Diapositiva 1 - Campus Virtual

Inmunohematología
2016
Dra. Ana Cecilia Haro
Sensibilización
Ag + Ac
Aglutinación
Ag-Ac
Enzimas
SAGH
LISS
Polibrene
PEG
Albúmina
Potencial zeta
Tipo de Ac
Densidad antigénica
Tiempo de
incubación
Fuerza iónica
pH
Temperatura
Títulación de antisueros
GR 5%
Sistema
ABO
Rh
Título
> 128
> 32
Score
Aglutinatos
Graduación en
tubo
Grumo único
++++
10
2- 3 grumos
+++
8
Hasta 10 grumos
++
5
Muchos, finos
+
2
ninguno
-
0
++++
10
+++
8
++
5
+
2
Sistema Score
ABO
> 50
Rh
> 50
0
Avidez
GR 10% → ABO
GR 50% → Rh
Sistema
ABO
Rh
Avidez
< 8 segundos
< 30 segundos
Especificidad
ABO
Rh
Reactivo
GR “A”
GR “B”
GR “AB”
GR “O”
Reactivo
Anti-A
Anti-B
Anti-A,B
+
+
-
+
+
-
+
+
+
-
Anti-D
+
-
GR “O” Rh D (+)
DCe/dce
R1r
GR “O” Rh D (-)
dce/dce
rr
Determinación de los
grupos sanguíneos
ABO y Rh
Sistema ABO
Grupo sanguíneo
GR → Ag
Plasma → Ac
A
A
A
Anti-B
B
B
B
Anti-A
AB
AB
O
O
A y B
Ninguno
Ninguno
Anti-A y AntiB
DIRECTA
Placa
Anti-A
INVERSA
GR
“O”
Tubo
Anti- B
Anti- B
Anti-AB
GR
GR
“A”A B “B”
O
Anti-A
A B AB
A B O
GR 5%
GR 5%
Interpretación
Grupo
sanguíneo
PRUEBA DIRECTA
PRUEBA INVERSA
Anti - A Anti - B Anti - AB GR A GR B GR O
O
-
-
-
+
+
-
A
+
-
+
-
+
-
B
-
+
+
+
-
-
AB
+
+
+
-
-
-
Muestra
mal identificada
Reactivos no controlados
Muestra coagulada
Dilución de Ig por trasfusión masiva de plasma
Subgrupos ABO
Quimera (transfusión o transplante)
Expresión antigénica eritrocitaria disminuida (leucemia
y otras neoplasias)
Actividad antiaglutinínica escasa o nula
(inmunodeficiencia)
Lactantes < 4-6 meses dan reacciones débiles o nulas
Presencia de autoanticuerpos (crioaglutininas)
Sistema
Rh
(Ag
D)
Differences between normal D, D-weak and partial-D phenotypes
Antígeno D Normal
común
D parcial o
D Débil
Variante D
Epitope:
Normal
Normal
Mutados
Cantidad de Ag:
Normal
Reducida
Normal o Reducida
Ac
---
---
Epitope
Antígeno
---
Placa
Tubo
GR 5%
D C
Aglutina
No Aglutina
No Aglutina
Aglutina
Rh D (-)
Rh D (+)
D débil
D parcial
D parcial débil
Rh D (+)
Investigar
antígenos D débiles
Determinación de antígenos D débiles
P
Paciente
Control
GR 5%
GR 5%
Anti-D
Soluc.Fisiol.
Centrifugar y Leer
Aglutina
No aglutina
No debe aglutinar
Rh D (+)
Incubar 37ºC 30 min (SENSIBILIZACIÓN)
Centrifugar y Leer
Aglutina
No aglutina
No debe aglutinar
Rh D (+)
Lavar 3 veces con solución fisiológica
SAGH
SAGH
Centrifugar y Leer
Aglutina
Rh D débil (+)
No aglutina
Rh D (-)
No debe aglutinar
C
¿Cómo se informa un grupo
sanguíneo?
Nombre y Apellido:
Fecha:
GRUPO SANGUÍNEO:
FACTOR Rh D:
AB
B
O
A
Negativo
Positivo
Prueba de Coombs
Prueba que permite demostrar la
presencia de anticuerpos que
sensibilizan los glóbulos rojos.
El reactivo de Coombs ó SAGH reconoce
fracción Fc de las Ig o las fracciones de C
específicas.
+
Suero Coombs
AGLUTINACIÓN
 PRUEBA
DE COOMBS DIRECTA (PCD)
• Detecta glóbulos rojos sensibilizados
“in vivo”
 PRUEBA
DE COOMBS INDIRECTA (PCI)
• Detecta glóbulos rojos sensibilizados
“in vitro”
Detecta los Acs y/ó componentes del
Complemento fijados in vivo a los hematíes
del paciente.
Descartar el plasma
rpm
Sangre entera
anticoagulada con EDTA
Separar una alícuota
para lavar con SF
Muestra: GR del paciente en estudio
 Lavar
3 veces con solución fisiológica
 Preparar suspensión globular al 5%
100 µL de GR + 1900 µL de SF
1 gota de
suspensión
de GR al 5%
1 gota del Rvo de
Coombs
rpm
45” a 1000g
LEER
 Resultado
positivo: presencia de
aglutinación. Se debe indicar la intensidad
de la positividad: +, ++, +++, ++++.
 Resultado
negativo: dejar a temperatura
ambiente 10 minutos, centrifugar y leer.
• Enfermedad Hemolítica Fetoneonatal
(EHFN)
• Reacción Hemolítica Postransfusional
• Anemia Hemolítica Autoinmune (AHAI)
• Anemia Hemolítica Inducida por
Fármacos
EHFN
Reactivo de
Coombs
+
MUESTRA: GR del
bebé lavados (2-5%)
Sensibilización de los
GR in vivo con Acs
maternos
¿QUÉ OCURRIRÍA SI…
LOS LAVADOS
SE OMITIESEN O
SE REALIZARAN
DEFICIENTEMENTE ?
La muestra contiene GR sensibilizados y muchas
globulinas no unidas
Muestra
1ra Centrifugación
Correcto
Erróneo
3ra Centrifugación
Correcto
Erróneo
Detecta los Acs y/ó componentes del
Complemento presentes en el suero del
paciente, los cuales serán fijados in vitro
a los hematíes.
MUESTRA: SUERO DEL PACIENTE
REACTIVOS:
• GR O Rh+ ó Paneles Selectores
• Reactivo de Coombs
• SF ó LISS (solución salina de baja fuerza
iónica)
Ag - Ac
Incubar 30’
100 µL SUERO
a 37°C
+
50 µL GR al 5% en SF
Incubar 15’
100 µL SUERO
a 37°C
+
50 µL GR al 5% en LISS
rpm
LEER
Lavar 3 veces
con SF
1 gota del
Rvo de
Coombs
Si la reacción es positiva se debe ser titular
Diluciones:
1/2
1/4
1/8
1/16
1/32
1/64
• Pruebas de compatibilidad
• Detección de anticuerpos irregulares
• Identificación de anticuerpos irregulares
• Tipificación de antígenos en el GR
• Anamnesis
• Muestra
• Fase Preanalítica
• Limpieza del material
• Centrífugas
• Reactivos
Se deben emplear
-GR sensibilizados con IgG
-GR sensibilizados con C’
-GR normales no sensibilizados
Titulación del Rvo de Coombs.
Controlar el pH de la SF (debe tener
pH 7,0 – 7,2)
Panel eritrocitario selector
• Suspensiones de GR
• Lavados
• Fase Analítica
• Tiempos de incubación
• En la centrifugación
• Lectura
 Lavado
inadecuado
 Prueba interrumpida o diferida
 Interpretación errónea de pruebas
positivas débiles
 Omitir el agregado de SAGH
 Pérdida de actividad de SAGH por mala
conservación
 Centrifugación inadecuada
 Concentración de GR alta o baja
 Concentración alta de IgG en suero en
estudio
 pH de solución fisiológica 6.0 disminuye
sensibilidad
 Glóbulos
rojos autoaglutinados o
poliaglutinados
 Partículas, contaminantes, precipitados o
fibrina presentes en tubos que producen
agregación de GR
 Sobrecentrifugación
Esta prueba permite que los GRs
no aglutinados pasen libremente
a través de la columna de gel
bajo centrifugación, mientras
que
aquellos
aglutinados,
permanecen atrapados entre las
esferas de gel.
NEGATIVO
POSITIVO
GRACIAS POR SU ATENCIÓN