Procesado de muestras de sangre

6 6 .Prevención
de la salud
Procesado
de muestras
de sangre
Los análisis de sangre
son una herramienta
diagnóstica muy
útil en la Clínica
Veterinaria. La
fiabilidad de un análisis
y su interpretación
dependen en gran
medida de la calidad
de la muestra que
se analiza o que se
envía al laboratorio. El
manejo adecuado de
las muestras desde
que se obtienen hasta
que realizan los análisis
es fundamental para
no obtener resultados
erróneos.
Repasaremos algunas
normas de manejo
de muestras que son
importantes y que nos
pueden servir tanto si
los análisis de sangre
se hacen en la clínica
como si se envían
fuera, a laboratorios
externos.
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Un análisis de sangre fiable empieza con una toma de muestras correcta. Existen muchos factores en la toma de muestras y en su manejo que
hay que “cuidar” y que pueden afectar los resultados de estas pruebas.
Es importante:
•
evitar que el animal esté muy estresado
•
no usar agujas de bajo calibre con jeringas de alto volumen
•
realizar una punción venosa limpia
•
no mantener el torniquete más de un minuto
•
no contaminar la muestra con antiséptico (alcohol).
En los animales muy estresados se produce un aumento de la glucosa
en sangre que hay que tener en cuenta a la hora de interpretar los resultados. La aguja y la jeringa que emplearemos dependerán de varios
factores. El tamaño de la jeringa que usemos va a depender del volumen de sangre que necesitemos y de la vena que hayamos seleccio-
Hemograma
nado. Los volúmenes grandes de sangre no deben ser extraídos con
agujas de calibre pequeño. Al utilizar agujas de bajo calibre acopladas
El hemograma nos proporciona el recuento de glóbulos rojos, blancos
a jeringas de alto volumen se puede producir hemólisis de la muestra.
y plaquetas. Para poder realizarlo la sangre tiene que conservar sus
La hemólisis es la ruptura de los glóbulos rojos que libera hemoglobina
características físicas y químicas, es decir no puede coagularse, debe
y otras sustancias en el plasma/ suero que le dan un color entre rosa
permanecer líquida.
y rojo. Este color afecta a varias determinaciones por el aumento en el
suero de la sustancia a medir o también por interferencia óptica o quí-
La muestra que necesitamos es sangre entera recogida en tubos con
mica durante la fase de análisis. Además de evitar que se produzca la
anticoagulante EDTA ya que es el anticoagulante que mejor conserva la
hemólisis seleccionando correctamente la jeringa y la aguja, debemos
morfología de las células sanguíneas.
evitar aplicar un torniquete durante más de un minuto ya que también
puede producir alteraciones en los análisis y también debemos evitar la
La primera regla para poder realizar correctamente el hemograma es
contaminación con alcohol.
que la sangre que vamos a echar al tubo con anticoagulante EDTA no
puede tener ningún coágulo. La segunda regla a tener en cuenta es
Una extracción de sangre se realiza usando principalmente la vena yu-
que es muy importante ajustar la cantidad de sangre que se echa al
gular, cefálica y safena. Normalmente, a no ser que sea un perro muy
anticoagulante que hay en el tubo (los tubos vienen ya preparados con
pequeño, un cachorro o en muchas ocasiones un gato, realizaremos la
el anticoagulante).
extracción en la vena cefálica, la que discurre por encima de la extremidad delantera. La vena yugular se usa frecuentemente en cachorros y
gatos pero cualquiera de las opciones es correcta.
El EDTA es el anticoagulante de elección para hacer el
hemograma y el frotis sanguíneo.
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Además de realizar los recuentos celulares,
sangre esté mucho tiempo en el anticoagu-
para completar un análisis hematológico de-
lante, como el deterioro de las células. Si el
bemos realizar también un frotis sanguíneo.
frotis, una vez hecho, no puede teñirse in-
Hay que extender una pequeña gota de san-
mediatamente, es importante por lo menos
gre sobre una lámina de vidrio (portaobjetos)
fijarlo, sumergiéndolo en metanol durante
para formar una película delgada (frotis san-
dos minutos. Las células fijadas se conser-
guíneo).
van durante mucho tiempo.
Pruebas bioquímicas
Normalmente los tubos vienen con una línea
que indica la cantidad de sangre que hay que
adicionar. Es fundamental respetar la recomendación ya que un defecto o exceso de
sangre según la proporción de anticoagulante
del tubo va a producir alteraciones hematológicas. El hemograma se puede realizar en
muestras recogidas en tubos con otros anticoagulantes como la heparina, pero este
anticoagulante conserva peor la morfología
Es fundamental
respetar la
recomendación ya
que un defecto o
exceso de sangre
según la proporción
de anticoagulante
del tubo va a
producir alteraciones
hematológicas.
celular y favorece que las plaquetas formen
grupos (agregación plaquetaria) lo cual altera
su contaje.
Lo dejamos secar al aire, y luego lo fijamos
introduciéndolo en un pocillo que contenga
Si no hacemos el hemograma en dos o tres
metanol y después se tiñe. Los frotis san-
horas la sangre debe ser refrigerada a 4º C
guíneos también deberían ser preparados
(debe estar en nevera). El recuento de glóbu-
inmediatamente después de haber obtenido
los rojos, la hemoglobina y el hematocrito no
la muestra o como máximo transcurridas dos
sufren modificaciones si la sangre se refrigera
horas tras la extrac- ción de la sangre. Así
durante unas 24 horas.
se evitan los problemas derivados de que la
Recordemos que la sangre es un tejido líquido, está formada por dos partes, las células y
el líquido en el que “nadan”, que se denomina
plasma. El plasma se obtiene tras centrifugar
la sangre que se ha introducido en un tubo
con anticoagulante. Contiene factores de la
coagulación (fibrinógeno).
Si ponemos sangre en un tubo de ensayo sin
anticoagulante y dejamos pasar unos minutos se forma un coágulo. Posteriormente, el
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Conservación
suero/plasma
coágulo se contrae y se separa de un líquido
Si queremos obtener plasma, las muestras
ambarino y transparente que es el suero san-
de sangre han de recogerse en tubos que
guíneo.
contengan heparina, preferentemente de litio, ya que este anticoagulante interfiere en
Si las determinaciones no se realizan
El suero se obtiene dejando que se produzca
muy pocas determinaciones bioquímicas.
inmediatamente después de haber
la coagulación espontáneamente en un tubo,
Igual que para hacer el hemograma, es muy
obtenido el suero o plasma:
preferentemente de vidrio, en el que no se ha
importante adicionar al tubo el volumen de
puesto anticoagulante y después centrifugan-
sangre indicado en el mismo. El plasma se
• conservar el suero/plasma a 4ºC:
do. El plasma se obtiene tras centrifugar la
obtiene centrifugando la muestra a 2500-
la mayoría de los compuestos se
sangre que se ha introducido en un tubo con
3000 rpm (5-10 min). Al igual que el suero,
conservan bien a esta temperatu-
anticoagulante.
conviene separar el plasma de las células
ra al menos durante tres días.
dentro de las dos horas después de la toma
La mayoría de las pruebas bioquímicas que
de muestras.
• congelar el suero/plasma a -20 ºC:
se hacen en el laboratorio de análisis clíni-
hay muy pocos compuestos que
cos pueden realizarse en muestras de suero.
Para que las células se adhieran al portaob-
no son estables a esta temperatu-
Muchas de estas determinaciones pueden
jetos, y para evitar que se degeneren, hay
ra durante largo tiempo.
realizase también en muestras de plasma te-
que fijar la muestra. El método de fijación
niendo en cuenta que el anticoagulante que
puede variar según la técnica de tinción que
usemos no interfiera en la prueba.
se vaya utilizar. Normalmente en la clínica o
para el envío de muestras a otro laboratorio
Como hemos dicho para obtener suero para
la muestra debe de secarse al aire y luego
hacer las pruebas bioquímicas la muestra de
debe fijarse con metanol. También puede
sangre debe introducirse en un tubo seco sin
utilizarse el primer reactivo de las técnicas
anticoagulante. Las muestras así obtenidas
rápidas.
se dejan a temperatura ambiente en posición
vertical hasta que se coagulen y se inicie la
Si la muestra se remite a un laboratorio es-
retracción del coágulo (30-40 minutos des-
pecializado es mejor no teñirlas en la clínica,
pués de obtener la muestra). Posteriormente
hay que fijarlas y dejarlas sin teñir. Cuando
se centrifugan los tubos a 2500-3000 rpm
la preparación se tiñe en la clínica se usa
(5-10 min) para separar el suero del coágulo.
normalmente la Técnica rápida Diff-Quik®.
Esta separación conviene realizarla dentro de
Esta técnica de tinción es muy utilizada
las dos horas después de la toma de mues-
debido a su sencillez y rapidez, todos sus
tras para evitar el intercambio de compuestos
reactivos son comerciales y están ajustados
entre las células y el suero y que la muestra
para realizar la técnica en el menor tiempo
se deteriore.
posible.
prevención de la salud.11
Técnica de Diff-Quik
¿Cómo hacer un frotis sanguíneo?
Fijación:
Secar al aire.
Utilizaremos dos portas, uno con la
Fijar en metanol durante 3 minutos o en la solu-
gota de muestra en un extremo, y el
ción fijadora comercial.
otro para realizar la extensión de la
Soluciones:
sangre (Figura 1). El porta de arriba
puede ser sustituido por un cubre.
a) Solución 1: fijador comercial
b) Solución 2: colorante comercial (eosina)
c) Solución 3: colorante comercial (mezcla de
colorantes azules)
Técnica:
Según las instrucciones del fabricante
1º Solución 1 (fijador): 5 pases de 20 segundos
cada uno.
2º Solución 2 (eosina): 5 pases de 20 segundos
cada uno.
3º Solución 3 (azules): 5 pases de 20 segundos
cada uno.
1) Apoyaremos uno de los bordes cortos del porta de extensión (o un cubre), sobre el porta con la muestra, formando
un ángulo de 30-40º
2) Deslizaremos el porta de extensión hasta contactar con la gota,
con lo que el material se extenderá en forma de línea en el borde corto del porta de extensión
3) Con un movimiento rápido y
suave deslizamos el porta de ex-
4º Lavar en agua corriente.
tensión, alejándonos de la gota,
5º Secar al aire.
formándose una capa uniforme
Los tiempos de inmersión en cada solución pueden variar según las preferencias de la persona
que va a interpretar la citología y el tiempo que
llevan los colorantes abiertos.
Recomendaciones:
Guardar las soluciones en botes herméticos de
boca ancha.
Una vez usados por primera vez, controlar la antigüedad (precipitados, contaminación, dilución,
concentración) de los colorantes.