control de cepas

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
QUIMICA DE ALIMENTOS
BIOTECNOLOGÍA
NOMBRE: Ivonne Vásquez
CURSO: 9º Alimentos
CONTROL DE CEPAS
 REACTIVACION DE CULTIVO.
Para reactivar los cultivos congelados, se debe proceder a descongelar el criovial a
una temperatura ambiente o en su caso también se puede realizar la descongelación
en un baño de agua a una temperatura de 36 – 37 ºC.
Posteriormente a esto se procede a tomar una perla del criovial y se lo transfiere a un
medio adecuado.
Generalmente se preparan subcultivos en fase estacionaria, en tubos con 10 ml de
caldo BHI o Caldo Nutritivo, se realiza la incubación en el shaker orbital (180 rpm y
37oC por 48 horas, dependiendo de la cepa). Este paso nos sirve para homogenizar a
la cepa en el medio y que se adapte a el.
 TECNICA:
1. Reactivar el cultivo congelado. Preparar subcultivos en fase estacionaria (10
ml de BHI o caldo nutritivo). Incubación en el shaker orbital.
2. Pasar 1 mL de la suspensión a los tubos para preparar las respectivas
diluciones, de acuerdo a lo que se requiera realizar.
3. De cada dilución se procede a sembrar en el medio respectivo para la cepa.
La técnica de siembra a realizar es por vertido y se procede a la incubación.
VERTIDO Se realiza para observar la viabilidad de la cepa
ESTRIADO  Para verificar su pureza
4. Una vez realizada la incubación, se procede a registrar las características de
la cepa( morfología, fisiología)
Cepa de Referencia
(Sub-cultivada 1 sola vez)
Cepa de Reserva
(Mantener en condiciones
específicas de la cepa)
Descongelación/Reconstitución
Cepa de Trabajo
Especificar tiempo y condiciones
de almacenamiento
Uso rutinario
 PUREZA
Se realiza a diferentes niveles del proceso. El objetivo es asegurar que las cepas
conserven sus características bioquímicas.
La preparación de cultivos puros se lleva a cabo aislando colonias en medios
nutricios selectivos y precediendo después a su cultivo.
El proceso se debe repetir algunas veces (como mínimo tres) para asegurar que el
microorganismo está en cultivo puro.
 VIABILIDAD
Se define la viabilidad como la capacidad del microorganismo para dividirse y dar
lugar a una descendencia.
Se evalúa mediante la cuenta indirecta de las colonias que aparecen sobre el medio,
después de sembrar una serie de diluciones sucesivas de la suspensión original e
incubándolas, durante el tiempo necesario.
El método más habitual para la determinación de células viables se basa en el conteo
del número de UFC, otro método es mediante turbidimetría.
El porcentaje de viabilidad, se determina mediante la relación del número de
bacterias viables determinadas al tiempo del muestreo, con respecto a aquellas
determinadas al inicio del período de conservación.
La viabilidad se realizará en medios que provean los nutrientes necesarios.
 IDENTIFICACION
La identificación de una bacteria es su asignación a un taxón según una clasificación
dada. Se determinan las características morfológicas (fenotípicas, genotípicas).
Se realizan técnicas convencionales para la identificación de las cepas:
-
coloración Gram (para identificar morfología, reacción tintorial y pureza del
cultivo)
-
determinación de la presencia de las enzimas citocromooxidasa, catalasa, ONPG
-
prueba de utilización de azúcares (glucosa, maltosa, lactosa, sacarosa, fructosa y
manitol)
-
crecimiento en aerobiosis o anaerobiosis
-
movilidad
Realización de pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a especie. Estas
dependerán del género o familia determinado. (ej: producción de pigmentos,
producción de indol a partir de triptófano, producción de coagulasa, de fenilalanina
deaminasa, etc.)
BIBLIOGRAFÍA:
1. KUNS, Benno; CULTIVO DE MICROORGANISMOS PARA LA PRODUCCION DE
ALIMENTOS, Editorial Acribia, Zaragoza, 1986
2. http://bilbo.edu.uy/-microbio/tioglicolato.html
3. www.procedimiento_para_el_aislamientodecepasindustrialesdesacharomyces.ht
ml