universidad de pamplona facultad de salud programa de

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 1
GENERALIDADES
OBJETIVOS:
•
•
Conocer y poner en practica las normas básicas de bioseguridad
impartidas en el laboratorio clínico
Adquirir destreza en la lectura del frotis de sangre periférica y conocer su
forma de reporte
FUNDAMENTO:
NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO
El bacteriólogo cada día tiene mas exigencias en su profesión para dar un
resultado de óptima calidad, pero de igual manera es un riesgo mayor que
corre con la manipulación de las muestras que tiene que procesar. Por ello es
de gran interés conocer el conjunto de normas y procedimientos que garantizan
el control de los factores de riesgos físicos, químicos y biológicos que pudieran
afectar al personal vinculado al laboratorio clínico o a los miembros de la
comunidad.
Normas básicas de bioseguridad que debe cumplir un trabajador en el
laboratorio son:
•
•
•
Lavarse las manos con agua y jabón (o el antiséptico necesario) antes
de iniciar cualquier procedimiento, después de terminado el
procedimiento (sobre todo si manipuló material y/o especímenes de
carácter infeccioso) e incluso en el momento de abandonar el área de
trabajo.
Limpiar y desinfectar previamente el área de trabajo así no se valla a
trabajar con materiales de carácter infeccioso. Una vez limpia, debe
lavarse nuevamente las manos. En los mesones no se debe colocar
material personal que sirva de vehiculo infeccioso como bolsos,
chaquetas, libros, etc.
Utilizar el equipo de protección para todo tipo de proceso: Bata,
uniforme, guantes, gorro, tapabocas, zapatos de suela no deslizable.
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Todo el material a colocarse debe estar estéril en el momento de uso y
una vez termina el procedimiento debe descartarse aquel material que
es descabale y desinfectar y/o esterilizar las prendas contaminadas
mediante procesos adecuados. No se debe llevar la ropa de laboratorio
fuera de este y debe tenerse a la mano otra bata o juego de ropa limpioestéril para salir del mismo
El personal no debe introducir ni consumir alimentos en las áreas del
laboratorio. No se debe guardar comida ni bebidas en los refrigeradores
ni en ninguna de las zonas de trabajo. Tampoco se debe permitir la
aplicación de cosméticos ni el uso de anillos dentro del laboratorio. Se
recomienda que las damas aseguren por detrás su cabello, de forma tal
que no entren en contacto con superficies contaminadas.
No pipetear con la boca, usar ayudas mecánicas tales como
dispensadores, bulbos y/o pipetas automáticas.
Evitar la exposición a gases, vapores y aerosoles por medio de la
campana de gases y extracción, especialmente con sustancias volátiles
y toxicas
Utilizar las diferentes cabinas de seguridad para trabajar tanto
elementos infecciosos como tóxicos.
Cada laboratorio debe tener un equipo de emergencia para derrames
con el fin de neutralizar reactivos ácidos, bases y solventes cuando
estos se derramen, e instruir a los empleados sobre su uso.
Cada laboratorio debe tener materiales y reactivos necesarios para
realizar los procesos de desinfección y esterilización necesarios
No permitir la entrada de niños y animales a las áreas de trabajo
Autorizar el paso a áreas del laboratorio, solo a las personas que hayan
sido informadas sobre los posibles riesgos y que satisfagan los
requisitos que se exigen para entrar
Terminado el proceso técnico se deben lavar las manos bajo las
condiciones de asepsia que tenga estandarizadas el laboratorio
Una vez terminada las labores el estudiante debe recoger todo el
material de trabajo, descartar cada material en su sitio y condición
apropiada, limpiar y desinfectar nuevamente los mesones, dejar las
sillas debajo de los mismos, ordenar el sitio de trabajo, asegurarse que
las llaves de gas, agua y otros estén perfectamente cerradas y lavarse
las manos antes de abandonar el sitio de trabajo
Cada laboratorio de acuerdo con su perfil ocupacional, va agregando
normas a sus trabajadores con el fin de garantizar su seguridad en el
laboratorio
Las agujas y las jeringas usadas antes de descartarlas debe pasar por el
Guardián; nunca vuelva a colocar la aguja en su funda, y deben ser
incineradas
•
Al manipular muestras biológicas utilizar guantes siempre y con mucha
precaución, marcar correctamente todos los reactivos que se utilicen.
PRACTICA: ANALISIS DE EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA
FROTIS DE SANGRE PERIFERICA
El frotis de sangre periférica es un modelo evaluativo de las diferentes líneas
sanguíneas que sirve para valorar el funcionamiento general de la mėdula
ósea a través de sus componentes celulares, lo cual implica la evaluación de
las líneas eritrocíticas, leucocitaria y megacariocítica, determinando
anormalidades en forma, tamaño, color e inclusiones citoplasmáticas, dando
una medida cuantitativa y cualitativa de los elementos que lo conforman
El FSP es un reflejo del buen funcionamiento de la mėdula ósea y de los
diferentes factores que influyen en la presencia de células maduras en calidad
y cantidad normal en el tejido sanguíneo. Es necesario realizar una evaluación
acertada para poder conducir con acierto los hallazgos patológicos.
Para un buen examen del FSP es necesario realizar un buen extendido de
sangre periférica realizado con muestras de sangre obtenidas por punción
venosa y/o capilar SIN ANTICUAGULANTE
MATERIALES Y EQUIPOS:
•
•
•
Aceite de inmersión
Microscopio
Láminas de colección.
PROCEDIMIENTO:
•
•
•
Escoja una lamina y enfóquela en el microscopio
En un aumento de bajo poder (10x) y mirando el cuerpo del extendido,
escoja 10 campos microscópicos uniformes y homogéneos donde los
eritrocitos se encuentren bien distribuidos para la observación de la
morfología de glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas
Realizar el informe de forma correcta teniendo en cuenta lo siguiente:
VALORACION DE GLOBULOS ROJOS:
Los glóbulos rojos que no presentan anormalidades se informa como:
NORMALES EN MORFOLOGIA.
En aquellos FSP en los que se encontramos anormalidades se reporta cada
patología.
•
ANISOCITOSIS:
El término anisocitosis implica presencia de células de diferente tamaño, para
evaluarla se tiene en cuenta el número de estas en el promedio de 10 campos
y se reporta así:
NORMAL
0-5
ADE
LIGERA
6 - 15
16.1 - 18
MODERADA
16 - 30
18.1 - 20
MARCADA
Mayor de 30
Mayor de 20.1
Los contadores automatizados actuales nos informan el grado de dispersión en
tamaño en el eje X de los glóbulos rojos contados, utilizando el histograma de
frecuencias de hematíes calcula el ADE (ancho de distribución de eritrocitos) o
RDW. Por lo tanto, un ADE mayor de 15,5 (valor normal encontrado para
nuestra población) podría relacionarse con anisocitosis, si esta acompañado de
VCM disminuido, podríamos pensar en anisocitosis con microcitosis, y si esta
aumentado este VCM, la relacionaríamos con macrocitosis.
Se debe tener cuidado con estas apreciaciones, ya que en la practica se puede
observar el ADE aumentado por causas diferentes a la anisocitosis, como es el
caso de poiquilocitosis con microesferocitosis, esquistocitos, anulocitos,
leptocitos, debido a que estas células son de menor tamaño y pueden tener un
registro en volumen menor que en un discolito, llegando incluso a ser menores
de 30 f. También se puede encontrar un VCM aumentado por el diámetro de
ovalocitos, eliptocitos, sin necesidad de hablar de células macrocíticas, o
detectar el ADE aumentado con un VCM normal en pacientes con anemias
dimorfas, en los que vamos a encontrar poblaciones tanto de micro como de
macro en el FSP.
La importancia es corroborar los resultados que arrojan los equipos con la
observación minuciosa del FSP
Para evaluar la intensidad de micro y macrocitosis se tiene en cuenta los
siguientes parámetros:
Se informa por cruces dependiendo de la cantidad de glóbulos rojos
microcíticos o macrocíticos en un promedio de 10 campos. Para realizar la
macrocitosis y la microcitosis con el VCM tenemos en cuenta los siguientes
parámetros:
INDICE
Micro:
VCM (fl)
NORMAL
LIGERA (+)
6 - 15
MODERADA
(++)
16 - 30
MARCADA
(+++)
Mayor de 30
0 -5
81 - 99
80 - 70
69 - 60
Menor de 60
Macro:
VCM (fl)
80 - 99
100 - 108
109 - 120
Mayor de 120
• POIQUILOCITOSIS:
Hablamos de poiquilocitosis cuando encontramos variaciones en la forma de
los glóbulos rojos.
Se informa como ligera, moderada o marcada con presencia de…… y se
especifica a expensas de que esta dada y en que intensidad cada una.
NORMAL
0 -5
LIGERA (+)
6 - 15
MODERADA (++)
16 - 30
MARCADA (+++)
Mayor de 30
Ejemplo: moderada poiquilocitosis con presencia de codocitos (++) y eliptocitos
(+)
El anterior dato se obtiene del promedio de cada una de las diferentes formas
y el valor total de la poiquilocitosis será la sumatoria de todas. Se tendrá en
cuenta tanto la sumatoria de todas las células de diferente forma como el dato
individual de cada una de las formas.
Es necesario corroborar todo dato de los equipos con la observación del FSP.
Por ejemplo, los esferocitos, a pesar de tener un tamaño menor que los
discocitos, el volumen es muy semejante a estos, por lo tanto no afecta el
VCM.
En la siguiente tabla se observa las diferentes formas con la nomenclatura
estandarizada y su relación con el VCM:
FORMA
ANORMAL
Esferocito
Acantocito
Drepanocito
Codocito
Leptocito
Eliptocito
Equinocito
Esquistocito
Ovalocito
Anulocito
Estomatocito
Dacriocito
•
NORMAL
LIGERA (+)
0
0
0
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1 -5
1 -5
1 -5
2 -5
2 -5
2 -5
2 -5
2 -5
2 -5
2 -5
2 -5
2 -5
HIPOCROMIA:
MODERADA
(++)
6 - 15
6 - 15
6 - 15
6 - 15
6 - 15
6 - 15
6 - 15
6 - 15
6 - 15
6 - 15
6 - 15
6 - 15
MARCADA
(+++)
Mayor de 15
Mayor de 15
Mayor de 15
Mayor de 15
Mayor de 15
Mayor de 15
Mayor de 15
Mayor de 15
Mayor de 15
Mayor de 15
Mayor de 15
Mayor de 15
RELACION
CON EL VCM
No afecta
No afecta
Disminuye
Disminuye
Disminuye
Aumenta
No afecta
Disminuye
Aumenta
Disminuye
Disminuye
Disminuye
Se considera los glóbulos rojos hipocrómicos, cuando su contenido de
hemoglobina es inferior al normal. La carencia de hemoglobina severa o
marcada, por lo general, trae como consecuencia que los glóbulos rojos se
deforman produciéndose formas anormales y carentes de hemoglobina, como
los codocitos, anulocitos, y leptocitos entre otros.
Para evaluar la hipocromía se debe contar diez campos, sacar el promedio de
glóbulos rojos hopocrómicos y compararlo con la tabla que presenta a
continuación:
INDICE
NORMAL
HCM (pg)
0-5
29 - 33
•
LIGERA
(+)
6 - 15
28 - 27
MODERADA
(++)
15 – 30
26 - 25
MARCADA
(+++)
Mayor de 30
Menor de 24
POLICROMATOFILIA:
Un aumento en la policromatofilia observada en FSP es reflejo de una medula
ósea en estrés que esta respondiendo a la hipoxia generada por la no
disposición de oxigeno en los tejidos. Estos glóbulos rojos policromáticos del
estrés tienen un tamaño superior a los policromáticos de respuesta medular
normal. La policromatofilia se relaciona directamente con reticulocitos
revelados con la coloración supravital.
Observamos policromatofilia en anemias hemolíticas congénitas o adquiridas,
anemias deficitarias en tratamiento.
Para informar la policromatofilia se debe contar diez campos, sacar un
promedio y comparar con la siguiente tabla
INDICE
Reticulocitos
(%)
NORMAL
0. – 1.5
LIGERA
(+)
1.6 – 2.5
MODERADA
(++)
2.6 – 3.5
MARCADA
(+++)
Mayor de 3.6
0.5 – 1.5
1.6 - 4
4.1 - 6
Mayor de 6
• NORMOBLASTOS:
Sin importar el estado de maduración, su informe se realiza en porcentaje en
100 células blancas contadas
•
INCLUSIONES ERITROCITARIAS:
1. PUNTEADO BASOFILO:
El punteado basófilo fino se observa generalmente en trastornos
caracterizados por la alteración en la biosíntesis de la hemoglobina como en
los síndromes diseritropoyėticos, hemoglobinopatias. El punteado basófilo
grueso se observa en procesos tóxicos como en intoxicaciones por plomo, no
obstante, cualquiera de los dos fino o grueso se puede encontrar
indiscriminadamente en cualquiera de los casos mencionados.
2. CUERPOS DE HOWELL – JOLLY:
Los observamos en todas las anemias hemolíticas graves, anemias
diseritropoyėticas. Un pequeño número de estas inclusiones aparece tras la
esplenectomía, la asplenia congénita, en la mielofibrosis avanzada y en la
eritroblastosis fetal
3. ANILLOS DE CABOT:
El anillo por lo general se encuentra asociado a otras inclusiones como el
punteado basófilo.
4. CUERPOS DE PAPPENHEIMER:
Son indicativos de alteraciones en la eritropoyesis, especialmente en la
observada en las anemias sideroblásticas, talasemias, alcoholismo grave y
otros procesos diseritropoyėticos. Lo podemos observar también en los
síndromes postesplenectomía
5. PARASITOS INTRACELULARES:
Hablamos especialmente de Plasmódium vivax y falciparum. Se informan como
positivo, dejando explicita la especie del Plasmódium
Las inclusiones eritrocitarias deben ser informadas individualmente por cruces
en los campos observados así:
INDICE
C.Howell - jolly
C.
Pappenheimer
Punteado
basófilo
Anillos de cabot
•
NORMAL
0
0
LIGERA
(+)
1-2
MODERADA
(++)
3-5
MARCADA
(+++)
Mayor de 6
0
0
1-2
1-2
3-5
3-5
Mayor de 6
Mayor de 6
FENOMENO DE ROULEAUX:
El fenómeno de rouleaux , o pilas de monedas, se observa frecuentemente en
hiperproteinemias (mieloma múltiple) y macroglobulinemias, también se puede
observar en enfermedades inflamatorias crónicas.
La valoración del fenómeno de rouleaux (promedio en diez campos) y como lo
indica la siguiente tabla:
NORMAL
0
•
LIGERA
(+)
1-5
MODERADA
(++)
6 - 15
MARCADA
(+++)
Mayor a 15
AUTOAGLUTINACION:
La autoaglutinación, es provocada especialmente los autoanticuerpos tipo
crioaglutininas, se detecta desde el momento de realizar el extendido, ya que
se presenta un grado de dificultad al extender la sangre y en los bordes hay
evidencia clara de aglutinación.
Se informa como paciente autoaglutinado sin tener en cuenta la intensidad.
VALORACION DE GLOBULOS BLANCOS:
1. Se debe realizar la apreciación de cantidad en 10x, observando campos
donde los glóbulos rojos apenas se toquen entre si. Se cuentan 10
campos, se saca promedio y el resultado se multiplica por 300. Este es
un método indirecto pero que no se compara con la exactitud de su
recuento en cámara de neubauer.
Este cálculo le da un número aproximado de leucocitos pero nunca de
un valor numérico en su informe. Sin embargo la observación en 10x le
sirve como parte de su control de calidad, ya que la apreciación de
número disminuida, aumentada o normal se debe relacionar
directamente con el recuento total de leucocitos.
2. Se debe dar el reporte del recuento diferencial incluyendo células
inmaduras, las cuales se informan en orden, de la más inmadura a la
más madura.
3. En cuanto a las anormalidades, a medida que se realiza el recuento
diferencial se observa la morfología de células encontradas y se anota
cualquier tipo de alteración en su morfología. Dentro de las principales
anormalidades tenemos:
•
FENOMENO DE PELGER – HUET O PSEUDOPELGER_ HUET:
Anormalidad en los PMN, los cuales se encuentran hiposegmentados.
Hablamos de perder cuando todos los PMN son hiposegmentados y de
pseudopelger cuando algunos PMN presentan segmentación normal. Se
considera como precursor de un proceso mieloide agudo
• MACROPOLICITOS:
Son PMN hipersegmentados y de mayor tamaño. Los macropolicitos obedecen
a un proceso megaloblástico
•
GRANULACIONES TOXICAS, VACUOLAS TOXICAS Y CUERPOS DE
DOHLE:
Las granulaciones toxicas son gránulos hipertrofiados, especialmente de los
neutrófilos. Las vacuolas tóxicas se encuentran en neutrófilos y monocitos. Los
cuerpos de Dohle no son exclusivos de los PMN, también se pueden encontrar
en los monocitos, pero se encuentran con mayor frecuencia en los neutrófilos.
La presencia de estas inclusiones indica hiperactividad celular, se encuentran
en condiciones tóxicas como escarlatina, septicemia, neumonía, quemaduras y
exposiciones a drogas citotóxicas
•
LINFOCITOS ATIPICOS:
Se debe anotar su presencia en porcentaje del total de los linfocitos contados
en el recuento diferencial. Se considera normal encontrar hasta un 30% de los
linfocitos atípicos en la población de adultos. Se sugiere que cifras menores a
un 30% no se informan.
El porcentaje se saca tomando como un 100% el porcentaje total de linfocitos y
a partir de estos se saca el porcentaje de los linfocitos atípicos encontrados
así:
55 linfocitos totales
9 linfocitos atípicos
55 _______________ 100%
9 _______________ X
X: 16%
El porcentaje de linfocitos atípicos es de 16 %
•
SI LOS LEUCOCITOS NO PRESENTAN NINGUNA ANORMALIDAD SE
INFORMAN NORMALES EN NUMERO Y MORFOLOGIA
VALORACION DE PLAQUETAS:
1.
Para el cálculo de las plaquetas se realiza un recuento indirecto,
observando 10 campos, sacar el promedio y se multiplica por 21.000, y
concluir si las plaquetas están aumentadas, disminuidas o normales. Se
considera normal encontrar entre 7 y 21 plaquetas por campo donde los
glóbulos rojos apenas se toquen entre si.
2. Para las características morfológicas y tintoriales, a medida que vaya
realizando el recuento analice si las plaquetas tienen la agrupación,
característica, gránulos y color adecuado.
3. Para anisocitosis a medida que va haciendo el recuento cuente cuantas
plaquetas grandes observa y saque el porcentaje de las plaquetas
grandes. Por ejemplo:
En 10 campos observo 450 plaquetas y de las 450, 28 son plaquetas
grandes.
450 ___________________ 100%
28 ____________________ X
X: 6%
Si se observa un porcentaje Mayor al 30%, se informa la presencia de
Macroplaquetas. Si da más del 5% y menos del 30% con aumento del
número total en el recuento se informa presencia de anisocitosis
plaquetaria.
•
SI LAS PLAQUETAS NO PRESENTAN NINGUNA ANORMALIDAD SE
INFORMA NORMALES EN NUMERO Y MORFOLOGIA
CUESTIONARIO:
1. El recuento de leucocitos por milímetro cúbico se calcula teniendo
encuenta: volumen del área contada, numero de células contadas y la
dilución empleada; como se realiza este cálculo para obtener el resultado
final.
2. Realice un cuadro comparativo teniendo encuenta las circunstancias
fisiológicas y patológicas que se presentan en una leucocitosis y
leucopenia diferenciando cada una de las células: Neutrófilos, eosinófilos,
linfocitos, basófilos y monocitos
3. Cuales son los valores de referencia de cada uno de los parámetros que
conforman el cuadro hemático normal, teniendo encuenta el sexo y la
edad de los pacientes
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PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 2
SISTEMA RENAL
OBJETIVOS:
•
•
•
•
Determinar el comportamiento de cada uno de los parámetros que
conforma un cuadro hemático, en las diferentes patologías del sistema
renal
Conocer las características de las generaciones del cuadro hemático
automatizado
Identificar los coeficientes de variación entre la técnica manual y
electrónica
Interpretar los histogramas y dispersogramas en sus parámetros
normales y sus variaciones frente hallazgos hematológicos.
FUNDAMENTO:
Al hablar de tipo de tecnología utilizada para realizar el cuadro hemático, es
usual emplear el término generación, para agruparlos de forma acorde con el
grado de automatización inherente al equipo:
•
PRIMERA GENERACION: Cuadro hemático manual
•
SEGUNDA GENERACION: Cuadro hemático semiautomatizado
•
TERCERA GENERACION: Cuadro hemático automatizado; presenta
gráficos de histogramas de glóbulos rojos, plaquetas y un recuento
diferencial de glóbulos blancos en tres partes
•
CUARTA GENERACION: Cuadro hemático automatizado, con
perforación de tapa, entrega graficas de histograma para glóbulos rojos
y plaquetas y un informe de dispersograma para glóbulos blancos, a los
que agrupa en cinco tipos de células.
Estos equipos automatizados para recuentos celulares han sido diseñados
teniendo en cuenta algunas propiedades de las células, entre otras:
• Son malas conductoras de la electricidad
• Tienen variedad de tamaños
• Tienen una densidad caracterizable y diferente para cada una
• Cada una refracta la luz con una intensidad diferente
• Tienen una composición citoquímica diferente y caracterizable para cada
una
• La relación núcleo-citoplasma es diferente para cada célula.
Teniendo en cuenta estas propiedades, se han venido desarrollando desde
1956 diferentes principios que permiten contar y medir partículas, las casas
comerciales emplean para el diseño uno o varios de estos, unos mas utilizados
que otros, dado los altos costos de algunos. En nuestro medio encontramos los
siguientes:
•
•
Impedancia eléctrica
Dispersión y absorción de luz
La tecnología que utiliza radiofrecuencia o luz electromagnética de alta
frecuencia constituye la base para la fabricación de equipos de cuarta y quinta
generación.
INFORME GRAFICO
1.
HISTOGRAMA:
Son graficas de frecuencias de volúmenes celulares representados en el eje X
graficado contra un numero relativo representado en el eje Y; por ser relativo no
tiene un equivalente numérico real. El eje X se expresa en fl.
En condiciones normales, en el informe se observan curvas cónicas o
cóncavas, que en su mayoría son modales, excepto la de plaquetas.
HISTOGRAMA DE GLOBULOS ROJOS:
La curva normal de glóbulos rojos es cónica, modal y se encuentra
representada en tamaños de 60 a 110 fl, con un pico o curva secundaria modal
de plana a ligeramente cóncava con muy poca altura que llega a 200 fl.
Algunas alteraciones mas frecuentes de la curva de eritrocitos son:
• Desplazada a la izquierda
• Desplazada hacia la derecha
• Curva bimodal
• ADE aumentado
• Arranque extenso en Y
• Aumento de pico secundario
HISTOGRAMA DE GLOBULOS BLANCOS:
Los glóbulos blancos se agrupan formando tres curvas claramente definidas y
estas configuran la arquitectura normal del histograma de glóbulos blancos.
•
•
•
Curva de linfocitos cónica: 50 – 100 fl
Curva de mononucleares plana a cóncava : 100 – 150 fl
Curva de granulocitos cóncava: 150 – 380 fl
Algunas de las alteraciones mas frecuentes son:
• Arranque extenso en Y
• Unión con granulocitos
• Unión con linfocitos
• Unión con mononucleares
• Aumento cónico con pėrdida de arquitectura
• Aumento cónico sin pėrdida de arquitectura
• Curva cónica modal
• Distribución no normal a la derecha
HISTOGRAMA DE PLAQUETAS:
La curva normal de plaquetas es cónica, sin distribución normal y con una
representación amplia en tamaños que va de 2 a 20 fl, dado que el recuento de
plaquetas se realiza en la dilución mayor, la misma de glóbulos rojos, el equipo
realiza un doble recuento de plaquetas, disminuyen de esta forma el coeficiente
de variación. Algunos equipos grafican el doble recuento donde muestran si ha
existido o no coincidencia en los mismos.
Algunas de las alteraciones que se presentan en el recuento de plaquetas son:
• No arranque en Y
•
•
•
•
•
Extendida 25-30 fl
Aumento celular en la terminación
Tope recto
Conformación de bloques
Curvas negativas
2. DISPERSOGRAMAS:
Los dispersogramas son otro tipo de representación grafica utilizada para el
recuento diferencial de glóbulos blancos, donde se mezclan diferentes
tecnologías y tienen en cuenta diferentes propiedades de los grupos celulares.
En estos sistemas vemos interactuar volumen, refracción, conductividad,
opacidad celular y absorción de luz. Las células se grafican según su
dispersión en un cubo, teniendo en cuenta algunas de las propiedades
individuales de los grupos celulares.
Se trata de un análisis tridimensional de las células, donde las diferentes casas
comerciales utilizan mínimo tres parámetros que hacen coincidir con las
propiedades específicas celulares, permitiendo de esta forma su clasificación
en cinco grupos: neutrófilos, eosinófilos basófilos, linfocitos y monocitos. Así
mismo permite sospechar con un alto grado de certeza la presencia de células
diferentes a las mencionadas.
La interpretación del dispersograma es mas sencilla comparada con la del
histograma, ya que al ubicar las cinco poblaciones celulares, el grado de
coincidencia de los tres parámetros debe haber sido total; por lo tanto el grado
de confiabilidad es mas grande y las células inmaduras, así como a las
anormales y las consideradas como no blancas se ubican en zonas no
establecidas.
Las alteraciones de los dispersogramas se relacionan con aumento o
disminución de los cinco tipos de glóbulos blancos que reporta o con la
aparición de células que obedecen a diferentes patologías, sean malignas o no.
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Aumento de neutrófilos
Aumento de eosinófilos
Sospecha de granulocitos inmaduros
Sospecha de blastos de la línea mieloide
Presencia de células viejas
Aumento de linfocitos
Sospecha de blastos de la línea linfoide
Sospecha de linfocitos atípicos
Aumento de monocitos’
•
•
•
•
Sospecha de blastos de la línea monocítica
Sospecha de núcleos de normoblastos
Sospecha de gametocitos de Plasmódium
Sospecha de macroplaquetas.
PRACTICA: CUADRO HEMATICO AUTOMATIZADO
PROCEDIMIENTO:
•
•
•
•
•
•
Analice los casos clínicos llevados por el profesor con los resultados de
Cuadro hemático automatizados impresos
Anote los parámetros que encuentre anormal y normal en la parte
numérica como hematocrito, hemoglobina, plaquetas e índices
corpusculares.
Interprete resultados teniendo en cuenta los valores de referencia.
Analice los histogramas y dispersogramas, informe si concuerdan con el
caso clínico y los datos numéricos
De acuerdo a todo lo anterior, como estaría el extendido de sangre
periférica.
Realice un diagnóstico del caso clínico y anote las posibles causas de su
alteración.
CUESTIONARIO:
1.
Que condiciones debe tener la muestra para ser utilizada en un equipo
para la realización de un cuadro hemático automatizado
2. Que parámetros calcula el equipo directamente y en que dilución.
Cuales parámetros son arrojados de forma indirecta
3.
Como es el comportamiento de cada uno de los parámetros del cuadro
hemático en las patologías del sistema renal como:
•
•
•
•
Litiasis.
Insuficiencia renal.
Glomerulonefritis.
Síndrome nefrótico y nefrítico.
4. como se graficarían los histogramas y dispersogramas en cada una de
las patologías mencionadas.
5. Que parámetros posee un paciente diabético con diálisis peritoneal
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FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 3
SISTEMA RESPIRATORIO
OBJETIVOS:
•
•
•
Identificar morfológicamente los reticulocitos mediante una coloración
supravital e interprete los resultados.
Conozca el procedimiento para determinar los eosinófilos en moco nasal
y determine cuando son característicos como patología del sistema
respiratorio
Realizar la velocidad de sedimentación globular y determinar en
unidades de longitud y tiempo la propiedad que tienen los glóbulos rojos
en formar pilas de monedas.
PRACTICA:
RECUENTO
DE
RETICULOCITOS,
RECUENTO
DE
EOSINOFILOS EN MOCO NASAL Y VELOCIDAD DE SEDIMENTACION
GLOBULAR
FUNDAMENTO:
RECUENTO DE RETICULOCITOS
Los reticulocitos son eritrocitos jóvenes que representa de 0.5 a 1.5% de los
eritrocitos totales, se forma cuando se pierde el núcleo del normoblasto
ortocromático. Su tamaño varia de 10 a 15ul. Tienen una vida media de dos
días en medula ósea, de allí salen a la circulación donde requieren de un dia
para convertirse en células rojas maduras. Su nombre proviene de que
contiene una red de material basófilo: acido ribonucleico (RNA) ribosomal y
demás organelas citoplasmáticas que se precipitan, observándose como
gránulos amorfos intracelulares que se tiñen de azul profundo con colorantes
supravitales como el azul de cresilo brillante.
Su abundancia en la circulación periférica es un índice de la actividad
eritropoyėtica. Así pues, se encuentran cifras altas en los primeros días de
vida, después de una perdida de sangre o hemorragia y después de tratar la
anemia carencial con sustancias especificas (vitamina B12 en la anemia
perniciosa, acido fólico con la anemia megaloblástica o hierro en la anemia
ferropėnica por la deficiencia de hierro). En general, la intensidad de la
respuesta reticulocitaria en estas condiciones es directamente proporcional a la
gravedad de la anemia.
Coloreado con wright, el reticulocito se identifica por una basofília difusa
llamada policromatofília y por poseer un tamaño ligeramente más grande que
el eritrocito maduro.
MATERIALES Y EQUIPOS:
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Tubos de ensayo
Baño Maria a 37oC
Pipeta pasteur
Portaobjetos limpios
Aceite de inmersión
Microscopio
Colorante Azul de Cresilo Brillante
Sangre venosa con EDTA
PROCEDIMIENTO:
•
•
•
Colocar en el tubo de ensayo dos gotas de sangre previamente
mezclada
Agregue dos gotas de colorante azul de cresilo brillante (filtrado) y
mezcle suavemente
Incube en el Baño Maria a 37oC durante 10 a 15 minutos. Al finalizar
este tiempo mezcle bien el contenido del tubo
•
•
•
•
•
Realice un extendido en lamina un poco mas delgado y deje secar al
ambiente
Coloque el extendido en la platina del microscopio y enfoque en bajo
poder (10X) para localizar el área donde los eritrocitos no estén
superpuestos
Pase el objetivo a 100X cuidadosamente y agregue una gota de aceite
de inmersión
Inicie el conteo. Las células rojas toman una coloración grisácea
verdosa. El RNA presente en los reticulocitos se colorea de azul intenso.
El retículo puede ser abundante o escaso dependiendo del estado de
desarrollo de la célula. El mas joven muestra mayor cantidad de RNA.
Busque el área mas adecuada para realizar el recuento, donde los
glóbulos rojos estén separados y se tengan 100 hematíes por campo, se
cuentan los reticulocitos encontrados en diez campos microscópicos
observados.
Para calcular los reticulocitos corregidos, se tienen valores ideales de Hb para:
Hombres: 15 g/dl
Mujeres: 14 g/dl
Niños: 12 g/dl
Formula:
1. Hb del paciente
2. Reticulocitos en %
3. Hb ideal
HB paciente X % de reticulocitos
HB ideal
Ejemplo: (Hombre)
1. HB: 8 g/dl
2. Reticulocitos: 8%
3. Hb ideal: 15 g/dl
8 g/dl X 8% de reticulocitos
15 g/dl
= 4.2 %
Tomando este valor se puede hallar el índice de reticulocitos, el cual indica el
índice de eritropoyesis en medula ósea. Con el valor de los reticulocitos
corregidos los relacionamos con un factor de corrección, para saber si la
respuesta medular compensa la destrucción.
Hemoglobina g/dl
10 – 11
7 -9
Menor de 7
Factor de corrección
1.5
2.0
2.5
Ejemplo:
Hb del paciente: 8 g/dl
Reticulocitos corregidos: 4.2%
Factor de corrección: 2.0 por el rango de Hb esta entre 7 – 9
4.2 / 2.0 = 2.1 (normoproliferativa)
Valor de la eritropoyesis:
MO
0.2
2 -5
5 o mayor
Hipoproliferativa
Normoproliferativa
Hiperproliferativa
Otra forma de obtener el IPR es:
Reticulocitos corregidos en % sobre periodo de maduración en medula ósea es
de 2 días.
4/2=2
El IPR:
Mayor de 3: Indica aumento de la actividad eritropoyética
Menor de 2: Indica escasa actividad
CALCULOS:
Reticulocitos en %:
Numero de reticulocitos contados
________________________________ X 100
Numero de Hematíes contados 1000
Para calcular los reticulocitos absolutos los datos requeridos son:
1. RBC/ml
2. Reticulocitos en %
3. Relación a 1000 GR
Formula:
Ejemplo:
1000 GR_________________ % de reticulocitos
RBC/ml _________________ X
1. 2.700.000/ml
2. 8%
3. 1000 GR
1000 GR
________________ 8% de reticulocitos
2.700.0000 RBC/ml ________________ X
X: 21.600/ml
•
•
Valores normales: 40.000 y 70.000 / ml
Este valor es importante en las anemias hemolíticas y en pacientes con
tratamiento de anemias carenciales
Porcentaje de reticulocitos corregidos:
Tiene por objeto establecer los reticulocitos reales teniendo en cuenta la
concentración de células rojas en sangre periférica, ya que la volemia del
paciente afecta su número. En otras palabras esta corrección debe hacerse
cuando se encuentra un hematocrito por debajo del establecido como normal,
aplicando la siguiente formula:
% de reticulocitos corregido =: % de reticulocitos X hematocrito del paciente
---------------------------------Hematocrito normal
Se acoge un valor medio del hematocrito para hombres de 45% y para mujeres
del 42%.
Otra forma de corrección a partir del dato de HB:
Se tiene en cuenta que solo se realiza si la Hemoglobina es menor de 11 g/dl.
Constituye un índice indirecto de la eritropoyesis en medula ósea y son de gran
valor para:
•
•
•
Conocer la eficacia de la eritropoyesis
Clasificar las anemias en regenerativas o arregenerativas
Conocer lo antes posible, la eficacia de un tratamiento con Hierro,
Vitamina B12 y Acido fólico.
0bservaciones:
•
El recuento se puede efectuar en sangre capilar
•
•
•
•
•
•
Se recomienda repetir el conteo cuando se obtienen valores por encima
del 3%
Los extendidos coloreados pueden guardarse por 24 horas sin afectar
los resultados
La relación sangre/colorante no tiene que ser exactamente igual. Para
mejores resultados use una mayor proporción de sangre cuando el
paciente tenga un hematocrito bajo. Añada una menor cantidad de
muestra cuando el hematocrito sea inusualmente alto
El tiempo de coloración de los reticulocitos no es critico, pero no debe
ser menor de 10 minutos
La presencia de altos niveles de glucosa en sangre y el uso de heparina
como anticoagulante pueden producir, en los reticulocitos, una
coloración pálida.
Es extremadamente importante que la sangre y el colorante se mezclan
bien antes de realizar los extendidos.
VALORES DE REFERENCIA:
•
Valor relativo: Hombres y Mujeres:
Recién nacido:
En dos semanas es igual al adulto
0.2 – 2%
2.0 - 6%
Interpretación:
El conteo de reticulocitos es una herramienta diagnostica importante puesto
que es el reflejo de la cantidad de células rojas efectivas viables que se
producen en la medula ósea. Su utilidad real es conocer la capacidad de
respuesta de la medula en aquellos casos en los cuales hay disminución de las
células en sangre periférica y es necesario que la medula aumente su
producción para así compensar el déficit de dichas células. Esta información es
de fundamental importancia en el diagnostico de anemias por falla en la
producción (anemia aplásica) o por aumento en la destrucción (anemia
hemolítica).
VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR:
Los eritrocitos poseen una carga electrostática negativa en su membrana, lo
cual genera fenómenos de repulsión que llevan a mantener los glóbulos rojos
suspendidos, conservando su individualidad. Esta fuerza de repulsión se
denomina potencial zeta.
En condiciones normales si se coloca la sangre en un tubo vertical, las células,
debido a la fuerza de la gravedad caen por que son más densas que el plasma.
Si la carga electrostática disminuye, por alguna causa, los eritrocitos producen
mayor cantidad de pilas de monedas que aumentaran la masa de la partícula y
en consecuencia, la velocidad de sedimentación.
La velocidad de sedimentación se expresa como la distancia en milímetros que
recorren los eritrocitos al caer por unidad de tiempo, generalmente una hora.
La sedimentación se puede determinar por métodos manuales o
automatizados. El método manual recomendado por el comité Internacional de
Estandarización en hematología, es el de Westergreen y entre los métodos
automatizados esta el Coulter Zetafuge y el Ves-matic.
METODO DE WESTERGREEN
MATERIALES Y REACTIVOS:
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Sangre venosa anticuagulada con EDTA
Tubo de Wintrobe
Aguja de Pasteur
Soporte para velocidad
Jeringa de 2 ml
PROCEDIMIENTO:
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•
Mezclar suavemente la sangre, por inversión, durante un minuto para
homogenizar la muestra
Llenar el tubo Wintrobe con la ayuda de aguja Pasteur y una jeringa
teniendo en cuenta que no queden burbujas, que la sangre no este
hemolizada y que quede exactamente hasta la marca cero (0)
Colocar en el soporte especial y dejar 1 hora, al cabo de la cual, se lee
en escala descendente, la cantidad de mm cúbicos que descendió.
Se da lectura en mm/hora.
VALORES DE REFERENCIA:
•
•
Hombres: 0 – 10 mm/h
Mujeres: 0 -20 mm/h
Estos valores son constantes entre los 10 y 50 años
EOSINOFILOS EN MOCO NASAL
Se realiza mediante un frotis de sangre periférica de la mucosa del cornete
inferior, usando un hisopo; obtenida la muestra se colorea con Wright o Giemsa
y se realiza un conteo celular diferencial.
Si la cantidad de leucocitos es adecuada se hace el recuento diferencial de 100
células. PMN. Si la cantidad de leucocitos es excasa, los eosinófilos se deben
reportar los observados en 10 campos microscópicos y en este caso se
reporta por campo.
•
•
•
Los eosinófilos en el moco > 20/campo confirman la alergia
Los neutrófilos aumentados están relacionados con las infecciones
bacterianas agudas
Los linfocitos sugieren procesos infecciosos de tipo crónico
CUESTIONARIO:
1.
En que patologías encontramos eosinofíllia en moco nasal.
2. Informe los resultados obtenidos en la clase, realice con este resultado,
una corrección de reticulocitos con un hematocrito de 28% y halle el IPR
3. Que se entiende por desviación reticulocitaria.
4. Que factores influyen en la eritrosedimentación.
5. Como realiza usted una VSG por punción capilar.
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 4
SISTEMA DIGESTIVO
OBJETIVO:
Identificar que parámetros son característicos de un cuadro hemático manual
que identifique la salmonelosis y la apendicitis
FUNDAMENTO:
SALMONELOSIS
La salmonelosis es un conjunto de enfermedades producidas por el género
microbiano Salmonella. No todas las especies, cepas o serotipos reconocidos
tienen igual potencial patogénico. Los principales agentes etiológicos
corresponden a Salmonella typhi, Salmonella paratiphi, Salmonella
thyphimurium y Salmonella enteritidis2.
Son bacilos Gram negativos, anaerobios facultativos de la familia
Enterobacteriaceae. Se encuentran fundamentalmente asociados a la flora
intestinal y, por ello, a aguas y alimentos que hayan contactado con material
fecal. Producen grandes cantidades de gas durante la fermentación de
azúcares, y llevan a cabo una fermentación ácido mixta, produciendo gran
cantidad de productos ácidos y gases.
Aparecen escalofríos , cefalea, náuseas, anorexia, tos y diarrea o
estreñimiento. La fiebre es prolongada y varía de 38,5ºC a 40ºC. Entre un 2040% presentan dolor abdominal.
APENDICITIS
Es la inflamación del apéndice, ubicado en el ciego, que es la porción donde
comienza el intestino grueso. Normalmente los casos de apendicitis leves se
pueden curar sin cirugía, sin embargo, la mayor parte de ellos requieren de un
procedimiento quirúrgico llamado apendicectomía o laparotomía en caso de
apendicitis con extirpación del apéndice inflamado. En casos sin tratamiento, el
índice de mortalidad es elevado, principalmente debido a una peritonitis y un
shock séptico cuando el apéndice inflamado se rompe
PRACTICA: CUADRO HEMATICO MANUAL
MATERIALES Y REACTIVOS:
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Sangre total con EDTA
Microhematocritos
Tabla de lectura o reglilla
Cubetas
Porta cubetas
Pipeta de Salhi
Pipeta de glóbulos blancos
Tubos de 13 x 100 mm
Gradilla, pipeta de 5 ml, pipeteadores
Pipetas automáticas, puntas azules y amarillas
Tapones de caucho
Cámaras de Neubauer
Cajas de petri, papel filtro
Reactivo de Drabkin
Reactivo de Turk
Estándar o patrón de hemoglobina
•
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•
•
•
Aceite de inmersión
Colorante de Wright
Solución Buffer, agua destilada
Microcentrífuga
Espectrofotómetro
Microscopio
PROCEDIMIENTO:
1. MEDICION DEL HEMATOCRITO:
•
•
•
•
•
•
Llenar el capilar con sangre bien mezclada hasta las 2/3 partes
aproximadamente
Limpiar el exceso de las paredes del capilar con toalla absorbente
Selle bien la parte inferior del capilar con plastilina
Colóquelo debidamente calibrado en la Microcentrífuga y tenga
en cuenta el numero correspondiente en esta
Cierre bien y coloque a centrifugar de 5 a 10 minutos entre 1000 y
5000 rpm respectivamente
Cuando la microcentrífuga pare, lea el Microhematocrito en la
tabla y obtenga el valor directamente y reporte en porcentaje.
2 MEDICION DE LA HEMOGLOBINA:
•
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•
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•
•
•
Prenda el espectrofotómetro y espere a que alcance la temperatura
adecuada para su funcionamiento
Servir en un tubo de ensayo de 13 x 100, 5 ml de Drabkin, con ayuda
de un pipeteador
Mezcle cuidadosamente la sangre por inversión unas 30 veces para
obtener una buena homogenización de la muestra
Llene la pipeta de salhi con 0.02 ml con ayuda de la boquilla o con 20
ul utilizando la pipeta automática, teniendo la precaución de limpiar
bien con una gasa las paredes externas de la pipeta cuando finalice
el llenado
Colocar la pipeta hasta el fondo del tubo y deposite la sangre,
soplando bien, enjuagar la pipeta con el reactivo en la parte superior
(evitando la formación de espuma). Tape y mezcle muy bien el tubo
por inversión
Dejar en reposo por 10 minutos para que se produzca la hemólisis
total de las células rojas y se complete bien la reacción
Transfiera la solución a las cubetas del espectrofotómetro y lea a
540 nm, usando como blanco el reactivo de Drabkin
•
Tome nota de la absorbancia de la muestra y del estándar
3 RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS:
A. DILUCION EN TUBO:
•
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•
•
•
•
•
Mezclar la muestra de sangre con EDTA y mézclela suavemente
por inversión unas tres veces
Tomar 20 ul de sangre y deposítela en un tubo que debe contener
380 ul de liquido de turk (dilución 1/20). Mezcle por inversión
Deje el tubo en reposo al menos por 5 minutos
Prepare la cámara de Neubauer con su laminilla, completamente
limpios
Tome el tubo con la sangre diluida, mézclelo nuevamente y con la
pipeta de 0.1 ml deposite 1-2 gotas entre cámara y laminilla
Deje en reposo por 8 minutos la cámara para que sedimente la
preparación. Para evitar que se seque coloque sobre el mesón
papel filtro húmedo, encima de la cámara y tápela con una caja
de petri
Seque por debajo la cámara, móntela con mucho cuidado en el
carro del microscopio
Realice el recuento en los 4 cuadrantes grandes de los extremos
B. DILUCION EN PIPETAS DE BLANCOS:
•
•
•
•
•
•
•
•
Mezclar la muestra de sangre con EDTA y mézclela suavemente
por inversión unas tres veces
Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 0.5
exactamente, haga uso del pipeteador
Limpie las paredes extremas de la pipeta para que no contamine
el liquido diluente
Aspire el liquido de Turk hasta la marca 11 exactamente
Sujete la pipeta entre los dedos pulgar e in dice, desprenda el
microaspirador y agite la pipeta en forma horizontal, durante 3
minutos para obtener hemólisis total de las células rojas
Descartar las 4 primeras gotas de la dilución, para eliminar el
contenido del capilar que no contiene leucocitos
Llene la Cámara de Neubauer controlando la gota que sale de la
pipeta
Realice el recuento en los 4 cuadrantes grandes de los extremos
4. EXTENDIDO Y COLORACION:
•
•
•
•
•
Realizar el frotis y dejarlo secar
Cubrir con el colorante de Wright y dejarlo actuar por 1 minuto
Sin lavar agregar buffer fosfato o agua destilada, soplando hasta que
aparezca una escarcha metálica. Dejar actuar de 3 a 10 minutos
Lavar con agua corriente limpiando la superficie posterior del frotis
Dejar secar la preparación
5. RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS:
•
•
•
•
Totalmente seco el extendido enfóquelo en objetivo de bajo poder (10X)
para localizar el cuerpo del extendido
Localizada esta área del extendido pase a 100X. agregue una gota de
aceite de inmersión
Realice el recuento en sentido que al mover el carro no se repitan
células haciendo un zigzag sobre el cuerpo del extendido
Cuente 100 leucocitos y vaya estableciendo un diferencial de cada una
de las células usando un sistema manual de recuento, aunque también
existen los tabuladores mecánicos.
CUESTIONARIO:
1. Que parámetros son característicos del cuadro hemático frente a las
patologías tratadas en clase.
2.
Que dilución se realizaría en el caso de una leucocitosis y cual seria su
procedimiento.
3. Con que patologías podemos encontrar similitud teniendo encuenta los
mismos parámetros del cuadro hemático de las patologías tratadas.
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 5
SISTEMA HEPATOBILIAR
OBJETIVOS:
•
•
•
Determinar la función plaquetaria mediante pruebas de tamizaje que
requieren una detallada historia clínica, manifestaciones hemorrágicas y
evaluación del riesgo hemorrágico.
Realizar el recuento de plaquetas por el método directo e indirecto
Determinar la importancia del recuento de plaquetas en los procesos de
coagulación
PRACTICA: RECUENTO DE PLAQUETAS
FUNDAMENTO:
HEMOSTASIA PRIMARIA
En la hemostasia primaria interviene los vasos sanguíneos y las plaquetas para
detener la hemorragia. Los vasos lesionados contribuyen por medio de
constricción y secreción de una variedad de mediadores bioquímicos que
afectan todos los pasos subsecuentes de la hemostasia. Las funciones de las
plaquetas consisten en adherirse a las áreas lesionadas de las paredes de los
vasos sanguíneos, agregarse mediante la adhesión entre si y también secretar
las sustancias almacenadas en sus gránulos. Las sustancias secretadas
ayudan a atraer y activar a unas plaquetas que se adicionan al agregado y
ayudan al crecimiento del tejido nuevo el cual repara permanentemente la
herida. Se requiere de la superficie de las plaquetas agregadas para las
reacciones de la hemostasia secundaria.
Las pruebas de laboratorio para la evaluación de la hemostasia primaria
incluyen un conteo de la plaquetas, evaluación de la función plaquetaria
medidas como el tiempo de sangría (prueba de tamizaje), la prueba de la
agregación plaquetaria (prueba especializada) y la prueba de retracción del
coagulo (procedimiento clínico poco usado).
TIEMPO DE SANGRIA
El tiempo de sangría es una medición in vivo de la función de las plaquetas.
Existen varios factores que afectan el tiempo de sangría, los cuales incluyen el
número de plaquetas, su función y la integridad vascular.
En 1910, Duke describió el método de tiempo de sangría como una pequeña
incisión en el lóbulo de la oreja (valor normal de 1 a 3 minutos) y relaciono la
prolongación de este tipo de hemorragia con trombocitopenia. Mas tarde IVY
modifico esta prueba para hacerla mas fidedigna y establece una técnica
estandarizada que incluye tres aspectos fundamentales:
•
•
•
Zona apropiada de la cara volar proximal del antebrazo
Presión por encima del antebrazo a 40 mm Hg para conseguir una
presión constante, creando estasis venosa. La venostasia producida por
la presión hace que los vasos permanezcan llenos de sangre
Bisturí (simplate) que permita una incisión de 5 mm de longitud y 1 mm
de profundidad.
METODO ESTANDARIZADO IVY:
La hemorragia provocada en la piel, al lesionar pequeños vasos, se detiene por
la constricción de estos (vasoconstricción) y por la formación del tapón
plaquetario en el sitio de la lesión.
MATERIALES:
•
•
•
•
•
•
Tensiómetro
Cronometro
Lancetas desechables (Simplate)
Papel de filtro
Algodón
Prepodine
PROCEDIMIENTO:
•
•
•
•
•
•
•
Colocar el tensiómetro, en el tercio superior del brazo, elevándolo a una
presión de 40 mm Hg. Esta presión es mantenida durante la prueba
Seleccionar un área de la parte extrema del antebrazo, libre de venas y
cicatrices
Limpiar con prepodine esta zona y dejarla secar
Realizar una incisión horizontal con el Simplate, que realiza dos
incisiones (estandarizadas) de 1 mm de profundidad por 5 mm de
longitud. (la dirección de la incisión en el antebrazo tiene un efecto sobre
el resultado. Se registran tiempos ligeramente mas largos cuando la
incisión es horizontal que cuando es vertical)
Poner en marcha el cronometro
Cada 30 segundos limpiar la sangre con papel filtro, tener cuidado de no
tocar el sitio de la lesión
Detener el cronometro en el momento en que la hemorragia cese y
retirar el tensiómetro.
Valores Normales:
1 a 9 minutos
OBSERVACIONES:
•
•
El tiempo de sangría es mas corto en niños recién nacidos que en
adultos; tiende a ser mas prolongado en mujeres y disminuye con la
edad
El tiempo de sangría es inversamente proporcional al numero de
plaquetas, al volumen de las paquetas y al hematocrito (la anemia
aumenta el tiempo de sangría y la eritrocitosis lo disminuye)
•
•
•
•
•
Pacientes con recuentos de plaquetas inferiores a 50.000lmm3 no se les
debe practicar la prueba
Pacientes que estén recibiendo tratamiento a base de acido acetil
salicílico deben esperar mínimo de siete a nueve días de ser suspendido
el medicamento para poder realizarle la prueba
La prueba de tiempo de sangría es ordenada prequirurgicamente para
determinar el riesgo de hemorragia perioperatoria y posoperatoria. Sin
embargo, esta prueba mide la formación adecuada del tapón plaquetario
en el sangrado superficial de la piel y no necesariamente en los órganos
internos
Estudios realizados recientemente han demostrado que el tiempo de
sangría no es confiable cuando se usa como una prueba de tamizaje
para evaluar el riesgo de sangrado excesivo perioperatorio. Un tiempo
de sangría anormal puede llevar a posponer innecesariamente una
cirugía, a realizar pruebas adicionales, y posiblemente, a un tratamiento
inapropiado para normalizar el tiempo de sangría
Se demuestra una vez mas, que una prueba única no reemplaza una
buena historia clínica ni el estudio integral prequirúrgico, dentro del
contexto clínico y de lógica medica. Desde el punto de vista técnico, el
tiempo de sangría es muy difícil de controlar a no ser que se utilice un
método estandarizado.
RECUENTO DE PLAQUETAS
Las plaquetas representan fragmentos citoplasmáticos derivados de los
megacariocitos. Están rodeados por la clásica membrana celular de doble capa
lipídica que contiene diversos receptores y fosfolípidos funcionalmente
importantes. Las plaquetas en circulación no se adhieren unas a otras, ni a la
superficie endotelial, pero pueden ser estimuladas a agregarse por varios
mediadores, jugando un papel importante en la hemostasia.
Para ello forman nudos en la red de fibrina, liberan substancias importantes
para acelerar la coagulación y aumentan la retracción del coagulo sanguíneo.
En las heridas las plaquetas aceleran la coagulación, y además al aglutinarse
obstruyen pequeños vasos, y engendran substancias que los contraen.
El recuento de plaquetas se realiza en sangre periférica, las plaquetas se
observan con una tonalidad levemente basofila lo cual permite detallar una
zona central granular llamada cronomero y una zona periférica mas clara
denominada hialomero.
MATERIALES Y EQUIPOS:
•
Sangre con EDTA
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Oxalato de amonio al 1% o Citrato de sodio al 3.8%
Pipeta de Glóbulos rojos
Cámara de neubauer
Laminilla de cuarzo
Microaspirador
Caja de petri
Papel filtro
Laminas
Colorante de wright
Agua destilada
Aceite de inmersión
Microscopio
PROCEDIMIENTO:
METODO INDIRECTO:
•
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•
•
•
•
•
Realizar extendido de sangre periférica
Colorear el frotis con colorante de wright
Dejar secar la coloración
Primero observar en objetivo de 10X para buscar la zona ideal
Pasar a objetivo de 100X, colocar aceite de inmersión
Identificado el sitio donde se observan 100 glóbulos rojos por campo,
contar las plaquetas en 10 campos microscópicos y sumar el numero
total, sacar el promedio dividiendo por diez
Luego el resultado lo multiplicamos por una constante que es 21.000 y el
resultado se da en mm3. Si el resultado es muy bajo contar en 20
campos.
METODO DIRECTO:
•
•
•
•
•
Mezcle cuidadosamente la sangre anticuoagulada por inversión, por lo
menos 30 veces, con el fin de obtener una muestra homogénea
Llene la pipeta con la muestra de sangre hasta la marca 1.0
exactamente, haga uso del microaspirador
Elimine el exceso de sangre de las paredes extremas de la pipeta para
no contaminar la solución diluente.
Aspire el liquido diluente hasta la marca 101 exactamente
Sujete la pipeta entre los dedos índice y pulgar, desprenda el
microaspirador y agite la pipeta en forma horizontal durante tres minutos
•
•
•
•
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•
•
•
•
Deje reposar la pipeta durante 10 minutos si esta trabajando con oxalato
de amonio al 1% con el fin de lograr hemólisis total de los glóbulos rojos
En caso de trabajar con citrato de sodio al 3.8% omita este paso
Agite suavemente
Descarte las primeras 4 gotas, para eliminar el liquido del capilar e
inmediatamente llene la cámara de neubauer en ambos lados
Coloque la cámara en ambiente húmedo por 10 minutos. El ambiente
húmedo se logra cubriendo la cámara con una caja de petri que llevara
adherido un disco de papel filtro humedecido con agua
Coloque la cámara en el microscopio. Enfoque con objetivo de 40X y
observe el llenado de la cámara, no deben existir agregados
plaquetarios
Cuidadosamente enfoque el cuadrado central
Las plaquetas se reconocen como estructuras pequeñas, opacas,
redondas o alargadas a veces con prolongaciones, que son
inmediatamente retractiles
El numero esta determinado por el conteo de los 25 cuadrados en que
se subdivide el cuadrado central, descartando las plaquetas que tocan
las líneas derecha e inferior.
CALCULO:
El número de plaquetas por mm3 se calcula de acuerdo a:
•
•
•
Volumen del área contada: 0.1 mm3 (1 x 1 x 0.1)
Dilución utilizada: 1:100
Numero de células contadas
Plaquetas por mm3 = N0 de células contadas X 1 X dilución
Plaquetas por mm3 = N0 de células contadas X 10 X 100
Plaquetas por mm3 = N0 de células contadas X 1000
VALORES DE REFERENCIA:
EL rango normal para el recuento de plaquetas es de
Unidades clásicas: 150.000 a 450.000 / mm3
OBSERVACIONES:
• Correlacione el numero de plaquetas observadas con el recuento
obtenido en cámara, usualmente se observan de 8 – 20 plaquetas
individuales por campo con objetivo de lato poder
•
•
•
•
•
•
•
Observe el tamaño de la plaqueta circulante. Frecuentemente se pueden
observar en bajo porcentaje, algunas plaquetas con tamaño mayor
(macroplaquetas)
Se debe tener especial cuidado con las soluciones diluentes, están no
deben estar contaminadas, pues tanto las partículas como las bacterias
pueden simular plaquetas
La limpieza de las cámaras y de las pipetas es extremadamente
importante en este procedimiento
Los líquidos diluentes se deben mantener refrigerados y filtrar antes del
uso
Si observa agregados en el recuento, el procedimiento debe repetirse
No se debe reportar el recuento de plaquetas Directo sin confrontarlo
con el extendido de sangre periférica coloreado con wright
La diferencia del número de plaquetas entre los cuadrados centrales de
la cámara no deben ser mayor de 10 plaquetas.
CUESTIONARIO:
1. En que circunstancias patológicas y fisiológicas podemos
encontrar trombocitosis y trombocitopenia
2. Que es el volumen medio plaquetario, ancho de distribución de
las plaquetas y plaquetocrito. Valores de referencia.
3. Explique brevemente la prueba de agregación plaquetaria.
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 6
SISTEMA CARDIOVASCULAR
OBJETIVO:
Realizar la determinación del tiempo parcial de tromboplatina tisular y el tiempo
de protombina, como medio para valorar la coagulación sanguínea en un
paciente.
PRACTICA: PT Y PTT
FUNDAMENTO:
HEMOSTASIA SECUNDARIA
La hemostasia secundaria esta dada a partir de las proteínas plasmáticas
implicadas en la coagulación sanguínea y que circulan como variantes inertes
hasta que se activan por exposición a las superficies cargadas negativamente
(vía intrínseca) o al factor tisular (vía extrínseca). Estas superficies y el FT
(factor tisular) son normalmente subendoteliales y extrínsecas a la sangre. Sin
embargo cuando los vasos se lesionan las proteínas de la coagulación de la
sangre se exponen al tejido subendotelial y a las plaquetas activadas. Esto
inicia la activación de las proteínas de la coagulación. El orden de activación es
secuencial a manera de cascada. La secuencia se inicia con los factores
menos concentrados en la sangre y continúa hasta el factor más concentrado,
el fibrinógeno.
Los factores dependientes de vitamina K (II, VII, IX, X) son zimógenos y cuando
se activan se convierten en proteasas. Estas proteasas forman complejos
sobre una superficie fosfolipídica con un cofactor (FT, V u VIII) y sustrato.
Aunque originalmente el proceso de coagulación se dividió en vía intrínseca,
vía extrínseca y vía común, actualmente existe amplia evidencia de que hay
gran interacción y retroalimentación entre las proteínas de estas vías. La vía
extrínseca parece ser la más importante en el inicio de la cascada, pero el
sistema intrínseco es responsable de ampliar y sostener la coagulación.
Las pruebas de laboratorio de la hemostasia secundaria pueden dividirse en
dos grupos: pruebas de detección y pruebas especiales. Las pruebas de
detección están diseñadas para probar la integridad general de la vía
intrínseca, extrínseca y común. Las más comunes de tales pruebas incluyen el
tiempo de protrombina (TP), el tiempo de tromboplastina parcial activada
(TTPa) y el tiempo de trombina (TT). Algunos laboratorios prefieren agregar
otras pruebas a sus perfiles de detección antes de realizar pruebas
confirmatorias. Si las pruebas de detección son anormales, se practican
pruebas especiales para identificar la anormalidad específica, como análisis del
fibrinógeno, pruebas con mezclas para evaluar deficiencias de factor, tiempo de
reptilasa, prueba de detección del factor XIII, prueba de Dímero D, entre otras.
TIEMPO DE PROTROMBINA (PT)
Cuando se añade calcio y un extracto místico al plasma, el facto VII reacciona
con el factor místico y se forma un producto que convierte el factor X a su
forma activa el factor Xa, este a su vez reacciona con el factor V, con el calcio y
con los fosfolípidos para formar la protrombina en trombina. Entonces la
trombina convierte el fibrinógeno en fibrina. La velocidad de formación de la
fibrina depende de los factores V, VII, X, II y I por lo cual, esta prueba es
empleada para medir la actividad total de estos factores.
MATERIALES Y REACTIVOS:
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Reactivo de Tromboplastina
Agua destilada
Plasma control normal
Plasma citratado del paciente
Baño Maria 370C
Tubos de vidrio de 12mm x 7.5 cm
Micropipetas graduadas de 100 y 200 microlitros
Pipetas volumétricas de 1,2 y 5 ml
Cronómetros
PROCEDIMIENTO:
•
•
•
•
•
•
•
•
Precalentar a 370C los tubos de ensayo
Para la reconstitución y conservación del reactivo deberán seguirse las
instrucciones indicadas por el fabricante
Precalentar a 370C 0.2 ml de reactivo por cada prueba. Evitar la
evaporación del reactivo no dejándolo a 370C por un tiempo superior a
60 minutos
Realizar por duplicado cada prueba iniciando con un control normal
Pipetear o.1 ml de plasma en el tubo correspondiente
Incubar el plasma 2 – 3 minutos mínimo y máximo 5 minutos
Pipetear 0.2 ml de reactivo preincubado y simultáneamente disparar el
cronometro
Parar el cronometro en el momento de la formación del cuagulo
RESULTADOS E INTERPRETACION:
El control normal debe dar un Tiempo de Protrombina (PT) en 10.5 y 13.5
segundos que corresponde a un INR de 1.0. El cual esta prolongado cuando
existe deficiencia congénita adquirida de los factores V, VII, X o protrombina,
cuando el fibrinógeno esta por debajo de 100 mg% y cuando aparecen
productos de degradación de fibrinógeno o de fibrina o hay heparina. En la
policitemia el PT puede estar prolongado como consecuencia de una
desproporción plasma / anticoagulante.
EL PT es la prueba mas comúnmente usada para controlar la terapia
anticuoagulada oral con antagonistas de la vitamina K para el tratamiento y la
prevención tanto de trombosis venosa como de tromboembolismo arterial. La
medicación debe controlarse regularmente con PT para prevenir la
sobreanticoagulante y el riesgo del sangrado.
La estandarización de la prueba de PT se ha hecho con la introducción de
patrones internacionales de tromboplastina y con la definición de una escala
internacional de actividad anticoagulante. En 1983 la OMS adopto un sistema
de normalización del PT para permitir la estandarización internacional del
control anticoagulante oral. Los valores de los pacientes se informan en
términos de la relación internacional (INR). Este sistema también ha sido
recomendado por el Comité Internacional de Trombosis y Hemostasis (ICTH) y
por el Comité Internacional para Estandarización de Hematología (ICSH).
FARMACODINAMICA DE LAS DROGAS CUMARINICAS:
La síntesis de factores de coagulación vitamina K dependientes (II – VII – IX –
X) en el hígado puede ser inhibida por derivados de la 4- hidroxicumarina y la
indandiona.
Normalmente la Vitamina K cataliza la carboxilación de los residuos de acido
glutámico en los factores de coagulación II, VII, IX y X así como en los
inhibidores naturales de la coagulación proteína C y proteína S.
Los residuos modificados de acido glutámico (acido-gama-carboxi-glutámico)
son necesarios para la interacción, mediada por calcio, de estas proteínas con
fosfolípidos cargados negativamente.
Los antagonistas de la vitamina K bloquean indirectamente la formación de
residuos de acidogamacarboxiglutamico, llevando a la liberación en la
circulación de proteinas inmodificadas llamadas PIVKA (Proteínas induced by
vitamina K absebce / antagonist).
Las PIVKA no tienen actividad funcional fisiológicamente importante, pero
pueden afectar la determinación del PT efectuada con algunos reactivos de
tromboplastina.
RELACION NORMALIZADA INTERNACIONAL (INR):
Para obtener una escala universal de actividad anticoagulante oral la OMS y el
ISTH – ICSH han recomendado conjuntamente que el PT debiera convertirse a
INR. Por definición el INR es la relación de PT que se habría obtenido si se
hubiera usado la Preparación Internacional de Referencia de la OMS.
En la práctica el INR del plasma de un paciente se deriva de la relación de PT y
del índice de Sensibilidad Internacional (ISI) de la tromboplastina.
El INR se calcula usando la siguiente formula:
INR: (PT PACIENTE)ISI
(PT NORMAL)
La OMS ha propuesto que los fabricantes de tromboplastina indiquen la
sensibilidad de cada lote de reactivo con el ISI correspondiente y que
proporcionen una tabla de conversión en términos de los resultados de PT.
Es importante tener en cuenta las variaciones que pueden causar imprecisión
del INR, estas incluyen: imprecisión en la calibración del ISI por un método
anunciado, estimada en aproximadamente 5%.
Variación entre laboratorios en la relación mediada para el PT, estimada en
aproximadamente 7% para ISI de 1.0 y de 9% para ISI de 2.0.
La variación biológica del INR de un paciente estimada en aproximadamente
8%,. Para tromboplastina con un ISI de 1.0 parece posible limitar la variación
total en el INR de un paciente de 11 a 13.5%. Para tromboplastinas con un ISI
de 2.0 a 2.5 puede observarse una variación más grande de hasta 26%. Por lo
tanto no se recomienda utilizar para PT tromboplastinas que tengan un ISI
superior a 2.5.
Entre las más importantes variables pre-prueba están, pronta centrifugación,
minimización de los efectos de envejecimiento de la muestra, adecuada técnica
de congelación y descongelación, presencia de heparina, anticoagulante usado
para el plasma, entre otros.
Para efectos prácticos de unificación de resultados, se recomienda informar el
resultado de PT así:
Resultados en segundos del paciente, control normal en segundos; e INR,
correspondiente al resultado del paciente.
Se considera prolongado un PT cuando el INR sea superior a 1.3.
TIEMPO PARCIAL DE TROMBOPLASTINA TISULAR
Cuando se añade calcio y cantidad suficiente de fosfolípidos plaquetarios al
plasma, se activan todos los factores de la coagulación necesarios para la
formación de protombinasa intrínsica, esta activa la protombina y la trombina
así formada convierten el fibrinógeno en fibrina.
MATERIALES Y REACTIVOS:
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Reactivo para PTT
Agua destilada
Cloruro de calcio 0.025 M
Plasma control normal
Cronómetros
Baño Maria a 370C
Tubos de vidrio de 12 mm x 7.5 cm
Micropipetas graduadas de 100 microlitros
Pipetas volumétricas de 1.2 y 5 ml
PROCEDIMIENTO:
•
•
•
•
•
•
•
•
Precalentar a 370C los tubos de ensayo
Para la reconstitución y conservación del reactivo deberán seguirse las
instrucciones indicadas por el fabricante
Realizar por duplicado cada prueba iniciando con el control normal
Calentar a 370C un volumen suficiente de cloruro de calcio 0.025 M
Disponer 0.1 ml de reactivo en cada tubo
Añadir 0.1 ml de plasma al tubo correspondiente e incubar de 3 a 5
minutos
Añadir 0.1 ml de cloruro de calcio 0.025 M precalentado a 370C
simultáneamente poner el cronometro en marcha
Parar el cronometro en el momento de la formación del coagulo.
VALOR NORMAL: 25 a 35 seg
INTERPRETACION:
El PTT esta prolongado en las deficiencias congénitas o adquiridas de uno o
mas de los factores XII, XI, X, IX, VIII, V, protombina y fibrinógeno. Esta
prolongado si el fibrinógeno es inferior a 100 mg%; cuando aparecen productos
de degradación de fibrinógeno o de fibrina. Puede estar prolongado en
presencia de anticuerpos antifosfolípido anticoagulante lúpico. En individuos
normales que no tienen historia hemorrágica ni alteraciones de los factores de
coagulación ocasionalmente se encuentra un PTT ligeramente prolongado.
El PTT es la prueba mas comúnmente usada para controlar terapia
anticoagulante con heparina. La heparina tiene una vida media de
aproximadamente 4 horas, requiere de antitrombina III como cofactor para
poder inactivar las proteasas de serina activadas (Factor XIIa, XIa, IXa, Xa y
IIa), su efecto anticoagulante es inmediato, dato que se debe tener en cuenta
cuando se este monitorizando un paciente heparinizado.
FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ANTICUAGULANTE DE LA
HEPARINA IN VIVO
•
•
•
•
•
Destrucción plaquetaria y liberación del factor plaquetario 4
Tipo de heparina
Proporción de difusión en el espacio extravascular
Resistencia del paciente después de una trombosis
Medicamentos que interfieren: Antibióticos, nicotina, glucosa 5% en
agua, antihistamínicos.
FACTORES QUE AFECTAN IN VITRO
•
•
•
•
•
•
Tiempo de recolección
Liberación del factor plaquetario 4 por recolección o centrifugación
inadecuada
Anticoagulante (citrato u oxalato)
Dosificación incorrecta
Pruebas utilizadas para monitorizar
Instrumentos
CUESTIONARIO:
1.
Interprete las causas por el cual se presentan las siguientes
alteraciones:
•
•
•
PT anormal y PTTa normal
PT anormal y PTT anormal
PT normal y PTTa anormal
2. En que consiste el Tiempo de Trombina (TT) y su valor normal
3.
En que consiste la prueba del Dímero D.
4.
Cuales son los inhibidores naturales del proceso de fibrinolisis y por
qué?
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FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 7
SISTEMA GENITAL
OBJETIVOS:
•
•
•
•
Determinar la clasificación sanguínea en relación con sistema ABO y el
sistema RH, efectuando pruebas que identifique el tipo sanguíneo de
cada uno de los pacientes.
Conocer la importancia de las células LE como diagnóstico para el
Lupus Eritematoso Sistémico
Identificar la existencia de una incompatibilidad sanguínea teniendo en
cuenta el sistema ABO y el sistema Rh
Conocer los parámetros de un cuadro hemático en las patologías
relacionadas al sistema genital como el HIV, Herpes tipo I y II, Sífilis,
Neisseria gonorrhoeae Candida, Chlamydia trachomatis, Gardnerella
vaginalis, Virus del papiloma humano, Micoplasma, entre otras.
FUNDAMENTO:
LUPUS ERITEMATOSO SISTEMICO
Es una enfermedad inflamatoria crónica de causa desconocida, que afecta a
todas las edades, pero con mayor frecuencia a adultos entre los 18 y 50 anos y
a ambos sexos, con predominio del sexo femenino en una proporción de un
hombre por cada 10 a 12 mujeres. Esta es una enfermedad de todos los
órganos y sistemas, primordialmente las articulaciones, músculos y piel, pero
también aunque en menor grado, de estructuras internas como los pulmones,
riñones y cerebro.
Existen tres tipos de lupus, la forma localizada o discoide, la forma
generalizada o sistémica y el lupus secundario a medicamentos o lupus por
fármacos. De todos ellos, la forma sistémica es la mas frecuente. La forma
discoide es también llamado lupus benigno, porque en el 90% de los casos se
limita a afectar solamente la piel. El lupus por fármacos, desaparece al
suspender el medicamento causante.
El LES, es una enfermedad donde loa anticuerpos atacan y destruyen los
tejidos de nuestro propio cuerpo, produciendo lesiones en todas las
estructuras, aunque en grado y extensión variables en cada paciente.
Los antígenos en esta enfermedad, son substancias propias, se les denominan
auto-antígenos y de aquí el nombre de la enfermedad auto-inmune como
también se le ha dado al LES. Dado a que estos auto-antigenos son
desconocidos como propios en los pacientes con esta enfermedad, se produce
una respuesta auto-inmune, como resultado de la enfermedad. El cuerpo se
hace alérgico así mismo, con la producción de gran cantidad de anticuerpos
agresores.
DIAGNOSTICO:
Se realiza el examen de células del Lupus eritematoso (EL) se utiliza
primordialmente para diagnosticar el Lupus eritematoso sistémico (LES).
Valores Normales:
La ausencia de células LE es normal.
Significado de los resultados anormales:
De un 50 a un 75% de los pacientes con LES tienen un examen positivo.
Algunos pacientes con artritis reumatoidea, con esclerodermia y con
sensibilidad a los medicamentos, también muestran un examen de células de
lupus eritematoso positivo.
GRUPOS SANGUINEOS
El grupo sanguíneo es cada uno de los diversos tipos en que se ha clasificado
la sangre de las personas en relación con la compatibilidad de los hematíes y
suero de otro individuo que la recibe. Estos grupos son cuatro, según la
clasificación que hizo Landsteiner, clasificación hoy universal y se denominan:
O, A, B, AB. Se caracterizan por las diferentes combinaciones de dos
aglutinógenos existentes en los glóbulos rojos y de dos aglutininas contenidas
en el suero.
FACTOR Rh:
El factor Rh es un aglutinógeno encontrado en 1940 por Landsteiner y Weiner,
en los glóbulos rojos en unos primates (Macacus rhesus) y que también existe
normalmente en el 85% de los humanos, que por esta causa se denomina Rh
positivos. La sangre de estos transfundida a los Rh negativos (15%), provoca
en el suero de estos últimos la formación de anticuerpos, que en sucesivas
transfusiones pueden destruir los glóbulos rojos del donante Rh positivo,
invalidando así la transfusión y creando efectos adversos. También en el
embarazo un feto Rh + puede provocar en la madre Rh – la producción de
aglutininas que podrán ser la causa de la enfermedad hemolítica de los recién
nacidos.
El factor Rh esta constituido por un complejo de seis antígenos fundamentales,
formado por tres pares de genes alelos: Cc, Dd, Ee. El antígeno de mayor
poder sensibilizante es el D, le siguen en importancia el e y el E.
Un grupo sanguíneo es una forma de agrupar ciertas características de la
sangre que dependen de los antígenos presentes en la superficie de los
glóbulos rojos y en el suero de la sangre.
Las dos clasificaciones más importantes para describir grupos sanguíneos en
humanos son los antígenos y el factor Rh. Las transfusiones de sangre entre
grupos incompatibles pueden desembocar en hemólisis, anemia, fallo renal,
shock y muerte.
LOS ANTIGENOS:
Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan
antígenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antígenos B en el
suero de su sangre.
Análogamente, las personas con sangre del tipo B tienen la combinación
contraria, glóbulos rojos con antígenos de tipo B en su superficie y anticuerpos
contra los antígenos A en el suero de su sangre.
Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antígenos
(A o B) en la superficie de sus glóbulos rojos, pero pueden fabricar anticuerpos
contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos
antígenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos.
A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningún
problema a cualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir
de cualquier tipo ABO
HERENCIA DEL TIPO ABO:
Los grupos sanguíneos son heredados de los progenitores. Son controlados
por un solo gen con tres alelos: O, A, B
El alelo A da tipo A, el B da tipos B y el alelo i da tipos O, siendo A y B
dominantes sobre i. Así las personas que heredan dos alelos ii tienen tipo O;
AA o Ai dan lugar a tipo A; y BB o Bi dan lugar a tipos B. Las personas AB
tienen ambos fenotipos debido a que la relación entre los alelos A y B es de
codominancia. Por lo tanto, es prácticamente imposible para unos progenitores
AB el tener un hijo con tipo O.
HERENCIA DEL FACTOR RH:
El factor Rh es heredado de la misma forma, con la diferencia de que hay dos
alelos y el Rh es dominante. Los alelos son Rh + y Rh –
FRECUENCIA:
La distribución de los grupos sanguíneos en la población humana no es
uniforme. El más común es O+, mientras que el mas infrecuente es AB-.
Además, hay variaciones en la distribución en las distintas subpoblaciones
humanas.
TIPO
FRECUENCIA
0+
40%
A+
34%
B+
9%
O7%
A6%
AB+
3%
B2%
AB1%
PRACTICA: HEMOCLASIFICACION INVERSA Y DIRECTA
DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO ABO
Las pruebas utilizadas para establecer la hemoclasificación sanguínea
relacionada a los diversos grupos sanguíneos, aprovechan las características
inmunológicas que expresa cada individuo de acuerdo a su particular
codificación genética.
En dichas pruebas se evidencian los antígenos y/o anticuerpos del grupo
sanguíneo, de acuerdo a su comportamiento in Vitro. En cuanto al sistema ABO
se investigan tanto antígenos o aglutinógenos como los anticuerpos o
isoaglutininas naturales.
Loa glóbulos rojos utilizados en estos procedimientos poseen en la membrana
los antígenos, además nos facilitan la visualización de la reacción como si
fuesen los indicadores del punto final de la hemoaglutinación.
La hemoaglutinación se considera la reacción de Ag – Ac de mayor utilidad en
el laboratorio de inmunohematología, por lo que se hace indispensable
recordar las características y las condiciones que modifican dicha reacción,
para poder determinar con claridad los requerimientos óptimos que permitan
obtener la mayor constante de equilibrio en cada prueba especifica y en esta
forma se asegure la confiabilidad y contribución exitosa de los procedimientos
empleados en el estudio de los grupos sanguíneos.
MATERIALES Y REACTIVOS:
•
•
•
•
•
Suero Anti A, Anti B, Anti A,B
Glóbulos rojos A, B y O
Tubos de ensayo
Solución salina 0.85%
Pipetas pasteur
•
•
•
•
•
Centrifuga
Muestra de sangre con EDTA
Suero del paciente
Laminas del paciente
Palillos
PROCEDIMIENTO
1. HEMOCLASIFICACION DIRECTA:
A. Método en tubo:
•
•
•
Marque los tubos con Anti A, Anti B, Antti A,B
Lavar los glóbulos rojos del paciente 3 veces consecutivos en solución
salina y preparar una suspensión final al 3% en dicha solución.
Adicionar:
Reactivo anti-A
Reactivo anti-B
Reactivo anti AB
GR paciente
•
•
A
2 gotas
1 Gota
B
2 Gotas
1 Gota
AB
2 Gotas
1 Gota
Mezclar cada tubo y centrifugar 15 – 30 segundos
Resuspender suavemente los botones celulares y observar aglutinación
POSITIVO: Aglutinación con cualquier antisuero. Reacciones positivas 3+ o 4+
de aglutinación.
NEGATIVO: La presencia de una suspensión uniforme de GR (O)
1. HEMOCLASIFICACION DIRECTA:
B. Método en lamina:
•
•
Marcar tres laminas portaobjeto como A, B y AB
Adicionar:
Reactivo anti-A
Reactivo anti-B
Reactivo anti AB
GR paciente
A
2 gotas
1 Gota
B
2 Gotas
1 Gota
AB
2 Gotas
1 Gota
•
•
•
Mezclar cada preparación con un palillo
Rotar manualmente cada lamina
Observar aglutinación y registrar los resultados
POSITIVO: La aglutinación fuerte de los glóbulos rojos en presencia de
cualquier anticuerpo ABO. Las reacciones positivas muestran 3+ de
aglutinación
NEGATIVO: La presencia de una suspensión uniforme (O) de glóbulos rojos.
2- HEMOCLASIFICACION INVERSA:
PRUEBA INVERSA EN TUBO:
•
•
Marcar tres tubos como A, B, O
Adicionar:
Suero paciente
GR A
GR B
GR O
•
•
•
•
A
2 Gotas
1 Gota
B
2 Gotas
O
2 Gotas
1 Gota
1 Gota
Incubar de 5 – 15 minutos a temperatura ambiente
Mezclar cada tubo y centrifugar por 15 – 30 segundos
Al terminar la centrifugación observar el sobrenadante para evidencia la
presencia de hemólisis.
Resuspender los botones celulares y observar aglutinación.
POSITIVO: Aglutinación y/o hemólisis
NEGATIVO: Una suspensión homogénea de eritrocitos.
HEMOCLASIFICACION: SISTEMA Rh (Ag D)
En el sistema Rh, existen varios antígenos: D, C, c, E, e; sin embargo, de
rutina, solo se determina la presencia del Ag D en los eritrocitos y de acuerdo a
su presencia o ausencia se dice que un individuo es Rh D positivo o Rh D
negativo.
MATERIALES Y REACTIVOS:
• Suero Anti D
• Tubos de ensayo
•
•
•
•
•
•
•
Solución salina 0.85%
Pipetas pasteur
Centrifuga
Muestra de sangre con EDTA
Laminas portaobjetos
Palillos
Albumina Bovina
PROCEDIMIENTO:
1. Prueba directa en lamina:
•
•
Marcar dos laminas como D y control
Adicionar:
Suero Anti-D
Albúmina Bovina 22%
Sangre
•
•
D
2 Gotas
1 Gota
Control
2 Gotas
1 Gota
Mezclar con palillos cada preparación
Rotar manualmente las laminas y observar aglutinación.
POSITIVO: Aglutinación de glóbulos rojos
NEGATIVO: Una suspensión uniforme de glóbulos rojos
OBSERVACIONES:
Si la preparación de glóbulos rojos con albúmina al 22% presenta aglutinación,
la prueba no se puede interpretar.
La desecación en los bordes de la preparación, no se debe confundir con
aglutinación.
2. Prueba directa en tubo:
• Lavar los glóbulos rojos del paciente tres veces con solución salina y
suspenderlos del 3 – 5%
• Marcar dos tubos como D y control
• Adicionar
Suero Anti D
Albúmina Bovina al
D
2 Gotas
-
CONTROL
2 Gotas
22%
GR paciente
•
•
1 Gota
1 Gota
Mezclar suavemente y centrifugar durante 15 -30 segundos
Resuspender el botón celular y observar aglutinación
POSITIVO: La aglutinación de los glóbulos rojos con anti-D
NEGATIVO: Una suspensión uniforme de los glóbulos rojos con anti-D
OBSERVACIONES:
Si en el control se observa aglutinación, la prueba no se puede interpretar,
hasta realizar mas análisis.
DETERMINACION DEL Ag DEBIL
Consiste en determinar la variante D débil en una muestra previamente
tipificada como Rh: D negativo
La determinación de la variante D débil, solo se realiza a muestras que por el
método manual usual han resultado D negativas.
MATERIALES Y REACTIVOS:
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Suero Anti D
Tubos de ensayo
Solución salina 0.85%
Pipetas pasteur
Centrifuga
Muestra de sangre con EDTA
Laminas portaobjetos
Palillos
Albúmina Bovina
Baño Maria a 370C
PROCEDIMIENTO:
• Lavar los eritrocitos a tipificar 3 veces con solución salina y suspenderlos
al 3 – 5%
• Marcar dos tubos con D y Control
• Adicionar:
D
CONTROL
Anti – D
Albúmina Bovina
GR paciente
•
•
•
•
•
2 Gotas
1 Gota
2 Gotas
1 Gota
Mezclar e incubar los tubos a 370C durante 15 – 30 minutos, según las
especificaciones del fabricante
Centrifugar 15 – 45 seg
Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia
de aglutinación. Si el tubo con anti – D, los eritrocitos están fuertemente
aglutinados, pero no en el tubo control, registrar la prueba como D
positiva y no realizar la fase siguiente con el suero de Coombs
Si las células no son aglutinadas o los resultados son dudosos, lavar los
eritrocitos 3 veces con abundante solución salina. Decantar la SS.
Adicionar:
Suero de Coombs
D
1 Gota
CONTROL
1 Gota
•
•
Mezclar y centrifugar 15 – 30 seg
Resuspender suavemente cada botón celular, examinar para
aglutinación y registrar el resultado teniendo en cuenta la escala de
intensidad. Si hay aglutinación en el tubo de prueba con anti – D,
entonces el resultado es D positivo.
•
Si el resultado es negativo, adicionar:
Células control de
Coombs
D
1 Gota
CONTROL
1 Gota
- Las células control de Coombs son GR O Rh D positivo sensibilizados
con anti D
•
Repetir la centrifugación por 15 – 30 seg. La aglutinación en este punto
refleja la presencia de suero antiglobulina libre y confirma que la
reacción era realmente Negativa
OBSERVACIONES:
Si se presenta aglutinación en cualquier fase de la prueba en el tubo control, no
se puede realizar la lectura.
CUESTIONARIO:
1.
Realice un cuadro con los parámetros normales del cuadro hemático
para recién nacido, niños de 1 mes, lactantes y niños mayores
2. Que es el Fenotipo Bombay
3.
Realice una tabla de compatibilidad entre los grupos sanguíneos,
teniendo en cuenta para cada grupo el Rh (-) y el Rh (+)..
4. Que parámetros son característicos del cuadro hemático frente a las
patologías del sistema genital
RESULTADOS DEL LABORATORIO
GRUPO NO: _______
INTEGRANTES:
HEMOCLASIFICACCION ABO:
Directa en lamina
ANTI- A
ANTI-B ANTI
AB
Directa en tubo
ANTI- A
AB
ANTI-B
ANTI
A
Resultado de la muestra analizada:
Grupo:____________
RESULTADOS DEL LABORATORIO
Hemoclasificación Rh:
Inversa
B
O
Directa en lamina
Anti – D
Control
Directa en tubo
Anti – D
Control
Hemoclasificación: Ag D DEBIL
D
CONTROL
Centrifugacion
inmediata
Fase Coombs
Celulas control de
Coombs
Resultados de la muestra analizada:
Rh: _________Ag D débil: ____________
ANALISIS:
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 8
SISTEMA ANDROGINECOLOGICO.
OBJETIVOS:
•
•
•
•
Identificar por medio del laboratorio las pruebas que son diagnosticas
para un síndrome antifosfolípido
Diferenciar un dengue hemorrágico de un dengue clásico utilizando los
parámetros diagnósticos del cuadro hemático
Adquirir destreza en el recuento de las plaquetas por el método directo e
indirecto
Clasificar las púrpuras de acuerdo a su fisiopatología e identificar las
pruebas de laboratorio que ayudan a su diagnostico
FUNDAMENTO:
SINDROME ANTIFOSFOLIPIDO
El síndrome antifosfolípido es una enfermedad auto-inmune en la que el cuerpo
produce grandes cantidades de anticuerpos antifosfolípidos. Los fosfolípidos
son un tipo de grasa especial que contiene el fosfato que constituye las
paredes externas de las células del cuerpo. Los anticuerpos antifosfolípidos
atacan a los fosfolípidos. Esto ocasiona diversos problemas incluyendo un
aumento en la coagulación de la sangre. La cardiolipina es un tipo de
fosfolípido y puede desarrollarse anticuerpos anticardiolopinas específicos.
La enfermedad es aproximadamente dos veces mas frecuente en mujeres que
en hombres. Generalmente se caracteriza por lo siguiente:
•
•
•
Trombosis – coágulos de sangre en arterias o venas (especialmente en
las piernas), coágulos en los vasos sanguíneos del sistema nervioso
central (cerebro y medula espinal) puede provocar accidentes
cerebrovasculares
Trombocitopenia
Perdida del embarazo (especialmente perdidas repetidas)
En el embarazo puede afectar tanto a la madre como al bebe. En mujeres con
el SAF, los riesgos pueden ser los siguientes:
•
•
•
Accidentes cerebrovasculares
Coágulos sanguíneos
Hipertensión
•
•
•
•
La muerte del feto
Aborto espontáneo recurrente
Retardo del crecimiento intrauterino
Nacimiento prematuro
El SAF puede ser primario si no acompaña alguna enfermedad autoinmune o
secundario cuando se presenta en el contexto de un LES. El SAF primario o
secundario, los anticuerpos antifosfolípidos han sido descritos en una amplia
variedad de desordenes, sean estos reumáticos, inducidos por drogas,
malignidad o infecciones.
LABORATORIO:
Son de utilidad para el diagnostico de esta entidad pruebas reagínicas,
inmunológicas y coagulométricas.
El anticoagulante lúpico se determina mediante pruebas que ponen de
manifiesto de forma indirecta la presencia de anticuerpos dirigidos contra la
fracción fosfolipídica del complejo activador de la protrombina. Inicialmente se
utilizan pruebas que puedan evidenciar alteraciones de los tiempos de la
coagulación, mediante la prolongación del tiempo parcial de tromboplastina
(PTT), tiempo de Caolín y tiempo de veneno de víbora de Russel. Si algunas
de estas pruebas es anormal, se repite utilizando una muestra en el cual el
plasma del paciente se mezcla con la de un sujeto normal. Si el paciente
tuviese déficit de algún factor de la coagulación, la prueba debería
normalizarse, caso contrario ante el anticoagulante lúpico, permanece
prolongado. Así mismo la presencia del AL se confirma con la normalización de
la prueba al añadir plaquetas o un exceso de fosfolípidos. La determinación del
AL, debe hacerse en plasma pobre en plaquetas, además estas pruebas
carecen del valor si el paciente se encuentra en tratamiento anticoagulante.
Pruebas reagínicas:
• VDRL (+) con FTA_ABS (-)
Pruebas inmunológicas:
• Anticuerpos anticardiolipinas (por técnica de ELISA)
• Isotipos IgG e IgM
Pruebas coagulométricas:
• Prolongación del tiempo parcial de tromboplastina (PTT)
• Prolongación del tiempo de Caolín
• Prolongación del tiempo de veneno de víbora de Russel.
El hecho de que un 30% no coexisten los anticuerpos anticardiolipinas y el
anticoagulante lúpico hace necesario la realización de estas pruebas, con la
finalidad de poder identificar los posibles pacientes con este síndrome.
CRITERIOS DIAGNOSTICOS:
El diagnostico del SAF se basa en el cumplimiento de criterios clínicos y de
laboratorio.
Manifestaciones clínicas:
•
•
•
•
•
Trombosis arteriales y / o venosas
Abortos y / o muertes fetales a repetición
Trombocitopenia
Ulceras en piernas
Anemia hemolítica
Parámetros de laboratorio:
• AAC – IgG (titulo medio – alto)
• AAC – IgM (titulo medio – alto)
• AL (+)
Se requiere de un criterio clínico y uno de laboratorio. Además la prueba para
AAF debe ser positiva por lo menos en dos ocasiones, separadas mas de tres
meses.
DENGUE
Enfermedad infecciosa tropical transmitida por el mosquito Aedes aegypty,
caracterizada por fiebre y dolor intenso en las articulaciones y músculos,
inflamación de los ganglios linfáticos y erupción ocasional de la piel. Es
producida
El dengue es endémico en algunas zonas de los trópicos y han aparecido
epidemias en países tropicales y templados. Carece de tratamiento específico
y de vacuna. Con frecuencia tiene una evolución de seis a siete días, pero la
convalecencia es larga y lenta. El dengue hemorrágico, es una forma mas
grave del dengue y puede ser mortal si no se trata adecuadamente.
La fiebre puede durar de 3 a 5 días (rara vez mas de 7 días, y suele ser
difásica). Cefalea intensa, mialgias artralgias, dolor retroorbital, anorexia,
alteraciones del aparato gastrointestinal y exantema rubeliforme. En algunos
casos aparece tempranamente eritema generalizado.
En la sección correspondiente al dengue hemorrágico se presentan un
incremento en la permeabilidad vascular, manifestaciones hemorrágicas y
ataque de órganos específicos.
En cualquier momento durante la fase febril pueden aparecer fenómenos
hemorrágicos de poca intensidad, como petequias y epistaxis. En las personas
de piel oscura la erupción a menudo no es visible.
La recuperación puede acompañarse de fatiga y depresión duradera. Son
frecuentes las linfoadenopatías.
Las epidemias tienen carácter explosivo, pero la tasa de letalidad es muy baja,
siempre que no aparezca el dengue hemorrágico.
LABORATORIO:
Inicia leucopenia con linfocitosis relativa; con menor frecuencia se observan
trombocitopenia (menor de 100.000 plaquetas por mm3) e incremento de las
aminotransferasas.
Dengue común (clásico)
· Leucopenia o leucocitosis
· Trombocitopenia
Dengue hemorrágico
· Trombocitopenia (menos de 100.000/mm3 )
· Extravasación de plasma manifiesta por cualquiera de los siguientes signos:
- Hematocrito inicial situado un 20% o más por encima del correspondiente a
esa edad, sexo y población.
- Descenso mayor del 20% del hematocrito después del tratamiento o signos
habitualmente asociados a la extravasación de plasma como derrame pleural u
otros derrames serosos, o hiperproteinemia
El diagnostico diferencial incluye todas las enfermedades epidemiológicamente
importantes incluidas bajo los episodios febriles víricas transmitidas por
artrópodos, sarampión, rubéola y otras enfermedades febriles sistémicas. Con
técnicas auxiliares en el diagnostico pueden utilizarse las pruebas de inhibición
de la hemoaglutinación, fijación del complemento. ELISA, captación de
anticuerpos IgG e IgM, así como las de neutralización. El virus se aísla de la
sangre por inoculación de mosquitos o por técnicas de cultivo celular de
mosquitos o vertebrados, y después se identifican con anticuerpos
monoclonales con especificidad de tipo.
PERIODO DE TRANSMISIBILIDAD:
No se transmite directamente de una persona a otra. Los enfermos suelen
infectar a los mosquitos desde el día anterior hasta el final del periodo febril
que es, en promedio, de unos cinco días. El mosquito se vuelve infectante de 8
a 12 días después de alimentarse con sangre, y así continua durante toda su
vida.
PERIODO DE INCUBACION:
De 3 a 14 días, por lo común de 7 a 10 días.
MEDIDAS PREVENTIVAS:
Educación de la población respecto a medidas personales tales como
destrucción de los criaderos y protección contra la picadura de mosquitos de
actividad diurna, incluso el empleo de mosquiteros, ropas protectoras y
repelentes.
PRACTICA: CUADRO HEMATICO MANUAL Y RECUENTO DE PLAQUETAS
CUADRO HEMATICO MANUAL
MATERIALES Y REACTIVOS:
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Sangre total con EDTA
Microhematocritos
Tabla de lectura o reglilla
Cubetas
Porta cubetas
Pipeta de Salhi
Pipeta de glóbulos blancos
Tubos de 13 x 100 mm
Gradillas
Pipeta de 5 ml
Pipeteadores
Pipetas automáticas
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Puntas azules y amarillas
Tapones de caucho
Cámaras de Neubauer
Cajas de petri, papel filtro
Reactivo de Drabkin
Reactivo de Turk
Estándar o patrón de hemoglobina
Aceite de inmersión
Colorante de Wright
Solución Buffer, agua destilada
Microcentrífuga
Espectrofotómetro
Microscopio
PROCEDIMIENTO:
1. MEDICION DEL HEMATOCRITO:
2 MEDICION DE LA HEMOGLOBINA:
3. RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS:
A. DILUCION EN TUBO:
B.
DILUCION EN PIPETAS DE BLANCOS:
4. EXTENDIDO Y COLORACION:
5. RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS:
6. RECUENTO DE PLAQUETAS
MATERIALES Y EQUIPOS:
•
•
•
•
•
•
•
Sangre con EDTA
Oxalato de amonio al 1% o Citrato de sodio al 3.8%
Pipeta de Glóbulos rojos
Cámara de neubauer
Laminilla de cuarzo
Microaspirador
Caja de petri
•
•
•
•
•
•
Papel filtro
Laminas
Colorante de wright
Agua destilada
Aceite de inmersión
Microscopio
PROCEDIMIENTO:
A. METODO INDIRECTO:
B. METODO DIRECTO:
CUESTIONARIO:
1. Realiza un cuadro comparativo con las diferentes púrpuras
mencionadas en clase.
2.
Que son las células CD3 y CD4 y como se realiza su recuento.
3. cuales son los valores de referencia y en qué patologías se
encuentran notablemente disminuídas y cuales son los valores
para predecir la evolución de la patología?
4. Clasificar las púrpuras de acuerdo a su fisiopatología e identificar
las pruebas de laboratorio que ayudan a su diagnostico
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 9
SISTEMA ENDOCRINO
OBJETIVOS:
•
•
Identificar las diferentes anemias teniendo en cuenta su fisiopatología y
su diagnostico en el laboratorio por medio de casos clínicos y extendido
de sangre periférica
Estandarizar los métodos utilizados para reportar los métodos utilizados
para reportar anormalidades celulares buscando unificar criterios en los
sistemas de información de los resultados.
FUNDAMENTO:
ANEMIAS
La anemia es un trastorno frecuente de la sangre que ocurre cuando la
cantidad de glóbulos rojos es menor que lo normal, o cuando la concentración
de hemoglobina en sangre es baja.
La anemia a menudo es un síntoma de una enfermedad más que una
enfermedad en si misma. En general, se desarrolla debido a la presencia de
uno de estos factores:
•
•
•
Perdida excesiva de sangre o hemorragia
Producción insuficiente de glóbulos rojos
Destrucción excesiva de glóbulos rojos
Que causa la anemia?
Generalmente, la anemia puede ser causada por varios problemas incluyendo
los siguientes:
•
•
•
•
•
Infecciones
Ciertas enfermedades
Ciertos medicamentos
La mala nutrición
La pérdida de sangre
Existe anemia cuando la concentración de hemoglobina en los eritrocitos y el
volumen globular (hto) están por debajo de los valores normales.
Valores normales de hemoglobina
• Hombre: 14-18 g/dl
• Mujer: 12-16 g/dl
• Recién nacidos: 16.5-19.5 g/dl
• Niños: (varia con la edad) 11.2-16.2 g/dl
Signos y síntomas de la anemia
Se debe a la disminución del aporte de oxigeno a los tejidos
Los principales signos de un paciente anémico son:
1.
2.
3.
4.
5.
fatiga
vértigo
desmayos
cefalea
palpitaciones
Físicamente los signos son:
1.
2.
3.
4.
palidez generalizada
presión arterial baja
fiebre ligera
edema en algunos casos clínicos
CLASIFICACION DE LAS ANEMIAS
Teniendo en cuenta el ADE (ancho de distribución eritrocitaria)
VR: 10 -15%
Teniendo en cuenta el VCM (volumen corpuscular medio)
VR: 80 – 100 fl
•
ANEMIAS MICROCITICAS HOMOGENEAS
ADE NORMAL Y VCM DISMINUIDO
1. Talasemias
2. Anemias secundarias a enfermedades crónicas
•
ANEMIAS MICROCITICAS HETEROGENEAS
ADE AUMENTADO Y VCM DISMINUIDO
1. Anemia ferropėnica
2. Algunas anemias hemolíticas de tipo inmune
•
ANEMIAS MACROCITICAS HOMOGENEAS
ADE NORMAL y VCM AUMENTADO
1.
2.
3.
4.
5.
Anemia megaloblástica
Anemias aplasia
Anemias hemolíticas
Hemoglobina SS
Presencia de aglutininas frías
•
ANEMIAS NORMOCITICAS HOMOGENEAS
VCM NORMAL Y ADE NORMAL
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Anemias secundarias a enfermedades crónicas
Hemoglobina s, c
Pacientes transfundidos
Pacientes en quimioterapia (LLC)
Hemorragias
Esferocitosis hereditaria
•
ANEMIAS NORMOCITICAS HETEROGENEAS
VCM NORMAL Y ADE AUMENTADO
1. Deficiencia de hierro, vitamina b12 o folatos
2. Anemia sideroblástica
3. Pacientes transfundidos
PRACTICA: ANALISIS DE EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA
ANALISIS DE CASOS CLINICOS
CUESTIONARIO:
1. Haga un paralelo entre las diferentes anemias, teniendo en cuenta:
etiología, manifestaciones clínicas, parámetros de laboratorio.
2. Qué tipo de dilución le harían a la muestra de un paciente con anemia
aplásica. Explica el procedimiento con un ejemplo.
3. Qué tipo de anemias requieren pruebas complementarias para su
diagnóstico, especifique la prueba y el objeto de la misma.
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 10
BANCO DE SANGRE, SISTEMA NERVIOSO CENTRAL Y PERIFERICO
OBJETIVOS:
•
•
Conocer el procedimiento de las pruebas de compatibilidad y adquirir
destreza en la realización del Coombs directo e indirecto
Interpretar cada uno de los resultados y tomar decisiones en las
incompatibilidad de las pruebas
FUNDAMENTO:
ANTIGLOBULINA HUMANA O DE COOMBS
La prueba de antiglobulina o de Coombs, es un procedimiento necesario en el
trabajo cotidiano de todo Banco de sangre, para demostrar la presencia de
anticuerpos incompletos de grupos sanguíneos, de significación clínica,
fracciones del complemento o algunos antígenos de los eritrocitos. Los
anticuerpos incompletos, usualmente Inmunoglobulina G (IgG), son capaces de
unirse a las células rojas, pero no de aglutinarlas cuando están suspendidas en
solución salina, por las características de su molécula, el tamaño muy
pequeño; sin embargo cuando se agrega otro anticuerpo, anti Ig G, la
aglutinación se hace posible. Este anticuerpo Ig G en si, es el suero
antiglobulina.
La prueba tiene una utilidad clínica muy amplia; es imprescindible cuando se
trata de establecer la naturaleza inmune de diversas situaciones como: una
reacción transfusional, la enfermedad hemolítica del recién nacido, una anemia
hemolítica relacionada con drogas o con mecanismos autoinmunes. Forma
parte de estudios pretransfusionales que deben realizarse tanto al donante
como al receptor, como las pruebas de compatibilidad y la detección e
identificación de anticuerpos inesperados.
El principio de la prueba de la antiglobulina es demostrar anticuerpos
incompletos, Inmunoglobulina G, o complemento, mediante el suero
antiglobulina, el cual contiene un anticuerpo anti Ig G y / o un anticuerpo
anticomplemento.
El suero antglobulina se prepara a partir de colonias diferentes de conejos
inmunizados con globulinas humanas. Los animales se inyectan con Ig G o
betaglobulinas, altamente purificadas, las cuales actúan como inmunogenos y
provocan una respuesta de anticuerpos contra esas globulinas humanas:
anticuerpos anti Ig G o anticuerpos contra el complemento.
La prueba de la antiglobulina se hace mediante dos formas, la prueba directa y
la prueba indirecta; son métodos similares, pero se diferencian en la reacción
de sensibilización de las células rojas, es decir la unión entre antígeno y su
correspondiente anticuerpo. En la prueba directa se demuestra esa
sensibilización in vivo, en la prueba indirecta in Vitro.
PRACTICA: COOMBS DIRECTO E INDIRECTO
COOMBS DIRECTO
Se usa para demostrar in vivo la cobertura de los eritrocitos con globulinas. Es
útil en la investigación de anemias hemolíticas autoinmunes, hemólisis inducida
por drogas, eritroblastosis fetal, reacciones aloinmunes contra eritrocitos
recientemente transfundidos.
MATERIALES Y REACTIVOS:
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Muestra de sangre con anticoagulante EDTA
Tubos de ensayo
Solución salina al 0.85%
Centrifuga
Tapones de caucho
Centrifuga
Gradillas
Pipeta pasteur
Suero de Coombs
PROCEDIMIENTO:
•
•
•
Lavar los eritrocitos 3 veces con SS y suspenderlos del 3 – 5%
Marcar dos tubos como CD y control
Adicionar:
Suero de Coombs
GR paciente
CD
2 Gotas
1 Gota
CONTROL
2 Gotas
-
GR O positivo
•
•
•
•
•
1 Gota
También puede realizar su control adicionando dos gotas del GR
del paciente y dos gotas de SS
Centrifugar 15 – 45 seg
Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia
de aglutinación
Graduar la aglutinación 0, 1+, 2+, 3+, 4+.
Si el resultado es negativo, adicionar:
Células control de
Coombs
•
•
-
CD
1 Gota
CONTROL
1 Gota
Repetir la centrifugación de 15 – 45 seg
La aglutinación en este punto refleja la presencia de suero antiglobulina
libre y confirma que la reacción era realmente negativa.
OBSERVACIONES:
Si se presenta aglutinación en cualquier fase de la prueba en el tubo control, no
se puede realizar la lectura.
Valor normal:
La ausencia de aglutinación (falta de agrupación de células) es lo normal.
Significado de los resultados anormales:
Un examen de Coombs directo positivo indica anticuerpos contra los glóbulos
rojos, los cuales a su vez pueden indicar la presencia de una de las siguientes
condiciones:
•
•
•
•
•
•
•
•
Anemia hemolítica autoinmune sin otra causa subyacente
Anemia hemolítica inducida por medicamentos
Eritroblastosis fetal
Mononucleosis infecciosa
Infecciones por Micoplasma
Sífilis
Leucemia linfocítica crónica u otro trastorno linfoproliferativo
Lupus eritematoso sistémico u otra condición reumatológica
•
•
Reacción a transfusión como la ocasionada por unidades de sangre de
compatibilidad inadecuada
Esta prueba también es anormal en algunas personas sin que exista una
causa clara, especialmente en personas de edad avanzada. Hasta el 3%
de las personas que están hospitalizadas sin un trastorno sanguíneo
conocido tendrán un resultado anormal en el examen de Coombs
directo.
COOMBS INDIRECTO
Detecta anticuerpos hacia los glóbulos rojos en la circulación. Es importante
para la determinación de la compatibilidad entre dador y receptor en el caso de
transfusiones de sangre. Detecta también la presencia de anticuerpos anti Rh
en la madre durante el embarazo. Evalúa la necesidad de administrar
inmunoglobulina Rh (Ag D). Ayuda a confirmar el diagnostico de anemia
hemolítica.
MATERIALES Y REACTIVOS:
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Suero problema
Muestra de sangre con anticoagulante EDTA
Tubos de ensayo
Baño Maria a 370C
Micropipetas
Albúmina Bovina
Suero de Coombs
Solución salina al 0.85%
Centrífuga
Gradillas
Pipetas pasteur
PROCEDIMIENTO:
•
•
•
•
Separar el suero del paciente con el que se va a realizar la prueba
Lavar los eritrocitos del paciente 3 veces con SS y suspenderlos del 3 –
5%
Marcar dos tubos como CI y Control
Adicionar:
GR Paciente
Suero del paciente
CI
2 Gotas
2 Gotas
CONTROL
2 Gotas
2 Gotas
•
•
Centrifugar 15 – 45 seg
Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia
de aglutinación
• Si el resultado es negativo, adicionar:
CI
CONTROL
Albúmina Bovina
2 Gotas
Solución salina al
2 Gotas
0.85%
•
•
•
•
Incubar a 370C por 20 minutos
Después de la incubación los glóbulos rojos se lavan tres veces con SS
al 0.85%
En el ultimo lavado descartar la SS al 0.85% hasta que quede la
muestra en las paredes del tubo.
Adicionar.
Suero de Coombs
Solución salina al
0.85%
•
•
•
•
CONTROL
2 Gotas
Centrifugar 15 – 45 seg
Resuspender los botones celulares suavemente y observar la presencia
de aglutinación
Graduar la aglutinación 0, 1+, 2+, 3+, 4+.
Si el resultado es negativo, adicionar:
Células control de
Coombs
•
•
CI
2 Gotas
-
CD
1 Gota
CONTROL
1 Gota
Repetir la centrifugación de 15 – 45 seg
La aglutinación en este punto refleja la presencia de suero antiglobulina
libre y confirma que la reacción era realmente negativa.
Valor normal:
La ausencia de aglutinación (falta de agrupación de células) es lo normal.
Significado de los resultados anormales:
•
•
Test positivo indica la presencia de anticuerpos circulantes contra los
glóbulos rojos
En la embarazada con sangre Rh negativo, un test con titulo positivo alto
significa que el feto puede desarrollar la enfermedad hemolítica del
recién nacido.
CELULAS CONTROL DE COOMBS
Cuando las pruebas de la antiglobulina, directa e indirecta, dan negativas, es
necesario verificar el reactivo antiglobulina. Una manera fácil es, a partir de la
prueba negativa, poner la suspensión en contacto con eritrocitos O Rh+,
sensibilizados con anti D conocidos como células control de coombs y leer de
nuevo.
MATERIALES Y REACTIVOS:
Tubos de ensayo
Antisuero anti D
Glóbulos rojos O Rh+, lavados y suspendidos al 3-5% en solucion salina al
0.85%
PROCEDIMIENTO:
•
•
•
•
•
•
•
•
Lavar tres veces glóbulos rojos O+
Colocar 8 a 10 gotas de suspensión de glóbulos rojos O positivos
Colocar la misma cantidad de antisuero anti D al tubo
Incubar a 37oC por 30 minutos
Lavar de 5 a 6 veces en solución salina 0.85%
Resuspender al 3-5% en solución salina 0.85%
Probar estos glóbulos rojos con una gota de suero de Coombs y buscar
aglutinación
Este control dura 4-5 días a 4oC
INTERPRETACION:
La lectura con las células control de Coombs deben dar positivas, no mayor de
dos cruces.
Es importante recordar que una prueba de la antiglobulina negativa, sin control,
puede interpretarse como una prueba negativa, falsa.
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD
Cuando a un paciente se le va a realizar una transfusión de cualquier
componente que contenga glóbulos rojos, se debe clasificar para los sistemas
ABO y Rh (Ag D) y buscar el componente del mismo grupo ABO y Rh (Ag D).
Además debe realizarse pruebas de compatibilidad, entre el suero o plasma del
receptor y los eritrocitos del donante.
La práctica consiste en buscar 1 unidad de sangre compatible.
•
•
•
•
•
•
•
•
Recolectar una muestra de sangre del receptor en tubo seco para
obtener suero y en tubo con EDTA para lavar glóbulos rojos
Separar el suero del receptor
Lavar los eritrocitos del receptor tres veces con solución salina y
resuspenderlos del 3-5%
Disponer de los tubos pilotos la bolsa proveniente del donante
Lavar los glóbulos rojos provenientes de los pilotos del donante tres
veces con solución salina y resuspenderlos del 3-5%
El procedimiento que se describe a continuación se debe realizar para
cada una de las unidades a transfundir
Marcar dos tubos uno con el numero de la bolsa y el otro como
autocontrol
Adicionar:
FASE SALINA:
Suero receptor
GR donante
GR receptor
•
•
•
PRUEBA CRUZADA
2 Gotas
1 Gota
-
AUTOCONTROL
2 Gotas
1 Gota
Centrifugar 30 – 45 seg
Observar la presencia de hemólisis en el sobrenadante. Resuspender
los botones para observar aglutinación; si existe graduarla según la
escala
La presencia de hemólisis o aglutinación, constituye una prueba cruzada
incompatible, una suspensión homogénea de eritrocitos se considera
como una prueba cruzada compatible en la Fase Salina o inmediata.
FASE ALBUMINA:
Albúmina bovina
•
PRUEBA CRUZADA
2 Gotas
Incubar 15-30 minutos a 370C
AUTOCONTROL
2 Gotas
•
•
•
•
Centrifugar 30 – 45 seg
Observar la presencia de hemólisis en el sobrenadante. Resuspender
los botones para observar aglutinación; si existe graduarla según la
escala
La presencia de hemólisis o aglutinación, constituye una prueba cruzada
incompatible, una suspensión homogénea de eritrocitos se considera
como una prueba cruzada compatible en la Fase de Albúmina
Lavar tres veces con SS y decantar bien el sobrenadante en el ultimo
lavado
FASE DE COOMBS:
Suero de Coombs
•
•
•
•
AUTOCONTROL
2 Gotas
Centrifugar 30 – 45 seg
Resuspender los botones para observar aglutinación. Si existe,
graduarla según la escala
La presencia de hemólisis o aglutinación, constituye una prueba cruzada
incompatible, una suspensión homogénea de eritrocitos se considera
como una prueba cruzada compatible en la Fase de Coombs
Si el resultado es negativo, adicionar:
Células control de
Coombs
•
•
•
PRUEBA CRUZADA
2 Gotas
PRUEBA CRUZADA
1 Gota
AUTOCONTROL
1 Gota
Centrifugar 30 – 45 seg
Observar aglutinación y registrar los resultados
La presencia de hemólisis o aglutinación, confirma que la prueba era
realmente negativa en la fase de Coombs y que se ha trabajado
correctamente. (Este es un control interno que no se informa).
OBSERVACIONES:
•
•
En algunos centros se emplean medios diferentes a la albúmina para
disminuir el potencial Z; entre ellos están la solución salina de baja
fuerza iónica (LISS), el Polietilenglicol (PEG) y el Polibreno de baja
intensidad (LIP). Para cada uno existen protocolos que se deben
seguir cuidadosamente
El autocontrol debe permanecer negativo siempre
•
Se deben registrar los resultados para cada unidad. Si la prueba es
incompatible la unidad no se debe trasfundir, se debe buscar otra
unidad de sangre y realizar las pruebas cruzadas correspondientes.
CUESTIONARIO:
1.
Qué es un Banco de Sangre
2. Qué tipos de Banco de Sangre existen
3. Qué es un donante y cuales son los criterios para proteger al donante
4. Qué es el receptor y cuales son los criterios para proteger al receptor
5. Defina:
•
•
•
•
•
•
Flebotomía terapéutica.
Donación autóloga.
Hemafėresis.
Receptor especifico.
Donación dirigida.
Donación Voluntaria
6. Cuales son las pruebas físicas y de laboratorio que se realizan antes de
la donación
7. Cuales son las condiciones que se deben tener en cuenta para que la
flebotomía sea un éxito.
8. Cuales son los criterios de autoexclusión de un paciente
9. Cuales son los parámetros postdonación
10. Enumere algunas reacciones adversas a la donación
11. Cuales son los componentes que conforma la sangre total
12. Cuales son las pruebas de laboratorio que se le realiza a cada unidad de
sangre.
13. Cuales son las alteraciones hematológicas de acuerdo a la etiología de
las meningitis.
RESULTADOS DEL LABORATORIO
GRUPO N0 _______
INTEGRANTES:
1. Hemoclasificación Receptor:
Hemoclasificación ABO:
Hemoclasificación Rh:
Directa en lamina
Anti D
Control
Interpretación:
Grupo: __________
Rh:___________
2. Hemoclasificación Donante (bolsa):
Hemoclasificación ABO:
Directa en lamina
Directa en tubo
Inversa
ANTI- A
AB
ANTI-B
ANTI
ANTI- A
AB
ANTI-B
ANTI
A
B
Hemoclasificación RH:
Directa en lamina
Anti D
Control
Interpretación:
Grupo: __________
Rh:___________
3. Prueba Cruzada:
Prueba Cruzada
Autocontrol
Fase Salina
Fase Albúmina
Fase de Coombs
Células control de
Coombs
Interpretación:
______________________________________________________
O
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 11
SISTEMA INMUNE
OBJETIVOS:
•
•
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Diferenciar las leucemias agudas de las crónicas teniendo en cuenta sus
hallazgos principales
Identificar las leucemias mieloides y linfoides morfológicamente por
medio de las características de las células inmaduras
Conocer los parámetros citoquímicos que complementan el diagnostico
de las anemias
FUNDAMENTO:
LEUCEMIAS AGUDAS
Se caracterizan por la presencia de células blásticas y leucocitos inmaduros en
sangre periférica y en medula ósea, casi siempre en estas leucemias va haber
anemia, leucocitosis, aunque algunos pacientes pueden presentar números
normales o bajos y casi siempre se presenta trombocitosis.
El promedio de vida de un paciente con leucemia aguda sin tratamiento es de 3
meses. La posible curación de la leucemia aguda se lleva a cabo mediante la
destrucción máxima de células cuando la enfermedad se acaba de
diagnosticar. Las leucemias agudas se dividen en Leucemias mieloides agudas
y Leucemias linfoides agudas.
Esta clasificación se basa en las características morfológicas de las células
tenidas con wright, en ESP o en medula ósea y con la tinción citoquímica de las
células blásticas.
La clasificación reciente de la OMS propone enfatizar en los rasgos genéticos
comunes en los signos y síntomas clínicos una evaluación adicional, de los
blastos leucémicos mediante análisis molecular y citometría de flujo.
LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA:
La FAB clasifica la LMA de la MO a la M7 y la LLA de L1 a L3. En cualquiera
de las categorías para definir las leucemias agudas debe de haber mayor de
30% de blastos.
MO: Con diferenciación mínima o Blastos mieloides indiferenciados
M1: LMA sin maduración
M2: LMA con maduración
M3: Leucemia promielocítica aguda
M4: Leucemia mielomonocítica aguda
M5:
M5a: Leucemia monoblástica aguda
M5b: Leucemia monocítica aguda
M6: Leucemia eritroide aguda
M7: Leucemia megaloblástica aguda
LEUCEMIA LINFOIDE AGUDA:
La LLA se divide en FAB L1 (niños), L2 (niños mayores y adultos) y L3
(pacientes con leucemia secundaria al linfoma de burkitt)
La L1, L2 y L3, se diferencian en la morfología, el tamaño, la cantidad de
nucleolos y la apariencia del citoplasma.
Del 60 – 70% de los pacientes hay leucocitosis, en el 25% hay leucopenia. En
el FSP casi el 100% son linfoblastos y linfocitos. Los blastos no tienen bastones
de Auer y tienen de 1 a 2 nucleolo, hay granulocitopenia, aunque en la L2
pueden haber células inmaduras de tipo mieloide, hay anemia y trombocitosis.
TINCIONES CITOQUIMICAS:
Útiles para la diferenciación de las leucemias. Las tinciones reflejan la
composición química de las células mediante el uso de reacción de color sin
dañar la célula.
Las tinciones citoquímicas son:
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Sudan Negro B
Mieloperoxidasa
Acido peryodico de schiff (PAS)
Naftol AS-D cloracetato
NASDCA Esterosol
Fosfatasa acida
Fosfatasa alcalina
TDT: Desoxinucleotidil transferasa Terminal
Antígeno CALLA
Inmunoglobulina de superficie
LEUCEMIAS CRONICAS:
LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA:
Existe un aumento de células blásticas en el FSP y medula ósea y se
disminuye el espacio para GB, GR y PQ, esto puede producir infecciones,
anemia y hemorragias, dolor en los huesos.
El número de células blásticas en la sangre y en la medula ósea y los
síntomas, determinan la fase de la enfermedad. Se presentan en pacientes
mayores de 50 anos.
Existe una traslocación genética de 2 cromosomas, el 9 y 22 que se conoce
como el cromosoma Filadelfia, aunque se presenta en pacientes de 50 a 60
anos, también pueden haber presentaciones infantiles y juveniles.
Los hallazgos más comunes al inicio de la enfermedad son: aumento de los GB
y crecimiento de bazo y menos frecuente crecimiento del hígado, anemia,
cansancio y sangrados.
En muchos casos los pacientes son asintomático y se diagnostica la
enfermedad de manera accidental al realizar un cuadro hemático.
ETAPAS DE LA LMC:
1. Fase crónica
2. Fase acelerada
3. Fase blástica
• De recaída
LEUCEMIA LINFOIDE CRONICA:
Pacientes mayores de 50 años, se caracteriza por aumento de linfocitos en el
numero y estos son normales. Comúnmente es diagnosticada por casualidad,
cuando se realiza un cuadro hemático. En general es una enfermedad
asintomática pero algunas veces puede presentar debilidad, sudoración
nocturna, fiebre sin infección, perdida de peso, aumento en las infecciones.
La enfermedad varia en algunos pacientes, avanza rápidamente y en otras
puede durar 10 a 20 años sin presentar problemas. Los linfocitos son normales,
pero no son capaces de combatir infecciones.
La LLC progresa con lentitud, en las primeras etapas de la enfermedad no hay
síntomas a medida que pasa el tiempo, los linfocitos se reproducen cada vez
más y empiezan aparecer síntomas.
El pronóstico depende de la etapa en la que se encuentra el paciente, la edad
del paciente y su estudio de salud en general.
ETAPAS DE LA LLC:
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Etapa O
Etapa I
Etapa II
Etapa III
Refractaria
MATERIALES Y REACTIVOS:
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Aceite de inmersión
Microscopio
Láminas de colección.
PROCEDIMIENTO:
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1.
Prepare la lámina entregada por el profesor de medula ósea o extendido
de sangre periférica para la observación en el microscopio.
En un aumento de bajo poder (10x) y mirando el cuerpo del extendido,
observe los campos microscópicos uniformes y homogéneos donde los
eritrocitos se encuentren bien distribuidos para la observación de la
morfología de glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas.
Identifique en 100 X las células inmaduras y maduras realizando un
diferencial de 100 células
Realice el reporte de la lamina entregada y analice los resultados
2. Analice los casos clínicos entregados por el profesor e informe el
tipo de leucemia y la razón por la cual da su diagnostico.
CUESTIONARIO:
1. La LMA según FAB esta clasificada de la MO a la M7, defina cada una de
ellas, teniendo en cuenta sus características principales para su
diferenciación.
2. La LLC según FAB esta clasificada de la L1 a la L3, defina cada una de
ellas, teniendo en cuenta sus características principales para su
diferenciación.
3. Que es la reacción leucemoide
4. Realiza un cuadro comparativo con las tinciones citoquímicas, identificando
el tipo de leucemia para la cual es diagnostico cada tinción.
5. Haga un esquema de los linajes que conforma la hematopoyesis (eritroide,
linfoide, monocítica, mieloide y megacariocítica).
UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
FACULTAD DE SALUD
PROGRAMA DE BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO
CORRELACION CLINICA
HEMATOLOGIA
UNIDAD N. 13
SISTEMA HEMATOPOYETICO
OBJETIVOS:
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Identificar las neoplasias del sistema inmune. Enfermedad de Hodgkin y
no Hodgkin
Diferenciar cada una de las mielodisplasias
Elaborar un caso clínico de las enfermedades tratadas en el curso de
hematología
FUNDAMENTO:
LINFOMAS:
Neoplasias del sistema inmunitario (célula B o T), que por lo común nacen en el
ganglio linfático
CAUSA:
DESCONOCIDA
EBV
(BURKIT)
ENFERMEDAD DE HODGKIN:
La Enfermedad de Hodgkin corresponde a un linfoma maligno con
características inmunitarias y linfocíticas únicas. En esta enfermedad, los sitios
primarios de afección tisular son los ganglios linfáticos. Desde el punto de vista
histológico se caracteriza por la presencia de células de Reed-Stemberg, que
son células multinucleadas aparentemente derivadas de los macrófagos.
La Enfermedad de Hodgkin presenta los siguientes subgrupos:
Con predominio de linfocitos
 Con celularidad mixta
 Esclero nodular
 Depresión de linfocitos
CLINICA:
 Linfoadenopatía indolora
 Síntomas sistémicos
 (b) fiebre > 38°c
 sudores nocturnos
 perdida de peso
 Prurito
 Lesión pulmonar(adenopatía)
INMUNES:
 Alergia e hipersensibilidad
Trastorno de inmunidad celular
 Citoquinas. trastornos inmunes humoral/cell
PROBLEMAS POCO FRECUENTES




Infiltrado pulmonar
Herpes zoster
Sepsis post-esplenectomía
Mononucleosis infecciosa
PREDOMINIO DE LINFOCITOS
 10%
 Etapa i el 70% de los pacientes
 Ataca ganglios axilares
ESCLEROSIS NODULAR

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




40 a 70 % de los pacientes
Además de cell de reed s.
Mujeres jóvenes.
Ganglios axilares inferiores
Ganglios supraclaviculares
Ganglios mediastínicos
70% limitada
CELULARIDAD MIXTA
 30 a 50 %
 Frecuentes en niños y ancianos
 Relacionado siempre con EBV
DEPLESION DE LINFOCITOS
 Menos frecuente
 Ancianos y enfermedad avanzada
 Síntomas sistémicos
El linfoma de Burkitt (BL) también está relacionado con la inmunosupresión en
sujetos con SIDA, y a la malaria en los casos de endemia de BL. Este último
fenómeno explica los hallazgos originales de Burkitt, donde los factores
climáticos están ligados a la etiología de la endemia de BL, ya que la
temperatura y la altitud condicionan el crecimiento y distribución de los
mosquitos que transmiten la malaria. Todos los casos de BL están también
marcados por la presencia de traslocaciones cromosómicas específicas, las
cuales producen la activación del c-myc proto-oncogene. La mayoría de éstos
comprenden una traslocación recíproca entre el cromosoma 8, en ó cerca del
c-myc loci, y el loci de las cadenas pesadas de las inmunoglobulinas en el
cromosoma 14.
PRACTICA: CUADRO HEMATICO MANUAL
MATERIALES Y REACTIVOS:
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Sangre total con EDTA
Microhematocritos
Tabla de lectura o reglilla
Cubetas
Porta cubetas
Pipeta de Salhi
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Pipeta de glóbulos blancos
Pipeta de glóbulos rojos
Tubos de 13 x 100 mm
Gradilla, pipeta de 5 ml, pipeteadores
Pipetas automáticas, puntas azules y amarillas
Tapones de caucho
Cámaras de Neubauer
Cajas de petri, papel filtro
Reactivo de Drabkin
Reactivo de Turk
Reactivo de amonio al 1% o Citrato de sodio al 3.8%
Estándar o patrón de hemoglobina
Aceite de inmersión
Colorante de Wright
Solución Buffer, agua destilada
Microcentrífuga
Espectrofotómetro
Microscopio
PROCEDIMIENTO:
1. MEDICION DEL HEMATOCRITO:
2. MEDICION DE LA HEMOGLOBINA:
3. RECUENTO DE GLOBULOS BLANCOS:
a. DILUCION EN TUBO:
b. DILUCION EN PIPETAS DE BLANCOS:
4. EXTENDIDO Y COLORACION:
5. RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS:
6. RECUENTO DE PLAQUETAS
CUESTIONARIO:
3. De cada uno de los siguientes temas amplíe su fundamento
a. Enfermedad de no Hodgkin
b. Mielodisplasias
c. Mononucleosis infecciosa
4. Haga un paralelo entre los estados de hemoconcentración por
causas fisiológicas y por causas patológicas.
5. Investigue un caso clínico
mencionados en esta guía.
de
cualquiera
de
los temas