Prevalencia de los polimorfismos de la MTHFR (677 CT Y 1298 AC)

Id. 107
Prevalencia de los polimorfismos de la MTHFR (677 C-T Y 1298 A-C) en mujeres
con historia de abortos espontáneos de repetición.
D CUENCA GOMEZ1, M DE LA PUENTE YAGUE2, M DUAREZ CORONADO3, M HERRAIZ MARTINEZ4
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Hospital Clinico San Carlos
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OBJETIVOS: 1. Analizar la prevalencia de los polimorfismos 677 CT y 1298 AC en las mujeres entre 18 y 40 años del área sanitaria
7 de la Comunidad de Madrid. 2. Establecer la prevalencia de los polimorfismos 677 CT y 1298 AC de la MTHFR en mujeres con
historia previa de abortos de repetición. 3. Establecer la prevalencia de los polimorfismos 677 CT y 1298 AC de la MTHFR en mujeres
con historia previa de 2 gestaciones o más a término sin abortos espontáneos previos. 4. Establecer la prevalencia de los polimorfismos
677 CT y 1298 AC de la MTHFR en mujeres con historia previa de 2 gestaciones o más a término con un aborto espontáneo previo.
5. Analizar si existe una mayor prevalencia de los polimorfismos 677 C-T y 1298A-C de la MTHFR en las mujeres de entre 18 y 40
años que presentan abortos de repetición en comparación con el grupo control.
MATERIAL Y MÉTODO: Se diseña un estudio observacional prospectivo analítico de casos y controles. Se estima un tamaño
muestral de 144 casos y 288 controles para una prevalencia del polimorfismo homocigoto 677TT de un 10% para la población general
y de un 20% en población con antecedentes personales de abortos de repetición, con un error alfa de 0.05 y un error beta de 0.20. Se
obtendrá un grupo de mujeres con historia de 2 o más abortos espontáneos antes de la semana 20 de gestación. Criterios de inclusión: •
Edad entre 19 y 40 años. • Pertenecer al área sanitaria número 7 de la Comunidad de Madrid. • Presentar historia médica previa de dos
o más abortos de repetición. Criterios de exclusión: • Pacientes fuera del rango etario de 19 a 40 años. • Diagnóstico de patologías
asociadas a pérdidas embrionarias: síndrome antifosfolípido, malformaciones uterinas, lupus eritematoso sistémico, infecciones genitales,
translocaciones genéticas balanceadas maternas o paternas, presencia de anticuerpos antitiroideos, hiperandrogenemia o
hiperprolactinemia. Previa a la obtención de la muestra las pacientes serán informadas de su inclusión en el estudio y deben haber
firmado el consentimiento informado realizado al efecto. Selección de controles La obtención de los casos del grupo control se realizará
en mujeres entre 19 y 40 años con historia personal de 2 embarazos a término sin abortos previos. Se obtendrá un segundo grupo
control con mujeres con historia de 2 o más embarazos a término y presencia de un aborto espontáneo. MÉTODO Metodología
analítica: Se obtendrá una muestra de sangre en EDTA. De este tubo de sangre se procederá a la extracción del ADN para el análisis de
los polimorfismos. El análisis de los polimorfismos se realizará mediante PCR -RLFP usando las enzimas de restricción HinfI para el
análisis de C677T y Mbo II en el análisis de A1298C. La amplificación del polimorfismo C677T se realizará con la secuencia de
primers: forward, 5’- TGA AGG AGA AGG TGT CTG GGG GA – 3’ , y reverse, 5’ – AGG ACG GTG CGG TGA GAG TG – 3’.
Para la detección del polimorfismo A1298C se emplearán los primers: forward 5’ – CTT TGC GGA GCT GAA GGA CTA CTA C –
3’ y reverse 5’ – CAC TTT GTG ACC ATT CCG GTT TG – 3’. El polifmorfismo C677T introduce un nuevo sitio de restricción a la
enzima HinfI obteniendo como resultado de la digestión fragmentos de 175 y 23 bp. Cuando se digieren los fragmentos con el
polimorfismo A1298C se obtienen fragmentos de 84, 31, 30 y 18 bp mientras que el fragmento wild type los fragmentos serán de 56,
31, 30 28 y 18 bp. Los fragmentos digeridos son separados en agarosa al 3%.
RESULTADOS: Se incluyó un grupo de casos formado por 30 mujeres que cumplian criterios de inclusión y un grupo de 40 casos.La
distribución etaria de ambos grupos, casos y controles, se muestra el la Figura 1. El rango de edad más frecuente en ambos grupos es el
comprendido entre los 30-35 años.La edad gestacional a la que se produjeron las pérdidas embrionarias se representan en la figura 2, n
= 73. El tipo de suplemento tomado según las recomendaciones de la SEGO se clasificó en cuatro grupos según sus constituyentes:
únicamente ácido fólico (AF), ácido fólico asociado a vitamina B12 y yodo (AF+VITB12+YODO) o ácido fólico asociado a 5MTHF
(5 MTHF). Los resultados se exponen en la siguiente tabla 1. La distribución de los grupos casos y control por frecuencias genotípicas
para el polimorfismo 677CT de la MTHFR fueron en el grupo de casos: CC 10 (33%); CT 18 (60%); TT 2 (7%). En el caso de los
controles la distribución del polimorfismo 677CT fue: CC 14(35%); CT(60%); TT 2(5%). Las comparaciones para ambos grupos para
las distribuciones genotípicas, tanto para los tres genotipos, como para la comparación por pares y para la combinación de los genotipos
positivos o negativos para T, resultó no significativa (p > 0,05). A continuación se realizó los estudios OR ajustados, resultando no
significativos para la comparación CC, CT: OR = 1,01 (IC al 95%: 0,39-2,63); siendo para CC, CT+TT: OR = 0,82 (IC al 95%:
0,32-2,11).
FIGURA1.ppsx
FIGURA 2(1).ppsx
Adjunto nº 3: TABLA1(1).ppsx
Adjunto nº 1:
Adjunto nº 2:
COMENTARIOS Y CONCLUSIONES: Se define como aborto a la pérdida del contenido uterino que se producen antes de la
semana 20 de gestación. Aproximadamente el 15% del total de las gestaciones espontáneas acaban en un aborto. La etiología de los
mismos es multifactorial. Los abortos de repetición son definidos por la Sociedad Española de Ginecología y Obstetricia como dos o
más pérdidas embrionarias por debajo de la semana 20 de gestación de forma consecutiva o 3 pérdidas de forma no consecutiva.La
prevalencia en las parejas en edad reproductiva de los abortos de repetición es de entre un 2 y 5%. Esta definición permite el inicio de
un estudio de fertilidad en la pareja con estos antecedentes . A pesar de conocerse múltiples causas de abortos espontáneos hasta en un
15 a 80% de los casos no se llega a establecer la etiología de los mismos. En los últimos años se ha planteado la hiperhomocisteinemia
como factor etiológico de abortos de repetición. Desde hace 15 años aproximadamente se han descrito múltiples polimorfismos de la
enzima MTHFR que conllevan una disminución de la actividad de la misma. La actividad enzimática se reduce en un 35% en los
portadores del polimorfismo 677CT y un 50 a un 70% en los portadores del polimorfismo 677TT. Esto conducirá a un aumento en los
niveles de homocisteína plasmática y a una reducción de la disponibilidad de los grupos metilos de ADN.La confirmación de una posible
relación entre los polimorfismos 677C-T y 1298A-C de la MTHFR como factor de riesgo de abortos de repetición puede suponer un
avance importante en el trabajo clínico diario de aquellos profesionales más comprometidos con el estudio de la fertilidad. Conllevaría
una introducción de la determinación de estos polimorfismos en el estudio básico que se realiza a las parejas con historia previa de
abortos de repetición. La relación existente entre los polimorfismos detectados de MTHFR asociadas a una disminución de su actividad
enzimática y las pacientes con abortos de repetición ha sido estudiada previamente por Zetterberg et al , 2002; Unfried et al, 2002 ; Bae
et al 2006 . Se ha establecido por tanto como posible agente etiológico de los abortos de repetición. Existe una relación
estadísticamente significativa entre abortos de repetición y polimorfismos de la MTHFR en los estudios de Bae J. en 2006 y Zetterberg,
2002; mientras que en otros estudios no se ha podido establecer una clara relación estadísticamente significativa. Existen múltiples
estudios al respecto con resultados muy dispares. En un meta-análisis publicado por Nelen y cols. en Fertility and Sterlity en el año 2000
concluye que existe un aumento del riego de abortos de repetición de un 40% para las pacientes con el polimorfismo homocigoto
677TT de la MTHFR . Existe un meta-análisis publicado en 2006 en la misma revista y realizado por Ren y cols. en el cual, a pesar de
la heterogeneidad de los estudios, incluyeron una muestra de 2120 casos y 2949 controles. El análisis estadístico de los datos muestra
una asociación de la mutación homocigoto 677TT con el riesgo de abortos de repetición, estableciéndose un OR de 1.49. Por el
contrario, no se encontró una asociación estadísticamente significativa entre los polimorfismos heterocigotos y los abortos de repetición.
Estas conclusiones podrían animar a la realización de más estudios al respecto y justificar el empleo de los metabolitos activos del ácido
fólico, como suplemento en las pacientes con esta patología. Pero estas conclusiones no son muy alentadoras cuando se realiza una
estratificación geográfica. Se encuentra entonces una asociación entre abortos de repetición y polimorfismo 677TT en población china
de forma estadísticamente significativa. En población europea no puede realizarse una asociación tan clara siendo los resultados no
significativos . La implicación de los polimorfismos 677C -T y 1298A-C de la MTHFR como factor etiológico de los abortos de
repetición puede permitirnos establecer estrategias preventivas en pacientes con estos antecedentes. Podríamos establecer la
suplementación alimenticia con acido levofolínico en aquellas pacientes con dichos antecedentes que presenten un polimorfismo de dicha
enzima. Los resultados obtenidos en este estudio preliminar, con 30 pacientes casos y 40 pacientes controles, no permite establecer
conclusiones con una relevancia estadísticamente significativa. Esto puede ser debido al pequeño tamaño muestral del estudio,
debiéndose realizar un trabajo más completo con un mayor número de pacientes incluidas para poder resolver los objetivos presentados
al inicio del trabajo. Conocido el coste que presenta la determinación de los polimorfismos de la MTHFR en todas las pacientes con
antecedentes de abortos de repetición, así como el coste que supondría suplementar con ácido levofolínico a todas las pacientes con
esos antecedentes o tan sólo a las pacientes que presenten alguno de los polimorfismos descritos, podríamos determinar cuál sería la
estrategia preventiva más eficiente.