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AVANCE
N°2 Septiembre 2011
AVANCE
N° 2 Septiembre 2011
Publicación de contenido científico editada por GT Laboratorio S.R.L. Necochea 3274 Rosario
PCR-US Inmunoquant
Método ultra sensible para determinar Proteina C - Reactiva
Inmunoturbidimetría exaltada por látex
GT Lab ha introducido un método inmuno turbidimétrico
con sensibilidad incrementada por partículas de látex que
permite la determinación manual o automatizada de la Proteína C-Reactiva (PCR).
La exaltación de la respuesta inducida por partículas de látex permite trabajar con una sensibilidad adecuada para discriminar entre valores bajos de PCR, los que son de interés
en procesos ateroscleróticos y vinculados a enfermedad cardíaca, entre otras patologías.
Los reactivos son presentados en forma líquida estables, los
que pueden emplearse en analizadores capaces de usar dos
reactivos por método o un reactivo único, a elección del
laboratorio.
PCR-US Inmunoquant
AVANCE
N°2 Septiiembre 2011
INTRODUCCIÓN
perfecta discriminación entre valores bajos, donde las
La proteína C-reactiva (PCR) es una proteína de la fase variaciones de concentración son marcadores eficientes
aguda producida principalmente en el hígado como res- de las referidas patologías.
puesta a una infección o agresión al organismo (1).
Recientemente, la PCR medida mediante métodos de- COMPOSICIÓN DE LOS REACTIVOS PROVISTOS
nominados de alta sensibilidad o ultrasensibles (PCR- R1: buffer tris 20 mmol/l, pH= 8,2.
US) han emergido como marcadores potenciales de R2: partículas de látex recubiertas con anticuerpos antiPCR, pH = 7.3.
riesgo enfermedad cardíaca (2).
La Asociación Americana de Cardiología ha propuesto Multicalibrador ASO / PCR / FR: la composición vasu medición como predictor de enfermedad cardiovas- ría entre lotes. La concentración de PCR del Multicalibrador está referenciada al HUMAN C-REACTIVE
cular (3).
La PCR-US ha sido identificada como un marcador sen- PROTEIN, 1st International Standard (Code 85/506).
sible y más estable en el tiempo para riesgos vasculares
que otros marcadores como el colesterol total y la pre- PREPARACION DE LOS REACTIVOS DE TRAsión sanguínea sistólica (4). El mismo trabajo demostró BAJO
otros beneficios de esta determinación, como una gran Homogeneice suavemente R2 y mezcle una parte de diestabilidad de su concentración en muestras sometidas a cho reactivo con 4 partes de R1. Las presentaciones disrepetidos procesos de congelamiento-descongelamiento ponibles permiten directamente volcar el contenido de
y menor variabilidad intra-individuo que otros marca- un frasco de R2 en uno de R1 sin necesidad de efectuar
dores de riesgo tales como el colesterol total y la presión mediciones de los reactivos.
arterial.
También el estudio prospectivo de Reykjavik durante CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
12 años reveló una excelente correlación con otros mar- Kit PCR-US Inmunoquant: Conserve refrigerado (28ºC) sin congelar. La estabilidad alcanza la fecha de vencadores de riesgo (5).
El meta-análisis de estudios prospectivos también arrojó cimiento indicada en la caja.
resultados al respecto al asociar PCR-US, fibrinógeno, Reactivo de trabajo: 30 días refrigerado (2-8ºC).
albúmina y recuento de leucocitos con enfermedad car- 1. MUESTRA
díaca coronaria (6).
Suero fresco.
La PCR-US ha sido identificada, además, como vin- Debe separarse dentro de los 30 minutos de extraída la
culada a procesos inflamatorios sistémicos en diversas muestra.
afecciones tales como diabetes mellitus (7) y asma (8). Aditivos
Este trabajo demostró que un incremento en los niveles No es necesario el agregado de aditivos.
de PCR-US puede asociarse con obstrucción del flujo Condiciones de conservación de las muestras
de aire e inflamación de las vías respiratorias, sirviendo Refrigerador (2-8ºC): estable 7 días.
como marcador subrogante de inflamación en asma.
Congelador (-20ºC): estable 3 meses.
Otro trabajo ha demostrado que, tanto en hombres Sustancias interferentes
como en mujeres físicamente saludables, desórdenes de- Las muestras con restos de fibrina deben centrifugarse
presivos asociados con elevaciones de PCR-US se vin- antes de ensayar. No emplee muestras groseramente hecularon con isquemias cardíacas fatales y no fatales (9). molisadas o lipémicas. La bilirrubina (20 mg/dl), hemoTambién se ha detectado que niveles de PCR-US corre- globina (10 g/l) y lípidos (10 g/l) y factor reumatoide
lacionan con el estrechamiento de arteriolas y ensancha- (75 UI/ml) no interfieren.
miento de las vénulas retinales, asociadas con enfermedad cardiovascular (10).
VALORES DE REFERENCIA
Toda esta bibliografía demuestra la creciente importan- Hasta 3 mg/l.
cia de la determinación de PCR por métodos ultra sen- Cada laboratorio debe establecer los valores normales
sibles.
correspondientes a la población que atiende.
PRINCIPIO
La proteína C reactiva de la muestra reacciona con anticuerpos anti-PCR-US adheridos a partículas de látex
del reactivo, provocando una turbidez proporcional a
su concentración, la que puede ser cuantificada fotométricamente. El empleo de partículas de látex incrementa
la sensibilidad de la reacción haciendo que pueda tener
EVALUACIÓN DE DESEMPEÑO DE PCR-US
INMUNOQUANT
Estudio de comparación
Se efectuaron comparaciones de muestras contra reactivos comerciales de igual fundamento técnico y aprobados por ANMAT. Los resultados obtenidos, expresados
2
PCR-US Inmunoquant
AVANCE
en mg/dl, se muestran en la Tabla I y en los Gráficos 1 ensayarse previa dilución con solución fisiológica. El
resultado obtenido debe multiplicarse por la dilución
y 2.
efectuada.
SENSIBILIDAD DEL MÉTODO
ESTUDIOS DE PRECISIÓN
Se procesaron pooles de muestras de personas caucási- El método permite una resolución de 0.5 mg/l.
cas, adultas, sin antecedentes de patologías y sin medicación para el caso del nivel “normal”, y sin otras patolo- ESTABILIDAD DE CALIBRACIÓN DEL
gías asociadas. Las muestras se conservaron congeladas a INSTRUMENTO
-20ºC durante todo el tiempo entre ensayos. Los resul- La estabilidad de la calibración depende del instrumento, ya que es función de sus características específicas.
tados se muestran en las Tablas II y III.
Por ejemplo, el Beckman Coulter Cx tiene un sistema
Evaluación de desempeño de PCR-US In- de medida basado en dos puntos de lectura. Estos sistemas tienen una estabilidad de calibración de 7 a 10 días.
munoquant.
Los analizadores Hitachi, por su parte, toman solamente un punto de lectura al final de la reacción. Esto
ESTUDIO DE COMPARACION
Se efectuaron comparaciones de muestras contra reacti- les da una estabilidad de calibración de 21 a 28días.
vos comerciales de igual fundamento técnico y aprobados por ANMAT. Los resultados obtenidos, expresados ADAPTACIONES A INSTRUMENTOS
en mg/dl, se muestran en la Tabla I y en los Gráficos 1 AUTOMÁTICOS
Están disponibles adaptaciones para diferentes analiy 2.
zadores automatizados. Consulte al departamento de
atención al cliente para mayores datos (infoprofesioESTUDIO DE PRESICION
Se procesaron pooles de muestras de personas caucási- [email protected]).
cas, adultas, sin antecedentes de patologías y sin medicación para el caso del nivel “normal”, y sin otras patolo- ADAPTACIONES A INSTRUMENTOS
gías asociadas. Las muestras se conservaron congeladas a AUTOMÁTICOS
-20ºC durante todo el tiempo entre ensayos. Los resul(valores en mg/l)
Kit origen
PCR-US
Kit origen
tados se muestran en las Tablas II y III.
CONTRA kit americano
Inmunoquant
N°2 Septiembre 2011
americano
ESTUDIO DE INTERFERENCIAS
Se estudió la interferencia de componentes de la muestra que pueden presentar efectos indeseables en métodos
de laboratorio, tales como la bilirrubina, los lípidos, el
factor reumatoide y la hemólisis.
La bilirrubina (hasta 20 mg/dl), la hemoglobina (hasta
10 g/l), los lípidos (hasta 10 g/l) y el factor reumatoide
(hasta 75 UI/ml) no mostraron interferir.
Las buenas prácticas de laboratorio recomiendan que las
muestras con restos de fibrina deban centrifugarse antes
de ensayar y no emplear muestras groseramente hemolisadas o lipémicas.
Los resultados se muestran el la Tabla IV.
5,2
1,3
4,9
5,0
4,4
2,9
1,0
3,0
4,0
4,0
5,0
5,4
4,9
4,0
2,3
2,4
2,3
4,3
1,3
4,9
2,9
ESTABILIDAD DE LOS REACTIVOS, CALIBRADORES Y CONTROLES
La vida útil de los reactivos HbA1c Directo Plus, medida en tiempo real, demostró ser de 18 meses en refrigeración. Del mismo modo, los Calibradores y Controles
demostraron una estabilidad de 24 meses refrigerados.
ESTUDIO DE LINEALIDAD
La técnica mostró cumplir con la Ley de Lambert Beer
hasta 10 mg/l. Muestras con valores mayores deben re
3
PCR-US Inmunoquant
GT Lab
5,1
1,2
5,1
4,8
4,4
3,0
0,9
3,1
4,1
4,2
5,1
5,1
5,0
3,8
2,2
2,3
2,2
4,1
1,3
4,7
2,8
Europeo
5,0
1,2
5,2
4,6
4,4
3,0
0,9
3,1
4,2
4,4
5,2
5,3
4,9
3,9
2,2
2,4
2,2
4,3
1,2
4,7
2,9
Ecuación de regression
y= 0,998x+-0,003
Coeficiente de
correlación: 0,995
CONTRA kit europeo
Ecuación de regresión
y= 0,986x+0,042
Coeficiente de
correlación: 0,998
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N°2 Septiiembre 2011
TABLA VI
Estudio de interferentes
TABLA II
Reproducibilidad intra ensayo
(Concentraciones en mg/l)
MUESTRA
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
PROMEDIO
SD mg/l +C.V.
% +-
1
1,61
1,68
1,62
1,69
1,63
1,64
1,60
1,64
1,69
1,61
1,64
0,033
2,01
2
2,93
2,90
2,92
2,90
2,97
2,91
2,92
2,94
2,96
2,98
2,93
0,029
0,99
Factor reumatoide (FR)
Conc FR (mg/l)
(UI/ml)
3
4,38
4,34
4,37
4,36
4,39
4,38
4,32
4,35
4,40
4,35
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
PROMEDIO
SD mg/l +C.V.
% +-
1
1,63
1,63
1,62
1,73
1,67
1,66
1,67
1,70
1,77
1,68
1,68
0,047
2,79
2
2,91
2,94
2,96
3,01
3,04
2,92
3,00
3,04
2,91
2,94
2,97
0,05
1,46
PCR ensayo
(mg/l)
3,4
3,3
3,2
3,1
3,3
3,4
3,3
3,2
2,6
Conc FR (mg/l)
(UI/ml)
PCR teórica
(mg/l)
PCR ensayo
(mg/l)
Suero puro 0
3,4
5,8
8,1
10,0
3,6
3,5
3,5
3,5
3,6
3,5
3,6
3,5
3,6
Suero puro
<10
28
53
76
97
Hemoglobina (Hb)
4,37
0,024
0,56
Bilirrubina (Br)
TABLA III
Reproducibilidad intra ensayo
(Concentraciones en mg/dl)
MUESTRA
PCR teórica
(mg/l)
Conc Br
(mg/dl)
Suero puro 0
7.50
11.04
17.73
20.89
3
4,47
4,35
4,40
4,34
4,46
4,34
4,34
4,44
4,39
4,36
Conc Br
(mg/dl)
PCR ensayo
(mg/l)
3,5
3,4
3,3
3,2
3,6
3,5
3,2
3,4
3,1
PCR teórica
(mg/l)
PCR ensayo
(mg/l)
3,5
3,3
3,2
3,2
3,6
3,5
3,2
3,4
3,1
Lipemia
Lipemia
(g/l)
Suero puro 0
3,3
6,3
8,4
10,4
4,39
0,05
1,20
4
PCR-US Inmunoquant
AVANCE
N°2 Septiembre 2011
GRAFICO 1
Comparación con Reactivo Americano
6,00
5,00
4,00
GT Lab
3,00
2,00
1,00
0,00
0,00
2,00
4,00
6,00
Reactivo Americano
6,00
GRAFICO 2
Comparación con Reactivo Europeo
5,00
GT Lab
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
Reactivo Europeo
5
PCR-US Inmunoquant
5,00
6,00
AVANCE
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GRAFICO 3:
Reproducibilidad intra ensayo
5
mg/dl
4
Serie1
3
Serie2
2
Serie3
1
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10
n
GRAFICO 3:
Reproducibilidad intra ensayo
5
mg/dl
4
Serie1
3
Serie2
2
Serie3
1
0
1
2
3
4
5
6
7
n
6
PCR-US Inmunoquant
8
9 10
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Referencias Biográficas
1- O’Neal DN, Piers LS, Iser DM, Rowley KG, Jenkins AJ, Best JD,
et al. – Atherosclerosis: 201:368 –77;2008
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Med 2:29 –36; 2005
3- Pearson TA, Mensah GA, Alexander RW, Anderson JL, Cannon
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10- Yim-Lui Cheung C – Amer J. of Epidem 17/2: 206-213; 2009
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