Uso de Sustancias Antioxidantes en el Enraizamiento de Estacas de

Uso de Sustancias Antioxidantes
en el Enraizamiento de Estacas de Yerba Mate
Tarragó, José R. - Sansberro, Pedro A. - Mroginski, Luis A.
Facultad de Ciencias Agrarias -UNNE - Cátedra de Fisiología Vegetal, Instituto de Botánica del Nordeste.
CC: 209 - (3400) Corrientes, Argentina.
E-mail: [email protected]
INTRODUCCIÓN
La yerba Mate (Ilex paraguariensis St. Hil.), es una especie dioica que se propaga por semillas, lo cual trae el
inconveniente de la heterogeneidad en las plantaciones resultantes. Por ello, se requiere de un método
eficiente en la multiplicación vegetativa de esta especie, ya que la selección de plantas con características
fenotípicas destacadas y su posterior multiplicación, constituye un método relativamente rápido para obtener
material superior en los caracteres elegidos.
En general, el material adulto proveniente de especies leñosas; presenta una elevada cantidad de compuestos
fenólicos, los cuales, son liberados de los compartimentos celulares en respuesta a un daño físico (por
ejemplo, durante la preparación de las estacas). Estos fenoles pueden ser oxidados por el oxígeno del aire,
peroxidasas o polifenoloxidasas y forman otros compuestos llamados quinonas; éstas se polimerizan
rápidamente y forman uniones covalentes con las proteínas, ocasionando el cese de la actividad enzimática
(Preece y Compton 1991), lo cual desencadena el declinamiento y muerte de la estaca.
Si bien, las sustancias antioxidantes, no impiden la oxidación de los compuestos fenólicos, previenen la
polimerización de las quinonas y reducen la probabilidad de que éstas reaccionen con las proteínas (Compton
y Preece 1986).
El propósito de este trabajo es estudiar el efecto que ejercen varias sustancias antioxidantes en el
enraizamiento de estacas plurinodales de yerba mate.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se emplearon trozos de ramas con 4-6 entrenudos y con diámetros entre 3 y 5 mm, extraídos de varios
individuos adultos (9 años de edad) que crecían en condiciones de campo (cedidas gentilmente por el
Establecimiento La Cachuera S.A.). Estas fueron acondicionadas, para su transporte, en bolsas plásticas y
transportadas en condiciones refrigeradas (12-15 °C). Los tratamientos se efectuaron dentro de las 24 hs de su
extracción. Antes del inicio del experimento, se cortaron todas las láminas foliares, salvo la más cercana al
ápice, de la cual sólo se dejó la mitad.
Previo al tratamiento con la mezcla enraizante, las estacas tuvieron los 2 cm basales sumergidos, durante
24 hs en 15 mM de Phloroglucinol (1,3,5-trihydroxybenzene), Catechol (1,2–benzenediol), 4-cloro resorcinol
(1,3-dihydroxy-4-chlorobenzene), PPZ (1-phenyl, 3-methyl, pyrazol -5- ona), ácido ascórbico ó en 0.5 % de
PVP (polyvinylpyrrolidone, PVP-40).
Se emplearon las siguientes mezclas enraizantes:
1- IBA (ácido indolbutírico) 1.5% + sacarosa 10% + Captan 10% (composición modificada de Caso et al
1993)
2- ANA (ácido naftalenacético) 1.5 % + sacarosa 10% + Captan 10%
En ambos casos, se empleó como vehículo talco inerte. Todas las drogas utilizadas en este experimento tiene
más del 98% de pureza (Sigma, Chemical Co).
Para el enraizamiento las estacas se colocaron en tubetes (150 cm3, HIKO V-150, Paul Forestal S.R.L.,
Buenos Aires, Argentina) con perlita. Las condiciones ambientales fueron dadas por una cámara diseñada
para tal fin, la cual consta de 3 módulos de 200 x 150 x 220 cm, provista de un sistema automático que
permite mantener la humedad del ambiente en el valor deseado a través de un sistema de niebla. Además,
cuenta con 2 extractores de aire, que permiten renovar la fase gaseosa en forma automática a través de un
control digital. La temperatura en la fase aérea se mantuvo entre 22 y 27 °C y la temperatura del substrato se
mantuvo entre 20 y 25 °C mediante el empleo de mantas térmicas (Hotbox Heatwave, Compañía ArgentinaHolandesa S.A., Buenos Aires, Argentina).
Se emplearon 10 estacas por tratamiento, realizándose 3 repeticiones. Cada 7 días se monitoreó la oxidación
en cada uno de los tratamientos y al cabo de 70 días se determinó el número de estacas enraizadas.
RESULTADOS
Es importante destacar el comportamiento de la curva de oxidación a través del tiempo, en la cual se observó
que, en la mayoría de los casos, el pre-tratamiento con sustancias antioxidantes es efectivo durante las
primeras 6 semanas, momento en que aumenta la oxidación cuyo valor final depende del tratamiento
efectuado. En todos los casos, la oxidación fue menor cuando se empleó IBA en la mezcla enraizante (Fig. 1
a-b).
Si bien, se ha inducido el enraizamiento de estacas, empleando el ácido naftalenacético (ANA), la auxina, sin
duda más utilizada en el enraizamiento de material adulto, es el ácido indolbutírico (IBA) debido a su mayor
persistencia en la estaca (Blakesley 1994). En tal sentido, el empleo de IBA en la mezcla enraizante, permitió
que un mayor número de estacas enraíce y en general, estas presentaron un mayor número de raíces
principales respecto a los tratamientos con ANA (Tabla 1), esto favorece una más rápida implantación y una
mejor exploración del suelo una vez trasplantadas.
Tabla 1: Efecto de la combinación de diferentes sustancias antioxidantes con ANA ó IBA sobre el
enraizamiento de estacas de Yerba Mate.
Estacas con raíces (%)
Pre-tratamiento
Control
Phloroglucinol
Catechol
4-cloro resorcinol
PVP
PPZ
Ácido ascórbico
Número de raíces/estaca
ANA
33.3 ± 16.6
33.3 ± 33.3
0
55.5 ± 29.3
61.1 ± 5.5
44.4 ± 22.2
50.0 ± 28.8
IBA
ANA
83.3 ± 8.3
52.4 ± 2.3
85.7 ± 8.2
38.1 ± 11.9
66.7 ± 22.0
56.6 ± 8.3
36.7 ± 11.6
3.5 ± 1.5
3.0 ± 1.0
0
3.5 ± 1.8
5.4 ± 0.9
6.2 ± 3.3
4.0 ± 1.7
IBA
7.6 ± 2.3
7.0 ± 3.1
10.3 ± 2.1
5.0 ± 1.4
8.0 ± 2.7
6.1 ± 1.2
4.8 ± 1.5
* ± Error estándar de la media (SEM)
CONCLUSIÓN
1) La mezcla enraizante que contiene IBA permitió –en general- un mayor número de estacas enraizadas y
un mayor número de raíces por estaca.
2) El empleo de sustancias antioxidantes no incrementa el porcentaje de estacas enraizadas. Por el contrario
en la mayoría de los casos, producen una disminución de dicho porcentaje. El empleo de catechol si bien
no incrementó el número de estacas enraizadas, cuando se empleó la mezcla que contenía IBA, posibilitó
una mayor cantidad de raíces.
BIBLIOGRAFÍA
Blakesley D 1994. In TD Davis; BE Haissig (Eds), Biology of adventitious root formation. Plenum Press,
New York; pp. 143-154.
Caso OH, LA Dotta, P Esteves 1993. In Actas XX Reunión Argentina de Fisiología Vegetal: 310-311.
Compton ME, JE Preece 1986. IAPTC NewsLetter 50: 9-18.
Preece JE, ME Compton 1991. In YPS Bajaj (Ed), Biotechnology in Agriculture and Forestry. Vol. 17.
Springer-Verlag, Berlin; pp. 168-189.
Fig 1a: Efec to del pretratamiento c on diferentes antioxidantes sobre el ennegrec imiento de estac as de
Yerba Mate. I. Interac ción con IBA
a) Contro l
Est acas en n eg recidas en %
100
Mezcla enraizante : IBA 1.5 % + sac arosa 10%
+ Captan 10%
75
50
25
0
1er
2da
3er
4ta
5ta
6ta
7m a 8va
9na
10m a Sem an a
Tiempo d e in cu baci ón
b) Phl orog lucinol 15 mM
c) Catechol 15 mM
100
Es tacas e nnegrecidas en %
Estac as enne grecidas en %
100
75
50
25
0
er
1
2
da
er
3
ta
4
ta
5
ta
6
7
ma
8
va
na
9
75
50
25
0
ma
10
1
Esta cas e nnegrecida s en %
Estaca s ene ngrecida s en %
da
3
ra
4
ta
5
ta
6
ta
ma
8
ma
8
ma
8
7
va
9
na
10
ma
100
1 00
75
50
25
75
50
25
0
0
1
ra
ra
da
3
2
4
ta
ta
5
ta
6
7
ma
8
va
na
9
10
ma
er
1
2
da
er
3
ta
4
5
ta
ta
6
7
va
9
na
va
9
ma
10
g ) Áci do ascórbico 1 5 mM
f) PPZ 1 5 mM
100
Esta cas e nnegrecida s en %
10 0
Es ta cas ennegrecidas en %
2
e) P VP 0 .5 %
d) 4-Cl Resorci no l 15 mM
75
50
25
0
ra
75
50
25
0
er
1
da
2
3
er
ta
4
ta
5
ta
6
ma
7
va
8
na
9
10
ma
er
1
2
da
er
3
4
ta
ta
5
ta
6
7
na
ma
10
Fig 1b: Efecto del pretratamiento con diferentes antioxidantes en el ennegrecimiento de estacas de
Yerba Mate. II. Interacción con ANA
a) Cont rol
Esta cas ennegrecidas en %
100
Mezcla enraizante : ANA 1.5 % + sacarosa 10%
+ Captan 10%
75
50
25
0
1
ra
2
da
3
ra
4
ta
5
ta
ta
6
7
ma
va
8
9
na
10
ma
Semana
Tiempo de incubación
b) Phl oroglucinol 15 mM
c) Catechol 15 mM
1 00
Estac as e nnegrecidas e n %
Esta cas ennegrecidas en %
100
75
50
25
0
75
50
25
0
1ra
2da
3r a
4ta
5ta
6ta
7m a
8va
9na
10ma
1
er
da
er
2
3
4
ta
5
ta
6
ta
7
ma
va
8
9
na
ma
10
e) P VP 0.5 %
d) 4-Cl Resorcinol 15 mM
100
Esta ca s enne gre cid as e n %
Es taca s enn egrecidas en %
1 00
75
50
25
50
25
0
0
er
1
da
2
3
er
4
ta
ta
5
ta
6
ma
7
va
8
na
9
10
1er
ma
f) PPZ 15 mM
3er
2da
4ta
6ta
5ta
7 ma
8va
9na
10ma
g) Ácido ascórbico 15 mM
100
100
Es ta cas enne grecida s e n %
Estaca s ennegrecidas en %
75
75
50
25
0
1
er
2
da
3
er
4
ta
ta
5
6
ta
ma
7
8
va
9
na
10
ma
75
50
25
0
1
er
da
2
er
3
ta
4
5
ta
6
ta
ma
7
8
va
na
9
10
ma