe al microscopio. 3. Hacer cortes delgados con los tejidos vegetales, en tres repeticiones cada uno. Agregue una gota de colorantes como se especifica en el paso 1. 4. Con un gotero limpio, tomar un poco de leche agria y hacer tres preparaciones. A cada preparación agregue una gota de colorantes como se muestra en el paso 1. 5. Tomar un poco del agua de estanque y elaborar tres preparaciones. A cada preparación agregue una gota de colorantes como las muestras anteriores. 6. Observar cada una de las preparaciones con el objetivo de 10x y si es necesario cambiar con el de 40x, una vez que se haya enfocado con el de 10x. 7. Para ver la bacteria en el queso fermentado, tomar solo un poco de la nata amarilla que está en la superficie y elaborar tres preparaciones. 8. Para poder observar las bacterias, es necesario utilizar el objetivo de 100x, no sin antes agregar una gota de aceite de inmersión sobre el cubre objetos para su visualización. Anota tu hipótesis: Responde a la pregunta ¿Qué esperas que suceda? _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ _______________________________________________________________ 26 RESULTADOS Esquematiza y edita tus fotografías de las 12 muestras observadas indicando el tipo de célula que es. 27 DISCUSIÓN. 1. ¿Cómo lograste identificar y clasificar una célula eucariota de una célula procariota? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ 2. ¿Cuál es la función de los colorantes? _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ CONCLUSIONES. _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 28 _________________________________ Firma del estudiante FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ ____________________________ Firma del profesor titular _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ FUENTES DE CONSULTA: Vargas Palomeque, Miguel; Gonzales Mendoza, Rossemary; Suplemento Técnico Científico, editado por El Diario, La Paz, Bolivia, 1993. Bolívar S, Rubén Darío; Gómez R., Miguel A., Biología Integrada, Editorial Voluntad S.A., Bogotá, Colombia, 1989. 29 PRACTICA N° 5 ESTRUCTURAS CELULARES PROPÓSITO: identifica las principales estructuras celulares y su función dentro de la célula. PRESENTACIÓN La célula es el factor anatómico común a todos los organismos vivos, pero aunque los seres vivos están formados por células, no todos se encuentran constituidos de la misma manera. En términos generales, se distinguen dos tipos de células, las vegetales y animales. Que además, de contener los organelos celulares comunes a todos los seres vivos, tienen ciertas características exclusivas. La célula vegetal, además, de poseer casi los mismos organelos que la célula animal, presenta dos componentes esenciales: a) una capa externa resistente, formada por celulosa, localizada por fuera de la membrana plasmática y se llama pared celular; esta capa tiene la función de dar resistencia y protección a la célula vegetal. b) los cloroplastos, que son organelos membranosos; estos contienen clorofila y llevan a cabo la función de la fotosíntesis. Las células vegetales también presentan otros tipos de plastos, los cromoplastos contienen diferentes tipos de pigmentos que dan color a las hojas, flores y frutos. MATERIALES Y REACTIVOS Microscopio 3 portaobjetos y cubreobjetos Papel filtro Verde de metilo Lugol 1/4 de bulbo de cebolla 1/4 de jitomate fresco 1/4 de papa Una naranja 50 ml de agua DESARROLLO 1. Corta un fragmento de cebolla y desprende con la uña la epidermis, que es la tela delgada y transparente de la superficie. 2. Coloca una gota de agua sobre el portaobjetos y sobre ella extiende la epidermis. Cubre la muestra y obsérvala al microscopio con el objetivo de 10X o 20X. 3. Quita el cubreobjetos de la muestra, seca con papel filtro el agua y agrega una gota de lugol. Cubre la muestra y 30 obsérvala al microscopio con el objetivo de 10X o 20X. 4. Coloca otro fragmento de epidermis de cebolla y agrega una o dos gotas de verde de metilo, observa con el objetivo de 10X y posteriormente con el objetivo de 40X. 5. Corta un pequeño fragmento de jitomate. Con la uña desprende una porción delgada de epidermis. Colócalo sobre otro portaobjetos; añade una gota de agua y cúbrela. 6. Observa al microscopio con el objetivo 10X o 20X. 7. Corta la papa a la mitad, raspa ligeramente la pulpa de la parte fresca de la papa con la navaja hasta obtener una masa blanquecina. Coloca una pequeña porción sobre un portaobjetos; añade una gota de lugol. Cúbrela y observa al microscopio. Observa los leucoplastos teñidos de color muy oscuro o morado. Elabora un esquema de las estructuras observadas. 8. De un gajo de naranja, desmenúzalo y toma una o dos lagrimitas que forman el gajo de la naranja, colócalo entre dos portaobjetos y oprímelos para que se revientes, retira el portaobjetos superior y cúbrelo con el cubreobjetos. 9. Observa las vacuolas de las células de la naranja. DISCUSIÓN 1. ¿Qué función realiza el núcleo? ____________________________________________________________________________________________________ 2. ¿Cómo se llaman a las estructuras celulares que dan color a las flores o frutos? ____________________________________________________________________________________________________ 3. ¿Qué estructuras celulares están encargadas del almacenamiento de sustancias? _____________________________________________________________________________________________________ 4. Escribe la función y la importancia que representan los cloroplastos. ____________________________________________________________________________________________________ ____________________________________________________________________________________________________ 31 CONCLUSIÓN: _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ ESQUEMAS DE LAS OBSERVACIONES 32 _________________________________ Firma del estudiante FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ ____________________________ Firma del profesor titular _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ 33 FUENTES DE CONSULTA: Vargas Palomeque, Miguel; Gonzales Mendoza, Rossemary; Suplemento Técnico Científico, editado por El Diario, La Paz, Bolivia, 1993. Bolívar S, Rubén Darío; Gómez R., Miguel A., Biología Integrada, Editorial Voluntad S.A., Bogotá, Colombia, 1989. 34 PRACTICA N° 6 TONIFICANDO LA CÉLULA PROPÓSITO: identifica las minerales que se encuentran en la leche para que determines el valor biológico que representa en la célula. PRESENTACIÓN Además del agua existen otras biomoléculas inorgánicas como las sales minerales. En función de su solubilidad en agua se distinguen dos tipos: insolubles y solubles en agua. 1. Sales insolubles en agua. Forman estructuras sólidas, que suelen tener función de sostén o protectora, como: Esqueleto interno de vertebrados, conformado por fosfatos, cloruros, y carbonatos de calcio. Caparazones de carbonato cálcico de crustáceos y moluscos. Endurecimiento de células vegetales, como en gramíneas (impregnación con sílice). Otolitos del oído interno, formados por cristales de carbonato cálcico (equilibrio). 2. Sales solubles en agua. Se encuentran disociadas en sus iones (aniones y cationes), son los responsables de actividad biológica. Desempeñan las siguientes funciones: Funciones catalíticas. Algunos iones, como el Cu+, Mn++, Mg++, Zn ++, entre otros, actúan como cofactores enzimáticos o tienen funciones osmóticas. Intervienen en los procesos relacionados con la distribución de agua entre el interior celular y el medio donde vive esa célula. Los iones de Na +, K+, Cl- y Ca++, participan en la generación de gradientes electroquímicos, imprescindibles en el mantenimiento del potencial de membrana y del potencial de acción y en la sinapsis neuronal. Función taponadora. Se lleva a cabo por los sistemas carbonato-bicarbonato, y también por el monofosfato-bifosfato. Los iones de mayor importancia biológica son: Cationes: Na+, K+, Mg++, NH4+, Zn++, Fe++, Fe3+, Cu+, Cu++ y Mn++. Entre los aniones se encuentran: Cl-, CO-3, HCO-3, PO-4, PO4H=, PO4H =, SO4=, NO3-, I- y SiO4=. 35 RECURSOS Vaso de precipitado Matraz o probeta Embudos con papel de filtro Pinzas para calentar tubos Mechero Leche Ácido nítrico Solución molibdato amónico al 1% . Solución de nitrato de plata al 1%. Solución de oxalato amónico al 1%. Ácido acético PROCEDIMIENTO El desarrollo de esta práctica se realizará dentro del laboratorio de biología. DISEÑO EXPERIMENTAL Preparación de la muestra. 1. Para determinar la presencia de sales es interesante utilizar Para conseguirlo, podemos realizar esta sencilla receta: Coloca en un vaso de precipitado unos 250 cc. de leche. Añade unas gotas de ácido acético y esperar unos minutos. FIGURA 1 Cuando se forme el cuajo, filtra con papel, para obtener el suero. FIGURA 2 el suero de leche. 36 Recoger el filtrado en un matraz o probeta. FIGURA 3 FIGURA 1 FIGURA 2 FIGURA 3 2. Preparar una gradilla con tres tubos de ensayo. 3. En cada tubo de ensayo poner unos 3cc. de suero de leche. FIGURA 4 4. Numerar los tubos con 1, 2 y 3. FIGURA 5 FIGURA 4 FIGURA 5 5. Al tubo de ensayo número 1, añadir 1cc. de solución de nitrato de plata. 6. Al tubo de ensayo número 2, añadir 2cc. de solución de molibdato amónico al 1%, tratado con ácido nítrico concentrado en cantidad suficiente para que el ácido molíbdico que se forma se redisuelva. Calentar el tubo al baño María. 7. Al tubo de ensayo número 3 unas 10 gotas de solución de oxalato amónico al 1%. 37 DISCUSIÓN 1. Describe los cambios obtenidos en cada uno de los tubos de la muestra al agregarles las sales. N° DE TUBO CAMBIOS OBSERVADOS 2. A que se le atribuye los cambios observados en los tubos. _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 3. ¿Cuál es la importancia Biológica de los Minerales que se encuentran en los alimentos? _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 38 _________________________________ Firma del estudiante ____________________________ Firma del profesor titular FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ 39 PRACTICA N° 7 PROPIEDADES DE GLUCIDOS (MONOSACÁRIDOS) PROPÓSITO: Identifica las principales propiedades químicas y físicas de los glúcidos (monosacáridos). PRESENTACIÓN Los glúcidos son biomoléculas de sabor dulce, solubles en agua, sólidos, blancos y cristalinos. Son compuestos ternarios por contener: Carbono (C), Hidrógeno (H) y Oxígeno (O). Los compuestos orgánicos pertenecientes al grupo de los glúcidos o carbohidratos, conocidos como monosacáridos, presentan propiedades químicas altamente reductoras, que se atribuyen a uno de los grupos funcionales de la molécula o sea al radical aldehído, el cual reduce algunos óxidos metálicos, como el cobre, bismuto y mercurio en solución alcalina. De acuerdo con el número de carbonos en su molécula, se les llama diosas (2 átomos), triosas (3 átomos), tetrosas (4 átomos), pentosas (5 átomos), hexosas (6 átomos), etc. Los monosacáridos más importantes desde el punto de vista biológico son las pentosas y las hexosas, ya que las pentosas como la Ribosa y Desoxirribosa forman parte fundamental de los ácidos nucléicos; y las hexosas como la glucosa, es importante en el metabolismo de las células animales, ya que de ella se obtiene una gran parte de la energía metabólica necesaria para que funcionen las células y por ende los seres vivos. Se Encargan de proporcionar la energía a la célula para la realización de sus funciones. Se le puede encontrar en las tortillas, miel, pan, papas, plátanos, mermeladas, pastas, etc. Los glúcidos que el cuerpo no utiliza, son transformados en grasas y se almacenan como producto de reserva. MATERIALES Y REACTIVOS . Tubos de ensayo Baño maría Mechero bunsen Pipeta Soporte universal Reactivo de Benedict Reactivo de Fehling A y B Rel. 2:1 Bebida comercial hidratante (Getorade o Enerplex Solución de glucosa o dextrosa a 0.1 % 40 DESARROLLO A) 1. Toma 4 tubos de ensayo, numéralos del 1 al 4 2. Coloca en cada uno de los tubos, 2 ml del reactivo de Benedict. 3. Adiciona en el tubo No. 2, una gota de la solución de glucosa; en el tubo No. 3, agrega tres gotas y en el tubo No. 4, adiciona 5 gotas. 4. Procede a calentar los 4 tubos en baño maría durante 5 minutos y observa lo que sucede en cada uno de los 4 tubos. 5. Repite la operación con la bebida hidratante o jugo natural. B) 1. Toma 4 tubos de ensayo, numéralos del 1 al 4. 2. Coloca en cada uno de los tubos, 1 ml del reactivo de Fehling. 3. Adiciona en el tubo No. 2, una gota de la solución de glucosa; en el tubo No. 3, agrega tres gotas y en el tubo No. 4, adiciona 5 gotas. 4. Procede a calentar los 4 tubos en baño maría durante 5 minutos y observa lo que sucede en cada tubo. 5. Repite la operación con la bebida hidratante. DISCUSIÓN 1. Menciona por qué son importantes los carbohidratos. _________________________________________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________________________________ 2. Investiga y anota cinco carbohidratos que se encuentren en las plantas. _________________________________________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________________________________ 3. Escribe el nombre de cinco monosacáridos. _________________________________________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________________________________ 41 4. Describe si encontraste glucosa en las bebidas hidratantes. _________________________________________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________________________________ 5. Relaciona ambas columnas correctamente. ( ) Elementos que entran en la composición de los carbohidratos 1. CELULOSA ( ) Sustancias en los que se transforman los carbohidratos que el cuerpo no utiliza 2. HIDRATOS DE CARBONO ( ( ) Sinónimo de los Carbohidratos ) Disacárido formado por una molécula de glucosa y otra de fructosa ( ) Es un ejemplo de un polisacárido 3. AZUCAR DE MESA 4. C, H, O 5. QUITINA 6. GRASAS Observaciones 42 CONCLUSIONES: ___________________________________________________________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________________________________________________________ _________________________________ Firma del estudiante FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ ____________________________ Firma del profesor titular _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ 43 PRACTICA N° 8 ¿Todas las plantas tienen glucosa? Propósito: Identifica y describe la función de la glucosa en los organismos vegetales. PRINCIPIO El sol es la fuente principal de energía en el planeta. Todos los organismos recibimos la energía de esta fuente ya sea directa o indirectamente. Las plantas la absorben en un proceso denominado fotosíntesis. Las hojas de los árboles disponen del bióxido de carbono para formar glucosa, la cual está compuesta por seis átomos de carbono, doce de hidrógeno y seis de oxígeno; su fórmula es C6H12O6. MATERIAL Y REACTIVOS Hojas de diferentes tipos Solución de Benedict Mortero Arena Oradador Mechero Bunsen. Matraz de 250 mL Tres tubos de ensayo Alcohol del 96° DISEÑO EXPERIMENTAL 1. 2. 3. 4. 5. Colecta varias hojas de plantas que se encuentres expuestas a la luz. Tritura las hojas con un poco de arena en un mortero. Toma los extractos y agrega disolución de Benedict. Observa lo que sucede y realiza tus anotaciones en la siguiente tabla. Con ayuda de un oradador corta las hojas de las plantas que han estado en la luz durante varias horas, de tal forma que tengas diversos discos. Anota tu hipótesis: Responde a la pregunta ¿Qué esperas que suceda? ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 44 6. Coloca los discos de las hojas en un vaso de precipitados con agua hirviendo durante dos minutos para matar a las células. 7. Apaga el mechero Bunsen. 8. Saca los discos del vaso y colócalos dentro de un tubo de ensayo que contenga el alcohol hasta una cuarta parte. 9. Calienta el tubo de ensayo en baño de agua durante tres minutos. 10. Observa y describe los cambios en las hojas. 11. Vierte el alcohol en el recipiente que te dan y aclara los discos con el agua para que se ablanden. 12. Coloca los discos sobre una capa blanca y cúbrelos con gotas de yodo ¿Qué tipo de sustancias están investigando? RESULTADOS Tipo de hoja Color producido con la disolución de Benedict Presencia de glucosa 1. 2. 3. 4. 5. 45 Piensa y discute 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. ¿Encontraste glucosa en todas las muestras? ¿Qué fue lo que sucedió? ¿Han sido incapaces de fabricar glucosa estas hojas? ¿Han fabricado tal vez otro tipo de sustancia? ¿Qué color toma el alcohol ¿ De qué color son los discos de las hojas? ¿Qué ha producido el alcohol en los discos de las hojas El almidón está formado por moléculas de glucosa unidas unas a otras ¿De qué color han quedado los discos? ¿Qué nos indica esto? 8. El almidón puede romperse dando glucosa, si ciertas enzimas actúan ¿Puede suceder también lo contrario? 9. ¿Puede la glucosa transformarse en almidón? CONCLUSIONES _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 46 _________________________________ Firma del estudiante FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ ____________________________ Firma del profesor titular _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ FUENTES DE CONSULTA: Vargas Palomeque, Miguel; Gonzales Mendoza, Rossemary; Suplemento Técnico Científico, editado por El Diario, La Paz, Bolivia, 1993. Bolívar S, Rubén Darío; Gómez R., Miguel A., Biología Integrada, Editorial Voluntad S.A., Bogotá, Colombia, 1989. 47 PRACTICA N° 9 Desnaturalizando proteínas Propósito: Describe el proceso de desnaturalización de proteínas como un factor que afecta la actividad enzimática. PRINCIPIO Desnaturalización de las proteínas Coagulación de Proteínas Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70:C o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc. La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes indicados, que al actuar sobre la proteína la desordenan por la destrucción de su estructura terciaria y cuaternaria Las cadenas de proteínas que hay en la clara de huevo se encuentran enrolladas adoptando una forma esférica. Se denominan proteínas globulares. Al freír o cocer un huevo, el calor hace que las cadenas de proteína se desenrollen y se formen enlaces que unen unas cadenas con otras. Este cambio de estructura da a la clara de huevo la consistencia y color Las cadenas de proteínas que hay en la clara de huevo se encuentran enrolladas adoptando una forma esférica. Se denominan proteínas globulares. Al freír o cocer un huevo, el calor hace que las cadenas de proteína se desenrollen y se formen enlaces que unen unas cadenas con otras. Este cambio de estructura da a la clara de huevo la consistencia y color que se observa en un huevo cocinado. Este proceso que se conoce con el nombre de desnaturalización se puede producir de muy diversas maneras : Por medio de agentes químicos como alcohol, sal, acetona, etc. Calentando : cocer o freír Puedes realizar un experimento similar utilizando sal de cocina en Batiendo las claras lugar de alcohol. 48 MATERIAL Y REACTIVOS 2 huevos de gallina Ácido acético Mechero Bunsen 3 Vasos de precipitado de 100ml 10 mL de leche Limón Etanol DISEÑO EXPERIMENTAL Experimento 1 Para ver la coagulación de las proteínas se puede utilizar clara de huevo, para conseguir más volumen puede prepararse para toda la clase una dilución de clara de huevo en agua, de forma que quede una mezcla aún espesa. Colocar en un tubo de ensayo una pequeña cantidad de clara de huevo. Añadir 5 gotas de ácido acético y calentar el tubo a la llama del mechero. Experimento 2 Coloca el contenido de un huevo en un cristalizador. Añade unas gotas de vinagre de caña sobre la clara y la yema y observa el aspecto que se forma en ambas. Observa lo que sucede. Experimento 3 Echa la clara del huevo en el interior del vaso con el alcohol. Tapa el vaso y espera al menos media hora. A medida que pasa el tiempo observa lo que sucede en el vaso. Tapa el vaso y vuelve a observarlo al día siguiente. Experimento 4 Añade el vinagre a uno de los vasos Exprime el limón en el otro Agita ambos vasos para que se mezclen sus contenidos Espera unos minutos 49 Observa lo que sucede en cada uno de los vasos Anota tu hipótesis: Responde a la pregunta ¿Qué esperas que suceda? _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _______________________________________ _____________________ RESULTADOS Tipo de hoja Color producido con la disolución de Benedict Presencia de glucosa 1. 2. 3. 4. 5. Piensa y discute ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de la clara de huevo? ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización? ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína? ¿Qué le sucedió a la leche? ¿cuál es su proteína? Explicita por medio de un representador gráfico como sucede la desnaturalización de las proteínas. 50 CONCLUSIONES ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ _________________________________ Firma del estudiante ____________________________ Firma del profesor titular FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ FUENTES DE CONSULTA: Vargas Palomeque, Miguel; Gonzales Mendoza, Rossemary; Suplemento Técnico Científico, editado por El Diario, La Paz, Bolivia, 1993. Bolívar S, Rubén Darío; Gómez R., Miguel A., Biología Integrada, Editorial Voluntad S.A., Bogotá, Colombia, 1989. 51 PRACTICA N° 10 Extracción de ADN Propósito: extrae el ADN de tejidos vegetales y animales, utilizando sustancias comunes. MATERIAL Y REACTIVOS Muestra vegetal: cebolla Enzimas (suavizador de carne Muestra animal : hígado de pollo en polvo o jugo de papaya ) Agua destilada o mineral Licuadora Recipiente de vidrio o plástico Vaso de precipitado graduado Colador de plástico o gasas Sal de mesa Detergente líquido o shampoo Alcohol blanco o isoamílico a 0°C PRINCIPIO El ADN es una de las partes fundamentales de los cromosomas, los cuales son estructuras constituidas por dos pequeños filamentos o brazos, que pueden ser iguales o desiguales, que están unidos por un punto común llamado Centrómero; varían en forma y tamaño, pueden verse fácilmente al momento de la división celular por medio de un microscopio. Los cromosomas químicamente están formados por proteínas y por el Ácido Desoxiribonucleico o ADN. La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las células mediante un detergente (jabón líquido), vaciándose su contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separado de él, por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamílico, probablemente el único reactivo de esta práctica que no es de uso común. 52 DISEÑO EXPERIMENTAL 1. Corta en pequeños trozos el hígado de pollo o cebolla, colócalo en la licuadora y adiciona suficiente agua de manera que al cabo de 10 segundos de licuar, tengamos la consistencia semilíquida. 2. Vierte el licuado en un recipiente que tenga graduaciones (vaso de precipitado) y utiliza un colador (o gasas) para separar algunas partes que no se hayan licuado lo suficiente. 3. Mide el licuado en el recipiente y añade ¼ de detergente líquido del total del licuado y mézclalos suavemente con ayuda de un agitador. 4. Añade 1 cucharada de Enzimas (suavizador de carne en polvo o jugo de papaya). 5. Agita con cuidado y lentamente por unos 5 minutos. Si mezclamos con demasiada rapidez o con mucha fuerza se corre el peligro de romper el ADN, con lo que no podríamos observarlo. 6. Vierte la mezcla en un recipiente alto y delgado hasta la mitad. 7. Ladea el recipiente y adiciona alcohol con mucho cuidado, evitando que se mezcle con el líquido de abajo. 8. Luego de unos minutos se podrá observar unos filamentos blancos dentro del alcohol y que se elevan de la mezcla de hígado o de cebolla, detergente y enzimas. Estamos observando el ADN! NOTA: utilizas una licuadora para separar las células unas de otras, en esto ayuda también el detergente. Las enzimas rompen la membrana de las células y hacen posible que se pueda ver el ADN que contienen. DISCUSIÓN: 1. Anota las características del ADN que obtuviste: _______________________________________________________ _______________________________________________________ _______________________________________________________ _______________________________________________________ _______________________________________________________ _______________________________________________________ 53 Esquematiza tus resultados de la pregunta anterior. 2. ¿Cuáles son los componentes del ADN? _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 3. Investiga la importancia que tiene la extracción de ADN a partir de sangre y tejido humano. _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 54 CONCLUSIONES: _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ FUENTES DE CONSULTA: Vargas Palomeque, Miguel; Gonzales Mendoza, Rossemary; Suplemento Técnico Científico, editado por El Diario, La Paz, Bolivia, 1993. Bolívar S, Rubén Darío; Gómez R., Miguel A., Biología Integrada, Editorial Voluntad S.A., Bogotá, Colombia, 1989. _________________________________ Firma del estudiante ____________________________ Firma del profesor titular FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ 55 PRÁCTICA N° 11 Huellas Dactilares Propósito: determina los diferentes tipos de huellas dactilares de los alumnos de la clase, identificando la variación genética humana. MATERIAL Y REACTIVOS Un vaso Carbón activado o tinta obscura Crema para manos Cinta adhesiva Hojas blancas Lupa Por diversidad genética se entiende la variación de los genes dentro de cada especie. Esto abarca poblaciones determinadas de la misma especie o la variación genética de una población. La diversidad genética representa la variación heredable dentro y entre poblaciones de organismos. Esencialmente, depende de las variaciones en la sucesión de los cuatro pares fundamentales con que se constituyen el código genético, teniendo en cuenta que -en los organismos avanzados- sólo una pequeña parte (frecuentemente menos de 1%) del material genético se expresa exteriormente en la forma y en el funcionamiento del organismo. Las líneas que se encuentran en las yemas de los dedos forman un dibujo particular que puede ser observado si lo entintamos, pues deja la huella. Las huellas dactilares se usan para identificar a las personas, ya que cada uno de nosotros, presentamos un dibujo en particular. Las huellas dactilares no cambian durante la vida de un individuo, pero son diferentes en cada uno de ellos, pues responden al efecto de los poligenes. 56 CLASIFICACIÓN DE LAS HUELLAS DACTILARES 57 DISCUSIÓN 1. ¿Cuál es el fundamento genético de la variación encontrada en las huellas de tus compañeros? _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 2. Investiga las aplicaciones que tiene esta práctica en tu entorno. _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ Coloca las huellas obtenidas, sus características y su clasificación en base al esquema que se te proporciona. 58 CONCLUSIONES: _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _________________________________ Firma del estudiante FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ ____________________________ Firma del profesor titular _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ 59 PRACTICA N° Y TÚ ¿QUÉ ESPECIE ERES? PROPÓSITO: Identifica quién es el que te clasifica como especie humana. PRINCIPIO A mediados del siglo pasado, gracias al avance de la biología, la genética y de la citología surgió una nueva ciencia llamada citogenética. Es por tanto una ciencia de gran aplicación en biología y medicina, ya que muchas enfermedades tienen un origen citogenética, igual que muchos abortos espontáneos, o malformaciones fetales. Desde mediados del siglo XIX hasta mediados del siglo XX no se supo el número de cromosomas del ser humano Hoy en día sabemos que el número de cromosomas es característico de cada especie y que además, hay genotipos muy variados como el gusano Ascaris, que solo presenta un cromosoma, los mamíferos: entre 40 y 50 cromosomas, los humanos: 46 cromosomas y la rata: 40 cromosomas por citar algunos ejemplos. En 1956, Ford y Hamerton publicaron un trabajo realizado con biopsias testiculares en el que explicaban que las espermatogonias tenían 46 cromosomas, y que los espermatocitos primarios tenían 23 cromosomas bivalentes. Con este estudio se confirmo el número característico de cromosomas de la especie humana, que es 46 cromosomas, y además, se estableció que había dos gonosomas diferentes X e Y. El verdadero empuje de la citogenética ocurrió en 1959, cuando tuvo lugar la primera publicación en que se demostró una anomalía cromosómica como causa de una enfermedad humana, gracias a las investigaciones de Lejeune. Se demostró que los niños con Síndrome de Down tenían un cromosoma supernumerario (3 en lugar de 2), el 21, que además era de pequeño tamaño. Este investigador hasta la muerte intentó buscar un tratamiento para la trisomía del 21, nombre con el que se designa al síndrome que descubrió. CONTEXTO. Esta práctica se llevará a cabo dentro del laboratorio poniendo mucha atención a la explicación de tus profesores y a la lectura de tus artículos para que te sirvan de sustento en la solución del problema que se plantea. 60 MATERIALES Hojas y colores Artículos científicos relacionados con el tema DISEÑO EXPERIMENTAL El paciente B es un hombre de 28 años que está tratando de identificar la causa de su infertilidad. Los cromosomas fueron obtenidos de células nucleadas de su sangre. I.Coloca éste cromosoma abajo en el cariotipo parcialmente completo. Cuando hagas el par correcto, procederás al cromosoma siguiente. _______ ________ ________ 1 2 3 ________ ________ 4 5 ________ ________ ________ ________ 6 7 8 9 ________ ________ ________ 10 11 12 ________ ________ ________ 13 14 15 ________ ________ 19 20 ________ ________ ________ 16 17 18 ________ ________ 21 22 ________ XX/XY 61 II. Ahora coloca éste cromosoma con su pareja. _______ ________ ________ 1 2 3 ________ ________ 4 5 ________ ________ ________ ________ 6 7 8 9 ________ ________ ________ 10 11 12 ________ ________ ________ 13 14 15 ________ ________ 19 20 ________ ________ ________ 16 17 18 ________ ________ 21 22 ________ XX/XY 62 III. Coloque este pareja. cromosoma con su _______ ________ ________ 1 2 3 ________ ________ 4 5 ________ ________ ________ ________ 6 7 8 9 ________ ________ ________ 10 11 12 ________ ________ ________ 13 14 15 ________ ________ 19 20 ________ ________ ________ 16 17 18 ________ ________ 21 22 ________ XX/XY 63 IV. Ahora, aparea este cromosoma . _______ ________ ________ 1 2 3 ________ ________ 4 5 ________ ________ ________ ________ 6 7 8 9 ________ ________ ________ 10 11 12 ________ ________ ________ 13 14 15 ________ ________ 19 20 ________ ________ ________ 16 17 18 ________ ________ 21 22 ________ XX/XY 64 DISCUSIÓN. 1. ¿Cuál es el cromosoma responsable de la infertilidad del paciente B? _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________________________ 2. ¿Qué análisis llevaste a cabo para llegar al resultado de la pregunta anterior? _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 3. ¿Cuáles son las aplicaciones que tiene la determinación del cariotipo humano? _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ 65 CONCLUSIONES. _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________________________ _________________________________ Firma del estudiante FECHA DE REALIZACIÓN:__________________ ____________________________ Firma del profesor titular _________________________ Firma del profesor del laboratorio CALIFICACIÓN: _________________________ 66 67