MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Ed. Nº Ej. N° 01 F.E.: 2003-05-12 Pág. 1 de 18 SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS ELABORADO POR: CNSP Blga. Miriam Graciela Palomino Salcedo REVISADO POR: CNSP Blga. Rosario Balta León CNSP Blgo. Pablo Edilberto Villaseca Castro CNSP Blga. Magna Suárez Jara CNSP Blga. Miriam Guevara Robles CNSP Blgo. George Obregón Boltan APROBADO POR: INFORME N° 003-05-DEET-CNSP/INS FECHA: 2005-09-16 EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 2 de 18 EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO INDICE CARÁTULA Pág. 1 INDICE 2 1. OBJETIVO 3 2. CAMPO DE APLICACION 3 3. REFERENCIAS 3 4. DEFINICIONES 3 5. RESPONSABILIDADES 4 6. FUNDAMENTO DEL METODO 4 7. DESARROLLO DEL METODO DE ENSAYO 4 7.1. TIPO DE MUESTRA 8 7.2. PREPARACIÓN DE MUESTRAS 8 7.3. CONDICIONES PREVIAS 4 7.4. ASPECTOS DE BIOSEGURIDAD 5 7.5. EQUIPOS Y MATERIALES 5 7.6. EJECUCIÓN DEL MÉTODO 6 8. EXPRESIÓN DE RESULTADOS 8 9. INFORME DE RESULTADOS 8 10. CONFIABILIDAD DEL MÉTODO 9 11. REGISTROS 9 12. ANEXOS 10 PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO 1. MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 3 de 18 OBJETIVO Evaluar el grado de susceptibilidad o resistencia de poblaciones de mosquitos adultos a insecticidas de uso en salud pública y detectar la aparición de una variedad resistente en un determinado período de tiempo. 2. CAMPO DE APLICACIÓN El presente método de ensayo es aplicable a los ingredientes activos de los insecticidas organofosforados, organoclorados, carbamatos y piretroides de uso en salud pública. 3. REFERENCIAS 3.1. OMS (1970). Resistencia a los Insecticidas y Lucha Contra los Vectores. 17° Informe del Comité de Expertos de la OMS en Insecticidas. Organización Mundial de la Salud Serie de Informes Técnicos N° 443. 3.2. OMS (1981). Instrucciones para determinar la susceptibilidad o resistencia de los mosquitos adultos a los insecticidas carbamatos, organoclorados y organofosforados. WHO/VBC/81.806. 3.3. WHO (1981). Instructions for determining the susceptibility or resistance of adult mosquitoes to organochlorine, organophosphate and carbamate insecticides establishment of the base-line. WHO/VBC/81.805. 3.4. OMS (1992). Resistencia de los vectores de enfermedades a los plaguicidas. Serie de Informes Técnicos N° 818. 3.5. Molina D. (1995). Estudio de la susceptibilidad a insecticidas organofosforados y piretroides en cepas de Aedes aegypti (Linn.) de cinco estados de Venezuela 3.6. WHO (1998). Test procedures for insecticide resistance monitoring in malaria vectors, bio efficacy and persistence of insecticides on treated surfaces. WHO/CDC/CPC/Mal/98.12. 3.7. Enviromental Health Project (1999). Activity Report N° 60. Malaria in the Peruvian Amazon: A review of the epidemiology, entomology and insecticide resistance of vectors. Prepared for USAID Misssion to Peru under EHP Activity N° 353-CC. 3.8. WHO (2001). Supplies for monitoring insecticide resistance in disease vectors. Procedures and conditions. WHO/CDS/CPE/PVC/2001.2 3.9. INS (2002). Susceptibilidad de los vectores de Malaria a los insecticidas en el Perú: Informe Técnico N° 5 Evaluación de la Susceptibilidad a los Insecticidas a los Mosquitos adultos del género Anopheles de las Regiones Maláricas del Perú. Lima-MINSA. 4. DEFINICIONES 4.1. ingrediente activo: El componente de una formulación, responsable de la actividad biológica directa o indirecta contra plagas. PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 4 de 18 4.2. insecticida: Compuesto químico utilizado para matar insectos. Los insecticidas son utilizados para controlar plagas en la agricultura e insectos que afectan la salud humana y animal. 4.3. resistencia: Respuesta atenuada de una población de especies animales o vegetales, a un insecticida o a un agente enemigo, como consecuencia de su aplicación. 4.4. susceptible: Capaz de recibir modificación o impresión. Siglas CNSP: Centro Nacional de Salud Pública. DEET: Dirección Ejecutiva de Enfermedades Transmisibles i.a.: Ingrediente activo. OMS: Organización Mundial de la Salud. 5. RESPONSABILIDADES 5.1. El Director Ejecutivo de la DEET revisa y firma los Informes de Resultados producto del desarrollo del presente método de ensayo. 5.2. El Coordinador de Enfermedades Metaxénicas es responsable de supervisar y hacer cumplir todos los aspectos relacionados a la aplicación del presente método de ensayo. 5.3. El Coordinador del Laboratorio de Entomología es responsable de revisar, verificar y supervisar la conformidad de los resultados de los análisis desarrollados mediante la aplicación del presente método de ensayo. 5.4. El analista del Laboratorio de Entomología del CNSP/INS es responsable de la ejecución del ensayo de susceptibilidad por el método de susceptibilidad o resistencia de los mosquitos adultos a los insecticidas, asimismo, coordina todas las actividades inherentes a la evaluación, así como el registro y emisión de resultados. 5.5. El responsable de Entomología del Laboratorio de Referencia Regional, participa en la prueba como analista y coordina las actividades de colecta de mosquitos. 5.6. El personal de campo participa en la colecta de mosquitos y acompañan en la ejecución de la evaluación. 6. FUNDAMENTO DEL MÉTODO Los procedimientos biológicos permiten determinar la actividad de una sustancia en función de sus efectos sobre los seres vivos. Los bioensayos utilizando varios lotes de mosquitos expuestos durante diversos periodos a la acción de papeles con impregnación normal de insecticidas y su posterior conservación durante 24 horas, son utilizados para determinar la mortalidad. Los grados de susceptibilidad son determinados mediante el establecimiento de la relación directa entre exposición y mortalidad. A fin PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 5 de 18 de fijar en toda su amplitud los márgenes de variación natural, conviene en lo posible repetir la operación en varias localidades y en diferentes épocas del año. Aunque no se pueda establecer con precisión el grado general de susceptibilidad (por ejemplo, en una población virgen) a consecuencia de haber hecho aplicaciones de insecticidas con cualquier finalidad, debe determinarse inmediatamente el grado de susceptibilidad de la especie vectora. El tiempo de exposición para los testigos es el más prolongado tanto como se emplee con el papel impregnado con insecticida. 7. DESARROLLO DEL MÉTODO DE ENSAYO 7.1. Tipo de muestra Muestras biológicas de cepas de mosquitos de Anopheles sp y Aedes sp. 7.2. Preparación de muestras 7.2.1. Los mosquitos Anopheles sp son capturados en refugio animal y con cebo humano (por ser inminentemente antropofílico) y son mantenidos en vasos de 1 L de capacidad cubiertos con tela organza a manera de tapa y sujetado con ligas delgadas. Luego los mosquitos son colocados en cajas de tecnopor en un lugar donde la temperatura no sea superior a 30°C, hasta las primeras horas de la mañana siguiente de haber sido capturados. 7.2.2. Los mosquitos Aedes sp son obtenidos de huevos o larvas criadas en laboratorio, con un suministro de alimento adecuado para asegurar la uniformidad del tamaño. 7.3. Condiciones previas 7.3.1. Condiciones que deben reunir los mosquitos. 7.3.1.1. Se emplean exclusivamente mosquitos hembras, de preferencia recién alimentadas y con sangre en el estómago. 7.3.1.2. En caso exista escasez de mosquitos, se emplea una mezcla de hembras alimentadas y no alimentadas, siempre que se determine la proporción entre unas y otras. 7.3.1.3. Cuando no sea posible conseguir un número suficiente de mosquitos adultos para la prueba, puede obtenerse la cantidad precisa recogiendo mosquitos en estadíos inmaduros y mantenerlos en el laboratorio hasta su emergencia a adulto. 7.3.1.4. En ciertos casos puede trabajarse exclusivamente con hembras que no hayan ingerido sangre, como las mantenidas en el laboratorio. 7.3.2. Condiciones que debe reunir el ensayo. 7.3.2.1. Conviene efectuar las pruebas en un local cerrado, no contaminado por insecticidas ni expuesto a condiciones extremadas de temperatura, humedad relativa, iluminación o ventilación. PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 6 de 18 7.3.2.2. Siempre que sea posible las pruebas comparativas se ejecutan en condiciones idénticas de humedad relativa y temperatura. 7.3.2.3. El transporte de los insectos a un laboratorio alejado produce con frecuencia muertes por causas ajenas a la acción del insecticida, lo que se pone de manifiesto por la alta mortalidad de los testigos. 7.3.2.4. El kit de susceptibilidad y/o los insecticidas pueden ser ordenados separadamente. Para los insecticidas la orden debe especificar el insecticida y el número del conjunto de estuches para organoclorados, organofosforafos, carbamatos y piretroides. 7.4. Aspectos de bioseguridad 7.4.1. Los analistas del laboratorio de Entomología deben estar especialmente capacitados e instruidos de los peligros potenciales provenientes de los productos a manipular y de las operaciones relacionadas a su trabajo y con conocimiento de las medidas de bioseguridad correspondientes y pertinentes. 7.4.2. Para una debida protección es necesario que los analistas del laboratorio de Entomología conozcan la toxicidad de los productos a manipular, las propiedades físicas, así como las vías de entrada al cuerpo, los síntomas de intoxicación y el tratamiento de primeros auxilios para atender cualquier caso de intoxicación. 7.4.3. Los analistas del laboratorio de Entomología no deben ingerir alimentos durante la manipulación del insecticida, y al final de la jornada deben de mudarse la ropa antes de consumir alimento alguno. 7.5. Equipos y materiales 7.5.1. Componentes del Kits de Susceptibilidad. - Doce (12) tubos de plástico de 125 mm de longitud por 44 mm de diámetro: Cinco (5) tubos de exposición marcados con un punto rojo. Dos (2) tubos control marcados con un punto verde. Cinco (5) tubos de reposo marcados con un punto verde. - Siete (7) correderas, cada uno con una tapa rosca a cada lado, y con un orificio de carga de 20 mm. - Paquetes de papeles impregnados con insecticidas - Cuarenta (40) hojas de papel limpio (12 x 15 cm) para forrar interiormente los tubos de reposo y observación. - Catorce (14) resortes angulares (7 de plata y 7de cobre) para sujetar los papeles aplicados a la pared interior de los tubos. - Dos (2) tubos aspiradores de vidrio de 12 mm de diámetro interior, y un (1) tubo flexible de 60 cm de longitud. - Un (1) rollo de cinta adhesiva. PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 7 de 18 EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO - Cuatro (4) m de gasa. - Dos (2) rollos de papel toalla. - 4 copias de formulario Anexo A.2. 7.5.2. Papeles impregnados con insecticidas Los papeles impregnados con insecticidas son preparados en la University Sains Malaysia (USM), Penang, Malaysia (centro autorizado por OMS). En forma de rutina los papeles son preparados solamente con las concentraciones discriminatorias (Anexo B). Los papeles impregnados con las concentraciones discriminatorias son aprovisionados en cajas de plástico; cada caja contiene 8 papeles. 7.6. Ejecución del método 7.6.1. Dentro de cada uno de los tubos sostenedores se inserta un pedazo de papel blanco limpio enrollado en forma cilíndrica para cubrir las paredes, se sujeta con un aro de acero. Se fija las unidades de correderas a los tubos (Anexo C). 7.6.2. Se colecta hasta 100 mosquitos hembras (Anopheles sp o Aedes sp) con un aspirador previsto. El daño a los mosquitos por mal manejo durante la recolección puede causar mortalidades engañosas. Los mosquitos son recolectados en lotes de no más de 10 y cuidadosamente transferidos a los tubos de reposo por el hueco que hay a cada lado hasta que haya de 20 a 25 por tubo. Cualquier variación de estas cantidades puede disminuir la veracidad de los resultados. 7.6.3. Puede ser necesario un periodo de prueba para asegurar que los especimenes dañados no se incluyan en la prueba. Con este propósito los tubos de mantenimiento se colocan parados con la redecilla para arriba durante 1 hora. Al final de este periodo se extraen los insectos dañados. 7.6.4. El analista coge los papeles impregnados con ingrediente activo de insecticida (organofosforado, organoclorado, carbamato y piretroide) con guantes y pinzas de punta fina. 7.6.5. Se coloca una hoja de papel impregnado enrollado dentro de cada cilindro o tubos de exposición (kits de susceptibilidad para mosquitos adultos) para cubrir las paredes y se sujeta en esa forma con un aro de cobre. 7.6.6. Mejorar la redacción. Después que un papel impregnado ha sido extraído del paquete, éste debe ser sellado cuidadosamente con la cinta adhesiva. Para el almacenamiento los paquetes son mantenidos en un sitio fresco pero no en refrigeración. 7.6.7. Se introducen los mosquitos en el tubo de exposición sujetando éste a la parte libre de la corredera que se jala hacia fuera hasta el punto en que la abertura esté totalmente libre de tal manera que no obstruya la boca del tubo; los mosquitos son soplados suavemente hacia dentro del tubo de exposición. Se cierra la corredera, se quita el tubo de mantenimiento colocándolo aparte. PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 8 de 18 7.6.8. Los tubos de exposición son acomodados parados con la rejilla hacia arriba durante el periodo requerido y bajo condiciones de iluminación difusa y moderada y humedad adecuada. 7.6.9. Al final del periodo de exposición requerido, se transfieren los mosquitos al tubo de mantenimiento por el procedimiento inverso. Cuando algunos mosquitos han sido derribados durante el periodo de exposición se sostienen en forma horizontal desalojando los insectos de la corredera antes de sacar los otros, mediante una suave adherencia al dedo del operador. 7.6.10. Se conecta el tubo de espera, se abre la corredera soplando los mosquitos dentro del otro tubo; se cierra la corredera y se quita el tubo de exposición. Luego se coloca el tubo de espera parado sobre la corredera, colocando sobre la rejilla un algodón mojado con agua. Las cajas de cartón, tazas, etc. pueden utilizarse en vez de los tubos de mantenimiento siempre y cuando esto sea constante. 7.6.11. Se mantienen los tubos por 24 horas en un lugar apartado y a la sombra donde la temperatura no exceda los 30°C (25°C± 2°C) y entre 70%Hr a 80%Hr. Siempre que sea posible las temperaturas máximas y mínimas del lugar donde están los tubos son registradas. Si es necesario los tubos son protegidos de las hormigas colocando los tubos en una plataforma puesta en un recipiente con agua. Si las condiciones son muy cálidas y secas, se puede preparar una cámara de humedad al colgar toallas húmedas en un recipiente controlando las temperaturas máximas y mínimas dentro. 7.6.12. La mortalidad se cuenta después de las 24 horas. Se extraen los mosquitos muertos, quitando la corredera con cuidado y separando los tubos. 7.6.13. Los insectos afectados que no puedan caminar deben contarse como muertos, si hay dificultad en contar los mosquitos vivos se sacude fuertemente el tubo para aturdirlos o anestesiarlos. 7.6.14. Se realizan 4 a 5 réplicas de 20 a 25 mosquitos por tubo con cada dosis diagnóstico y 1 a 2 controles con los papeles impregnados en el aceite. 7.6.15. Si la mortalidad en los testigos excede de 20% a pesar de ser insatisfactoria, los resultados son registrados y se realiza una investigación de las causas de tal mortalidad, tomando las precauciones necesarias para prevenirlas. Una posible causa es que los mosquitos fueron colectados de sitios fumigados. En tal caso es necesario colectar los ejemplares de lugares no rociados o probar con mosquitos provenientes de pupas o larvas de esos lugares. 7.6.16. Cada papel impregnado puede ser utilizado hasta 20 veces (OMS, 1981) o hasta tres semanas después de ser extraído del paquete, si se han tomado todas las precauciones posibles para evitar la evaporación de la solución insecticida. Con este fin los papeles son dejados en los tubos con las aberturas bien tapadas y colocadas en el estuche de prueba el cual a su vez se mantiene en un lugar fresco. Ningún papel es utilizado después de tres semanas de haber sido sacado del paquete. Sin embargo, la OMS (WHO, 1998) sugiere también que para los papeles impregnados con PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 9 de 18 piretroides no se usen más de 5 veces (en relación con los datos disponibles que demuestren eficacia sobre esta gama). 7.6.17. Cuando se realizan pruebas con papeles impregnados con insecticidas piretroides, los tubos de exposición permanecen en posición horizontal, debido a que estos insecticidas tienen un efecto knock-down (derribados) y los mosquitos pueden ser derribados rápidamente sin permanecer el tiempo establecido para cada insecticida y especie de mosquito en contacto con el mismo. 8. EXPRESIÓN DE RESULTADOS 8.1. Los resultados de los ensayos de susceptibilidad por el método de susceptibilidad o resistencia de los mosquitos adultos a los insecticidas se expresan como el porcentaje de mortalidad de los mosquitos expuestos a 60 minutos, a 24 horas de recuperación. 8.2. La interpretación de resultados se realiza considerando los rangos sugeridos por la OMS: - De 98 a 100% de mortalidad indica susceptibilidad. - De 80 a 97% mortalidad sugiere la posibilidad de resistencia que necesita ser confirmada. - <80% de mortalidad sugiere resistencia. Cuando la mortalidad es <95% en ensayos que son conducidos por debajo de las condiciones óptimas con un tamaño de muestra >100 mosquitos entonces la resistencia puede ser fuertemente sospechosa. 9. INFORME DE RESULTADOS Los resultados de las evaluaciones descritas en el presente documento son reportados en los formularios autorizados por el CNSP. 10. CONFIABILIDAD DEL MÉTODO 10.1. Si la mortalidad en los tubos control está entre 5% y 20%, los porcentajes de mortalidad son corregidos por la Fórmula de Abbott: Mortalidad media= % Mortalidad mosquitos expuestos – % Mortalidad mosquitos control X 100 100 – % Mortalidad mosquitos control 10.2. Si la mortalidad en los tubos excede al 20%, los resultados son registrados pero no corregidos. La precisión de la interpretación de los resultados depende de la confiabilidad de los datos obtenidos. Utilizando el máximo número de ejemplares por tubo (25) disminuye el efecto de las diferentes respuestas de los individuos. PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO 11. MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 10 de 18 REGISTROS La información originada por la susceptibilidad o resistencia de los mosquitos adultos a los insecticidas y toda información generada por esta actividad, son registrados en los formularios anexos. 12. ANEXOS ANEXO A: Formularios ANEXO A.1: FOR-001 MET-CNSP-003 Método de ensayo de susceptibilidad o resistencia de los mosquitos adultos a los insecticidas. ANEXO A.2: FOR-002 MET-CNSP-003 Determinación discriminato-rias en mosquitos adultos. de de ANEXO B: Concentraciones discriminatorias utilizados en el control de Malaria. ANEXO C: Ensayo de susceptibilidad para mosquitos adultos dosis insecticidas PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-001 Edición Nº 01 Pág. 11 de 18 EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO ANEXO A.1 FOR-001 METCNSP-003 FORMULARIO Edición Nº 01 ENSAYO DE SUSCEPTIBILIDAD (MÉTODO DE SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS) Pág. 1 de 2 Nombre del evaluador: Nombre y dirección de la Institución: Información del Área País Departamento Localidad Distrito Coordenadas geográficas: N/S E/O Breve descripción del área Elevación Cultivo principal (s) Especifique los insecticidas usados en el área muestreada Salud pública Mosquitero tratado con insecticida: por cuanto tiempo (años) Aplicación residual en la vivienda: por cuanto tiempo (años) Larvicida: por cuanto tiempo (años) Agricultura: por cuanto tiempo (años) Información de la muestra Especie evaluada Miembro de complejo Sexo: Edad (días) (si es relevante) (cuando sea aplicable) Estado fisiológico: No alimentada con Alimentada con Semi-grávida Grávida Técnica muestreo: Colecta de larvas Progenie F1 Atrayente persona Trampa con animal Otros (especificar): Colecta de larvas, tipo de criadero: Charcos de agua: Pozos: Brazo del río Canal de irrigación Depósitos: Otros: Información del insecticida Insecticida evaluado Concentración Papeles impregnados por: Datos de impregnación: Datos de expiración: Fecha de apertura de la caja: Numero de veces que se ha usado el papel: Condiciones de almacenamiento: Temperatura ambiente: °C Refrigerado a: °C Condiciones de la prueba Fecha de la prueba: Periodo de exposición (minutos) Temperatura De Periodo de exposición Periodo de recuperación Humedad relativa a de a MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-001 Edición Nº 01 Pág. 12 de 18 EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO ANEXO A.1 (continuación) FOR-001 METCNSP-003 FORMULARIO Edición Nº 01 ENSAYO DE SUSCEPTIBILIDAD (MÉTODO DE SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS) Réplica 1 Réplica 2 Réplica 3 Réplica 4 Pág. 2 de 2 Total expuestos Total control N° expuestos N° muertos al final del periodo Mortalidad observada (%) Mortalidad corregida (%) N° de caídos después de la exposición por minutos 10 15 20 30 40 50 60 80 Especie identificada* Mecanismo de resistencia** * = solamente aplicable al DDT y piretroides ** = identificar si es miembro de un complejo Interpretación: Nombre del evaluador: Fecha de lectura final: Firma del evaluador Fuente: WHO. Test procedures for insecticide resistence monitoring in malaria vectors, bio efficacy and persistence of insecticides on treated surfaces. WHO/CDC/CPC/Mal/98.12. MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-001 Edición Nº 01 Pág. 13 de 18 EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO ANEXO A.2 FOR-002 METCNSP-003 FORMULARIO Edición Nº 01 DETERMINACIÓN DE DOSIS DISCRIMINATORIAS EN MOSQUITOS ADULTOS Pág. 1 de 2 Número de prueba: Insecticida: Concentración/dosis (%) Especie de Anophelino probado: Cepa: Historia de la colonia: Edad (días): (origen, periodo de mantenimiento en el laboratorio) Fecha de la prueba: Día Mes Año Rango de temperatura Rango de humedad Periodo de exposición De a Periodo de exposición De a Periodo de recuperación De a Periodo de recuperación De a Resultados de la prueba y otra información Prueba Fecha de uso del papel impregnado N° mosquitos expuestos N° mosquitos caídos al final del periodo de exposición N° mosquitos muertos al final del periodo Mortalidad observada (%) Mortalidad corregida (%) NA = no aplicable Prueba Réplica 1 Prueba Réplica 2 Prueba Réplica 3 Prueba Réplica 4 Total de la prueba NA Total control MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-001 Edición Nº 01 Pág. 14 de 18 ANEXO A.2 (continuación) FOR-002 METCNSP-003 FORMULARIO DETERMINACIÓN DE DOSIS DISCRIMINATORIAS EN MOSQUITOS ADULTOS Edición Nº 01 Pág. 2 de 2 Fórmula de Abbotts*: Mortalidad media= % Mortalidad mosquitos expuestos - % Mortalidad mosquitos control X 100 100 - % Mortalidad mosquitos control *Aplicada cuando la mortalidad del control está entre 5-20% Nombre del evaluador: Fecha: Firma del evaluador Nombre y dirección de la institución: Fax N°: E-mail: Tel N°: Comentario: Fuente: WHO. Test procedures for insecticide resistence monitoring in malaria vectors, bio efficacy and persistence of insecticides on treated surfaces. WHO/CDC/CPC/Mal/98.12. MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 15 de 18 EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO ANEXO B CONCENTRACIONES DISCRIMINATORIAS DE INSECTICIDAS PARA MOSQUITOS ADULTOS (una hora de exposición) Concentración discriminatoria Clase de insecticidas Insecticida Anophelinos DDT Organoclorados Organofosforados Carbamatos Piretroides Dieldrin Aedes aegypti 4% 4% 0,4% (a) – 4% – (b) Malathion 5% 0,8% Fenitrothion 1% – Propoxur 0,1% 0,1% Bendiocarb 0,1% – Permethrina 0,75%(1) 0,25% Deltamethrina 0,1%(2) – Lambda Cyhalothrina 0,1%(2) 0,03% Cyfluthrin 0,1%(2) – Cypermethrina 0,1%(2) – Alphacipermethrina 0,1%(2) – Etofenprox 0,5%(1) – Fuente: (1) WHO/CDS/CPC/MAL/98.12 Test procedures for Insecticide resistance monitoring in Malaria vectors, bio-efficacy and persistence of insecticides on treated surfaces (1998). (a) Mata susceptibles (SS) pero heterocigotos no resistentes (Rs). (b) Mata heterocigotos (Rs) pero homocigotos no resistentes (RR). (2) INS (2002). Susceptibilidad de los vectores de Malaria a los insecticidas en el Perú: Informe Técnico N° 5 Evaluación de la Susceptibilidad a los Insecticidas a los Mosquitos adultos del género Anopheles de las Regiones Maláricas del Perú. Lima-MINSA. PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 16 de 18 ANEXO C EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO Ensayo de susceptibilidad para mosquitos adultos Foto: Blga. Miriam Graciela Palomino Salcedo Kits de Susceptibilidad para mosquitos adultos (OMS) Foto: Blga. Miriam Graciela Palomino Salcedo Mosquitos Anofelinos capturados PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 17 de 18 ANEXO C (continuación) EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO Ensayo de susceptibilidad para mosquitos adultos Foto: Blga. Miriam Graciela Palomino Salcedo Tubo de reposo y exposición (Kit de OMS) Foto: Blga. Miriam Graciela Palomino Salcedo Tiempo de exposición de mosquitos adultos (60 minutos) PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS MÉTODO DE ENSAYO SUSCEPTIBILIDAD O RESISTENCIA DE LOS MOSQUITOS ADULTOS A LOS INSECTICIDAS MET-CNSP-003 Edición Nº 01 Pág. 18 de 18 ANEXO C (continuación) EL PRESENTE DOCUMENTO SE DISTRIBUYE COMO COPIA NO CONTROLADA Y TIENE UNA VIGENCIA DE 2 AÑOS CONTADO A PARTIR DE LA FECHA DE SU APROBACIÓN EL EQUIPO DE GESTIÓN DE LA CALIDAD DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PUBLICA PROCESA LAS PROPUESTAS DE MODIFICACIÓN Y ACTUALIZA LAS EDICIONES VIGENTES DEL MISMO Ensayo de susceptibilidad para mosquitos adultos Foto: Blga. Miriam Graciela Palomino Salcedo Tubos de reposo. Después de la exposición, se transfieren los mosquitos al tubo de reposo a un mantenimiento óptimo de temperatura y humedad. La mortalidad es determinada después de 24 horas. PROHIBIDO REPRODUCIR SIN AUTORIZACION DEL DIRECTOR GENERAL DEL CENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA DEL INS