Ingezim gluten

 INGENASA
INGEZIM GLUTEN
R.30.GLU.K2
Ingezim gluten es un inmunoensayo enzimático basado en el uso del Anticuerpo Monoclonal R5, específico de las
Prolaminas. Límite de detección: 3 ppm.
BASE TÉCNICA DEL KIT
Placa antigenada con AcM R5
Adición de muestra
Lavado
Adición de AcM R5-PO
POSITIVO
1.
Placas tapizadas con un anticuerpo monoclonal (AcM) específico
de Gliadina,
Secalina y Hordeina. Las muestras se añaden en los pocillos y se incuban.
2.
Si la muestra contiene gluten, este antígeno se fijará al anticuerpo específico frente a la
Gliadina inmovilizado en la placa.
3.
Añadiendo un AcM específico frente a la Gliadina, éste se fijará al antígeno de la muestra.
Para poder detectar esta unión, el AcM se encuentra conjugado a Peroxidasa (PO).
4.
Al añadir el sustrato específico para la PO, se desarrolla una reacción colorimétrica en
presencia del conjugado
APLICACIÓN
Lavado
El Test esta indicado, especialmente, para muestras con un contenido de Gluten entre 0 –
300ppm
Substrato
Ensayo aprobado por el CODEX ALIMENTARIUS como Método de Análisis Tipo I para
la determinación de gluten en alimentos.
EVALUADO
POR
ALIMENTARIA”
NEGATIVO
SENSIBILIDAD
1-Respecto al Estándar Europeo.
Se efectuan cinco diluciones de este patrón. El ensayo es
capaz de detectar 1,56 ng/ml de este estándar. Este
valor corresponde a una cantidad de 3 ppm de gluten
en alimentos, de acuerdo con la siguiente fórmula y
utilizando la muestra a dilución 1/25.
ppm = (C x D x 2 x 40) /1000 .
C: Concentración de la muestra (ng/ml) calculada a partir de
la curva de calibración.
D: Factor de Dilución de la muestra (25,50,100,etc)
2: Factor aplicado para expresar los resultados como
concentración de gluten
40: Factor de Dilución aplicado en la preparación de la
muestra (0,25g en 10 ml de extracción del buffer).
1000: Conversión de ng/ml a ppm
LA
“AGENCIA
300
250
ConcentraciónReal (ppm)
200
100
50
0
1
4
5
Determinada mediante la técnica de Inmunoblotting. El AcM
R5 es capaz de detectar específicamente las prolaminas del
gluten presente en el TRIGO, CENTENO y CEBADA (gliadina,
secalina y hordeina, respectivamente).
20
15
10
Abs 450nm
1,56
0,2
3
ESPECIFICIDAD
25
0,0
2
Muest ras
30
0
Concentracióndeterminadacon
INGEZIM(ppm)
150
y = 15,154x - 6,4417x + 2,4497
R2 = 0,9974
5
SEGURIDAD
350
2
25
DE
2-Utilizando muestras de alimentos con contenidos de
gluten conocidos.
Se utilizan 5 muestras controladas de pan con contenidos de
gluten
conocidos (ppm). Los resultados obtenidos se
muestran a continuación
Curva de regresión
ng/ml
ESPAÑOLA
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
1,6
COMPOSICIÓN DEL KIT
PRODUCTO FABRICADO POR INGENASA
 Placa de microtitulación de 96 pocillos.
 Vial con Control Positivo
 Vial con Control Negativo
 Punto Control
 Estándares Europeos de Gliadina (5)
 Vial con Conjugado-PO
 Frasco con Solución de Lavado
 Frasco con Diluyente.
 Frasco con Substrato (TMB)
 Frasco con Solución de Frenado
 Solución de Extracción
CADUCIDAD:
12 meses
Conservado a 4ºC
INMUNOLOGÍA Y GENÉTICA APLICADA, SA – C/ Hermanos García Noblejas, 39 – 28037 MADRID (SPAIN) – Tel (+34) 91 368 0501
www.ingenasa.es
INGENASA
INGEZIM GLUTEN Quick
R.30.GL2.K2
Ingezim Gluten Quick es un inmunoensayo enzimático RÁPIDO, basado en el uso del Anticuerpo Monoclonal R5, específico
de las Prolaminas. Límite de detección: 3 ppm.
Placa antigenada con AcM R5
Adición de muestra
Lavado
Adición de AcM R5-PO
Lavado
Substrato
POSITIVO
NEGATIVO
BASE TÉCNICA DEL KIT
1.
Placas tapizadas con un anticuerpo monoclonal R5 (AcM) específico de Gliadina,
Secalina y Hordeina. Las muestras se añaden en los pocillos y se incuban.
2.
Si la muestra contiene gluten, este antígeno se fijará al anticuerpo específico frente a la
Gliadina inmovilizado en la placa.
3.
Añadiendo un AcM específico frente a la Gliadina, éste se fijará al antígeno de la muestra.
Para poder detectar esta unión, el AcM se encuentra conjugado a Peroxidasa (PO).
4.
Al añadir el sustrato específico para la PO, se desarrolla una reacción colorimétrica en
presencia del conjugado
APLICACIÓN
El Test esta indicado, especialmente, para muestras con un contenido de Gluten entre 0 –
300ppm.
El ensayo permite la realización de incubaciones cortas (20 minutos), tanto en la extracción
como en el análisis.
Ensayo aprobado por el CODEX ALIMENTARIUS como Método de Análisis Tipo I para
la determinación de gluten en alimentos.
VALIDACIÓN
SENSIBILIDAD ANALÍTICA
MUESTRAS DE REFERENCIA
Se analizaron en paralelo distintas muestras de referencia (FAPAS)
y muestras control (con un contenido conocido de gluten);
utilizando los kits INGEZIM GLUTEN e INGEZIM GLUTEN QUICK.
Todas las muestras se analizaron 3 veces por diferentes analistas.
La media de resultados se resume en la siguiente tabla:
La sensibilidad del ensayo es de 3ppm de Gluten (1.5 ppm de
gliadina)
ESPECIFICIDAD
Determinada mediante la técnica de Inmunoblotting. El AcM R5 es
capaz de detectar específicamente las prolaminas del gluten
presente en el TRIGO, CENTENO y CEBADA (gliadina, secalina y
hordeina, respectivamente).
COMPOSICIÓN DEL KIT
 Placa de microtitulación de 96 pocillos.
 Vial con Control Negativo
 Estándares Europeos de Gliadina (5)
 Vial con Conjugado-PO
 Frasco con Solución de Lavado
 Frasco con Diluyente.
 Frasco con Substrato (TMB)
 Frasco con Solución de Frenado
 Solución de Extracción
PRODUCTO FABRICADO POR INGENASA
CADUCIDAD:
12 meses
Conservado a 4ºC
INMUNOLOGÍA Y GENÉTICA APLICADA, SA – C/ Hermanos García Noblejas, 39 – 28037 MADRID (SPAIN) – Tel (+34) 91 368 0501
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INGEZIM GLUTEN SEMIQ
R.30.GSQ.K2
Ingezim gluten SemiQ es un ensayo inmunoenzimático semicuantitativo basado en el uso del Anticuerpo
Monoclonal R5, específico de las Prolaminas. Límite de detección: 10 ppm.
Placa antigenada con AcM R5
Adición de muestra
Lavado
BASE TÉCNICA DEL KIT
1.
Placas de 4 tiras tapizadas con un anticuerpo monoclonal (AcM) específico de
Gliadina, Secalina y Hordeina. Las muestras y el punto SemiQ se añaden en los
pocillos y se incuban durante 15 minutos.
2.
Si la muestra contiene gluten, este antígeno se fijará al anticuerpo específico frente
a la Gliadina inmovilizado en la placa.
3.
Añadiendo un AcM específico frente a la Gliadina, éste se fijará al antígeno de la
muestra. Para poder detectar esta unión, el AcM se encuentra conjugado a
Peroxidasa (PO). La incubación con el Conjugado es también de 15 minutos.
4.
Al añadir el sustrato específico para la PO y dejar incubar durante 5 minutos, se
desarrolla una reacción colorimétrica en presencia del conjugado
Adición de AcM R5-PO
Lavado
Substrato
POSITIVO
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Comparación entre la DO de la muestra y la DO del Punto SemiQ
NEGATIVO
Ensayo aprobado por el CODEX ALIMENTARIUS como Método de Análisis Tipo I
para la determinación de gluten en alimentos.
SENSIBILIDAD
VALIDACIÓN
En comparación con el kit de referencia INGEZIM GLUTEN
La sensibilidad del ensayo es de 10ppm de Gluten (5ppm
de gliadina)
133 muestras
Ingezim Gluten
ESPECIFICIDAD
Ingezim Gluten Semi Q
Determinada mediante la técnica de Inmunoblotting. El
AcM R5 es capaz de detectar específicamente las
prolaminas del gluten presente en el TRIGO, CENTENO y
CEBADA (gliadina, secalina y hordeina, respectivamente).
94% coincidencia
COMPOSICIÓN DEL KIT
PRODUCTO FABRICADO POR INGENASA
 Placa de microtitulación de 32 pocillos.
 Vial con Punto SemiQ
 Vial con Conjugado-PO
 Frasco con Solución de Lavado
 Frasco con Diluyente.
 Frasco con Substrato (TMB)
 Frasco con Solución de Frenado
 Solución de Extracción
CADUCIDAD:
12 meses
Conservado a 4ºC
INMUNOLOGÍA Y GENÉTICA APLICADA, SA – C/ Hermanos García Noblejas, 39 – 28037 MADRID (SPAIN) – Tel (+34) 91 368 0501
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INGENASA
INGEZIM GLUTEN HIDROLIZADO
R.30.GLH.K2
Ingezim Gluten Hidrolizado es un inmunoensayo directo que permite identificar y cuantificar prolaminas
hidrolizadas. Basado en el uso del Anticuerpo Monoclonal R5. Límite de detección: 0,25 ppm.
BASE TÉCNICA DEL KIT
Placa activada
1.
Placas de 48 pocillos activados químicamente.
2.
Si la muestra contiene gluten, las prolaminas extraídas de la misma se fijan al pocillo,
aunque se encuentren fragmentadas (hidrolizadas).
3.
Tras un paso de lavado, se añade el Anticuerpo Monoclonal R5 (específico de
Gliadina, Secalina y Hordeína) conjugado con peroxidada, el cual se unirá a las
prolaminas fijadas.
4.
Al añadir el sustrato específico para la PO, se desarrolla una reacción colorimétrica
directamente proporcional a la cantidad de gluten presente en la muestra.
Adición de muestra
Lavado
Adición de AcM R5-PO
Lavado
APLICACIÓN
El test esta indicado especialmente para el análisis de muestras que contengan Gluten
Hidrolizado (cervezas, whisky, siropes…)
Substrato
POSITIVO
NEGATIVO
COMPARACIÓN CON ELISA DAS
SENSIBILIDAD
El ensayo es capaz de detectar hasta 0.25ppm de GLUTEN, en
base a una curva de regresión lineal, lo que permite una mayor
precisión en los resultados.
Comparando diversas muestras de cerveza, se comprobó que la
recuperación es mucho mayor utilizando el ELISA DIRECTO que
con el ELISA DAS (doble anticuerpo)
2,5
y = 0,9829x - 0,0705
R2 = 0,9986
180
160
1,5
140
1
ppm Gluten
ppm
2
0,5
0
0
0,5
1
1,5
2
2,5
120
100
ELISA DIRECTO
80
ELISA DAS
60
40
Absorbancia (450nm )
20
0
1
ESPECIFICIDAD
Determinada mediante la técnica de Inmunoblotting. El AcM R5 es
capaz de detectar específicamente las prolaminas del gluten
presente en el TRIGO, CENTENO y CEBADA (gliadina, secalina y
hordeina, respectivamente).
2
3
4
5
6
7
8
9
Cervezas
PRODUCTO FABRICADO POR INGENASA
COMPOSICIÓN DEL KIT
 Placa de microtitulación de 48 pocillos.
 Estándar europeo de Gliadina (concentrado 100X)
 Vial con AcM Conjugado anti prolaminas
 Frasco con Solución de Lavado
 Frasco con Diluyente
 Frasco con Substrato (TMB)
 Frasco con Solución de Frenado
 Solución de Extracción
CADUCIDAD:
12 meses
Conservado a 4ºC
INMUNOLOGÍA Y GENÉTICA APLICADA, SA – C/ Hermanos García Noblejas, 39 – 28037 MADRID (SPAIN) – Tel (+34) 91 368 0501
www.ingenasa.es