Generación de protocolos para la propagación in vivo e in vitro de

Construyendo la Nueva Universidad
Generación de protocolos para la propagación in vivo e in vitro
de genotipos élites de especies forestales nativas y promisorias
para la reforestación de la Región Sur del Ecuador.
Investigadores: Ing. Julia Minchala Patiño, Ing. Víctor Hugo Eras Mg. Sc., Ing. Ruth Poma, Ing. Luis Muñoz
Introducción
E
l Proyecto de investigación en el año
2013, tuvo como objetivo general
la generación de protocolos para la
producción de plántulas, tanto a nivel de
laboratorio e invernadero, de cuatro especies forestales promisorias para la reforestación del bosque seco en la Región
Sur del Ecuador. En el siguiente resumen
se presentan resultados obtenidos sobre
germinación de semillas in vitro de las especies Prosopis limensis, Tabebuia billbergii y
Loxopterygium huasango, que constituyen
el germoplasma de base para las fases de
brotamiento y enraizamiento in vitro de
ápices caulinares y segmentos nodales de
las plántulas germinadas in vitro. Además,
se tiene previsto en fases posteriores realizar la inducción de callos y la organogé-
nesis directa e indirecta. La germinación
in vitro de estas tres especies forestales
se realizó en el Laboratorio de Micropropagación Vegetal del Área Agropecuaria
y de Recursos Naturales Renovables de la
Universidad Nacional de Loja. Los frutos se
recolectaron de árboles con características
fenotípicas sobresalientes del bosque seco
de los cantones Paltas, Macará y Zapotillo.
Metodología
La metodología utilizada para la germinación de semillas in vitro
fue la siguiente:
a). Selección y escarificación de semillas
Se seleccionó las mejores semillas, considerando características
fenotípicas como: forma, tamaño, peso, color, madurez fisiológica
y buenas condiciones fitosanitarias. En el caso de T. billbergii, se eliminó parte del ala de la semilla y en L. huasango se eliminó la parte
alada que cubre a la semilla, a fin de reducir la contaminación.
Cuadro 1. Efecto de escarificación en la germinación in vitro de
semillas de P. limensis y L. huasango
Tratamiento
AG3 *
(mg/L)
Métodos de
Escarificación
T1
0,0
Testigo
T2
0,0
Físico
T3
0,0
Mecánico
T4
0,0
Químico
Para semillas de P. limensis y L. huasango se realizaron tratamientos
de escarificación: mecánico, físico y químico, con la finalidad de
romper la dureza de los tegumentos de la semilla e inducir la imbibición del embrión.
T5
0,5
Testigo
T6
0,5
Físico
T7
0,5
Mecánico
T8
0,5
Químico
b). Cultivo de semillas
T9
1,0
Testigo
Se colocaron 50 semillas en frascos de vidrio, en el caso de L. huasango, por el tamaño de la semilla, fueron colocadas en tul.
En la cámara de flujo laminar estas fueron desinfestadas con alcohol
etílico al 70% e hipoclorito de sodio comercial, más 3 gotas Tween
80, en concentraciones y tiempos variables.
El medio de cultivo para germinación de semillas estuvo conformado por las sales minerales de Murashige y Skoog (1962) suplementadas con vitaminas tiamina y m-inositol, sacarosa y ácido giberélico
(AG3), en diferentes concentraciones (ver Cuadro 1.) y agar. El pH
se ajustó a 5,8. Luego se distribuyó 25 ml de medio de cultivo por
frascos, esterilizados en autoclave a 120 °C de temperatura y 1,5 kg/
cm2 de presión, durante 25 minutos.
T10
1,0
Físico
T11
1,0
Mecánico
T12
1,0
Químico
En la cámara de flujo laminar se inocularon las semillas, en estudio,
tres semillas por frasco, 15 semillas por tratamiento. Se probaron
doce tratamientos para P. limensis, cuatro tratamientos para L. huasango, y tres tratamientos para T. billbergii. Una vez inoculadas las
semillas se mantuvieron en incubación a una temperatura de ± 23
°C, fotoperiodo de 16 horas luz y 8 horas de oscuridad.
c). Parámetros evaluados
La evaluación se realizó por observación directa, cada 5 días hasta
treinta días después de la siembra. Los parámetros que se evaluaron
fueron: porcentaje de semillas germinadas, porcentaje de contaminación y días a la germinación.
Resultados:
En P. limensis con los métodos de escarificación física y mecánica,
en las tres concentraciones de AG3 utilizadas, se obtuvo 100% de
germinación, la misma que se inició al segundo día después de la
inoculación. La contaminación fue del 7 al 27% causada por
hongos y bacterias. Las plántulas germinadas in vitro iniciaron un
crecimiento y desarrollo homogéneo (Figura 1).
Unidad de Difusión y Transferencia de Conocimiento e Innovación
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Construyendo la Nueva Universidad
Figura 1. Porcentaje de germinación de semillas de Prosopis limensis
con diferentes métodos de escarificación, en tres concentraciones
de AG3
Figura 4. Crecimiento de plántulas germinadas in vitro de L. huasango
Para T. billbergii, la germinación estuvo entre el 67 y 75 %, no existiendo diferencias significativas entre las concentraciones de AG3
probadas. La germinación inició al sexto día de la inoculación y las
semillas no presentaron contaminación. Las plántulas germinadas in
vitro iniciaron un crecimiento y desarrollo homogéneo (figura 5 y 6).
Figura 2. Crecimiento de plántulas germinadas in vitro de P. limensis
La germinación en L. huasango estuvo entre el 60 y 70 %, no existiendo diferencias significativas entre los métodos de escarificación.
La germinación inició al quinto día de la inoculación, con una contaminación entre el 20 a 28 % causada por bacterias y hongos. Las
plántulas germinadas in vitro iniciaron un crecimiento y desarrollo
homogéneo (figura 3 y 4).
Figura 5. Porcentaje de germinación de semillas de T. billbergii en
tres concentraciones de AG3
Conclusiones:
• La escarificación mecánica y física fueron los mejores tratamientos
pregerminativos para las semillas de P. limensis en condiciones de
laboratorio. La adición de AG3 al medio de cultivo no influyó de
forma significante en los resultados obtenidos.
• En L. huasango los tratamientos pregerminativos no incidieron
de manera significativa en la germinación.
• En T. billbergii el uso de AG3 en el medio de cultivo no incidió de
manera significativa en la germinación de las semillas.
• En T. billbergii el almacenamiento prolongado de las semillas disminuye el poder germinativo de las mismas.
• Los métodos utilizados para la desinfección de las semillas, previo
a la inoculación in vitro, permitieron obtener bajos porcentajes
de contaminación.
Figura 3. Porcentajes de germinación de semillas de L. huasango en
diferentes métodos de escarificación
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Palabras clave: escarificación, germinación, in vitro, bosque seco.